Name: minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model
Uploaded: 2019-05-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل بأموال من وزاره الاقتصاد والقدرة التنافسية في اسبانيا (AGL2017-85162-1-R) وبرنامج البحوث المتعلقة بالعموميات في فالنسيا (PrometeoII 2014/036). نسخه النص الإنكليزي المنقحة من قبل n. Macowan خدمه اللغة الانجليزيه

أجريت جميع الإجراءات التجريبية المستخدمة في هذه الدراسة وفقا للتوجيه 2010/63/EU EEC للتجارب الحيوانية واستعرضتها ووافقت عليها اللجنة الاخلاقيه لتجريب الماشية في الجامعة الvalènciaه ، اسبانيا (قانون البحث: 2015/VSC/PEA/00170). XGD ، FMJ ، MPVC و JSV يحمل شهادة تفويض صادره عن الاداره الحكومية بلنسية لتجربه علي الح?...

منذ أول حاله الولادة الحية موثقه من الاجنه المنقولة9، وقد أصبحت هذه التقنية وأنواع الأرانب حاسمه في الدراسات الانجابيه. والي جانب ذلك ، تتطلب الدراسات البحثية المتعلقة بالاجنه ، التي تنطوي علي التلاعب والإنتاج والتجميد وما إلى ذلك ، كخطوه أخيره ، تقييم قدره الاجنه علي ت?...

وبهدف تجاوز العقم البشري أو تحسين نشر الماشية ذات القيمة الجينية العالية والحفاظ علي الموارد الوراثية الحيوانية ، فان مجموعه من التقنيات تسمي مجتمعه تكنولوجيات الإنجاب المساعدة ، مثل الاباضه الفائقة ، في تم تطوير الإخصاب الأنبوبي ، وثقافة الاجنه ، أو التجميد ،1،2. حاليا ، يتم إعطاء العلاجات الهرمونية لتحفيز المبيضين وإنتاج عدد كبير من بصيلات المبيض عدد الجريبات الغاريه1. البويضات التي يتم جمعها من هذه البصيلات يمكن نضجها ، المخصبة ، وتطويرها في المختبر حتى يتم اما بالتبريد أو نقلها إلى الأمهات البديلة3. ومع ذلك ، خلال هذه العلاجات ، ويتعرض الامشاج و تخليق ملقح لسلسله من العمليات غير الفسيولوجية التي يمكن ان تتطلب التكيف الجنين للبقاء علي قيد الحياة في هذه الظروف4،5. هذا التكيف هو ممكن بسبب اللدونة الجنين في وقت مبكر ، والذي يسمح التغييرات الجنينية في التعبير الجيني والبرمجة التنموية6. ومع ذلك ، يمكن ان تؤثر هذه التعديلات علي المراحل اللاحقة من تطور الجنين حتى سن الرشد ، ومن المقبول علي نطاق واسع الآن ان الأساليب والتوقيت وإجراءات التجميد أو الظروف الثقافية تظهر نتائج مختلفه علي مصير الجنين7 , 8. لذلك ، لتوضيح الآثار المستحثة محدده من الفنون ، واستخدام نماذج الحيوانية تتميز جيدا لا مفر منه.
وقد حدثت أول ولادة حيه موثقه ناتجه عن نقل أجنه ثدييه في ال18909. اليوم ، نقل الاجنه (ET) إلى انثي بديله هو خطوه حاسمه في دراسة الآثار الناجمة عن الفن خلال مرحله ما قبل الغرس علي مراحل تطوير الاجنه اللاحقة10. تقنيات ET تعتمد علي حجم والهيكل التشريحي لكل الحيوانية. وفي حاله النماذج الحيوانية الكبيرة الحجم ، كان من الممكن القيام بعمليات ET عن طريق تقنيات ET غير جراحيه لعنق الرحم ، ولكن في قسطرة الأنواع الأصغر حجما من عنق الرحم هي أكثر تعقيدا وتستخدم التقنيات الجراحية في كثير من الأحيان11. ومع ذلك ، يمكن ان يسبب الجراحة ET نزيف التي يمكن ان تضعف زرع ونمو الجنين ، والدم يمكن ان تغزو تجويف الرحم ، مما تسبب في وفاه الجنين10. ولا تزال التقنيات غير الجراحية عبر عنق الرحم تطبق في البشر ، والبالونات ، والأبقار ، والخنازير والفئران12،13،14، 15،16،17، ولكن الجراحية لا تزال تستخدم ETs في أنواع مثل الماعز والأغنام أو الحيوانية الأخرى التي تمثل صعوبات اضافيه10،18،19،20،21، مثل الأرانب (اثنين الاجهزه المستقلة) أو الفئران (حجم صغير). ومع ذلك ، تميل أساليب النقل الجراحية تدريجيا إلى استبدالها بطرق اقل الغازية. واستخدم التنظير الباطني لنقل الاجنه ، علي سبيل المثال ، في الأرانب والخنازير والتاملات الصغيرة18و19و20. ويمكن استخدام هذه الطرق التنظير طفيف التوغل لنقل الاجنه في أمبول عن طريق infundibulum ، وهو أمر ضروري في الأرانب وأظهرت اثار مفيده في بعض الأنواع20. ويستند هذا إلى اهميه الحوار الصحيح بين الجنين والام خلال مراحل الاجنه المبكرة في القناة. وكما ذكر أعلاه ، فان أعاده عرض الاجنه التي تجري في الأرانب اثناء هجره الاجنه من خلال القناة الهوائية ضرورية لتحقيق الاجنه القادرة علي زرع22،23.
