Name: leaf spray mass spectrometry: a rapid ambient ionization technique to directly assess metabolites from plant tissues
Uploaded: 2018-06-21T15:00:00
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Este trabalho foi financiado pela concessão do programa de pesquisa de genoma de planta NSF IOS-1238812 e a sociedade pós-doutorado em biologia IOS-1400818. O trabalho também foi financiado por uma bolsa de pós-graduação aluno de Monsanto para Katherine A. Sammons. O africano pesquisador Fulbright Scholars Program (2017-2018) é agradeceu por financiamento concedido a Nokwanda P. Makunga. Agradecemos imensamente a doação de uma fonte de nanospray de Jessica Prenni e a proteómica e metabolómica facilidade na Colorado State University.

1. modificações a fonte Nanospray para folha pulverizador MS
<ol><li>Use uma fonte de nanospray modificada para spray de folha MS. Como não fluídico componentes são necessários para spray de folha MS, modificar a fonte, removendo a sonda LC da fonte.</li>
	<li>Monte o fio de MS de pulverizador de folha que aplicará a tensão no tecido da planta com o pino apropriado para conectar a fonte. Solde o pino para uma extremidade de um fio isolado; uma pinça para a extremidade oposta do fio de solda. Nota: A braçad...

<ol>
	<li>Pitt, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+applications+of+liquid+chromatography+-+mass+spectrometry+in+clinical+biochemistry.">Principles and applications of liquid chromatography - mass spectrometry in clinical biochemistry.</a> The Clinical Biochemist Reviews. 30 (1), 19-34 (2009).</li><li>Cooks, R. G., Ouyang, Z., Takats, Z., Wiseman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+technologies.+Ambient+mass+spectrometry.">Detection technologies. Ambient mass spectrometry.</a> Science. 311 (5767), 1566-1570 (2006).</li><li>Kim, H. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+pesticide+residues+by+leaf+spray+mass+spectrometry.">Analysis of pesticide residues by leaf spray mass spectrometry.</a> Analytical Methods. 4 (7), 1913-1919 (2012).</li><li>Snyder, D. T., Schilling, M. C., Hochwender, G., Kaufman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+methods+profiling+phenolic+glycosides+in+Populus+deltoides+and+Populus+grandidentata+by+leaf+spray+ionization+tandem+mass+spectrometry.">Analytical methods profiling phenolic glycosides in Populus deltoides and Populus grandidentata by leaf spray ionization tandem mass spectrometry.</a> Analytical Methods. 7 (3), 870-876 (2015).</li><li>Falcone, C. E., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+recognition+of+emerald+ash+borer+infestation+using+leaf+spray+mass+spectrometry.">Molecular recognition of emerald ash borer infestation using leaf spray mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 30 (11), 1304-1312 (2016).</li><li>Liu, J., Gu, Z., Yao, S., Zhang, Z., Chen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+analysis+of+Callicarpa+L.+using+direct+spray+ionization+mass+spectrometry.">Rapid analysis of Callicarpa L. using direct spray ionization mass spectrometry.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 124, 93-103 (2016).</li><li>Freund, D. M., Martin, A. C., Cohen, J. D., Hegeman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+surface+localized+specialized+metabolites+from+Glycyrrhiza+lepidota+(American+licorice)+by+leaf+spray+mass+spectrometry.">Direct detection of surface localized specialized metabolites from Glycyrrhiza lepidota (American licorice) by leaf spray mass spectrometry.</a> Planta. 247 (1), 267-275 (2018).</li><li>Smith, M. T., Crouch, N. R., Gericke, N., Hirst, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychoactive+constituents+of+the+genus+Sceletium+N.E.Br.+and+other+Mesembryanthemaceae:+a+review.">Psychoactive constituents of the genus Sceletium N.E.Br. and other Mesembryanthemaceae: a review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 50 (3), 119-130 (1996).</li><li>Gerickea, N., Viljoen, A. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cross-platform+toolkit+for+mass+spectrometry+and+proteomics.">A cross-platform toolkit for mass spectrometry and proteomics.</a> Nature Biotechnology. 30 (10), 918-920 (2012).</li><li>Pluskal, T., Castillo, S., Villar-Briones, A., Ore, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MZmine2:+modular+framework+for+processing,+visualizing,+and+analyzing+mass+spectrometry-based+molecular+profile+data.">MZmine2: modular framework for processing, visualizing, and analyzing mass spectrometry-based molecular profile data.</a> BMC Bioinformatics. 11, 395 (2010).</li><li>Meyer, G. M. J., Wink, C. S. D., Zapp, J., Maurer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GC-MS,+LC-MS(n),+LC-high+resolution-MS(n),+and+NMR+studies+on+the+metabolism+and+toxicological+detection+of+mesembrine+and+mesembrenone,+the+main+alkaloids+of+the+legal+high+&amp;#34;Kanna&amp;#34;+isolated+from+Sceletium+tortuosum.">GC-MS, LC-MS(n), LC-high resolution-MS(n), and NMR studies on the metabolism and toxicological detection of mesembrine and mesembrenone, the main alkaloids of the legal high &amp;#34;Kanna&amp;#34; isolated from Sceletium tortuosum.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 407 (3), 761-778 (2015).</li><li>Zhang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+polyhydroxylated+alkaloids+in+mulberry+using+leaf+spray+mass+spectrometry.">Rapid detection of polyhydroxylated alkaloids in mulberry using leaf spray mass spectrometry.</a> Analytical Methods. 5 (10), 2455-2460 (2013).</li><li>Pereira, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+of+agrochemicals+by+paper+spray+ionization+and+leaf+spray+mass+spectrometry:+which+technique+is+more+appropriate?.">Rapid screening of agrochemicals by paper spray ionization and leaf spray mass spectrometry: which technique is more appropriate?.</a> Analytical Methods. 8, 6023-6029 (2016).</li><li>Zhang, J. I., Li, X., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+analysis+of+steviol+glycosides+from+Stevia+leaves+by+ambient+ionization+mass+spectrometry+performed+on+whole+leaves.">Direct analysis of steviol glycosides from Stevia leaves by ambient ionization mass spectrometry performed on whole leaves.</a> The Analyst. 137 (13), 3091-3098 (2012).</li><li>Freund, D. M., Hegeman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+stable+isotope-enabled+mass+spectrometry-based+plant+metabolomics.">Recent advances in stable isotope-enabled mass spectrometry-based plant metabolomics.</a> Current Opinion in Biotechnology. 43, 41-48 (2017).</li><li>Wurtzel, E. T., Kutchan, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+metabolism,+the+diverse+chemistry+set+of+the+future.">Plant metabolism, the diverse chemistry set of the future.</a> Science. 353 (6305), 1232-1236 (2016).</li></ol>

