Name: mating-based overexpression library screening in yeast
Uploaded: 2018-07-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast at JoVE.com

We zijn dankbaar voor de nadenkende gesprekken met leden van het Ju-laboratorium en Zhong laboratorium, en de financiële steun van de Wright State University.

Opmerking: De hier beschreven protocol is ontworpen voor het screenen van bibliotheek plasmiden vervat in tien 96-wells-platen maar kunnen worden geschaald omhoog of omlaag dienovereenkomstig. Het protocol moet worden herhaald om te voltooien van de hele bibliotheek screening. Gewoonlijk, kan screening tegen 10 platen van bibliotheek genen telkens comfortabel worden behandeld door 1 persoon.
1. voorbereiding van de 96-Wells gist transformatie
Opmerking: Deze stap wordt gedaan als eerder b...

<ol>
	<li>Dujon, B. A., Louis, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+diversity+and+evolution+in+the+budding+yeasts+(Saccharomycotina).">Genome diversity and evolution in the budding yeasts (Saccharomycotina).</a> Genetics. 206 (2), 717-750 (2017).</li><li>Khurana, V., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+neurodegeneration+in+Saccharomyces+cerevisiae:+why+cook+with+baker's+yeast.">Modelling neurodegeneration in Saccharomyces cerevisiae: why cook with baker's yeast.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11 (6), 436-449 (2010).</li><li>Willingham, S., Outeiro, T. F., DeVit, M. J., Lindquist, S. L., Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+genes+that+enhance+the+toxicity+of+a+mutant+huntingtin+fragment+or+alpha-synuclein.">Yeast genes that enhance the toxicity of a mutant huntingtin fragment or alpha-synuclein.</a> Science. 302 (5651), 1769-1772 (2003).</li><li>Outeiro, T. F., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+cells+provide+insight+into+alpha-synuclein+biology+and+pathobiology.">Yeast cells provide insight into alpha-synuclein biology and pathobiology.</a> Science. 302 (5651), 1772-1775 (2003).</li><li>Cooper, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-synuclein+blocks+ER-Golgi+traffic+and+Rab1+rescues+neuron+loss+in+Parkinson's+models.">Alpha-synuclein blocks ER-Golgi traffic and Rab1 rescues neuron loss in Parkinson's models.</a> Science. 313 (5785), 324-328 (2006).</li><li>Treusch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+links+between+Abeta+toxicity,+endocytic+trafficking,+and+Alzheimer's+disease+risk+factors+in+yeast.">Functional links between Abeta toxicity, endocytic trafficking, and Alzheimer's disease risk factors in yeast.</a> Science. 334 (6060), 1241-1245 (2011).</li><li>Ju, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+yeast+model+of+FUS/TLS-dependent+cytotoxicity.">A yeast model of FUS/TLS-dependent cytotoxicity.</a> PLoS Biology. 9 (4), 1001052 (2011).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+determinants+and+genetic+modifiers+of+aggregation+and+toxicity+for+the+ALS+disease+protein+FUS/TLS.">Molecular determinants and genetic modifiers of aggregation and toxicity for the ALS disease protein FUS/TLS.</a> PLoS Biology. 9 (4), 1000614 (2011).</li><li>Johnson, B. S., McCaffery, J. M., Lindquist, S., Gitler, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+yeast+TDP-43+proteinopathy+model:+Exploring+the+molecular+determinants+of+TDP-43+aggregation+and+cellular+toxicity.">A yeast TDP-43 proteinopathy model: Exploring the molecular determinants of TDP-43 aggregation and cellular toxicity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (17), 6439-6444 (2008).</li><li>Fleming, M. S., Gitler, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+yeast+plasmid+overexpression+screen.">High-throughput yeast plasmid overexpression screen.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2836 (2011).</li><li>Herskowitz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+the+budding+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Life cycle of the budding yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiological Reviews. 52 (4), 536-553 (1988).</li><li>Suter, B., Auerbach, D., Stagljar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast-based+functional+genomics+and+proteomics+technologies:+the+first+15+years+and+beyond.">Yeast-based functional genomics and proteomics technologies: the first 15 years and beyond.</a> Biotechniques. 40 (5), 625-644 (2006).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (25), 7821-7826 (2015).</li><li>Jackson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+forelimb+function+by+UPF1+gene+therapy+in+a+rat+model+of+TDP-43-induced+motor+paralysis.">Preservation of forelimb function by UPF1 gene therapy in a rat model of TDP-43-induced motor paralysis.</a> Gene Therapy. 22 (1), 20-28 (2015).</li></ol>

