Name: rapid, safe, and simple manual bedside nucleic acid extraction for the detection of virus in whole blood samples
Uploaded: 2018-06-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples at JoVE.com

Vi tackar Susanne Lopes Rasmussen och Solvej Kolbjørn Jensen för deras tekniskt bistånd och för hantering av kliniska prover. Detta projekt är en del av konsortiet EbolaMoDRAD, som har fått stöd från de innovativa läkemedel 2 gemensamma företaget för initiativet under grant avtalet N ° 115843. Detta gemensamma företag får stöd från EU: s Horizon 2020 forsknings- och innovationsprogrammet- och EFPIA.

Utskottet för biomedicinsk forskningsetik, huvudstadsregionen har gett ett informerat samtycke, och alla metoder som beskrivs här har undantagits från en översyn av kommittésystemet för etiska, i enlighet med den danska lagen om assay utvecklingsprojekt.
1. beredning av blod insamling vakuumrör för Virus inaktivering och snabba NA utvinning
FÖRSIKTIGHET: Musbufferten för detta protokoll innehåller guanidinium kaliumtiocyanat (GITC) och en icke-jonisk tensid...

<ol>
	<li>Lee, D., Shin, Y., Chung, S., Hwang, K. S., Yoon, D. S., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+Highly+Sensitive+Molecular+Diagnosis+of+Zika+Virus+by+Lateral+Flow+Assays.">Simple and Highly Sensitive Molecular Diagnosis of Zika Virus by Lateral Flow Assays.</a> Analytical Chemistry. 88, 12272-12278 (2016).</li><li>Benzine, J. W., Brown, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Diagnostic+Field+Test+for+Point-of-Care+Detection+of+Ebola+Virus+Directly+from+Blood.">Molecular Diagnostic Field Test for Point-of-Care Detection of Ebola Virus Directly from Blood.</a> Journal of Infectious Diseases. 214 (Suppl 3), S234-S242 (2016).</li><li>Faye, O., Faye, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+deployment+of+a+rapid+recombinase+polymerase+amplification+Ebola+virus+detection+assay+in+Guinea+in+2015.">Development and deployment of a rapid recombinase polymerase amplification Ebola virus detection assay in Guinea in 2015.</a> Euro Surveillance. 20 (44), 10-18 (2015).</li><li>Yang, M., Ke, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Evaluation+of+a+Rapid+and+Sensitive+EBOV-RPA+Test+for+Rapid+Diagnosis+of+Ebola+Virus+Disease.">Development and Evaluation of a Rapid and Sensitive EBOV-RPA Test for Rapid Diagnosis of Ebola Virus Disease.</a> Scientific Reports. 6, (2016).</li><li>Smither, S. J., Weller, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Buffer+AVL+alone+does+not+inactivate+Ebola+virus+in+a+representative+clinical+sample+type.">Buffer AVL alone does not inactivate Ebola virus in a representative clinical sample type.</a> Journal of Clinical Microbiology. 53 (10), 3148-3154 (2015).</li><li>Byrnes, S., Fan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Portable,+Pressure+Driven,+Room+Temperature+Nucleic+Acid+Extraction+and+Storage+System+for+Point+of+Care+Molecular+Diagnostics.">A Portable, Pressure Driven, Room Temperature Nucleic Acid Extraction and Storage System for Point of Care Molecular Diagnostics.</a> Analytical Methods. 5 (13), 3177-3184 (2013).