O uso bem sucedido do presente protocolo baseia-se sobre a otimização de várias etapas para as espécies de plantas, tipo de tecido e compound(s) de alvo de interesse. Os parâmetros descritos no protocolo fornecem um bom ponto de partida. As seguintes decisões experimentais precisam ser feitas e testadas: ou não para uso (1) corte ou tecido sem cortes e (2) solventes ou sem solvente, (3) o solvente para usar e em que volume, (4) qual a distância do tecido a partir da entrada do íon deve ser e (5) a amplitude de t...

As plantas contêm uma grande variedade de pequenas moléculas com propriedades químicas diferentes. MS é uma técnica poderosa para analisar compostos de plantas, porque pode fornecer composições elementares com uma alta sensibilidade e especificidade para a detecção e identificação de metabólitos1. Mais comumente, MS é realizada em amostras extraídas por meio de solvente, que são separadas por cromatografia antes o MS análise1. No entanto, o uso de cromatografia líquida (LC) requer vezes análise longa e é frequentemente associado com uma amostra extensa preparação1. Em contraste, direto de análise química de tecidos intactos que contorna a cromatografia é uma técnica muito rápida, exigindo a amostra mínima preparação2. Assim, em casos onde as etapas cromatográficas podem ser cobradas, uma análise química direta pode ser altamente vantajosa.
LC-MS típico para pesquisa de produtos e metabolomics natural depende de extrações demoradas em massa de materiais secos ou congelados planta contendo vários tecidos e células tipos3. Alternativamente, análise química direta, tais como a detecção de MS de metabolitos do tecido de planta, pode isolar os tipos de células e evitar artefatos de preparação4. Spray de folha MS, também conhecida como tecido-pulverizador5,6, é uma técnica de ionização ambiente direto MS, que requer essencialmente, sem preparação amostra5,7. Pulverizador de folha que MS está intimamente relacionada com spray de papel MS, uma técnica de ionização ambiente com características de ionização electrospray que permite a detecção dos analitos que são depositadas em papel7. Apesar do nome, folha spray MS é aplicável para vários tipos de tecidos vegetais, não nos deixa e tem sido demonstrado em frutos, sementes, raízes, tecidos florais e tubérculos, entre outros,6,8,9, 10,11,12. A técnica facilita a ionização de fitoquímicos endógenas directamente a partir dos materiais de planta para o espectrômetro de massa para a deteção de8. Spray de folha MS também pode fornecer informações sobre a distribuição espacial dos produtos químicos em tipos diferentes de tecidos em plantas13. Quando o pulverizador folha MS é comparado com a extração de solvente e LC-MS, os resultados sugerem pulverizador folha que MS permite a rápida detecção de metabólitos de superfície de tipos de células únicas tais como tricomas13. A Figura 1 ilustra a montagem experimental de folha pulverizador MS. Ionização electrospray direta ocorre após apenas modificações de fonte menor. Uma alta tensão é aplicada no tecido vegetal através de uma pinça de metal, produzindo um spray de gotas altamente carregadas, formando um cone de Taylor que transporta os íons para a entrada de iões de Electrospray a Sra. ionização ocorre a partir do líquido natural da planta ou o solvente appl IED para a superfície da planta. Uma ponta pontiaguda no tecido facilita a electrospray e pode ser naturalmente natural ou criado por um corte.
Spray de folha MS é um método rápido de análise qualitativa e semi-quantitativa de tecidos de planta intacta que achei utilidade para uma ampla variedade de aplicações. Por exemplo, a técnica tem sido usada para detectar compostos endógenos para distinguir espécies relacionadas e até mesmo para avaliar alterações na mesma espécie cultivada em diferentes condições. Estudos anteriores mostraram esta abordagem medindo metabolitos em beautyberry (Callicarpa L.) 12 e ginseng americano (Panax quinquefolium L.) 6. no último exemplo, ginsenósidos, aminoácidos e oligossacarídeos poderiam ser detectados depois de molhar o tecido cru ginseng. Ginseng americano selvagens e cultivado foram diferenciadas de tubérculo fatias6. Integridade do tubérculo de ginseng foi preservada sucedendo spray de folha MS, que permitiu uma inspeção morfológica e microscópico subsequente6. Além disso, compostos exógenos em amostras de plantas também podem ser detectados. Um número de pesticidas (acetamipride, Difenilamina, imazalil, linurão e tiabendazol) foram detectado na casca ou polpa de frutas e legumes9. Enquanto estes estudos e muitos outros têm mostrado a utilidade do pulverizador folha MS para várias finalidades específicas, um protocolo detalhado não foi anteriormente relatado.