نماذج الحيوانية أكبر حجما ، مثل الأبقار ، هي مثيره للاهتمام لان السمات البيوكيميائية وما قبل الغرس مماثله لتلك الموجودة في الأنواع البشرية24. ومع ذلك ، الحيوانية الكبيرة مكلفه للغاية لاستخدامها في التجارب الاوليه ، وتعتبر القوارض نموذجا مثاليا (76 ٪ الكائنات الحية النموذجية هي القوارض) للبحوث المختبرية25. ومع ذلك ، فان نموذج الأرنب يوفر بعض المزايا علي القوارض في الدراسات الانجابيه ، كما ان بعض العمليات البيولوجية الانجابيه التي عرضها البشر هي أكثر تشابها في الأرانب من تلك الموجودة في الفئران. الإنسان والأرانب تقديم مماثله الوراثية الجنينية تنشيط الجينوم ، والذواقة وبنيه المشيمة الأرقاء. الاضافه إلى ذلك ، باستخدام الأرانب فمن الممكن ان نعرف التوقيت الدقيق للإخصاب ومراحل الحمل بسبب الاباضه المستحثة25. الأرنب دورات الحياة قصيرة ، واستكمال الحمل في 31 يوما والوصول إلى سن البلوغ في حوالي 4-5 أشهر ؛ الحيوانية من السهل التعامل معها بسبب سلوكها المنصاع وغير العدواني ، وصيانتها اقتصاديه جدا بالمقارنة مع حساب الأكبر من الماشية. وعلاوة علي ذلك ، من المهم ان نذكر ان الأرانب لديها الرحم المزدوج مع اثنين من cervixes مستقله11،25. هذا يضع الأرنب في وضع تفضيلي ، كما يمكن نقل الاجنه من المجموعات التجريبية المختلفة إلى نفس الحيوانية ، ولكن في قرن الرحم مختلفه. وهذا يتيح لنا مقارنه كل من الآثار التجريبية ، والحد من عامل الامومه من النتائج.
اليوم ، غير الجراحية أساليب ET ليست في استخدامها في الأرنب. بعض الدراسات التي أجريت في أواخر 90s باستخدام تقنيه ET عبر عنق الرحم أسفرت عن انخفاض معدلات التسليم تتراوح بين 5.5 ٪ إلى 20.0 ٪11،26 مقابل 50-65 ٪ من الطرق الجراحية ، من بينها اجراء تنظير البطن الموصوفة من قبل Besenfelder و Brem18. معدلات النجاح المنخفضة لهذه الطرق غير الجراحية ET في الأرانب تتزامن مع عدم وجود أعاده عرض الاجنه اللازمة في القناة ، والتي يتم تجنبها في الناقلات العنقية. هنا ، ونحن وصف فعاله الحد الأدنى من الجراحة بالمنظار ET الاجراء باستخدام الأرانب كنموذج الكائن الحي. هذا الأسلوب يوفر نموذجا لمزيد من البحوث الانجابيه في الحيوانية الكبيرة والبشر.
