यह विधि विशेष रूप से घोड़े आवर्ती लैरिंजियल न्यूरोपैथी के लिए परिधीय न्यूरोपैथी के स्टेम सेल-आधारित उपचार के बारे में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक के मुख्य फायदे यह हैं कि स्टेम सेल हार्वेस्ट न्यूनतम आक्रामक है, और इंजेक्शन विधि को अन्य परिधीय न्यूरोपैथी में भी स्थानांतरित किया जा सकता है। इस तकनीक के निहितार्थ अन्य सेल प्रकारों के अन्य अध्ययनों तक विस्तारित होते हैं, क्योंकि स्टेम कोशिकाओं को इंजेक्शन से पहले ब्याज की अन्य कोशिकाओं में विभेदित किया जा सकता है।
इस विधि का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है, क्योंकि लैरिंजियल आंदोलनों का वीडियो एंडोस्कोपिक नियंत्रण और तंत्रिका उत्तेजक तकनीकों में हेरफेर सीखना मुश्किल हो सकता है। कोहनी के बिंदु और कंधे के बिंदु के बीच मिडलाइन के बारे में दृश्य निरीक्षण और टटोलना द्वारा ट्राइसेप्स मांसपेशी के लंबे सिर में नमूना साइट की पहचान करें। एक लगभग दो सेंटीमीटर क्षेत्र दाढ़ी के लिए बिजली के क़ैंची का उपयोग करें, और उजागर त्वचा के लिए एक मिनट के लिए पॉली-आयोडाइड तरल साबुन और शराब संपीड़न से मिलकर एक सर्जिकल स्क्रब लागू होते हैं ।
25 गेज सुई का उपयोग करके, कीटाणुरहित क्षेत्र के केंद्र में 2% लिडोकेन समाधान के एक मिलीलीटर को इंजेक्शन दें। साफ जीवाणुरोधी हाथ साबुन के साथ कीटाणुरहित करने के बाद, और बाँझ दस्ताने धारण करने के बाद, एक डिस्पोजेबल बाँझ कपड़ा पर एक अर्द्ध स्वचालित 14 गेज बायोप्सी सुई जगह है, और सुई हाथ करने के लिए वसंत तंत्र पर खींच । एक ट्रॉचर बनाने के लिए लॉक की स्थिति में एक कैनुला और ऑब्टरेटर को इकट्ठा करें, और डिसेन्सिटाइज्ड त्वचा के माध्यम से ट्रॉचर को लंबवत रूप से पेश करें, लगभग 1.5 सेंटीमीटर अंडरलेइंग मांसपेशी ऊतकों में।
इसके बाद ट्रॉचर निकाल कर ऑबर्टेटर को बाँझ ड्रेप पर रखें। कैनुला के माध्यम से सुई का परिचय दें। इसके बाद, सुई और कैनुला को मांसपेशियों में त्वचा चीरा के माध्यम से पेश करें, जब तक कि सुई की नोक ट्राइसेप्स मांसपेशियों के लंबे सिर के बीच में न हो।
फिर बायोप्सी सुई छोड़ें, सुई और कैनुला को मांसपेशियों से बाहर निकालें, और कैनुला से सुई को हटा दें। दूसरे हाथ से सुई पकड़े हुए एक हाथ से वसंत खींचें, जब तक कि नमूना बायोप्सी सुई की नोक पर दिखाई न दे। एक सहायक की मदद से, नमूना माध्यम युक्त एक नमूना ट्यूब खोलें, और बायोप्सी सुई से छोटे मांसपेशियों के टुकड़े को नमूना माध्यम में स्थानांतरित करने के लिए 19 गेज हाइपोडर्मिक सुई का उपयोग करें।
स्क्रू कैप के साथ ट्यूब को बंद करें, और यह सुनिश्चित करने के लिए धीरे-धीरे ट्यूब को दो बार झुकाएं कि नमूना माध्यम में तैर रहा है। फिर बायोप्सी सुई को फिर से हाथ में लें और त्वचा चीरा के माध्यम से कैनुला को फिर से पेश करें ताकि मांसपेशियों के ऊतकों के लगभग 20 मिलीग्राम तक दो से तीन और नमूने एकत्र न किए जा सकें। कोशिकाओं को इंजेक्ट करने के लिए, कमरे के तापमान के लिए सेल निलंबन वार्मिंग के बाद, कोशिकाओं के एक मिलीलीटर को दो मिलीलीटर सिरिंज में एस्पिरेट करें और पुष्टि करें कि घोड़ा सिर-नीचे की स्थिति में है जो पूर्ण बेहोश करने का संकेत है।
