Name: saccharomyces cerevisiae metabolic labeling with 4-thiouracil and the quantification of newly synthesized mrna as a proxy for rna polymerase ii activity
Uploaded: 2018-10-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity at Jo

彼のサポートのためのラズロ寅と V. フィッシャー、k. シューマッハと f. エル Saafin 議論のために感謝しますマリー キュリー ITN フェローシップ (PITN-ジョージア州-2013-606806、NR ネット) に支えられ闘病を続けてと財団アーク。この作品は、アジャンス ナシオナル デ ラ抜き (ANR-15-CE11-0022 SAGA2) からの資金によって支えられました。本研究は、ANR-10-LABX-0030-INRT、フレーム プログラム Investissements d'Avenir ANR-10-アイデックス-0002-02 下のアジャンス ナシオナル デ ラ抜きの運営するフランス国家ファンドによっても支えられました。

1. 細胞培養と佐賀のサブユニットのラパマイシン枯渇
<ol><li>各酵母ひずみと複製は、野生型を含むまたは制御系統は ypd 培地 (2% ペプトン、1% 酵母エキス、グルコース 2%) 5 mL に新鮮なプレートから単一コロニーを接種します。</li>
	<li>定数撹拌 (150 rpm) 30 ° C で一晩出芽酵母細胞を成長します。</li>
	<li>600 の光学濃度を測定 nm (外径600) ypd 培地約 0.1 で 100 mL の OD600</sub...

<ol>
	<li>Gardini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Run-On+Sequencing+(GRO-Seq).">Global Run-On Sequencing (GRO-Seq).</a> Methods in Molecular Biology. 1468, 111-120 (2017).</li><li>Churchman, L. S., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nascent+transcript+sequencing+visualizes+transcription+at+nucleotide+resolution.">Nascent transcript sequencing visualizes transcription at nucleotide resolution.</a> Nature. 469 (7330), 368-373 (2011).</li><li>Churchman, L. S., Weissman, J. 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ゲノムワイドな転写の変化を解析するツールまだ改善している間唯一 RNA の定常状態レベルの定量化によるトランスクリプトーム解析では RNA ポリメラーゼ II の活性の変更は正確に反映可能性があります。確かに、mrna は RNA 合成だけでなく、成熟し、劣化も規制されています。MRNA 分解から非 mRNA 合成を測定するには、明確なプロトコルは、酵母や哺乳類の初期転写の解析のため近年開発さ?...

