Name: caenorhabditis sieve: a low-tech instrument and methodology for sorting small multicellular organisms
Uploaded: 2018-07-04T15:00:00
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著者らは、研究デザインに彼女の初期の貢献のヘザー幣制と博士 Swarup ミトラ原稿の彼の批評のために感謝したいと思います。我々 はまた博士マイケル ・ b. ハリスありがとうコメント、改良、この方法論のデモの生産の支援したいと思います。系統は、線虫の遺伝学センター研究基盤プログラム (P40 OD010440) の NIH のオフィスによって資金が供給されるによって提供されました。この出版物で報告された研究がによって国立科学研究所の一般医療賞を受賞番号 UL1GM118991、TL4GM118992、または RL5GM118990 の下で健康の国民の協会のやから機関の開発賞 (アイデア) サポートされています。国立科学研究所の一般医療許可番号 5P20GM103395-15 の下で健康の国民の協会の。内容は著者の責任と国立衛生研究所の公式見解を必ずしも表さない。UA は AA/EO の雇用者、教育機関、個人に対する違法な差別を禁止: www.alaska.edu/titleIXcompliance/nondiscrimination。

1線虫ふるいの構築とその利用。
<ol><li>
構築プロトコル
	<ol>
<li>50 mL コニカル チューブ (図 1 a) から 2 蓋を取得します。</li>
		<li>(下の図 1 bから見た) ときに蓋の内側の唇の内側中心領域を削除するブンゼン バーナーと熱い金属プローブまたははんだごてを使用してまたはドリルを歩んだ。 注: はプラスチック製の蓋をカット...

