Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål om stamcellebaseret behandling af perifere neuropatier, især for Equine Tilbagevendende larynx neuropati. De vigtigste fordele ved denne teknik er, at stamcellehøsten er minimalt invasiv, og at injektionsmetoden også kan overføres til andre perifere neuropatier. Konsekvenserne af denne teknik omfatter andre undersøgelser af andre celletyper, da stamcellerne kan differentieres til andre celler af interesse før injektionen.
Visuel demonstration af denne metode er kritisk, da videoen endoskopisk kontrol af larynx bevægelser og manipulation af nerve stimulator teknikker kan være svært at lære. Identificer prøvestedet i den lange hoved af triceps musklen ved visuel inspektion og palpering, omkring midterlinjen mellem det punkt af albuen og det punkt af skulderen. Brug elektriske klippere til at barbere en ca. to af to centimeter område, og anvende en kirurgisk krat bestående af poly-iodid flydende sæbe og alkohol komprimerer i et minut til den eksponerede hud.
Ved hjælp af en 25 gauge nål, subkutant injicere en milliliter 2% lidocain opløsning i midten af desinficeret område. Efter desinfektion med ren antibakteriel håndsæbe, og iførelse sterile handsker, placere en semi-automatisk 14 gauge biopsi nål på en engangs steril drapere, og træk på foråret mekanisme til at arm nålen. Saml en kanyle og obturator i låst position til at danne en trochar, og indføre trochar vinkelret gennem desensibiliserede hud, ca 1,5 centimeter i underlaget muskelvæv.
Fjern derefter trochar, og læg obturatoren på en steril drapere. Indfør nålen gennem kanylen. Dernæst indføre nålen og kanylen gennem huden indsnit i musklen, indtil spidsen af nålen er i midten af den lange leder af triceps muskel.
Slip derefter biopsinålen, træk nålen og kanylen ud af musklen sammen, og fjern nålen fra kanylen. Træk fjederen med den ene hånd, mens du holder nålen med den anden hånd, indtil prøven bliver synlig på spidsen af biopsinålen. Med hjælp fra en assistent skal du åbne et prøverør, der indeholder prøvemediet, og bruge en 19-gauge hypodermisk nål til at overføre det lille muskelstykke fra biopsinålen til prøvetagningsmediet.
Rørret røret med skruehætten, og vip forsigtigt røret to gange for at sikre, at prøven flyder i mediet. Derefter re-arm biopsi nålen og genindføre kanylen gennem huden snit til at indsamle to til tre flere prøver, indtil ca 20 milligram muskelvæv er blevet erhvervet. For at indsprøjte cellerne, efter opvarmning af cellesuspensionen til stuetemperatur, aspirere en milliliter celler i en to milliliter sprøjte og bekræfte, at hesten er i head-down position, der er tegn på fuld sedation.
Dernæst klip en tyve-by-ti centimeter område over venstre larynx region, og anvende en kirurgisk krat af poly-iodid sæbe og alkohol til den udsatte region. Placer en fleksibel standard video endoskop gennem venstre nare af hesten mod nasopharynx, justere placeringen af endoskopet, indtil en fuld visning af både arytenoid brusk og epiglottis er opnået. Tilslut stimuleringsnålen til nervestimulatorens negative elektrode.
Tilslut sprøjten med cellesuspensionen til injektionsledningen, og fyld røret for at skylle luften ud af systemet. Tilslut nervestimulatorens positive elektrode til et elektrodeplaster, der vil blive hængende på området af eksponeret hud. Læg en sprøjte med et volumen af steril saltvandsopløsning svarende til det fyldte volumen af røret, og indfør stimuleringsinjektionsnålen mod strubehovedets dorsolaterale aspekt, start af nervestimulatoren i en Hertz-stimulationstilstand med en strøm på to milliampere, når den nærmer sig det dorsale laterale aspekt af strubehovedet.
Bevæg forsigtigt nålen mod den tilbagevendende larynxner. Så snart bortførelsen bevægelse af venstre arytenoid brusk er synlig, reducere strømmen, indtil bevægelsen forsvinder, samtidig med at nålen på plads. Når der observeres et tab af motorrespons ved 0,5 milliampere, bevares nålepositionen, og der injiceres en milliliter af de autologe stamceller efterfulgt af hele mængden af præfabrikeret saltvand.
Hold nålen i en stabil position under denne proces, da afstanden til nerverne styres af de strømme, der giver en motorreaktion, og bittesmå bevægelser af nålen kan medføre et pludseligt tab af respons. Fjern derefter nålen og endoskopet, og lad hesten komme sig med overvågning. I tidligere undersøgelser er der ikke observeret bivirkninger under eller efter prøveudtagningen, og der er heller ikke observeret betændelse under eller efter stimulering eller injektion af stamcellerne.
Desuden er der ikke målt forskelle mellem førinjektionsscoren af larynxfunktionerne og de scorer, der er opnået på dag et, syv og 28 efter stamcelleinjektionen. Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske, at stamceller indsamling procedure er noninvasive og tillader kulturen i et stort antal autologe mesenkymale stamceller i en kort tid. Efter denne procedure, andre metoder, ligesom injektion af præ-differentierede celler, kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om, hvorvidt Schwann celler er mere tilbøjelige til at bidrage til bestemmelse af nerver.
Efter sin udvikling banede denne teknik vejen for forskere i regenerativ medicin til at udforske stamcellebrug i Equine Tilbagevendende larynx neuropati.