Name: tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization
Uploaded: 2018-09-15T15:00:00
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Gostaríamos de agradecer Athanasios Papangelis, comentários críticos sobre o manuscrito. FM é apoiado pela biotecnologia e Conselho de pesquisa de ciências biológicas (BBSRC; BB/M009424/1). IP é suportado pela Associação coração americano cientista desenvolvimento Grant (17SDG33060002).

As amostras de tecido do coração de rato para este estudo foram obtidas em conformidade com a legislação e as normas institucionais e foram aprovadas pelo Comitê de uso e Yale University institucional Cuidado Animal.
1. preparação da solução
<ol><li>Preparar O RNase livre ddH2, tratando de 5 L de DDQ2O com 5 mL de diethylpyrocarbonate de 0,1% (DEPC) durante a noite (O/N), à temperatura ambiente (RT). Autoclave (121 ° C) para desactivar o DEPC. Uso tratada com...

<ol>
	<li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs:+genomics,+biogenesis,+mechanism,+and+function.">MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function.</a> Cell. 116, 281-297 (2004).</li><li>Denli, A. M., Tops, B. B., Plasterk, R. H., Ketting, R. F., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+primary+microRNAs+by+the+Microprocessor+complex.">Processing of primary microRNAs by the Microprocessor complex.</a> Nature. 432, 231-235 (2004).</li><li>Hutvagner, G., Zamore, P. 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Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+hyperfunction+of+the+heart+and+cardiac+insufficiency.">Compensatory hyperfunction of the heart and cardiac insufficiency.</a> Circulation Research. 10, 250-258 (1962).</li><li>Tardiff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy:+stressing+out+the+heart.">Cardiac hypertrophy: stressing out the heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 116, 1467-1470 (2006).</li><li>Burchfield, J. S., Xie, M., Hill, J. 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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNA+in+situ+hybridization+in+formaldehyde+and+EDC-fixed+tissues.">miRNA in situ hybridization in formaldehyde and EDC-fixed tissues.</a> Nature Methods. 6, 139-141 (2009).</li></ol>

deteção de transcrição de miRNA pode ser conseguida através de técnicas diferentes que variam em sensibilidade, especificidade e poder quantitativa. Aqui, demonstramos o acoplamento de miRNA hibridação in situ com imunocoloração e descrever um protocolo que permite a avaliação simultânea dos níveis de expressão de moléculas miRNA e proteína, sobre as mesmas seções de coração. Nós primeiro mostrar como realizar a hibridação in situ de sondas de miRNA LNA escavar-etiquetadas em se?...