<ol>
	<li>C elegans Sequencing Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans:+a+platform+for+investigating+biology.">Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).</li><li>Herman, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hermaphrodite+cell-fate+specification.">Hermaphrodite cell-fate specification.</a> WormBook. , 1-16 (2006).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Chalfie, M., Hart, A. C., Rankin, C. H., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+mechanosensation.">Assaying mechanosensation.</a> WormBook. , (2014).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+the+Mitochondrial+Superoxide+Dismutase+sod-2+Extends+Lifespan+in+Caenorhabditis+elegans.">Deletion of the Mitochondrial Superoxide Dismutase sod-2 Extends Lifespan in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS Genetics. 5 (2), e1000361 (2009).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FUdR+causes+a+twofold+increase+in+the+lifespan+of+the+mitochondrial+mutant+gas-1.">FUdR causes a twofold increase in the lifespan of the mitochondrial mutant gas-1.</a> Mechanisms of Ageing Development. 132 (10), 519-521 (2011).</li><li>Gandhi, S., Santelli, J., Mitchell, D. H., Stiles, J. W., Sanadi, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+maintaining+large,+aging+populations+of+Caenorhabditis+elegans.">A simple method for maintaining large, aging populations of Caenorhabditis elegans.</a> Mechanisms of Ageing Development. 12 (2), 137-150 (1980).</li><li>Aitlhadj, L., St&#252;rzenbaum, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+FUdR+can+cause+prolonged+longevity+in+mutant+nematodes.">The use of FUdR can cause prolonged longevity in mutant nematodes.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 131 (5), 364-365 (2010).</li><li>Davies, S. K., Leroi, A. M., Bundy, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorodeoxyuridine+affects+the+identification+of+metabolic+responses+to+daf-2+status+in+Caenorhabditis+elegans.">Fluorodeoxyuridine affects the identification of metabolic responses to daf-2 status in Caenorhabditis elegans.</a> Mechanisms of Ageing Development. 133 (1), 46-49 (2012).</li><li>Feldman, N., Kosolapov, L., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorodeoxyuridine+improves+Caenorhabditis+elegans+proteostasis+independent+of+reproduction+onset.">Fluorodeoxyuridine improves Caenorhabditis elegans proteostasis independent of reproduction onset.</a> PLoS One. 9 (1), e85964 (2014).</li><li>Pulak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+analysis,+sorting,+and+dispensing+of+C.+elegans+on+the+COPAS+flow-sorting+system.">Techniques for analysis, sorting, and dispensing of C. elegans on the COPAS flow-sorting system.</a> Methods Molecular Biology. 351, 275-286 (2006).</li><li>Argon, Y., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+fertilization-defective+mutants+with+abnormal+sperm.">Caenorhabditis elegans fertilization-defective mutants with abnormal sperm.</a> Genetics. 96 (2), 413-433 (1980).</li><li>Lee, S. J., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+longevity+response+to+temperature+by+thermosensory+neurons+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of the longevity response to temperature by thermosensory neurons in Caenorhabditis elegans.</a> Current Biology. 19 (9), 715-722 (2009).</li><li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span.">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mechanisms of Ageing Development. 6 (6), 413-429 (1977).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+Temperature+Differentially+Modulates+C.+elegans+Longevity+through+a+Thermosensitive+TRP+Channel.">Environmental Temperature Differentially Modulates C. elegans Longevity through a Thermosensitive TRP Channel.</a> Cell Reports. 11 (9), 1414-1424 (2015).</li><li>Michaelson, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+A+Practical+Approach.+Ian+A.+Hope+(ed.).+Oxford+University+Press,+Oxford.+1999.+Pp.+281.+ISBN+0+19+963738+5.">C. elegans: A Practical Approach. Ian A. Hope (ed.). Oxford University Press, Oxford. 1999. Pp. 281. ISBN 0 19 963738 5.</a> Heredity. 85 (1), 97-100 (2000).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Herndon, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+and+genetic+factors+influence+tissue-specific+decline+in+ageing+C.+elegans.">Stochastic and genetic factors influence tissue-specific decline in ageing C. elegans.</a> Nature. 419 (6909), 808-814 (2002).</li><li>Calixto, A., Chelur, D., Topalidou, I., Chen, X., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1.">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nature Methods. 7 (7), 554-559 (2010).</li><li>Henderson, S. T., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-16+integrates+developmental+and+environmental+inputs+to+mediate+aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">daf-16 integrates developmental and environmental inputs to mediate aging in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Current Biology. 11 (24), 1975-1980 (2001).</li><li>Rea, S. L., Wu, D., Cypser, J. R., Vaupel, J. W., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stress-sensitive+reporter+predicts+longevity+in+isogenic+populations+of+Caenorhabditis+elegans.">A stress-sensitive reporter predicts longevity in isogenic populations of Caenorhabditis elegans.</a> Nature Genetics. 37 (8), 894-898 (2005).</li><li>Libina, N., Berman, J. R., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+activities+of+C.+elegans+DAF-16+in+the+regulation+of+lifespan.">Tissue-specific activities of C. elegans DAF-16 in the regulation of lifespan.</a> Cell. 115 (4), 489-502 (2003).</li><li>Keith, S. A., Amrit, F. R., Ratnappan, R., Ghazi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C.+elegans+healthspan+and+stress-resistance+assay+toolkit.">The C. elegans healthspan and stress-resistance assay toolkit.</a> Methods. 68 (3), 476-486 (2014).</li><li>Scerbak, C., Vayndorf, E. M., Hernandez, A., McGill, C., Taylor, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+neuron+aging:+Differential+trajectories+with+lifespan-extending+alaskan+berry+and+fungal+treatments+in+Caenorhabditis+elegans.">Mechanosensory neuron aging: Differential trajectories with lifespan-extending alaskan berry and fungal treatments in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8, 173 (2016).</li><li>Vayndorf, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+remodeling+of+C.+elegans+neurons+during+aging+is+modified+by+compromised+protein+homeostasis.">Morphological remodeling of C. elegans neurons during aging is modified by compromised protein homeostasis.</a> npj Aging and Mechanisms of Disease. 2, 16001 (2016).</li><li>Murakami, S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+pathway+conferring+life+extension+and+resistance+to+UV+stress+in+Caenorhabditis+elegans.">A genetic pathway conferring life extension and resistance to UV stress in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 143 (3), 1207-1218 (1996).</li><li>Abbas, S., Wink, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+Tea+Extract+Induces+the+Resistance+of+Caenorhabditis+elegans+against+Oxidative+Stress.">Green Tea Extract Induces the Resistance of Caenorhabditis elegans against Oxidative Stress.</a> Antioxidants (Basel). 3 (1), 129-143 (2014).</li><li>Yanase, S., Hartman, P. S., Ito, A., Ishii, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+pretreatment+increases+the+X-radiation+resistance+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Oxidative stress pretreatment increases the X-radiation resistance of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Mutation Research. 426 (1), 31-39 (1999).</li><li>Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-chip+rapid+microscopy,+phenotyping+and+sorting+of+C.+elegans.">Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans.</a> Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).</li></ol>