इसके बाद, बाएं लैरिंजियल क्षेत्र पर बीस-बाय-दस सेंटीमीटर क्षेत्र को क्लिप करें, और उजागर क्षेत्र में पॉली-आयोडाइड साबुन और अल्कोहल का सर्जिकल स्क्रब लागू करें। नासोफेरिंक्स की ओर घोड़े की बाईं नाड़ी के माध्यम से एक लचीला मानक वीडियो एंडोस्कोप रखें, एंडोस्कोप की स्थिति को समायोजित करें जब तक कि आर्यटेनॉयड कार्टिलाज और एपिग्लोटिस दोनों का पूरा दृश्य प्राप्त न हो जाए। तंत्रिका उत्तेजक के नकारात्मक इलेक्ट्रोड के लिए उत्तेजना इंजेक्शन सुई कनेक्ट।
इंजेक्शन लाइन के लिए सेल निलंबन युक्त सिरिंज कनेक्ट, और पूर्व प्रणाली से बाहर हवा फ्लश करने के लिए ट्यूब भरें । तंत्रिका उत्तेजक के सकारात्मक इलेक्ट्रोड को एक इलेक्ट्रोड पैच से कनेक्ट करें जो उजागर त्वचा के क्षेत्र में फंस जाएगा। ट्यूब की पूर्व-भरे मात्रा के बराबर बाँझ नमकीन समाधान की मात्रा के साथ एक सिरिंज लोड करें, और गला के डोरसोलेटरल पहलू की ओर उत्तेजना इंजेक्शन सुई पेश करें, एक हर्ट्ज उत्तेजना मोड में तंत्रिका उत्तेजक शुरू करें, गला के पृष्ठीय पार्श्व पहलू के पास पहुंचने पर दो मिलीएम्प्स की धारा के साथ।
धीरे-धीरे सुई को आवर्ती लैरिंजियल तंत्रिका की ओर ले जाएं। जैसे ही बाईं ओर के अपहरण आंदोलन दिखाई देता है, तब तक धारा को कम करें, जब तक कि सुई को चालू रखते हुए आंदोलन गायब न हो जाए। जब 0.5 मिलीएम्प्स पर मोटर प्रतिक्रिया का नुकसान देखा जाता है, तो सुई की स्थिति को बनाए रखें, और ऑटोलॉगस स्टेम कोशिकाओं के एक मिलीलीटर इंजेक्ट करें, जिसके बाद पहले से तैयार खारा की पूरी मात्रा होती है।
इस प्रक्रिया के दौरान सुई को स्थिर स्थिति में बनाए रखें, क्योंकि नसों की दूरी धाराओं द्वारा नियंत्रित होती है जो मोटर प्रतिक्रिया पैदा करती है और सुई की छोटी गतिविधियों से प्रतिक्रिया का अचानक नुकसान हो सकता है। फिर सुई और एंडोस्कोप को हटा दें, और घोड़े को निगरानी के साथ ठीक होने दें। पिछले अध्ययनों में, नमूने के दौरान या बाद में कोई प्रतिकूल प्रतिक्रिया नहीं देखी गई है, न ही उत्तेजना या स्टेम कोशिकाओं के इंजेक्शन के दौरान या बाद में कोई सूजन देखी गई है।
इसके अलावा, लैरिंजियल कार्यों के पूर्व इंजेक्शन स्कोर के बीच कोई अंतर नहीं है, और स्टेम सेल इंजेक्शन के बाद एक, सात, और 28 दिनों पर प्राप्त स्कोर मापा गया है । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि स्टेम सेल संग्रह प्रक्रिया गैर-निवास है और कम समय में बड़ी संख्या में ऑटोलॉगस मेसेंचिमल स्टेम कोशिकाओं की संस्कृति की अनुमति देती है। इस प्रक्रिया के बाद, पूर्व-विभेदित कोशिकाओं के इंजेक्शन की तरह अन्य तरीकों को अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है कि क्या श्वान कोशिकाओं को नसों के निर्धारण में योगदान करने की अधिक संभावना है।
इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने पुनर्योजी चिकित्सा में शोधकर्ताओं के लिए घोड़े आवर्ती लैरिंजियल न्यूरोपैथी में स्टेम सेल उपयोग का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया।
