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•
08:23 min
September 25th, 2018
DOI :
10.3791/58051-v
Chapters
0:04
Title
0:48
Blood Collection and Plasma Storage
2:04
cfDNA Extraction
4:45
ddPCR Mix Preparation
5:46
Droplet Generation
6:25
PCR Amplification
7:06
Results: KRAS and EGFR Drop-off ddPCR Assays
7:50
Conclusion
Transcript
该方法可作为癌症诊断工具,分析循环肿瘤DNA。该技术在单个反应中对聚类突变区域的多重基因变化进行检测。这有助于保存珍贵的患者样本。
该方法可以深入了解肿瘤的突变性特征。现在,它也可以应用于分子分析,作为qPCR的替代品,以获得核酸靶序列的绝对定量。在七毫升EDTA管中收集血液样本。
建议使用两根管子收集大约四毫升的血浆。在抽血后三小时内将血液样本在重力820倍的离心10分钟,分离出红血球、白血球和血浆。采样和离心之间的时间对于获得高品位的T细胞无DNA不受白血球释放
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Summary
在这里, 我们提出了一个协议, 以准确地量化一个目标区域的多基因变化, 在单一的反应使用下拉 ddPCR 和一个独特的对水解探针。
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