ここで、デザインと並べ替えと線虫を維持するためのツールとしてアクセス可能な効果的な線虫のふるいの使用を紹介しました。このツールには、手動で集団、化学処理 (例えばFUDR)、および分離動物のより高価な方法を洗濯、個々 の動物を狩りにいくつかの利点があります。まず、線虫ふるい効率的かつ迅速に (20 分以内) 動物 (表 2) の大規模な混合?...

線虫、線虫はプレミア モデル生物です。研究室では、その栽培の簡単かつ制御された自然、に加えて彼らの全体のゲノムはシーケンス1と各細胞の発生運命は2知られています。これらの機能により線虫は遺伝学的研究のため広く使用されているモデル生物です。しかし、これらの有益な特性と一緒にには、研究者のいくつかの課題を来る。彼らの急速な生成の時間、 c. の elegans集団食品のうち実行することができますすぐにおよび/または複数の世代の集団を混合になって、発達段階を一度に提示します。したがって、固体線虫成長媒体 (NGM) の実験は研究者が細菌の食料源を使い果たすし、新しい幼虫を開発する前に、新鮮なプレートに動物を物理的に移動する必要。子孫世代と混ざらないから実験集団を防ぐために必要な動物の頻繁に転送するよう、これは退屈なことができます。それでも、いくつかの実験には、両方の多数の動物と長時間ポイント (例えば、成人期に DNA または RNA の抽出) が必要があります。これは正確に同期の人口を維持して、動物の数が多いを転送の課題を化合物します。
NGM 上で培養した線虫を転送する現在の方法は、ピッキングや洗濯の動物プレート;化学的に (例えば、DNA 複製阻害剤フルオロデオキシウリジンまたは FUDR); 動物の治療またはウェルプレートで動物を並べ替えるにフローサイトメトリーを使用して。ピッキングには、個人または複数の動物3,4を手動で転送する白金細線または、まつげで作られた手のひらツールの使用が含まれます。このメソッドの正確なが、スキルと時間が必要です、多数の動物の研究の制限。また 5 月を選ぶ可能性のある障害と力の不自然なと一貫性のない金額を個人をかけることによって物理的に有害な動物にストレスであります。洗濯と緩衝液の培養皿を洗浄し、新しい培養プレートにガラス パスツール ピペットで動物とソリューションを移すことを含みます。このメソッドでは複数の世代と動物の発達段階が一括で転送されるときに正確ではないが、迅速かつ効率的です。FUDR などの化学治療は、DNA 複製としたがって、配偶子の生産と卵の開発ブロックを介して子孫の生産を防ぐために養殖のメディアに溶解できます。しばらくの間効果的な正常発達プロセスを中断させないよう発達成熟後このメソッドを適用する必要があります、これはその管理3の前に動物を譲渡する必要がまだあることを意味します。このメソッドに複数携帯シグナル伝達経路、彼らの年齢として動物に顕著な影響の結果として (例えば、寿命延長または変更されたプロテオステイシス) c. の elegans使用5のひずみによっても影響します。 6,7,8,9,10。フローサイトメトリー メソッドは自動的に並べ替えし、別111 つのウェル プレートから個々 のc. の elegansを転送します。この方法は非常に効果的かつ効率的な流れの cytometry の機器は高価であり、多くの研究者がアクセスできません。動物を転送する代わりに、温度に敏感、 fer 15や有限要素法 1、温度調整12と無菌になるなど突然変異体のモデルを使用します。突然変異動物の使用はいくつかの状況で役に立つ、これらの特定の系統の野生型の動物よりも遅い成長、エージングや健康的なワームの貧しい人々 の代表者として、変化のゲノムに依存しています。また、不妊を引き起こす温度シフトへの依存はまた静的な環境の欠如の結果、遺伝子表現13,14,に影響を与える温度変化が容易に示されている15. 研究グループは以前のサイズ16 c. の elegansをフィルターするメッシュの使用を記述する技術を公開しています。しかし、このようなフィルターの使用と関連付けられるかもしれない全体的な健康の結果の変更テストの前の仕事を見つけることができませんでした。
こうして、線虫研究コミュニティ内で培養皿間動物の大きい数を転送するための手頃な価格、効率的、迅速、かつ正確な方法の必要性があります。(名前は線虫ふるい) 装置とその製造と線虫研究コミュニティのニーズを満たす操作の関連付けられているプロトコルの改良、アクセス可能な部分を開発しました。ここで、我々 は線虫ふるいとその使用方法の設計を共有し、一般的な健康または任意のストレス マーカー標準手動狩りと一般的使用、治療と比較した場合、その使用が影響しませんを紹介不妊治療を制限する化学 FUDR。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="654">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Safety glasses</td>
			<td style="width:129px;">Uline</td>
			<td style="width:119px;">S-21076&#160;</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Protective heat resistant glove</td>
			<td style="width:129px;">Grainger</td>
			<td style="width:119px;">Item # 3AT17 Mfr. Model # 3AT17 Catalog Page # 1703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL conical tube</td>
			<td style="width:129px;">Falcon</td>
			<td style="width:119px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Synthetic Nylon mesh</td>
			<td style="width:129px;">Dynamic 
			Aqua-Supply Ltd</td>
			<td style="width:119px;">NTX20 and NTX50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:129px;">Scotch Super Glue Liquid</td>
			<td style="width:119px;">SAD114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pliers</td>
			<td style="width:129px;">Vampliers</td>
			<td style="width:119px;">VMPVT-001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dremmel tool with circular file</td>
			<td style="width:129px;">Lowe&#39;s</td>
			<td style="width:119px;">Item # 525945 Model # 100-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FUDR</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">M9 chemicals ( NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4)&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">NGM plate chemicals (Bactopeptone, Agar, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2,Cholesterol, Streptomycin)</td>
			<td style="width:129px;">BD Biosciences (bactopeptone) , Lab express (agar), Sigma ( rest)</td>
			<td style="width:119px;">BD bioscience 211677, Lab Express 1001,&#160; Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pluronic F-127</td>
			<td style="width:129px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">P2443&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraquat dichloride hydrate</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">36541&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus&#160;</td>
			<td style="width:119px;">FSX100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

