Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over de stamcelgebaseerde behandeling van perifere neuropathieën, met name voor Equine Recurrent Laryngeal Neuropathie. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat de stamceloogst minimaal invasief is en dat de injectiemethode ook kan worden overgedragen naar andere perifere neuropathieën. De implicaties van deze techniek breiden zich uit tot andere studies van andere celtypen, omdat de stamcellen vóór de injectie kunnen worden gedifferentieerd in andere cellen van belang.
Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang, omdat de video-endoscopische controle van de laryngeale bewegingen en de manipulatie van de zenuwstimulatortechnieken moeilijk te leren kan zijn. Identificeer de monsterplaats in het lange hoofd van de tricepsspier door visuele inspectie en palpatie, ongeveer middellijn tussen het punt van de elleboog en het punt van de schouder. Gebruik elektrische tondeuse om een gebied van ongeveer twee bij twee centimeter te scheren en breng een chirurgische scrub aan bestaande uit poly-jodide vloeibare zeep en alcoholcomprimeert gedurende een minuut op de blootgestelde huid.
Met behulp van een 25-meter naald, onderhuids injecteren een milliliter van 2%lidocaïne oplossing in het midden van het ontsmette gebied. Na het ontsmetten met schone antibacteriële handzeep, en het aantrekken van steriele handschoenen, plaats een semi-automatische 14-gauge biopsie naald op een wegwerp steriele gordijnen, en trek aan de veer mechanisme om de naald arm. Monteer een canule en obturator in de vergrendelde positie om een trochar te vormen, en introduceer de trochar loodrecht door de ongevoelige huid, ongeveer 1,5 centimeter in het onderlaagende spierweefsel.
Verwijder vervolgens de trochar en plaats de obturator op een steriel laken. Introduceer de naald door de canule. Introduceer vervolgens de naald en de canule via de huidincisie in de spier, totdat het puntje van de naald zich in het midden van het lange hoofd van de tricepsspier bevindt.
Laat vervolgens de biopsienaald los, trek de naald en canule samen uit de spier en verwijder de naald uit de canule. Trek de veer met de ene hand terwijl u de naald met de andere hand vasthoudt, totdat het monster zichtbaar wordt aan het uiteinde van de biopsytiaald. Open met behulp van een assistent een monsterbuis met het monstermedium en gebruik een 19-gauge hypodermische naald om het kleine spierstuk van de biopsienaald over te brengen naar het bemonsteringsmedium.
Sluit de buis met de schroefdop en kantel de buis twee keer voorzichtig om ervoor te zorgen dat het monster in het medium zweeft. Dan re-arm de biopsie naald en herintroduceren de canule via de huid incisie om twee tot drie meer monsters te verzamelen tot ongeveer 20 milligram spierweefsel is verworven. Om de cellen te injecteren, na het opwarmen van de cel suspensie tot kamertemperatuur, aspirate een milliliter cellen in een twee milliliter spuit en bevestigen dat het paard in de head-down positie die indicatief is voor volledige sedatie.
Knip vervolgens een gebied van twintig bij tien centimeter over het linker laryngeale gebied en breng een chirurgische scrub van poly-jodide zeep en alcohol aan op het blootgestelde gebied. Plaats een flexibele standaard video-endoscoop door de linker nare van het paard in de richting van de nasopharynx, waarbij de positie van de endoscoop wordt aangepast totdat een volledig beeld van zowel het arytenoid kraakbeen als de epiglottis is verkregen. Sluit de stimulatie injectie naald aan de negatieve elektrode van de zenuwstimulator.
Sluit de spuit met de celsuspensie aan op de injectielijn en vul de buis vooraf om lucht uit het systeem te spoelen. Sluit de positieve elektrode van de zenuwstimulator aan op een elektrodepatch die vastzit aan het gebied van blootgestelde huid. Laad een spuit met een volume steriele zoutoplossing gelijk aan het voorgevulde volume van de buis en introduceer de stimulatie-injectienaald naar het dorsolaterale aspect van het strottenhoofd, waarbij de zenuwstimulator in de Hertz-stimulatiemodus wordt gestart, met een stroom van twee milliampère bij het naderen van het dorsale zijdeaspect van het strottenhoofd.
Beweeg de naald voorzichtig naar de terugkerende laryngeale zenuw. Zodra de ontvoeringsbeweging van het linker arytenoid kraakbeen zichtbaar is, vermindert u de stroom, totdat de beweging verdwijnt, terwijl de naald op zijn plaats blijft. Wanneer een verlies van motorische respons bij 0,5 milliampère wordt waargenomen, moet de naaldpositie behouden en een milliliter van de autologe stamcellen injecteren, gevolgd door het volledige volume van vooraf bereide zoutoplossing.
Houd de naald in een stabiele positie tijdens dit proces, als de afstand tot de zenuwen wordt gecontroleerd door de stromingen die een motorische reactie produceert en kleine bewegingen van de naald kan een plotseling verlies van reactie te produceren. Verwijder vervolgens de naald en endoscoop en laat het paard herstellen met controle. In eerdere studies zijn geen bijwerkingen waargenomen tijdens of na de bemonstering, noch is er een ontsteking waargenomen tijdens of na de stimulatie of de injectie van de stamcellen.
Verder zijn er geen verschillen tussen de pre-injectiescores van de laryngeale functies en de scores die op dag één, zeven en 28 na de stamcelinjectie zijn verkregen. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden dat de stamcellen collectie procedure is niet invasief en maakt de cultuur van een groot aantal autologe mesenchymale stamcellen in een korte tijd. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals de injectie van voorgedifferentieerde cellen, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over de vraag of Schwann-cellen eerder zullen bijdragen aan de bepaling van zenuwen.
Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers in de regeneratieve geneeskunde om het gebruik van stamcellen in Equine Recurrent Laryngeal Neuropathie te onderzoeken.