</li><li>Rosenstierne, M. W., Karlberg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+bedside+inactivation+of+Ebola+virus+for+safe+nucleic+acid+tests.">Rapid bedside inactivation of Ebola virus for safe nucleic acid tests.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (10), 2521-2529 (2016).</li><li>Vinner, L., Fomsgaard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+orthopoxvirus+for+diagnostic+PCR+analysis.">Inactivation of orthopoxvirus for diagnostic PCR analysis.</a> Journal of Virological Methods. 146, 401-404 (2007).</li><li>Schmitz, H., K&#246;hler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+clinical+and+laboratory+data+in+two+cases+of+imported+Lassa+fever.">Monitoring of clinical and laboratory data in two cases of imported Lassa fever.</a> Microbes and Infection. 4 (1), 43-50 (2002).</li><li>De La Vega, M. A., Caleo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ebola+viral+load+at+diagnosis+associates+with+patient+outcome+and+outbreak+evolution.">Ebola viral load at diagnosis associates with patient outcome and outbreak evolution.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4421-4428 (2015).</li><li>Hasanoglu, I., Guner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+viral+load+in+Crimean+Congo+hemorrhagic+fever.">Dynamics of viral load in Crimean Congo hemorrhagic fever.</a> Journal of Medical Virology. 90 (4), 639-643 (2017).</li><li>Biava, M., Colavita, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+rapid+and+sensitive+RT-qPCR+assay+for+the+detection+of+Ebola+Virus.">Evaluation of a rapid and sensitive RT-qPCR assay for the detection of Ebola Virus.</a> Journal of Virological Methods. 252, 70-74 (2018).</li><li>Fern&#225;ndez-Carballo, B. L., McBeth, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous-flow,+microfluidic,+qRT-PCR+system+for+RNA+virus+detection.">Continuous-flow, microfluidic, qRT-PCR system for RNA virus detection.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (1), 33-43 (2017).</li><li>Weller, S. A., Bailey, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Biofire+FilmArray+Biothreat+E-test+(v2.5)+for+rapid+identification+of+Ebola+virus+disease+in+heat-treated+blood+samples+obtained+in+Sierra+Leone+and+United+Kingdom.">Evaluation of the Biofire FilmArray Biothreat E-test (v2.5) for rapid identification of Ebola virus disease in heat-treated blood samples obtained in Sierra Leone and United Kingdom.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (1), 114-119 (2015).</li><li>Semper, A. E., Broadhurst, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+the+GeneXpert+Ebola+Assay+for+Diagnosis+of+Ebola+Virus+Disease+in+Sierra+Leone:+A+Field+Evaluation+Study.">Performance of the GeneXpert Ebola Assay for Diagnosis of Ebola Virus Disease in Sierra Leone: A Field Evaluation Study.</a> PLoS Medicine. 13 (3), e1001980 (2016).</li><li>Biocartis. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Instructions for Use: Idylla TM Ebola Virus Triage Test. , (2016).</li><li>MPLC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Total Nucleic Acid Isolation Kit. Safety data sheet version 1.7. , (2015).</li></ol>