caenorhabditis sieve: a low-tech instrument and methodology for sorting small multicellular organisms

線虫(C. elegans) は基本的な生物医学の研究の範囲にわたって使用確立モデル生物です。線虫の研究コミュニティの中でc. の elegansの大規模な年齢をマッチさせた集団を維持する手頃な価格で効果的な方法の必要性があります。機械的に並べ替えと線虫のクリーニングの方法論を紹介します。私たちの目的は、均一サイズおよび実験での使用のためのライフ ステージの動物を取得するコスト効果の高い、効率的な高速、簡単なプロセスを提供することです。このツールは、線虫のふるいは、一般的な円錐ラボ チューブにスレッドし、線虫体サイズに基づいてを並べ替え特注蓋システムを使用してください。また線虫ふるい効果的にから転送する動物 1 つ培養プレート別急速な並べ替え、同期、および健康のマーカーに影響を与えることがなく洗浄できることを示す運動などストレス誘導性遺伝子記者。このアクセス可能な革新的なツールはc. の elegans個体群を維持するため高速で効率的、かつ非ストレスの多いオプションです。

線虫ふるい 2 のスクリュー キャップの簡単な洗浄法を用いた生物の生きている人口を抽出するために使用目的の発達年齢の体径より不織布ナイロン モノフィラメント メッシュの領域を確保で構成されます。標準の円錐管に添付し、機械的にチューブでさらにメンテナンス及び実験 (例えば、転送または遺伝の収穫) を行う準備ができて希望の動物を残し...

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Caenorhabditis Sieve: A Low-tech Instrument and Methodology for Sorting Small Multicellular Organisms

現在のプロトコルを含むソートと年齢をマッチさせた集団のクリーニングの方法論線虫。それは研究用の線虫の実験的人口を取得するのに単純な安価なとカスタムメイドの効率的なツールを使用します。

線虫ふるい: ローテク装置と小型の多細胞生物の並べ替えのための方法論

Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a well-established model organism used across a range of basic and biomedical research. Within the nematode ...