セルは、内因性と外因性手がかり、その遺伝子発現プログラムの動的変化に対応します。近年、ゲノム手法の途方もない開発は、さまざまな条件でトランスクリプトーム変更に関する正確な包括的な記述をことができます。ほとんどのトランスクリプトーム研究でマイクロ アレイ交配または高スループット シーケンスは合計定常 RNA 画分からの RNA レベルの定量化に使用されます。転写の変更特定の摂動の下では、特定の遺伝子の表現の変更やアップまたはダウンレギュ レート遺伝子の大きいスペクトルの可能な結果の広い範囲を表示できます。遺伝子発現調整の平衡の結果である- または定常状態-RNA ポリメラーゼが RNA 合成と RNA のレベルに影響を与える他のプロセスの間。Rna ポリメラーゼ II の転写は高度および複雑な mRNA や劣化、翻訳、細胞質のエクスポート処理に関連付けられているが (開始、延長および終了) の 3 つの段階を含みます。
いくつかの最近の研究は Mrna 合成と崩壊結合メカニズムが、とき定常状態の総 RNA 転写効果突然変異または刺激を見落とすことができる示した。まず、常に mRNA の定常状態レベルの分析を通して転写変化の検出は、Mrna の半減期に依存します。摂動を導入すると、短い半減期を持つ Mrna のそれらより長い半減期を持つ Mrna の定常状態レベルにはるかに少ない影響します。したがって、RNA 合成の変化の検出能転写率のダイナミックな変化を明らかにする長寿命の mRNA 種の解析が失敗する中短時間の成績証明書を支持してバイアス強くされています。第二に、いくつかのレポートは、酵母や哺乳類の両方で、転写でグローバルな変更は見落されるかもしれない mRNA の定常状態レベルを解析するとき示されています。これは mRNA 合成と分解の mRNA のバッファリングの結果をリンク機構による可能性が高いです。これは新たに転写された mRNA の解析による劣化から非 mRNA 合成を定量化する新しいプロトコルの開発を促した。近年、グローバル実行シーケンス (GRO seq)1、配列 (NET seq)2,3ネイティブ伸長トラン スクリプトなど、いくつかの選択肢が提示されています。ここで、当初哺乳類セル4,5,6で開発され、酵母7,8,9,10に適応し、プロトコルを紹介して 11, RNA のチオール ヌクレオシドまたは基本アナログで分類に基づく 4-thiouridine (4sU) または 4-チオウラシル (4tU)、それぞれ。
このメソッド具体的には浄化する RNA の細胞から新しく転写 RNA が細胞の恒常性の干渉のほとんどない、4sU 付けパルス。したがって、セルは、4sU にさらされれば、一度、分子は急速に有った、4sU 三リン酸にリン酸化し、転写される Rna に組み込まれているです。(RNA の定常状態レベルに対応する)、総細胞 RNA を抽出することが可能だし、その後、4sU 標識 RNA の一部分はチオール具体的に、パルス標識を変更した後、ビオチン間のジスルフィド結合の形成につながると新しく転写 RNA4,5。ただし、4sU は人間の平衡ヌクレオシド輸送体 (hENT1)、出芽か分裂酵母で、すぐに使用を防止するよう、ヌクレオシド輸送体の発現している細胞によって取り込まれたをできるだけです。酵母は、ヌクレオシドの運送者10,の式を必要とせず、4tU を取ることができるので変更された基本 4tU を使用してより簡単なアプローチを実現できますs.pombeの出芽酵母hENT1 で表現できる 1 つ間11,12,13。 実際には、4tU の代謝は酵素ウラシル phosphoribosyltransferase (UPRT) の活動を必要とします。酵母がない哺乳類を含むいくつかの生物では、UPRT はウリジル酸にウラシルをリサイクル ピリミジンの海難救助の細道に不可欠です。
並行分析の異なるサンプル間の正規化でトランスクリプトーム研究に重要なバイアスを導入できます。確かに、多くの逸脱要因を及ぼします変異体と野生型株のトランスクリプトームの比較分析: セル換散の効率の抽出と RNA およびマイクロ アレイ解析用スキャナーの調整で差異の回復の違い、他の中で。前述したように、RNA ポリメラーゼ II の転写で世界的な効果が期待されるときそのような変化は特に誤解を招くできます。異なるサンプル間の mRNA 合成率を正確に比較するエレガントな意味は、内部標準として遠縁分裂酵母分裂酵母を使用してによって設計されました。そのため一定数のラベル, 分裂酵母出芽酵母のサンプルは、野生型や突然変異細胞、セル換散および RNA 抽出10前にセルが追加されます。その後、 , 分裂酵母と酵母から定常状態と新たに合成された Rna は RT qPCR または経由でマイクロ アレイ チップまたは高スループット シーケンス10の使用によって明らかにした.速度論的モデリングとこれらのデータを組み合わせて、mRNA 合成と出芽酵母における崩壊の絶対速度を測定できます。
この原稿のフレームワークでどの新たに転写された RNA の解析は新進の RNA ポリメラーゼ II の転写のコアクチベーター複合体佐賀と (ディスインテグリン) 酵母14,15のためにグローバル ロールを明らかにするため許可されて表示されます。 16。重要なは、過去の研究は出芽酵母の定常状態の mRNA のレベルを定量化し、佐賀が佐賀で突然変異によって強く影響を受けるが (ディスインテグリン) に比較的耐性酵母遺伝子の限定セットに支配的な機能を果たしていることが示唆されました。突然変異17,18,19。驚いたことに、佐賀酵素は RNA ポリメラーゼ II の転写でこの co 活性剤のより広範な役割を示唆して、全く転写ゲノムに関する法律に示されていた。減少で最も発現遺伝子の RNA ポリメラーゼ II 新卒を募集していた佐賀またはこれらし、コアクチベーターがほとんど遺伝子で一緒に仕事することを示唆している (ディスインテグリン) の不活化に.したがって、新たに転写された mRNA の定量化は、佐賀と (ディスインテグリン) が RNA ポリメラーゼ II14,15,16でほぼすべての遺伝子の転写に必要なことを明らかにしました。代償機構の実装は、細胞 mRNA 分解同時グローバル減少によってバッファリングは mRNA 合成の世界的な減少に対処するための方法として現れます。転写因子 tfiih が不安定21,22 一般、調停コアクチベーター複合20RNA ポリメラーゼ II の転写、RNA Pol II サブユニット10など全体に影響を及ぼす因子のリストに追加します佐賀と間接的に、mRNA 分解機械9,10,23の要素。そのような代償的なイベントは佐賀変異体の mRNA 合成14のグローバルかつ深刻な減少にもかかわらず定常状態の mRNA のレベルのささやかな、限られた変更を会計で普遍的に観察されました。同様の分析は、ヒストン H2B のユビキチン化の完全な損失の結果BRE1の削除のひずみで行われました。酵母の新規転写された RNA の代謝ラベリングすることができます検出し、mRNA の変化の広い範囲を定量化することを示す、Bre1 の不在で、穏やかな、一貫したグローバルに大きな影響 RNA ポリメラーゼ II の転写を検出できる興味深いことに、合成料金です。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:640px;" width="640">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:216px;">4-Thiouracil</td>
			<td style="width:119px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">Cat# 440736</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Rapamycin</td>
			<td style="width:119px;">Euromedex</td>
			<td style="width:139px;">Cat# SYN-1185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Countess II FL Automated Cell Counter</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:216px;">RiboPure RNA Purification kit, yeast</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">Cat# AM1926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">NanoDrop 2000 Spectrophotometer</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">TURBO DNA-free Kit</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">AM1907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">EZ-Link HPDP Biotin</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">Cat# 21341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Thiolutin</td>
			<td style="width:119px;">Abcam</td>
			<td style="width:139px;">ab143556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">&#181;MACS Streptavidin kit</td>
			<td style="width:119px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:139px;">Cat# 130-074-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Transcriptor Reverse Transcriptase</td>
			<td style="width:119px;">Roche</td>
			<td style="width:139px;">03 531 295 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">SYBR Green I Master</td>
			<td style="width:119px;">Roche</td>
			<td style="width:139px;">4707516001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">GeneChip Yeast Genome 2.0</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">900555</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">GeneChip Fluidics Station 450</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">00-0079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">GeneChip Scanner 3000 7G</td>
			<td style="width:119px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:139px;">00-0210</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