Aqui, a descrição do protocolo não incidirá sobre a otimização do método para um determinado tecido ou composto. Em vez disso, a detecção de alcaloides de mesembrine de Sceletium tortuosum (L.) N.E.Br. (Aizoaceae) é usada como um exemplo para discutir as medidas necessárias de otimização que devem ser tomadas ao preparar um experimento de MS de pulverizador de folha para uma espécie, tecido, ou Compound(s) pela primeira vez. S. tortuosum é uma suculenta endêmicas para a região semi-árida de Karoo, na África do Sul. Uma medicina tradicional de San e Khoi Khoi povos, foi usada para supressão apetite e sede, bem como quanto aos seus efeitos psicotrópicos e analgésicos14,15. Atualmente, os extratos padronizados são utilizados para o tratamento de distúrbios neuropsiquiátricos e neuropsicológicos16,17. Os principais compostos de interesse incluem o alcaloide mesembrine e seus derivados, muitos dos quais também são encontrados em relacionados Sceletium espécies15. Populações selvagens e cultivadas de S. tortuosum têm concentrações variáveis de alcaloides mesembrine, apresentando, assim, um desafio de controle da qualidade18. Um método para a detecção rápida de mesembrine alcaloides, tais como spray de folha MS, pode ser útil na monitorização Sceletium produtos. Porque anteriormente, não tinha havido nenhum protocolo experimental visual pormenorizado pelo spray de folha técnica do MS, nós ilustraremos o método usando o exemplo da S. tortuosum, e é descrita a seguir: a modificação de uma fonte de nanospray, o seleção e preparação dos tecidos da planta, a aquisição dos dados, a interpretação dos resultados e a otimização dos parâmetros de MS.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="880">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">Conn Pin</td>
			<td style="width:139px;">Digi-Key elctronics&#160;</td>
			<td style="width:119px;">WM2563CT-ND</td>
			<td style="width:385px;">pin will insert into Thermo Scientific&#160; source to provide voltage&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">small clamp</td>
			<td style="width:139px;">Digi-Key elctronics&#160;</td>
			<td>314-1018-ND</td>
			<td>CLIP MICRO ALLIGATOR COPPER 5A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">large clamp</td>
			<td style="width:139px;">Digi-Key elctronics&#160;</td>
			<td>290-1951-ND</td>
			<td>ALLIGATOR CLIP NARROW NICKLE 5A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heat shrink</td>
			<td style="width:139px;">Digi-Key elctronics&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Q2Z1-KIT-ND</td>
			<td>to cover soldering joints&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">NSI source Nanospray Ion Source</td>
			<td style="width:139px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>Another brand will work if you are not using a Thermo instrument</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:237px;">Q Exactive- hybrid quadrupole Orbitrap</td>
			<td style="width:139px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>Another brand will work if you are not using a Thermo instrument</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">Tune Software</td>
			<td style="width:139px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Another brand will work if you are not using a Thermo instrument</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">Xcalibur Software</td>
			<td style="width:139px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:237px;">Plant of interest - S. tortousum</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

leaf spray mass spectrometry: a rapid ambient ionization technique to directly assess metabolites from plant tissues