This method can help answer key questions in molecular biology, involving assays that require specific developmental stages of C.elegans. Like assays of gene and protein expression levels. The advantage of this technique is that it allows for accurate and efficient selection of large numbers of C.elegans by body size, this facilitates the use of assays that would normally be time and cost prohibitive.Generally, individuals new to this method will struggle because they can't perform the arching turnover step or they don't keep solution flow in the center of the mesh. Visual demonstration of this method is critical, as the washing and flipping steps are difficult to learn. Some may have trouble interpreting and visualizing specific motions in text.To begin, acquire two 50 mL conical tubes with lids, then use a stepped drill bit to remove the center from the inner lip of the lids. If necessary, use a file, sandpaper, or a rotary tool to clean and sand the edges and tops of the lids. Then cut a disc of nylon monofilament woven mesh, slightly smaller than the diameter of the lid.Texture the top surfaces of the lids, and clean them with ethanol. After allowing the lids to dry, apply cyanoacrylate glue to the top surfaces of both lids. Next, lay the monofilament mesh disc on one glued lid.Invert the second lid on top of the mesh, and press the lids firmly together. After the first layer of glue dries, apply a generous ring of cyanoacrylate glue around the outer gap between the lids. Next, label the filter with its respective mesh pore size.First, place the sieve over a labeled 50 mL conical tube. Then pipette saline solution through the center of the sieve until a droplet forms, coalesces, and drips off of the center of the filter. Using M9 buffer, wash a population of C.elegans off of an auger plate, then use a glass pasteur pipette to transfer the buffer containing the worms on the top side of the monofilament mesh.Operating in the center of the mesh, rinse the filter with M9 buffer, repeat this rinse step as needed to pass all bacteria and smaller worms through the mesh. Next, attach a new 50 mL conical tube to the top of the sieve, the previously collected worms larger than the pores in the mesh will be facing the inside of the new tube. Remove the waste tube and quickly flip the sieve.Then rinse the mesh with M9 buffer into the new collection tube. Allow the collected worms to settle for approximately one minute, then carefully aspirate the buffer solution away from the pellet of worms. Using a glass pasteur pipette, create droplets of worms on an NGM plate and allow them to dry.Finally, rinse the sieve with reverse-osmosis water and ethanol. After the sieve dries, store it in a clean container for future use. Discard the sieve when it develops a sagging appearance.In this protocol a sieve was constructed to sort and clean age-matched populations of C.elegans. Animals in the sieve treatment group exhibited normal and spontaneous movement pattern throughout adulthood. Additionally, the pick and sieve groups did not show any significant differences in pharyngeal pump rate.Animals in the sieve group also responded normally to anterior or posterior mechanical stimulus when compared to all of the treatment groups on any of the testing days. Finally, the fecundity of the treatment groups was compared;the use of the sieve did not significantly impact the number of progeny when compared to the pick treatment group. Once mastered, this technique can be done in less than ten minutes.While attempting this procedure, it's important to remember to operate in the center of the mesh area. After watching this video, you should have a good understanding of how to assemble and properly use a Caenorhabditis sieve to sort worms by body size.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Caenorhabditis Sieve: A Low-tech Instrument and Methodology for Sorting Small Multicellular Organisms

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

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線虫を用いて生殖化学毒性を総合的に評価<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

発生生物学

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心外膜の伸長文化検定と<em&gt; ex vivoで</em&gt;心外膜由来の細胞移動の評価

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Mechanism of Regulation of Adipocyte Numbers in Adult Organisms Through Differentiation and Apoptosis Homeostasis

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Considering that adipose tissue (AT) is an endocrine organ, it can influence whole body metabolism. Excessive energy storage leads to the dysregulation of ...

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再現性の高い小分子ベースの分化プロトコルを使用したヒト多能性幹細胞から心筋細胞の大規模生産

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

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線虫ニューロンの細胞内輸送を分析するための固定化

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

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線虫剤群連鎖球菌によって引き起こされる酸化ストレスの勉強

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

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Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

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Caenorhabditis elegansふたなり生殖管内の精子の誘導と運動性の測定

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...