Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål om stamcellebasert behandling av perifere nevropatier, spesielt for Equine Recurrent Laryngeal Neuropathy. De viktigste fordelene med denne teknikken er at stamcellehøsten er minimal invasiv, og at injeksjonsmetoden også kan overføres til andre perifere nevropatier. Implikasjonene av denne teknikken strekker seg til andre studier av andre celletyper, da stamcellene kan differensieres til andre celler av interesse før injeksjonen.
Visuell demonstrasjon av denne metoden er kritisk, da videoen endoskopisk kontroll av strupebevegelsene og manipulering av nervestimulatorteknikkene kan være vanskelig å lære. Identifiser prøvestedet i triceps muskelens lange hode ved visuell inspeksjon og palpasjon, omtrent midtlinjen mellom albuepunktet og skulderens punkt. Bruk elektriske klippere til å barbere et omtrent to og to centimeter område, og påfør en kirurgisk skrubb bestående av polyjodid flytende såpe og alkoholkomprimerer i ett minutt til den eksponerte huden.
Bruk en 25 gauge nål, subkutant injisere en milliliter av 2% lidokain løsning i midten av desinfisert området. Etter desinfisering med ren antibakteriell håndsåpe, og iført sterile hansker, plasser en halvautomatisk 14 gauge biopsi nål på en engangssteril drapering, og trekk på fjærmekanismen for å bevæpne nålen. Monter en kanyle og obturator i låst posisjon for å danne en trochar, og introdusere trochar vinkelrett gjennom den desensibiliserte huden, ca 1,5 centimeter inn i underleggsmuskelvevet.
Fjern deretter trochar, og legg obturatoren på en steril drapering. Introder nålen gjennom kanylen. Deretter introduserer nålen og kanylen gjennom hud snittet inn i muskelen, til spissen av nålen er midt i triceps muskelens lange hode.
Slipp deretter biopsinålen, trekk nålen og kanylen ut av muskelen sammen, og fjern nålen fra kanylen. Trekk fjæren med den ene hånden mens du holder nålen med den andre hånden, til prøven blir synlig på spissen av biopsinålen. Ved hjelp av en assistent, åpne et prøverør som inneholder prøvemediet, og bruk en 19-gauge hypodermisk nål for å overføre det lille muskelstykket fra biopsinålen til prøvetakingsmediet.
Lukk røret med skrukorken, og vipp forsiktig røret to ganger for å sikre at prøven flyter i mediet. Deretter re-arm biopsi nål og gjeninnføre kanylen gjennom huden snitt for å samle to til tre flere prøver til ca 20 milligram muskelvev er anskaffet. For å injisere cellene, etter oppvarming av cellesuspensjonen til romtemperatur, aspirerer en milliliter celler i en to milliliter sprøyte og bekrefter at hesten er i head-down-stilling som indikerer full sedasjon.
Deretter klipper du et tjue-til-ti centimeter område over venstre laryngealregion, og påfør en kirurgisk skrubb av polyjodidsåpe og alkohol til den eksponerte regionen. Plasser et fleksibelt standard videoendoskop gjennom hestens venstre nare mot nasopharynx, justere posisjonen til endoskopet til en full visning av både arytenoidbrusk og epiglottis oppnås. Koble stimuleringsinjeksjonsnålen til nervestimulatorens negative elektrode.
Koble sprøyten som inneholder cellefjæringen til injeksjonslinjen, og fyll røret på forhånd for å skylle luft ut av systemet. Koble den positive elektroden av nervestimulatoren til et elektrodeplaster som vil bli sittende fast i området eksponert hud. Legg en sprøyte med et volum av steril saltvannsløsning lik det forfylte volumet av røret, og introder stimuleringsinjeksjonsnålen mot det dorsolaterale aspektet av strupehodet, start nervestimulatoren i den ene Hertz-stimuleringsmodusen, med en strøm på to milliamper når de nærmer seg det dorsale laterale aspektet av strupehodet.
Beveg nålen forsiktig mot den tilbakevendende laryngealnerven. Så snart bortføringsbevegelsen av venstre arytenoid brusk er synlig, reduser strømmen, til bevegelsen forsvinner, mens du holder nålen på plass. Når et tap av motorrespons på 0,5 milliamps observeres, opprettholde nåleposisjonen, og injisere en milliliter av autologe stamceller, etterfulgt av hele volumet av pre-forberedt saltvann.
Hold nålen i stabil stilling under denne prosessen, da avstanden til nervene styres av strømmene som produserer en motorrespons og små bevegelser av nålen kan gi et plutselig tap av respons. Fjern deretter nålen og endoskopet, og la hesten komme seg med overvåking. I tidligere studier har det ikke blitt observert noen bivirkninger under eller etter prøvetakingen, og det er heller ikke observert betennelse under eller etter stimuleringen eller injeksjonen av stamcellene.
Videre, ingen forskjeller mellom pre-injeksjon score av strupehodefunksjoner, og score oppnådd på dag én, syv, og 28 etter stamcelleinjeksjonen er målt. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske at stamcelleinnsamlingsprosedyren ikke er invasiv og tillater kulturen til et stort antall autologe mesenchymale stamceller på kort tid. Etter denne prosedyren kan andre metoder, som injeksjon av pre differensierte celler, utføres for å svare på flere spørsmål om Schwann-celler er mer sannsynlig å bidra til bestemmelse av nerver.
Etter utviklingen banet denne teknikken vei for forskere i regenerativ medisin for å utforske stamcellebruk i Equine Recurrent Laryngeal Neuropathy.