saccharomyces cerevisiae metabolic labeling with 4-thiouracil and the quantification of newly synthesized mrna as a proxy for rna polymerase ii activity

RNA ポリメラーゼ II の転写で世界的な欠陥は、トランスクリプトーム研究は、定常状態の RNA を分析によって見落されるかもしれない。確かに、mRNA 合成の世界的な減少は通常定常状態レベルを復元する mRNA 分解の同時減少で補償されるように示されています。したがって、mrna から独立して、mRNA が合成のゲノムワイドな定量化は RNA ポリメラーゼ II の転写活性の最高の直接の反射です。ここでは、酵母(出芽酵母) における初期の rna 代謝ラベリングの非摂動法について述べる。具体的には、ウラシル、アナログ 4-チオウラシルと 6 分のため培養されるセルとラベル新しく転写された Rna の精製しすべての個々 の mRNA の合成レートを決定する定量化します。さらに、内部標準により異なる酵母mRNA 合成の比較として分裂酵母細胞のラベルを使用して系統。このプロトコルを使用して、継ぎ手の動的な運動モデルとデータは、対応する mRNA の腐食率を決定できます。

制御する必要があるいくつかの側面、新たに転写された RNA の代謝ラベル付けを実行するとき: 時間とラベリング、スパイクの割合、抽出のプロトコル、ビオチン化効果 (含む信号対雑音比) の効率他の中。これらの条件広範囲、組織的が示されている他の人が7,10,11。ここで我々 は主に解釈とサン?...

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Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity

ここで説明されているプロトコルは、4-チオウラシルが付いた酵母から精製した新しく合成された mRNA のゲノムワイドな定量化に基づいています。このメソッドは、mrna から非 mRNA 合成を測定することができ、したがって、RNA のポリメラーゼ II のトランスクリプションの正確な測定を提供します。

酵母4 チオウラシルの定量化とラベリング代謝新しく合成された mRNA RNA ポリメラーゼ II の活性のためのプロキシとして

Global defects in RNA polymerase II transcription might be overlooked by transcriptomic studies analyzing steady-state RNA. Indeed, the global decrease in ...