micro-RNAs (miRNAs) são curtas (18-25 nucleotides), RNAs single-stranded, não codificante que funcionam como reguladores negativos da expressão génica a nível pós-transcricional por inibição da tradução do RNA mensageiro (mRNA) e/ou promover a degradação do mRNA 1. os miRNAs são transcritas de intrões ou exões de codificação ou não-codificante genes e são clivadas no núcleo por DROSHA, que os miRNAs precursor (pre-miRNAs), que são estruturas de Hairpin loop curto de 70 nucleotídeos2. Seguindo citoplasmática de exportação, pré-miRNAs são subsequentemente transformados por DICER em miRNAs maduros que abrangem 18-25 nucleotides3,4. Posteriormente, o complexo silencioso induzido por RNA (RISC) incorpora estes miRNAs como single-stranded RNA, que permite a sua ligação à 3' untranslated região (3'-UTR) dos seus mRNAs alvo para suprimir sua expressão3,5 .
Dentro nas últimas três décadas, desde que eles foram primeiramente identificados, miRNAs surgiram para mestre reguladores da expressão do gene, cujos níveis de expressão são rigidamente controlada6. Funções para os miRNAs têm sido descritas em órgão desenvolvimento7,8,9,10,11,12, manutenção da homeostase13,14 , bem como os contextos de doença que incluem neurológico15,16,17,18,19, cardiovascular20, doenças auto-imunes21 ,22, cancros23,24e outros25. A crescente valorização para a relevância de padrões de expressão de miRNA apresentou a necessidade de métodos de deteção confiável de miRNA transcrições. Tais métodos incluem PCR em tempo Real, microarrays, mancha do Norte, hibridação in situ e outros, que variam de sensibilidade, especificidade e poder quantitativa, predominantemente, devido ao fato de que miRNA transcrições são compostas de curto e sequências homólogas altamente6.
Recentemente, informou um papel importante no desenvolvimento da hipertrofia miocárdica26, uma condição descrevendo a adaptação estrutural do coração em resposta às elevadas exigências hemodinâmica27,28de miRNA-182. Hipertrofia cardíaca é caracterizada pelo aumento da massa miocárdica, que, se associado com remodelação mal-adaptativos29, pode levar a aumento do risco de insuficiência cardíaca, uma condição de contabilização de 8,5% de todas as mortes atribuíveis a cardiovascular doença de30.
Aqui, descrevemos nosso protocolo que combina a hibridação in situ com uma sonda de ácido nucleico de bloqueado (escavação) (LNA) Digoxigenina-etiquetadas e imunocoloração para a detecção simultânea de moléculas miRNA e proteína em cortes de tecido de coração de rato, em nosso modelo de hipertrofia cardíaca.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5758</td>
			<td>DEPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB02038</td>
			<td>non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>HS-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, recombinant, PCR Grade</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3115879001</td>
			<td>ProK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S271</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride Hexahydrate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 1 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SA48</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 12 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S25358</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Methylimidazole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>336092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>39391</td>
			<td>EDC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>216763</td>
			<td>H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td>Sodium Citrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>339450</td>
			<td>scramble miRNA/U6 snRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA mmu-miR-182 detection probe</td>
			<td>QIagen</td>
			<td>YD00615701</td>
			<td>5&#39;-DIG and 3&#39;-DIG labelled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisol hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NBT/BCIP Tablets</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11697471001</td>
			<td>NBT-BCIP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslip</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-545E</td>
			<td>Glass coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic coverslip</td>
			<td>Grace Bio-Labs</td>
			<td>HS40 22mmX40mmX0.25mm</td>
			<td>RNA-ase free plastic coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11093274910</td>
			<td>DIG antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td>Pap pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cardiac Troponin T antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92546</td>
			<td>cTnT antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Absorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>anti-rabbit-568 antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Formamide</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB00600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Oven</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>UVP HB-1000 Hybridizer</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization

micro-RNAs (miRNAs) são transcrições de single-stranded RNA que se ligam ao RNA mensageiro (mRNAs) e inibem a sua tradução ou promovem a sua degradação. Até à data, os miRNAs têm sido implicados em um grande número de processos biológicos e doença, que tem representado a necessidade para os métodos de detecção confiável de miRNA transcrições. Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para Digoxigenina-rotulado (escavação) trancado ácido nucleico (LNA) baseada em investigação miRNA deteção, combinada com proteína immunostaining em seções de coração de rato. Primeiro, realizamos uma técnica hibridização em situ utilizando a sonda para identificar miRNA-182 expressão nas seções de coração de controle e os ratos de hipertrofia cardíaca. Em seguida, realizamos imunocoloração para proteína cardíaca de troponina T (miocardite), sobre as mesmas seções, co localizar miRNA-182 com as células de casos. Usando este protocolo, fomos capazes de detectar miRNA-182 através uma fosfatase alcalina baseado ensaio colorimetric e miocardite através de coloração fluorescente. Este protocolo pode ser usado para detectar a expressão de qualquer miRNA de interesse através das sondas LNA escavar-etiquetadas e expressão de proteínas relevantes em cortes de tecido de coração de rato.

hibridação de miRNA in situ foi otimizada em seções de coração de rato usando um scramble miRNA e U6-snRNA, que serviu como controles positivos e negativos, respectivamente. Coloração positiva é indicada em azul, enquanto a coloração negativa é indicada pela falta de desenvolvimento de cor (figura 1A-1B). Casos específico expressão de miRNA-182 foi avaliada em seções de coração de controle e PlGF superexpressão rat...

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Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Tecido-específica miRNA Expression Profiling Mouse coração seções usando em hibridação in Situ

micro-RNAs (miRNAs) são sequências de RNA curtas e altamente homólogas, servindo como reguladores pós-transcricional de RNAs mensageiro (mRNAs). Métodos de deteção de miRNA atuais variam em sensibilidade e especificidade. Descreveremos um protocolo que combina a hibridação in situ e imunocoloração para a deteção simultânea de moléculas miRNA e proteína em cortes de tecido de coração de rato.

