Name: tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization
Uploaded: 2018-09-15T15:00:00
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我々 は原稿の批判的なコメントのアタナシオス Papangelis を感謝したいです。バイオ テクノロジー ・生物科学研究会議 (BBSRC; で FM をサポートします。BB/M009424/1)。IP は、アメリカ心臓協会の科学者開発の補助金 (17SDG33060002) によってサポートされます。

この研究のマウス心臓組織サンプルは関連する法律と制度のガイドラインに準拠して得られたし、イェール大学機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。
1. ソリューションの準備
<ol><li>RNase フリー ddH2O を用意し、5 ml の 0.1% ジエチルピロカーボネート (DEPC) の ddH2O の 5 L を扱うことによって常温 (RT) (O/N) を一晩します。オートクレーブ (1...

<ol>
	<li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs:+genomics,+biogenesis,+mechanism,+and+function.">MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function.</a> Cell. 116, 281-297 (2004).</li><li>Denli, A. M., Tops, B. B., Plasterk, R. H., Ketting, R. F., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+primary+microRNAs+by+the+Microprocessor+complex.">Processing of primary microRNAs by the Microprocessor complex.</a> Nature. 432, 231-235 (2004).</li><li>Hutvagner, G., Zamore, P. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-155+promotes+autoimmune+inflammation+by+enhancing+inflammatory+T+cell+development.">MicroRNA-155 promotes autoimmune inflammation by enhancing inflammatory T cell development.</a> Immunity. 33, 607-619 (2010).</li><li>Chan, E., Prado, D. E., Weidhaas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+microRNAs:+from+subtype+profiling+to+predictors+of+response+to+therapy.">Cancer microRNAs: from subtype profiling to predictors of response to therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 17, 235-243 (2011).</li><li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microRNA+component+of+the+p53+tumour+suppressor+network.">A microRNA component of the p53 tumour suppressor network.</a> Nature. 447, 1130-1134 (2007).</li><li>Kloosterman, W. P., Plasterk, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diverse+functions+of+microRNAs+in+animal+development+and+disease.">The diverse functions of microRNAs in animal development and disease.</a> Developmental cell. 11, 441-450 (2006).</li><li>Li, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-182+Modulates+Myocardial+Hypertrophic+Response+Induced+by+Angiogenesis+in+Heart.">miR-182 Modulates Myocardial Hypertrophic Response Induced by Angiogenesis in Heart.</a> Science Reports. 6, 21228 (2016).</li><li>Meerson, F. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+hyperfunction+of+the+heart+and+cardiac+insufficiency.">Compensatory hyperfunction of the heart and cardiac insufficiency.</a> Circulation Research. 10, 250-258 (1962).</li><li>Tardiff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy:+stressing+out+the+heart.">Cardiac hypertrophy: stressing out the heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 116, 1467-1470 (2006).</li><li>Burchfield, J. S., Xie, M., Hill, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+ventricular+remodeling:+mechanisms:+part+1+of+2.">Pathological ventricular remodeling: mechanisms: part 1 of 2.</a> Circulation. 128, 388-400 (2013).</li><li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135, e146-e603 (2017).</li><li>Pena, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNA+in+situ+hybridization+in+formaldehyde+and+EDC-fixed+tissues.">miRNA in situ hybridization in formaldehyde and EDC-fixed tissues.</a> Nature Methods. 6, 139-141 (2009).</li></ol>

miRNA のトラン スクリプトの検出は、感度、特異性、定量的な力が異なる別の技術で実現できます。ここでは、miRNAの in situハイブリダイゼーション免疫染色のカップリングを示す心のセクションは同じに、マイクロ Rna とタンパク質分子の発現量の同時評価を可能にするプロトコルを記述し、。心臓切片で上皮内掘 LNA マイクロ Rna プローブの交配を実行する方法を示す.次に、我?...