Hier beschrijven we een protocol voor het uitvoeren van een plasmide overexpressie scherm in gist met paring te introduceren de plasmide-bibliotheek in het model van de gist. Met behulp van deze aanpak, kunnen meerdere gist modellen van neurodegeneratieve ziekte eiwit toxiciteit worden gescreend met behulp van dezelfde collectie van gist getransformeerd met een plasmide-bibliotheek. Het moeizame proces van transformatie hoeft alleen te worden uitgevoerd zodra, na welke hoogefficiënte gist paring wordt gebruikt om de pla...

De ontluikende gist Saccharomyces cerevisiae heeft wijd gebruikt in fundamenteel wetenschappelijk onderzoek1 om te begrijpen van de cellulaire processen rechtstreeks verband houdt met ziekten bij de mens. Bovendien, het is gebruikt als een modelorganisme bestuderen van menselijke ziekte-geassocieerde eiwitten, zoals die in verband met de meest voorkomende neurodegeneratieve ziekten, met inbegrip van de ziekte van Alzheimer, ziekte van Parkinson, de ziekte van Huntington en Amyotrofische Laterale sclerose (ALS)2. Een voordeel van de gist-model is het gemak waarmee een genoom-brede scherm kan worden uitgevoerd om te identificeren van cellulaire routes in verband met de toxiciteit van ziekte-gerelateerde eiwitten, waardoor inzicht in het mechanisme van hun toxiciteit. Één dergelijke scherm heet een overexpressie bibliotheek scherm, waarin elk van de 5.500 gist genen in een gekleed bibliotheek is omgevormd tot een model van de gist om te identificeren welke genen toxiciteit wanneer overexpressie kunnen wijzigen. Deze screeningmethode is succesvol toegepast in de modellen van de gist van meerdere neurodegeneratieve ziekte-geassocieerde eiwitten, met inbegrip van huntingtin voor de ziekte van Huntington3, α-synuclein voor de ziekte van Parkinson4,5 , Aβ voor Alzheimer's disease6, FUS en TDP-43 voor ALS7,8,9. Terwijl het gebeurt meestal in een high-throughput wijze10, is de meest arbeidsintensieve stap van het scherm afzonderlijk 5.500 gist genen uit een gekleed bibliotheek transformeren. Deze stap moet worden uitgevoerd telkens wanneer die de screening wordt herhaald, en wanneer een nieuw opgerichte gist-model moet worden bestudeerd. Het is belangrijk om te vinden van een meer efficiënte manier om deze taak te volbrengen.
Gistcellen kunnen stabiel in zowel haploïde en diploïde vormen bestaan. Er zijn twee tegenover paring soorten haploïde cellen, paring type een en α. haploïde cellen van elke paring Typ produceren en afscheiden van hun eigen specifieke paring feromoon, waarop alleen de tegenovergestelde paring type cellen reageren. Hierdoor wordt de paring tussen een en α cellen tot stabiele diploïde cellen, een/α. Dit proces is spontaan en hoogefficiënte11. We kunnen profiteren van deze unieke levenscyclus van S. cerevisiae in te voeren van de plasmide-bibliotheek. Meer in het bijzonder, zal elk gen in de gekleed plasmide-bibliotheek worden omgezet in haploïde cellen van één paring type, dat wil zeggen, α-cel. Deze cellen met de genen van de bibliotheek zal dan in glycerol voorraad in een gekleed 96-Wells-indeling worden opgeslagen. Voor elk gist-model dat moet worden onderzocht, kunnen gistcellen die de bibliotheek genen bevatten worden ontdooid uit de voorraad van glycerol en de screening kan worden gedaan door de paring met het model van de gist van belang in het tegenovergestelde paring type, dat wil zeggen, paring type een. Dit idee van het gebruik van de paring aan het samenbrengen van twee genen in gist is niet nieuw. Het is met succes toegepast in de gist van de high-throughput screening van de twee-hybride, in die een aas bouwen (dat wil zeggen, Gal4-DNA-bindende domein fusies) in één paring type is samengebracht door paring met een prooi construct uit een gekleed bibliotheek 12. deze strategie heeft echter nooit zijn toegepast in overexpressie bibliotheek vertoningen, die altijd gebruik van traditionele transformatie methoden gemaakt hebben.
Ons laboratorium gevestigd eerder een model van de gist van de ALS-geassocieerde proteïne FUS7. Door overexpressie bibliotheek screening met de transformatie methode ontdekten we vijf gist genen(ECM32, NAM8, SBP1, SKO1en VHR1) die het redden van de toxiciteit van FUS wanneer overexpressie. Deze bevindingen werden onafhankelijk van elkaar met een gelijkaardige studie bevestigd door een andere groep8. hUPF1, een menselijke homolog van ECM32, werd later aan het onderdrukken van de toxiciteit in primaire neuronale cellen13 en in een diermodel van ALS14 ook aangetoond. Met behulp van deze vijf genen als bewijs van beginsel, we laten zien dat alle vijf genen ook FUS toxiciteit redden, wanneer zij worden binnengebracht in het model van de gist FUS door paring. Omdat gistcellen met de genen van de bibliotheek kunnen worden permanent in glycerol voorraad opgeslagen en nieuw leven ingeblazen wanneer nodig, zal deze paring gebaseerde methode de tijdrovende stap van transformatie telkens die de bibliotheek worden gescreend moet tegen verwijderen. Omdat de paring is zeer efficiënt met geen plasmide transformatie betrokken, vermindert deze strategie ook aanzienlijk de kosten in verband met reiniging en transformatie van een grote plasmide-bibliotheek. We zullen met succes deze methode toepassen op een bibliotheek screening tegen gist model van FUS.