micro-RNAs (miRNAs) are single-stranded RNA transcripts that bind to messenger RNAs (mRNAs) and inhibit their translation or promote their degradation. To ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo do microRNA, fornecendo ferramentas para detectar a lcalização relativa de moléculas de proteína e microRNA. A principal vantagem desta técnica é que você pode detectar moléculas de proteína e microRNA da mesma seção tecidual. Este protocolo começa com uma reidratação dos tecidos montados em slides.Aqueça os slides a 60 graus Celsius por 10 minutos no forno de hibridização. A parafina deve estar visivelmente derretendo. Em seguida, incubar os slides em um frasco de vidro Coplin contendo agente de compensação comercialmente disponível por 10 minutos.Faça isso duas vezes. Em seguida, transfira os slides da lavagem para lavar para reidratar os tecidos. Uma vez hidratado, incubar os tecidos na solução de trabalho proteinase K a 37 graus Celsius por 15 minutos.Para remover a proteína K, lave os slides em 1x PBS duas vezes. Agora, conserte os tecidos. Primeiro, faça reservatórios nos slides usando uma caneta hidrofóbica para desenhar um círculo repelente de água em torno dos preparativos.Em seguida, aplique 500 microliters de solução 4%PFA dentro da barreira, e incubar os slides em um capô de fumaça. Para remover o fixador, lave os slides em um frasco de Coplin contendo PBS por cinco minutos duas vezes à temperatura ambiente. Em seguida, lave os slides em 0,13 molar 1-Metilimidazol por 10 minutos.Faça isso no capô da fumaça à temperatura ambiente, e faça esta lavagem duas vezes. Adicione o EDC fixativo e incubar à temperatura ambiente em um capô de fumaça por uma hora. Enxágüe os slides com tris de 50 mililitros.Para se preparar para a hibridização, primeiro construa uma câmara umidificada. Carregue dois pedaços de filtro ou papel de tecido na parte inferior de uma caixa, e molhe o papel com uma mistura de formamida e 1x SSC. Em seguida, aplique 200 microliters de solução de hibridização pré-aquecida em cada slide, e incubar a câmara umidificada de slides por uma a três horas a 50 graus Celsius.Após a incubação, substitua a solução de hibridização por 250 microliters de solução de sonda e cubra os slides com um deslizamento de cobertura sem RNase. Tente evitar prender bolhas de ar sob o deslizamento de cobertura. Agora, sele cuidadosamente a câmara com parafilm, e incubar os slides durante a noite a aproximadamente 30 graus Celsius abaixo da temperatura de fusão do RNA da sonda.Pode ser necessária otimização. Além de definir a temperatura de incubação certa, diferentes microRNAs são expressas em diferentes níveis, de modo que a otimização em relação à concentração da sonda também pode ser necessária para obter o sinal ideal. Após a hibridização, realize as lavagens de stringency.Primeiro, estava em 2x SSC a 50 graus Celsius por cinco minutos, ou até que a tampa deslize. Em seguida, execute duas lavagens em 2x SSC em temperatura ambiente, cada uma por cinco minutos. Em seguida, continuando em temperatura ambiente, lave os slides por cinco minutos em 0,2x SSC, seguido de cinco minutos em PBST e, finalmente, cinco minutos em 1x PBS.Neste ponto, os híbridos RNA-RNA são estáveis, e as condições rigorosas do RNA não são mais necessárias. Para detecção de anticorpos DIG, primeiro, retoque as barreiras hidrofóbicas e aplique 500 microliters de solução de bloqueio por trinta minutos. Incubar os slides à temperatura ambiente em uma câmara umidificada.Em seguida, remova a solução de bloqueio e substitua-a por 500 microliters da solução de anticorpos DIG. Incubar os slides à temperatura ambiente em uma câmara umidificada por uma hora. Em seguida, usando frascos Coplin, lave os slides três vezes no PBST por cinco minutos por lavagem.Em seguida, lave os slides em solução de pré-coloração por cinco minutos duas vezes. Em seguida, transfira os slides para um frasco de mailer de slides de polipropileno e adicione 20 mililitros de solução de substrato AP. Agora, incubar os slides a 37 graus Celsius por seis a 24 horas, protegidos da luz.Ao usar pela primeira vez o substrato AP, é importante acompanhar a reação. Em intervalos de duas horas, verifique o desenvolvimento de cores nos slides usando um microscópio, até que um tempo ideal de incubação tenha sido determinado. Para remover o excesso de substrato AP, lave os slides duas vezes na solução KTBT por cinco minutos por lavagem, seguido de uma lavagem em PBS por cinco minutos.Para detectar o anticorpo cTNT, primeiro, bloqueie os tecidos por uma hora. Em seguida, aplique 200 microliters de solução de anticorpos cTNT e incubar os slides durante a noite a 4 graus Celsius em uma câmara umidificada. No dia seguinte, lave os slides em um frasco de Coplin contendo PBS por cinco minutos.Faça isso três vezes. Em seguida, aplique 250 microliters de solução de anticorpos anti-coelho 568, e incubar os slides por uma hora à temperatura ambiente em uma câmara umidificada. Para lavar o excesso de anticorpo secundário, use três lavagens de cinco minutos em PBS.Em seguida, se desejar, aplique 250 microliters de solução de trabalho DAPI e incubar os slides por um minuto, protegidos da luz. Para remover a mancha de DAPI em excesso, use duas lavagens PBS de cinco minutos e, após as lavagens, monte os slides. A hibridização in-situ microRNA foi otimizada em seções cardíacas do mouse usando um microRNA mexido para controle negativo, e um SNRNA U6 como um controle positivo.A expressão específica do cardiomiócito de microRNA-182 foi avaliada em seções cardíacas a partir do controle e dos camundongos que superexpressam o PlGF. Os camundongos carregavam um transgêgênio PlGF sob um promotor alfa-MHC, e desenvolveram hipertrofia cardíaca, secundária ao aumento da angiogênese, dentro de seis semanas após a ativação transgênica. O protocolo de coloração revelou aumento da expressão do microRNA-182 nos corações dos camundongos PlGF.Em seguida, para determinar quais tipos de células expressas microRNA-182, as mesmas seções foram imunos detidas para cTNT. A coloração da DAPI também foi utilizada. Em ambas as seções cardíacas do rato de controle e plGF, microRNA-182 foi encontrado no compartimento nuclear das células de cardiomiócitos cTNT positivo.Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a hibridização microRNAse, seguida por imunostaining proteico. Ao tentar este procedimento, é muito importante lembrar de manter as condições livres de RNAse durante todo o primeiro dia, durante todas as etapas que antecedem a hibridização prop. Após este procedimento, outros métodos como a mancha ocidental em um PCR em tempo real podem ser realizados para responder a perguntas como, quais são os níveis de expressão relativa deste microRNA particular em diferentes tecidos, ou esta proteína particular na mesma seção tecidual.Não se esqueça que trabalhar com fixações como PFA e ADC pode ser extremamente perigoso. As precauções, incluem o uso de luvas e jalecos, bem como o uso de capuzes de fumaça, devem ser sempre tomadas ao realizar este procedimento.