I den här rapporten beskriver vi en säker, snabb och enkel manuell sängkanten NA utvinning metod för nedströms molekylär påvisande av virus i Lys/bindande buffert-inaktiverat helblod. Den beskrivna NA utvinning metoden utvecklades för att utföras direkt på helblod prov som samlats i vakuum blod insamling rör som innehåller Lys/bindande buffert (Tabell för material)7. Denna specifika buffert inactivates EBOV7 och är en kritisk komponent i metod...

I virus utbrottssituationer, när patienter är begränsade till sjukhusavdelningar isolering eller när en snabb diagnos behövs, är en säker, enkel och korrekt point-of-care molekylär diagnos viktigt för patientens vård och risk inneslutning. De två senaste viral utbrott, Ebola-viruset (EBOV) i västra Afrika (2013) och zikaviruset i Sydamerika (2015), har ökat intresset för förbättrad point-of-care molekylär diagnostiska tester, såsom omvänd Transkription loop-medierad isotermiska förstärkning (RT-lampa)1,2 och recombinase polymeras amplifiering (RPA)3,4. Både RT-lampa och RPA är snabb, känsliga och specifika molekylära tester som kan utföras på förenklat prov preparat. För zikaviruset, har RT-lampa kombinerats med en lateral flow-analys (LFA), som kan upptäcka zikavirus i icke-renat hela blodprov inom 30 min1; för EBOV, som är klassificerat som en risk grupp 4 patogen och är mycket smittsam, proverna måste dock hanteras under biosäkerhet nivå 4 (BSL-4) villkor och inaktiverat innan några säkra diagnostiska procedurer kan utföras.
Förenklade inaktivering metoder för EBOV, såsom tillägg av Lys buffertar till prov2,3,4,5, användes under utbrottet; dessa metoder kräver dock hantering BSL-4 villkor med laboratorieutrustning, till exempel BSL-3 biosäkerhet skåp, centrifuger, värmeblocken pipetter, minst. Denna utrustning finns normalt inte i isolering vårdavdelningar eller ute i fältsjukhus. För att övervinna denna utmaning, försök har gjorts att utföra diagnostik i resväskor3, och flera bärbara enheter och maskiner har varit utvecklade [e.g., en bärbar enhet för extraktion av nukleinsyra (NA)]6. EBOV-positiva prover behöver dock fortfarande inaktiveras innan dessa enheter kan användas.
Vi har tidigare rapporterat en snabb bedside virus inaktivering metod för EBOV7, vacciniavirus och Cowpox virus8 genom tillsats av en kommersiell lysis/bindande buffert till vanliga vakuum blod insamling rör, möjliggör direkt överföring av blod från patienten till den inaktivering buffer7. Detta direkt och omedelbar inaktivering i ett stängt system eliminerar behovet av hantering av proverna med någon fullständig inneslutning, såsom BSL-4 villkor7, och proverna kan hanteras under normala BSL-2. Denna inaktivering metod är kompatibel med flera NA utvinning system, såsom robotar och hand rening kit7; dessa metoder kräver dock laboratorieutrustning, som robotar, centrifuger och el, som inte alltid finns i Fältinställningar eller inuti isolering sjukhusavdelningar.
I den här rapporten beskriver vi en säker, snabb och förenklad manuell NA utvinning metod för efterföljande molekylär påvisande av virus i Lys/bindande buffert-inaktiverat helblod. Den NA utvinning metoden kräver inte någon utrustning än en magnet/magnetiska hållare. Ingen centrifuger, värme block, eller el behövs för NA utvinning. Därför, denna metod är inte beroende av laboratorier och lätt kan användas var som helst (t.ex., i fältsjukhus, i isolering sjukhusavdelningar eller med resurssnål inställningar). NA utvinning metoden är snabb och enkel och kan användas direkt i någon nedströms NA tester, såsom qPCR, RT-qPCR, lampa eller RT-lampa. När denna NA extraktionen metod kombineras med lampa och en bärbar batteridriven isotermiska instrument, kan en bedside diagnos erhållas inom 40 min av blodinsamling.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1080px;" width="1081">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:544px;">Vacutainer K2 EDTA tubes (4 mL)</td>
			<td style="width:251px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">368861</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plus Blood Collection</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">362725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">23G x 1 needle&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">300800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LUER LOK syringe (3 mL)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butterfly needle with small-bore extension tubing</td>
			<td style="width:251px;">J&#248;rgen Kruuse A/S</td>
			<td style="width:119px;">121714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1% Virkon&#160;</td>
			<td>Nomeco A/S</td>
			<td style="width:119px;">849265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I - Lysis/Binding Buffer - Refill</td>
			<td>Roche Diagnostics A/S</td>
			<td style="width:119px;">03246752001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit</td>
			<td>Roche Diagnostics A/S</td>
			<td style="width:119px;">3038505001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nunc&#8482; Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (1,8 mL)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">375418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nunc&#8482; Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (3,6 mL)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">379189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nunc&#8482; Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (4,5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">379146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DynaMag&#8482;-5 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12303D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipette (3.5 mL)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">86.1171.010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermo Scientific&#8482; Samco&#8482; Fine Tip Transfer Pipettes (1.5 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Thermo Scientific&#8482; Nunc&#8482; 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid, safe, and simple manual bedside nucleic acid extraction for the detection of virus in whole blood samples