マイクロ Rna (Mirna) は短い (18-25 のヌクレオチド)、単一座礁させた、非コード Rna メッセンジャー RNA (mRNA) の翻訳を抑制することおよび/または mRNA の分解促進により転写レベルでの遺伝子発現の負の制御因子として機能します。1。 miRNAs はイントロンやコーディングのエクソンから転写されるまたは非コード遺伝子と切断 70 ヌクレオチド2の短い茎ループ構造は、前駆体 miRNAs (pre-Mirna) に DROSHA、による核。次の細胞質をエクスポート、プレは 18-25 のヌクレオチド3,4にまたがる成熟 Mirna にダイサーによってさらに処理されます。その後、RNA によるサイレンシング複合体 (RISC) として組み込まれていますこれらの Mirna 一本鎖 Rna を式3,5 を抑制するため、3' 非翻訳領域 (3' UTR)、ターゲット Mrna に結合可能.
最後の三十年に彼らが最初に識別されたので、遺伝子発現、その独自の表現のレベルが厳しく制御された6のマスター調節因子に Mirna が登場しました。Mirna の役割は、臓器開発7,8,9,10、11,12、恒常性1314,のメンテナンスに記載されています。、病気コンテキスト神経15,16,17,18,19, 心血管20, を含む自己免疫条件21 だけでなく、 ,22癌23,24,25。MiRNA 発現パターンの関連性の増加の感謝は前方マイクロ Rna 転写産物の信頼性の高い検出法の必要性をもたらしています。このようなメソッドなどリアルタイム PCR、マイクロ アレイ、北にしみが付くことの in situハイブリダイゼーション、miRNA のトラン スクリプトは短いから成るという事実のために主に感度、特異性、定量的な力で変化して高い相同配列の6。
我々 は最近、miRNA-182、心筋肥大26、高架の血行力学的要求27,28に応えて心臓の構造的に適応を記述する条件の開発の重要な役割を報告しました。心臓肥大は不適応改造29に関連付けられている場合は、会計 8.5% すべての死のために起因する心血管の条件、心不全のリスク増加につながることができる心筋の量の増加によって特徴付けられる病気30。
ここで、ジゴキシゲニン標識 (DIG) ロックされた核酸 (LNA) プローブとマウス心臓ティッシュ セクションのマイクロ Rna とタンパク質分子の同時検出用免疫染色での in situハイブリダイゼーションを組み合わせた私たちのプロトコルを説明私たち心臓肥大のモデル。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5758</td>
			<td>DEPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB02038</td>
			<td>non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>HS-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, recombinant, PCR Grade</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3115879001</td>
			<td>ProK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S271</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride Hexahydrate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 1 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SA48</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 12 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S25358</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Methylimidazole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>336092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>39391</td>
			<td>EDC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>216763</td>
			<td>H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td>Sodium Citrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>339450</td>
			<td>scramble miRNA/U6 snRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA mmu-miR-182 detection probe</td>
			<td>QIagen</td>
			<td>YD00615701</td>
			<td>5&#39;-DIG and 3&#39;-DIG labelled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisol hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NBT/BCIP Tablets</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11697471001</td>
			<td>NBT-BCIP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslip</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-545E</td>
			<td>Glass coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic coverslip</td>
			<td>Grace Bio-Labs</td>
			<td>HS40 22mmX40mmX0.25mm</td>
			<td>RNA-ase free plastic coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11093274910</td>
			<td>DIG antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td>Pap pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cardiac Troponin T antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92546</td>
			<td>cTnT antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Absorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>anti-rabbit-568 antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Formamide</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB00600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Oven</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>UVP HB-1000 Hybridizer</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization

マイクロ Rna (Mirna) は、メッセンジャー Rna (Mrna) にバインドの翻訳を阻害して、劣化を促進させる、単一座礁させた RNA 転写産物です。日には、miRNAs はマイクロ Rna 転写産物の信頼性の高い検出法の必要性を意味したが、生物学的および病気プロセスの多数に関与しています。ここでは、ジゴキシゲニン標識 (DIG) ロックされた核酸 (LNA) プローブを用いた miRNA 検出、マウス心臓セクションにおける蛋白免疫染色と組み合わせるための詳しいプロトコルについて述べる。まず、プローブを使用して、コントロールと心臓肥大のマウスからの中心セクションに miRNA 182 式を識別するの in situハイブリダイゼーション法を行った。次に、共同 miRNA-182 心筋細胞をローカライズするのには、同じセクションの心臓トロポニン T (cTnT) タンパク質に対する免疫染色を行った。このプロトコルを使用して、アルカリ性ホスファターゼによる miRNA 182 ベースの比色定量法と蛍光染色を通じて cTnT を検出することができました。このプロトコルは、LNA の掘分類されたプローブを介して関心の任意の miRNA の発現とマウス心臓切片に関連するタンパク質の発現を検出する使用することができます。

miRNAの in situハイブリダイゼーション スクランブル miRNA と U6 snRNA、それぞれ正と負のコントロールとして提供を使用してマウス中心セクションの最適化を行った。否定的な汚損は発色の欠乏によって示されている間、青で示されます陽性 (図 1 a-1 b)。MiRNA 182 の心筋細胞特異的発現を制御 PlGF 過剰発現マウスからの心臓セクシ?...