De procedure voor paring gebaseerde screening wordt kort beschreven in Figuur 1. In eerste instantie is de gekleed plasmide-bibliotheek omgevormd tot een haploïde giststam van het type α met een hoge gegevensdoorvoer gist transformatie protocol waarin elk putje van een 96-wells-plaat gist getransformeerd met een specifieke bibliotheek plasmide bevat paring. Deze collectie van getransformeerde gist wordt opgeslagen als een glycerol voorraad die kan worden ontdooid en nieuw leven ingeblazen voor gebruik later. Het model van de gist van belang, in dit geval FUS toxiciteit, moet worden gegenereerd in een haploïde giststam met de tegenovergestelde paring type (type paring een). In een high-throughput wijze met behulp van steriele 96-pins replicators, zijn de FUS stam giststammen met de bibliotheek van de plasmide overgedragen aan 96-wells-platen met rijke media en kunnen van de stuurman. Na de paring, een klein volume van elk putje van de paring cultuur wordt overgedragen aan 96-wells-platen met synthetische dropout media in welke alleen diploïde gist met zowel de FUS en bibliotheek genen kunnen groeien. Een robotic spotten machine wordt vervolgens gebruikt voor het overzetten van gist cultuur van elk putje op agar platen waar de uitdrukking van FUS en de genen van de bibliotheek wordt geïnduceerd.  Bovendien is gist cultuur gespot om agar platen waar FUS en de bibliotheek genen niet worden uitgedrukt. Na groei op agar platen, genen die redden of verergeren FUS toxiciteit worden geïdentificeerd.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:555px;" width="554">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">salmon Sperm DNA (SS-DNA)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:99px;">&#160; D1626</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:183px;">YPD broth</td>
			<td style="width:127px;">Research Products International (RPI)</td>
			<td style="width:99px;">Y20090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">Granulated Agar</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">BP97445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:183px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:127px;">Research Products International (RPI)</td>
			<td style="width:99px;">G32040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:183px;">D-(+)-Galactose</td>
			<td style="width:127px;">Research Products International (RPI)</td>
			<td style="width:99px;">G33000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:183px;">D-(+)-Raffinose Pentahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Research Products International (RPI)</td>
			<td style="width:99px;">R20500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">A702-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Synthetic Ura- drop out medium</td>
			<td style="width:127px;">Clontech</td>
			<td style="width:99px;">630416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:183px;">Yeast amino acid drop out supplement -Histidine/-Uracil</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>630422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:183px;">Yeast Nitrogen Base without Amino Acids and Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:127px;">Research Products International (RPI)</td>
			<td style="width:99px;">Y20060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">S67496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Lithium acetate, anhydrous</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">AC268640010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Polyethylene Glycol 3350 (PEG-3350)</td>
			<td style="width:127px;">Spectrum Chemical&#160;</td>
			<td style="width:99px;">PO125-12KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">96 Pin Replicator&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Scinomix</td>
			<td style="width:99px;">SCI-5010-OS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">Nunc OmniTray</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Sci</td>
			<td>140156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:183px;">Corning Costar 96 well assay plate, round bottom with lid</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">07-200-760</td>
			<td>non-treated, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Eppendorf&#160;Research plus Multichannel Pipette</td>
			<td style="width:127px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:99px;">TI13690052</td>
			<td>30-300ul volume</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:183px;">Fisherbrand&#160;Isotemp Digital Dry Baths/Block Heaters</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">88-860-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">Eppendorf&#160;MixMate</td>
			<td style="width:127px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:99px;">21-379-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Eppendorf 5810R Centrifuge</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Sci</td>
			<td style="width:99px;">05-413-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:183px;">Avanti J-26 XPI Centrifuge</td>
			<td style="width:127px;">Beckman</td>
			<td style="width:99px;">393127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">MultiFlo FX Multi-Mode Dispenser</td>
			<td style="width:127px;">BioTek</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:183px;">Rotor HDA&#160;&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Singer Instruments</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mating-based overexpression library screening in yeast