Snabb diagnos av infektion är viktigt för utbrott management, risk inneslutning och patientvård. Vi har tidigare visat en metod för snabb bedside inaktivering av Ebolavirus under blodprovstagning för säker nukleinsyra (NA) tester genom att lägga till en kommersiell lysis/bindande buffert direkt in i vakuum blod insamling rören. Använder detta sängkanten inaktivering tillvägagångssätt, har vi utvecklat en säker, snabb och förenklad sängkanten NA utvinning metod för efterföljande detektion av virus i Lys/bindande buffert-inaktiverat helblod. NA extraktion utförs direkt i blod insamling rören och kräver ingen utrustning eller elektricitet.
När blodet samlas in i Lys/bindande bufferten, innehållet blandas genom att vrida röret för hand och blandningen inkuberas i 20 min i rumstemperatur. Magnetiska glas partiklar (FUP) läggs till röret, och innehållet blandas genom att vända samling röret för hand. De fleråriga utvecklingsprogrammen samlas sedan vid sidan av den bloduppsamlingsrör med hjälp av en magnetisk hållare eller en magnet och ett gummiband. De fleråriga utvecklingsprogrammen tvättas tre gånger och efter tillägg av eluering buffert direkt in i samling röret, NAs är redo för NA tester, såsom qPCR eller isotermiska loop amplifiering (lampa), utan avlägsnande av de fleråriga utvecklingsprogrammen från reaktionen. Den NA utvinning metoden är inte beroende av någon laboratorieresurser och lätt kan användas var som helst (t.ex., i fältsjukhus och vårdrum isolering). När denna NA extraktionen metod kombineras med lampa och ett bärbart instrument, kan en diagnos erhållas inom 40 min av blodinsamling.

Det protokoll som presenteras här är enkel och effektiv och i stort sett kan tillämpas på någon molekylär analys ska utföras på infektiös helblod prover inactivateds med Lys/bindande bufferten. Arbetsflödet för blod inaktivering och NA utvinning visas i figur 1, inklusive utarbetandet av blod insamling vakuumrör7 (figur 1A), den blod insamling7 (figu...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples at JoVE.com

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Här presenterar vi ett protokoll för snabb virus nukleinsyra utvinning från den virus-inaktiverat helblod. Utvinning sker i blod insamling rören och kräver ingen utrustning eller elektricitet. Metoden är inte beroende av laboratorier och kan användas var som helst (t.ex., i fältsjukhus).

Snabb, säker och enkel manuell sängkanten nukleinsyra extraktion för påvisande av Virus i helblod