この技術の主な利点は、RNA分解の影響を受けていない新たに合成されたmRNAを測定することによってRNAポリメラーゼII活性を反映していることである。このプロトコルは、マイクロアレイハイブリダイゼーションを用いて記述されたが、新たに転写されたmRNAのハイ・エアー・シーケンシングに容易に採用することができる。この手順を実証することは、私たちの研究室の元大学院生ティアゴ・バティスタです。S.cerevisiae細胞を接種した後、150 RPMで一定の攪拌で摂氏30度で一晩成長させる。翌日、600ナノメートルで光学密度を測定する。培養液を約0.1のOD600に100ミリリットルのYPD培地で希釈する。OD600が約0.8になるまで細胞を成長させます。この後、S.pombeの一晩培養物のOD600を測定する。この培養液を約0.1のOD600に希釈し、500ミリリットルのYAS培地で、OD600が約0.8になるまで成長させます。まず、2つのモル4チオウラシルの新鮮な溶液を調製する。調製した溶液を室温に保ち、光から保護します。4チオウラシル溶液をS.cerevisiaeおよびS.pombe培養物に加え、最終的な濃度が5ミリモルになるようにします。摂氏30度と摂氏32度でS.cerevisiaeとS.pombeの文化を6分間一定の攪拌でインキュベートします。この後、各培養物の小さなアリコートを取り除き、自動細胞カウンターまたはノイバウアーチャンバーのいずれかを使用して細胞を数えます。遠心分離機を2、500倍g、摂氏4度で5分間細胞を採取する。上清を捨て、氷冷で細胞を1回PBSで洗います。2、500倍g、摂氏4度で5分間再び遠心分離機。次に、5ミリリットルの氷冷中の細胞をPBSを1回再懸濁する。S.cerevisiaeとS.pombe細胞を3対1の比率で混ぜます。混合サンプルを2、500倍g、摂氏4度で5分間遠心分離する。その後、PBSを取り除き、液体窒素中の細胞をフラッシュ凍結します。使用できる状態になるまで、サンプルをマイナス80°Cで保存します。進行する準備ができたら、約20〜30分間氷上の細胞を解凍します。テキストプロトコルで概説されているようにRNAを抽出するために適応された酵母RNA抽出キットを使用してください。その後、フィルターカートリッジを最終回収管に移します。100°Cに予熱されたDEPC処理RNaseフリー水の50マイクロリットルでRNAをエルプ。遠心分離機は16,000回gで1分間行う。その後、50マイクロリットルの予熱DEPC処理RNaseフリー水を使用して、RNAを同じチューブに再び溶出させます。16,000回gの遠心分離機で1分間、サンプルボリューム全体がフィルタを通過したことを確認します。それがない場合は、遠心分離機を再び長い期間待たします。完了したら、適切な装置を使用してサンプルの純度を定量化し、確認します。DEPC処理ヌクレアーゼフリー水を使用して、以前に獲得したRNAの濃度を1ミリリットル当たり2ミリグラムに調整します。アリコート200マイクログラムの全RNAを摂氏60度で10分間加熱します。すぐに氷の上で2分間冷やします。600マイクロリットルのDEPC処理RNaseフリー水を加えます。100マイクロリットルのビオチン化バッファーを加え、200マイクロリットルのビオチンHPDPを加えます。バイオチン HPDP 溶液が溶液から沈殿する場合は、テキスト プロトコルで概説されているように、DMSO または DMF の量を最大 40% の反応量まで増やします。光からサンプルを保護し、3時間穏やかな攪拌で室温でインキュベートします。この後、ほぼ等量のクロロホルムをチューブに加え、激しく混ぜます。13,000倍gで遠心分離機、摂氏4度で5分間。次に、上相を新しい2ミリリットルチューブに慎重に移します。サンプル量の約1/10に等しい5モル塩化ナトリウムの量を加えます。その後、サンプルを混ぜます。まず、ビオチン化したRNAを摂氏65度で10分間加熱します。その後、氷の上でサンプルを5分間冷やします。ビオチン化されたRNAにストレプトアビジンコーティングされた磁気ビーズを100マイクロリットル加えます。90分間わずかな揺れで室温でインキュベートします。キットに付属の柱を磁気スタンドに置きます。次に、900マイクロリットルの室温洗浄バッファーをカラムに加えます。200マイクロリットルビーズとRNA混合物をカラムに塗布します。1.5ミリリットルのチューブでフロースルーを収集し、同じ磁気カラムに再度適用します。ラベルなし RNA の端数を表すため、必要に応じてこのフロースルーを保持します。異なる分数のRT-qPCR検証を開始するには、まずテキストに概説されているようにcDNAを合成します。次に、標準プロトコルを使用してリアルタイムqPCRでcDNAを増幅します。4チオウラシルの有無にかかわらず培養した野生型細胞から精製された分画中の転写物の測定レベルは、この手順が特異的に標識RNAを精製したことを確認した。spt20デルタ株の分析は、全定常RNAの量がほとんど変わらないか、または試験された遺伝子に対して軽度にしか減少しないことが明らかである。bre1 で削除された株に対しても同様の結果が見られます。しかし、spt20デルタ株における新たに転写されたRNAの分析は、すべての試験された遺伝子に対するmRNA合成の3〜5倍の減少を明らかにする。一方、bre1の損失は、より控えめですが、まだ目に見える減少につながります。spt7の誘導可能な枯渇に際して、サガ複合体の構造サブユニットは、新たに転写されたmRNAレベルが、欠失株と同様の程度に減少する。全RNAレベルをゲノム全体解析で測定すると、spt20の欠失時に、調節または下方調節のいずれかによって発現レベルが変化すると見られる遺伝子はわずかです。しかし、新たに転写されたRNAの分析は、4,000以上の遺伝子のレベルがspt20の欠失時に有意に2倍有意に減少することを明らかにし、芽出芽酵母におけるRNAポリメラーゼII転写に対するサガの世界的なプラス効果を示唆している。この方法はサッカロミセス・セレビシエの転写に関する洞察を提供することができるが、このプロトコルを用いてわずかなばらつきでしか適用されなかったが、mRNA分解の世界的な減少によって補償されたmRNA合成の世界的な減少を検出することができた。