Ontluikende gist is wijd verbeid gebruikt als een model in het bestuderen van eiwitten die zijn gekoppeld aan ziekten bij de mens. Genoom-brede genetische screening is een krachtig hulpmiddel gebruikte gist studies. De expressie van een aantal neurodegeneratieve ziekte-geassocieerde eiwitten in gist zorgt ervoor dat de cytotoxiciteit en statistische vorming, Recapitulerend bevindingen gezien bij patiënten met deze aandoeningen. Hier beschrijven we een methode voor het screenen van een model van de gist van de Amyotrofische laterale sclerose-geassocieerde proteïne FUS voor parameters van de toxiciteit. In plaats van transformatie, berust dit nieuwe platform voor screening op de paring van de gist te introduceren een gekleed bibliotheek van plasmiden in het model van de gist. De paring methode kent twee duidelijke voordelen: ten eerste, het is uiterst efficiënt; Ten tweede, de vooraf getransformeerde gekleed bibliotheek van plasmiden kan worden opgeslagen voor de lange termijn als een voorraad van glycerol en snel toegepast op andere schermen zonder de arbeidsintensieve stap van transformatie naar het model van de gist telkens. We laten zien hoe deze methode kan met succes worden gebruikt aan het scherm voor de genen die de toxiciteit van FUS wijzigen.