Research

JoVE Journal

Genetics

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

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In Situ Rotulagem de replicação de DNA mitocondrial em Drosophila Adulto Ovários por Edu Coloração

The mitochondrial genome is inherited exclusively through the maternal line. Understanding of how the mitochondrion and its genome are proliferated and ...

Genética

Parallel Measurement of Circadian Clock Gene Expression and Hormone Secretion in Human Primary Cell Cultures

Medição paralela da expressão do gene relógio circadiano e hormonal secreção em culturas de células primárias humanas

Circadian clocks are functional in all light-sensitive organisms, allowing for an adaptation to the external world by anticipating daily environmental ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

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A mutagénese aleatória optogenetic Usando Histona-miniSOG em<em&gt; C. elegans</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

Detecção de Inter-aberrações cromossômicas estáveis ​​por fluorescência múltipla<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridização (mFISH) e Spectral Cariotipagem (SKY) em ratos irradiados

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

Single-cell Gene Expression Profiling Using FACS and qPCR with Internal Standards

Perfil de expressão gênica de célula única usando FACS e qPCR com controles internos

Gene expression measurements from bulk populations of cells can obscure the considerable transcriptomic variation of individual cells within those ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

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Alta resolução hibridação fluorescente In Situ em embriões da drosófila e tecidos usando amplificação de sinal Tyramide

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

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Sincronismo de replicação de DNA usando Zebrafish como um sistema modelo In Vivo de criação de perfil

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

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Visualização da Microbiota nas entranhas do carrapato por toda a montagem In Situ da hibridação

Infectious diseases transmitted by arthropod vectors continue to pose a significant threat to human health worldwide. The pathogens causing these ...

Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH) Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

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Única molécula fluorescência In Situ Hybridization (smFISH) análise em Budding fermento crescimento vegetativo e meiose

Single molecule fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a powerful technique to study gene expression in single cells due to its ability to detect ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

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Análise quantitativa de alternativo Pre-mRNA emendar nas seções de cérebro de rato usando o RNA In Situ da hibridação do ensaio

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...