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Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

マウス心臓のセクションを使用してその場で交配で発現組織固有の miRNA

マイクロ Rna (Mirna) は、メッセンジャー Rna (Mrna) の転写調節因子として、短いと高い相同性の RNA シーケンスです。現在の miRNA 検出方法は、感度と特異度で変わる。In situハイブリダイゼーションや免疫染色マウス心臓ティッシュ セクションのマイクロ Rna とタンパク質分子の同時検出を組み合わせたプロトコルについて述べる。

micro-RNAs (miRNAs) are single-stranded RNA transcripts that bind to messenger RNAs (mRNAs) and inhibit their translation or promote their degradation. To ...

この方法は、タンパク質およびマイクロRNA分子の両方の相対lcalizationを検出するツールを提供することにより、microRNA分野の主要な質問に答えることができます。この技術の主な利点は、同じ組織セクションからタンパク質とマイクロRNA分子の両方を検出できることです。このプロトコルは、スライドマウント組織の水分補給から始まります。ハイブリダイゼーションオーブンで10分間摂氏60度でスライドを温めます。パラフィンは目に見えて溶けているはずです。次いで、市販のクリアリング剤を含有するガラスコプリンジャーにスライドを10分間インキュベートする。これを2回行います。次に、洗浄から洗浄するためにスライドを移して組織を水分補給します。水和したら、プロテイナーゼKの働く溶液中の組織を摂氏37度で15分間インキュベートします。プロテナーゼKを除去するために、スライドを1倍PBSで2回洗浄する。さて、組織を修正します。まず、疎水性ペンを使用してスライド上に貯水槽を作り、製剤の周りに撥水円を描きます。次に、バリア内に4%PFA溶液の500マイクロリットルを塗布し、ヒュームフードにスライドをインキュベートします。固定剤を取り除くために、PBSを含むコプリン瓶でスライドを室温で2回5分間洗います。次に、0.13モル1-メチルイミダゾールで10分間スライドを洗浄します。室温でフームフードでこれを行い、この洗浄を2回行います。EDC固定剤を加え、ヒュームフードで室温で1時間インキュベートします。スライドを50ミリモルトリスですすいでください。ハイブリダイゼーションの準備をするために、まず加湿チャンバーを構築します。フィルターまたはティッシュペーパーを2枚を箱の底に積み込み、ホルムアミドと1x SSCの1対1の混合物で紙を濡らします。次に、各スライドに200マイクロリットルの事前温めハイブリダイゼーション溶液を塗布し、加湿したチャンバーを摂氏50度で1〜3時間インキュベートします。インキュベーション後、ハイブリダイゼーション溶液を250マイクロリットルのプローブ溶液に交換し、スライドをRNaseフリーカバースリップで覆います。カバースリップの下に気泡をトラップしないようにしてください。さて、チャンバーをパラフィルムで丁寧に密封し、プローブのRNA融解温度より約30°C以下でスライドを一晩インキュベートします。最適化が必要な場合があります。適切なインキュベーション温度の設定に加えて、異なるマイクロRNAが異なるレベルで発現されるため、最適な信号を得るためにプローブ濃度に関する最適化が必要になる場合があります。ハイブリダイゼーションに続いて、ストリンジェンシーの化しを行う。まず、5分間摂氏50度で2倍のSSCに入ったか、またはカバースリップが緩むまでであった。次いで、室温で2倍のSSCで2回の洗剤を行い、それぞれ5分間行う。次いで、室温で続け、スライドを0.2x SSCで5分間洗浄し、続いてPBSTで5分間、最後に1x PBSで5分間洗浄します。この時点で、RNA-RNAハイブリッドは安定しており、RNAに厳しい条件は必要なくなりました。DIG抗体検出の場合、まず疎水性バリアをタッチアップし、500マイクロリットルのブロッキング溶液を30分間塗布します。加湿チャンバ内で室温でスライドをインキュベートします。次に、ブロッキング溶液を取り出し、DIG抗体溶液500マイクロリットルに交換します。加湿チャンバー内の室温でスライドを1時間インキュベートします。その後、コプリン瓶を使用して、PBSTでスライドを1回5分間洗浄します。次に、スライドをプレ染色液で5分間洗浄します。次いで、スライドをポリプロピレンスライドメーラージャーに移し、20ミリリットルのAP基板溶液を加える。今、光から保護された6〜24時間、摂氏37度でスライドをインキュベートします。まずAP基質を使用する場合、反応に従うことが重要である。2時間間隔で、最適なインキュベーション時間が決定されるまで、顕微鏡を使用してスライド上の色の発達を確認します。余分なAP基板を取り除くために、1回の洗浄につき5分間KTBT溶液でスライドを2回洗浄し、続いてPBSで5分間1回洗浄します。cTNT抗体を検出するには、まず、組織を1時間ブロックする。次いで、200マイクロリットルのcTNT抗体溶液を塗布し、加湿チャンバ内で一晩4°Cでスライドをインキュベートします。翌日、PBSを含むコプリン瓶でスライドを5分間洗います。これを3回行います。次いで、抗ウサギ568抗体溶液の250マイクロリットルを塗布し、加湿チャンバ内で室温で1時間スライドをインキュベートする。過剰な二次抗体を洗い流すために、PBSで5分間の洗浄を3回使用する。次に、必要に応じて、250マイクロリットルのDAPI作業溶液を塗布し、光から保護されたスライドを1分間インキュベートする。余分なDAPI染色を除去するには、2つの5分間のPBSを使用し、その後、スライドを取り付けます。マイクロRNAインシトゥハイブリダイゼーションは、陰性制御用のスクランブルマイクロRNAと、陽性対照としてU6 snRNAを使用してマウス心臓切片で最適化しました。マイクロRNA-182の心筋細胞特異的発現は、コントロールマウスおよびPlGF過剰発現マウスから心臓切片で評価した。マウスは、α−MHCプロモーターの下でPlGF導入遺伝子を運び、そして心臓肥大を発症し、血管新生を増加させ、トランスジーン活性化の6週間以内に二次的に発症した。染色プロトコルは、PlGFマウスの心臓におけるマイクロRNA-182の発現の増加を明らかにした。次に、どの細胞タイプがマイクロRNA-182を発現するかを決定し、同じ切片をcTNTについて免疫染色した。DAPI染色も使用した。コントロールおよびPlGFマウス心臓切片の両方で、マイクロRNA-182はcTNT陽性心筋細胞の核コンパートメントに見られた。このビデオを見た後、マイクロRNAAseハイブリダイゼーションを行う方法、続いてタンパク質免疫染色を行う方法をよく理解しているはずです。この手順を試みる間、プロップハイブリダイゼーションに至るまでのすべてのステップの間、1日目を通してRNAseフリーの状態を維持することを忘れないでください。この手順に従って、リアルタイムPCRにおけるウエスタンブロットのような他の方法は、異なる組織におけるこの特定のマイクロRNAの相対的な発現レベル、または同じ組織セクション内のこの特定のタンパク質のような質問に答えるために実行することができる。PFA や ADC などの固定剤を使用すると、非常に危険な作業が行われる可能性があることを忘れないでください。予防措置には、手袋やラボコートの着用、ヒュームフードの使用など、この手順を実行する際には必ず服用する必要があります。