De ALS-geassocieerde proteïne FUS, een RNA/DNA-bindend-proteïne, was eerder studeerde in haploïde gist7,8. Genetische screening met de transformatie gebaseerde methode ontdekt verschillende gist genen die FUS toxiciteit onderdrukken. De menselijke homolog van één van de genen van gist werd later aangetoond te worden effectief in het onderdrukken van de toxiciteit in een primaire neuronale cel en rat model ALS<sup class="xref"...

Watch this Scientific Journal Video about Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast at JoVE.com

Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast

Dit artikel presenteert een paring gebaseerde methode om overexpressie screening in ontluikende gist met behulp van een gekleed plasmide-bibliotheek.

Paring gebaseerde overexpressie bibliotheek Screening in het gist

Budding yeast has been widely used as a model in studying proteins associated with human diseases. Genome-wide genetic screening is a powerful tool ...

Research

JoVE Journal

Genetics

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

gerichte<em&gt; In Situ</em&gt; Mutagenese van histon genen in gist

We describe a PCR- and homologous recombination-based system for generating targeted mutations in histone genes in budding yeast cells. The resulting ...

A Universal Protocol for Large-scale gRNA Library Production from any DNA Source

Een universeel Protocol voor grootschalige gRNA bibliotheek productie uit elke bron van DNA

The popularity of the CRISPR/Cas9 system for both genome and epigenome engineering stems from its simplicity and adaptability. An effector (the Cas9 ...

Robust DNA Isolation and High-throughput Sequencing Library Construction for Herbarium Specimens

Robuuste DNA isolatie en High-throughput Sequencing bibliotheek bouw voor Herbarium Specimens

Herbaria are an invaluable source of plant material that can be used in a variety of biological studies. The use of herbarium specimens is associated with ...

Gene-targeted Random Mutagenesis to Select Heterochromatin-destabilizing Proteasome Mutants in Fission Yeast

Gen-gerichte willekeurige mutagenese Heterochromatin-destabiliserende proteasoom mutanten in Fission gist selecteren

Random mutagenesis of a target gene is commonly used to identify mutations that yield the desired phenotype. Of the methods that may be used to achieve ...

Ultralow Input Genome Sequencing Library Preparation from a Single Tardigrade Specimen

Ultralow Input genoom Sequencing bibliotheek bereiding op basis van een enkel exemplaar van de Tardigrade

Tardigrades are microscopic animals that enter an ametabolic state called anhydrobiosis when facing desiccation and can return to their original state ...

Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH) Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization smFISH Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

Één molecuul fluorescentie In Situ hybridisatie (smFISH) analyse in Budding vegetatieve groei van gist en meiose

Single molecule fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a powerful technique to study gene expression in single cells due to its ability to detect ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Karakterisering van Histone posttranslationele wijziging wijzigingen in gist neurodegeneratieve Proteinopathy modellen

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

A Deep-sequencing-assisted, Spontaneous Suppressor Screen in the Fission Yeast Schizosaccharomyces pombe

A Deep-sequencing-assisted, Spontaneous Suppressor Screen in the Fission Yeast Schizosaccharomyces pombe

Een Deep-sequencing-bijgewoonde, spontane Suppressor scherm in de kernsplijting gist Schizosaccharomyces pombe

A genetic screen for mutant alleles that suppress phenotypic defects caused by a mutation is a powerful approach to identify genes that belong to closely ...

HOX Loci Focused CRISPR/sgRNA Library Screening Identifying Critical CTCF Boundaries

HOX Loci Focused CRISPR/sgRNA Library Screening Identifying Critical CTCF Boundaries

HOX Loci gericht CRISPR/sgRNA bibliotheek Screening identificeren kritische CTCF grenzen

CCCTC-binding factor (CTCF)-mediated stable topologically associating domains (TADs) play a critical role in constraining interactions of DNA elements ...

Expression, Purification, and Liposome Binding of Budding Yeast SNX-BAR Heterodimers

Expressie, zuivering en liposoom binding van ontluikende gist SNX-BAR Heterodimers

SNX-BAR proteins are an evolutionarily conserved class of membrane remodeling proteins that play key roles in sorting and trafficking of protein and ...