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

This method can help when performing point of care diagnostics, of patients with signs of viral infections. The main advantage of this technique is that it can be performed without laboratory equipment and electricity, and hence it can be performed in a hospital ward. Demonstrating the blood collection procedure, will be Medical Doctor Anders Fomsgaard, and Scientist Morten Rasmussen, both from my laboratory.Begin by preparing the blood collection tubes. Use a 25 gauge one inch needle attached to a 3ML syringe, to inject 1.6ML of a commercial lysis buffer into a 4ML EDTA vacuum tube. It is critical to maintain the vacuum in the blood collection tube for blood collection.Hence, always use a needle to inject the lysis buffer into the blood collection tube. Next completely re-suspend a 960 micro-liter volume of magnetic glass particles, or MGPs, and transfer to a labeled 1.8ML tube. Next pipet 4ML of wash buffer one into a 4.5ML tube labeled WB-1.1.5ML of wash buffer two into a 3.6ML tube labeled WB-2, and 3ML of wash buffer three into a 4.5ML tube labeled WB-3.Finally add 100 micro-liters of elution buffer to a 1.8ML tube labeled EB, and leave the tubes at room temperature until use. To collect intravenous whole blood from the patient, use a butterfly needle with a small bore extension tubing, and one of the previously prepared blood collection vacuum tubes containing lysis buffer. Rest the patient's arm in a downward position.Insert the butterfly needle into the vein of the patient, and attach the blood collection vacuum tube to the small bore extension. After blood collection mix the contents of the tube, by flipping the tube five to ten times. Disinfect the outside of the tube using 70%ethanol.Then incubate the tubes for 20 minutes at room temperature for virus inactivation. To purify nucleic acids from the collected blood, again mix the contents of the tube by flipping the vacuum tube by hand five to ten times. Pour the prepared aliquot of MGP's directly into the blood collection tube.The place a new lid from an unused blood collection tube on the tube containing the sample. Place a finger on the lid to ensure that the tube is tightly closed, and mix the contents of the tube by flipping five to ten times. Place the tube in the magnetic holder and keep a finger on the lid, to ensure the tube is tightly closed.Then flip the magnetic holder with the tube a few times to disperse the MGP's before they collect on the side of the tube with the magnet. Remove the lid of the tube, and discard the contents of the tube into a 50ML collection tube, using a disposable pipet. Pour the prepared aliquot of WB-1 directly into the blood collection tube and close the lid on the tube.Mix the content by hand five to ten times. Then collect the beads at the side of the tube, using the magnet and remove the liquid as before. Re-suspend the beads in the prepared aliquot of WB-2, then discard the solution, and repeat the procedure with a prepared aliquot of WB-3.Finally, remove the tube from the magnetic holder and pour the prepared aliquot of EB directly into the blood collection tube. Place the lid on the tube, and re-suspend the MGP's by tapping five to ten times with a finger. Finally, use a 1.5ML disposable pipet to transfer one droplet of the re-suspended MGP's to the downstream nucleic acid amplification reaction mix.Be sure to fully re-suspend the MGP's before transferring only one droplet into the PCR reaction. To demonstrate proof of concept, negative whole blood was spiked with 10 fold dilutions of the Ebola virus standard, prepared from the recent outbreak in southern Guinea, or three different concentrations of Epstein Barr virus. The extracted nucleic acids were analyzed by in-house virus specific R2 qPCR or qPCR.The lower the crossing threshold, or CT, the higher the viral genome copy number. Here, whole bloods spiked with different concentrations of Ebola virus was detected by an Ebola virus specific lamp. The final concentration of virus in the spiked whole blood sample is seen on the X axis, and the minutes to positive is seen on the Y axis.Here, whole blood was spiked with 10 fold dilutions of a hepatitis C WHO standardized serum sample, with detection by HCV specific RT qPCR. Finally, this image shows the results of an Epstein Barr virus specific lamp reaction, on Epstein Barr virus positive whole blood. While attempting this procedure it's important to use the specified lysis binding buffer.This is a crucial step, and a crucial re-agent for the method. This lysis binding buffer will inactivate virus in the sample. Following this technique you can perform different molecular detection methods like lamp and PCR, and hence you can perform a differential diagnosis.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Kombination av självhäftande tejp grundad på provtagning och fluorescens På plats Hybridisering för snabb upptäckt av Salmonella På färskvaror

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-throughput Detektion Metod för Influensa Virus-

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Låst nukleinsyra Flödescytometri-fluorescens På plats Hybridisering (LNA flow-FISH): En metod för bakteriell små RNA-detektering

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

En enkel och effektiv strategi för att konstruera Mutant vacciniavirus vektorer

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

En enkel Flödescytometriska metod för att mäta glukosupptag och glukostransportör uttryck för monocyt Subpopulationer i helblod

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flödescytometrisk analys av Natural Killer Cell lytisk aktivitet i humant helblod

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran effektiviserar Lentiviral transduktion murina och mänskliga primära NK-celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetomrörare metod för detektion av<em&gt; Trichinella</em&gt; Larver i muskelprover

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

Karakterisering av mänskliga monocyt delmängder av helblod Flow flödescytometri analys

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...