Research

JoVE Journal

Genetics

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

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EDU染色によりショウジョウバエアダルト卵巣内のミトコンドリアDNA複製のその場の標識で

The mitochondrial genome is inherited exclusively through the maternal line. Understanding of how the mitochondrion and its genome are proliferated and ...

Parallel Measurement of Circadian Clock Gene Expression and Hormone Secretion in Human Primary Cell Cultures

ヒト初代細胞培養物における概日時計遺伝子発現やホルモン分泌のパラレル測定

Circadian clocks are functional in all light-sensitive organisms, allowing for an adaptation to the external world by anticipating daily environmental ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

でヒストンminiSOGを使用した光遺伝学ランダム突然変異誘発<em&gt; C。エレガンス</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

複数の蛍光によるインター染色体安定型異常の検出<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーション（mFISH）と照射されたマウスにおけるスペクトル核型分析（SKY）

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

Single-cell Gene Expression Profiling Using FACS and qPCR with Internal Standards

内部標準でFACSおよび定量PCRを用いた単一細胞遺伝子発現プロファイリング

Gene expression measurements from bulk populations of cells can obscure the considerable transcriptomic variation of individual cells within those ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

ショウジョウバエの胚とパスチラミドシグナル信号増幅を利用した生体表面の高解像度蛍光In Situハイブリダイゼーション

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

In Vivoモデル システムとしてゼブラフィッシュを用いた DNA 複製タイミングのプロファイリング

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

ホール マウントIn Situハイブリダイゼーションによる目盛りの腸内微生物叢の可視化

Infectious diseases transmitted by arthropod vectors continue to pose a significant threat to human health worldwide. The pathogens causing these ...

Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH) Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization smFISH Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

単一分子蛍光In-situハイブリダイゼーション (smFISH) における出芽酵母の栄養増殖と減数分裂

Single molecule fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a powerful technique to study gene expression in single cells due to its ability to detect ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

代替の Pre-mrna スプライシング RNA In Situハイブリダイゼーション法によるマウス脳のセクションでの定量的解析

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...