As plantas produzem milhares de pequenas moléculas que são diversas em suas propriedades químicas. Espectrometria de massa (MS) é uma técnica poderosa para a análise de metabólitos da planta porque ele fornece pesos moleculares com alta sensibilidade e especificidade. Spray de folha MS é uma técnica de ionização ambiente onde o tecido de planta é usado para análise química direta via electrospray, eliminando a cromatografia do processo. Esta abordagem de metabólitos de amostragem permite uma grande variedade de classes químicas para ser detectado simultaneamente de tecidos vegetais intactos, minimizando a quantidade de preparação de amostra necessária. Quando usado com uma MS em massa de alta resolução, precisas, spray de folha MS facilita a rápida detecção de metabólitos de interesse. Também é possível coletar dados de fragmentação de massa em tandem com esta técnica para facilitar a identificação de compostos. A combinação de medições precisas em massa e a fragmentação é benéfica em confirmando identidades compostas. O spray de folha técnica MS requer apenas pequenas modificações a uma fonte de ionização de nanospray e é uma ferramenta útil para expandir ainda mais os recursos de um espectrômetro de massa. Aqui, o tecido de folhas frescas de Sceletium tortuosum (Aizoaceae), uma planta medicinal tradicional da África do Sul, é analisado; numerosos alcaloides de mesembrine são detectados com spray de folha MS.

Em 10 semanas que pós-germinação, recém coletados com efeito de estufa-crescido S. tortuosum folhas foram analisados por spray folha MS. O fluxo de trabalho experimental para a detecção de metabólitos de S. tortuosum deixa usar spray de folha que MS é ilustrada na Figura 2. Uma folha foi selecionada, cortar uma tira fina com uma extremidade pontiaguda para formar um ponto e fixada com o spray de folha MS aparelhos de grampo de arame....

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Leaf Spray Mass Spectrometry: A Rapid Ambient Ionization Technique to Directly Assess Metabolites from Plant Tissues

Espectrometria de massa de pulverizador de folha é uma técnica de análise química direta que minimiza a preparação da amostra e elimina a cromatografia, permitindo a detecção rápida de pequenas moléculas de tecidos vegetais.

Espectrometria de massa folha Spray: Uma técnica de ionização ambiente rápida para avaliar diretamente a metabolitos de tecidos vegetais

Plants produce thousands of small molecules that are diverse in their chemical properties. Mass spectrometry (MS) is a powerful technique for analyzing ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Experimental Design for Laser Microdissection RNA-Seq: Lessons from an Analysis of Maize Leaf Development

Projeto Experimental de Laser Microdissecção RNA-Seq: Lições de uma análise do desenvolvimento foliar do milho

Genes with important roles in development frequently have spatially and/or temporally restricted expression patterns. Often these gene transcripts are not ...

Bioquímica

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

resolvida no tempo com ionização por electrospray Hidrogénio-deutério troca Espectrometria de Massa para estudar a estrutura e dinâmica das proteínas

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Resolver purificada por afinidade complexos de proteínas por Azul Native PAGE e Proteína Correlação Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

Um Método de Extração Fracionada Simples para a Análise Abrangente de Metabolitos, Lípidos e Proteínas de uma única amostra

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Preparação ideal de formol fixada amostras para peptídeo baseado Matrix assistida por espectrometria de massa de ionização/dessorção Laser Imaging fluxos de trabalho

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Detecção de locais de ubiquitinação de proteínas por enriquecimento de peptídeos e espectrometria de massa

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Preparação de amostras para espectrometria de ionização de eletrospray de sonda

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Isolation of Histone from Sorghum Leaf Tissue for Top Down Mass Spectrometry Profiling of Potential Epigenetic Markers

Isolamento de Histone do tecido da folha de sorgo para perfil de espectrometria de massa de top down de potenciais marcadores epigenéticos

Histones belong to a family of highly conserved proteins in eukaryotes. They pack DNA into nucleosomes as functional units of chromatin. ...

Semi-Quantitative Analysis of Peptidoglycan by Liquid Chromatography Mass Spectrometry and Bioinformatics

Análise semiquantitativa de peptidoglicanos por cromatografia líquida, espectrometria de massas e bioinformática

Peptidoglycan is an important component of bacterial cell walls and a common cellular target for antimicrobials. Although aspects of peptidoglycan ...

Quantitative Metabolomics of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Metabolomics of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Metabolômica Quantitativa de Saccharomyces Cerevisiae Usando cromatografia líquida juntamente com espectrometria de massa tandem

Metabolomics is a methodology used for the identification and quantification of many low-molecular-weight intermediates and products of metabolism within ...