Research

JoVE Journal

Genetics

Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity

Inducible T7 RNA Polymerase-mediated Multigene Expression System, pMGX

誘導性T7 RNAポリメラーゼ媒介マルチ遺伝子発現システム、pMGX

Co-expression of multiple proteins is increasingly essential for synthetic biology, studying protein-protein complexes, and characterizing and harnessing ...

遺伝学

Genome-wide Mapping of Protein-DNA Interactions with ChEC-seq in Saccharomyces cerevisiae

Genome-wide Mapping of Protein-DNA Interactions with ChEC-seq in Saccharomyces cerevisiae

ChEC-seqとのタンパク質 - DNA相互作用のゲノムワイドマッピング<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Genome-wide mapping of protein-DNA interactions is critical for understanding gene regulation, chromatin remodeling, and other chromatin-resident ...

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

S の酵母酵母の低酸素応答中に時間をかけての mRNA のレベルを測定

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Metabolic Labeling and Profiling of Transfer RNAs Using Macroarrays

代謝ラベリングと Macroarrays を使用して転移 Rna のプロファイリング

Transfer RNAs (tRNA) are abundant short non-coding RNA species that are typically 76 to 90 nucleotides in length. tRNAs are directly responsible for ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

テロメラーゼ逆転写酵素蛋白質の RNA 依存 RNA ポリメラーゼ活性の半定量的な検出

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) of Histone Modifications from Saccharomyces cerevisiae

Chromatin Immunoprecipitation ChIP of Histone Modifications from Saccharomyces cerevisiae

酵母からヒストン修飾のクロマチン免疫沈降 (チップ)

Histone post-translational modifications (PTMs), such as acetylation, methylation and phosphorylation, are dynamically regulated by a series of enzymes ...

Methodology for Accurate Detection of Mitochondrial DNA Methylation

ミトコンドリア DNA のメチル化の正確な検出のための方法論

Quantification of DNA methylation can be achieved using bisulfite sequencing, which takes advantage of the property of sodium bisulfite to convert ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

代替の Pre-mrna スプライシング RNA In Situハイブリダイゼーション法によるマウス脳のセクションでの定量的解析

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Evaluation of a Universal Nested Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction for the Detection of Lyssaviruses

Lyssaviruses の検出のための普遍的な入れ子逆転写ポリメラーゼ連鎖反応の評価

To detect rabies virus and other member species of the genus Lyssavirus within the family Rhabdoviridae, the pan-lyssavirus nested reverse transcription ...

Artificial RNA Polymerase II Elongation Complexes for Dissecting Co-transcriptional RNA Processing Events

共転写RNA処理イベントを解剖するための人工RNAポリメラーゼII伸長複合体

Eukaryotic mRNA synthesis is a complex biochemical process requiring transcription of a DNA template into a precursor RNA by the multi-subunit enzyme RNA ...