لان الأرانب لديها نافذه زمنيه ضيقه بشكل خاص لغرس الاجنه ، ET في هذا النوع يتطلب درجه عاليه من التزامن بين المرحلة التنموية للجنين في ET والوضع الفسيولوجي للمستلم27. في بعض الحالات ، بعد العلاج التناسلي الذي يبطئ نمو الجنين (مثل الثقافة الانبوبيه) أو يغير من تقبل بطانة الرحم (مثل علاجات الاباضه) ، لا يوجد تزامن بين الجنين ورحم الام. ويمكن ان تؤثر هذه الحالات سلبا علي النتيجة. للرد في هذه السياقات ، ونحن وصف الفعالة الأرنب مورلي التزجيج البروتوكول الذي يسمح لنا لوقفه ، وتنظيم واستئناف التجارب. وهذه العملية مستصوبه من النواحي اللوجستية للدراسات الانجابيه وتتيح لنا القدرة علي تخزين الاجنه علي المدى الطويل ، مما يسمح بنقلها. الاجراء بالمنظار واستراتيجيات الحفظ بالتبريد تسمح بتخطيط أفضل للدراسات مع عدد اقل من الماشية. التالي ، فان منهجيتنا توفر مزايا صحية واقتصاديه وتتوافق مع مفهوم 3Rs (الاستبدال والتخفيض والصقل) للبحوث الحيوانية مع الهدف المعلن لتحسين العلاج البشري للحيوانات التجريبية. وهكذا ، مع هذه الأساليب ، والأرانب تشكل كائن نموذجي مثالي لاختبارات التكاثر في الجسم الحي.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>626</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buserelin Acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B3303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate soap</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCJ500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCA500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>99921</td>
			<td>CO2 N48.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15385194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W387509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5773</td>
			<td>Without calcium chloride.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric razor</td>
			<td>Oster Golden A5</td>
			<td>078005-140-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope camera</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>OP-714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope trocar with silicone leaflet valve</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>30114GK</td>
			<td>Lightweight trocar model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993046</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epicraneal needle 23G</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>514056353</td>
			<td>Smaller needles can be also used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural catheter</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural needle</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>102466-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>5273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>184</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laparoscopy equipment</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>26003 AA</td>
			<td>Hopkins&#174; Laparoscope, 0&#186;-mm straight-viewing laparoscope, 30-cm length, 5-mm working channel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>Fibrolux 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>P1505XXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical CO2 insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>Endoflator&#174;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993501</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 35-mm</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic dressing (Nobecutan)</td>
			<td>IBOR medica</td>
			<td>7140028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Straw 0.25 mL</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>02656DPYS500S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td>Any regular surgical grade steel small straight scissors will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube for insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>20400040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16F</td>
			<td>There are cheaper options such as Leica MZ8 or Nikon SMZ-10 or SMZ-2B, to name a few.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>087GL010075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>12261501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile mask</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>058B15924B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straw Plug</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11750425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 5-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11773313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urinary catheter</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>17722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath</td>
			<td>RAYPA</td>
			<td>BAE-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>525225</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbits</td>
			<td>Universitat Polit&#232;cnica de Val&#232;ncia</td>
			<td>Line A</td>
			<td>Other maternal lines, such as Line V or Line HP can be used.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model

وتؤثر تقنيات الإنجاب المساعدة (الفنون) ، مثل ثقافة الاجنه في المختبر أو التجميد الجنيني ، علي أنماط التنمية الطبيعية التي تترتب عليها عواقب ما قبل الولادة وبعدها. لضمان البراءة من التطبيقات الفنية ، والدراسات في النماذج الحيوانية ضرورية. الاضافه إلى ذلك ، وكخطوه أخيره ، تتطلب دراسات تنميه الاجنه تقييم قدرتها علي تطوير نسل صحي كامل الأجل. هنا ، لا غني عن نقل الاجنه إلى الرحم للقيام بأي تجربه ذات صله بالفنون.
وقد استخدم الأرنب كنموذج الكائن الحي لدراسة تكاثر الثدييات لأكثر من قرن. بالاضافه إلى قربها الوراثي للأنواع البشرية وحجمها الصغير وتكلفه صيانتها المنخفضة ، فان لها خصائص انجابيه مهمة مثل الاباضه المستحثة ، والتسلسل الزمني للتطور الجنيني المبكر علي غرار البشر والحمل القصير التي تسمح لنا لدراسة عواقب تطبيق الفن بسهوله. وعلاوة علي ذلك ، يتم تطبيق الفنون (مثل حقن السائل المنوي داخل الجنين ، وثقافة الاجنه ، أو التجميد) مع الكفاءة المناسبة في هذا النوع.
باستخدام تقنيه نقل الاجنه بالمنظار وبروتوكول الحفظ بالتبريد المقدمة في هذه المقالة ، ونحن وصف 1) كيفيه نقل الاجنه من خلال تقنيه سهله وطفيفه التوغل و 2) بروتوكول فعال للتخزين علي المدى الطويل من الأرنب الاجنه لتوفير القدرات اللوجستية المرنة الوقت والقدرة علي نقل العينة. وتشير النتائج التي تم الحصول عليها بعد نقل أجنه الأرانب في مراحل تنموية مختلفه إلى ان المستنقع هو المرحلة المثالية لشفاء ونقل أجنه الأرانب. التالي ، فانه يلزم نقل الاجنه الجنينية ، مما يبرر العملية الجراحية. وعلاوة علي ذلك ، يتم بنجاح المزجج الأرنب الاجنه ومنظار نقلها ، مما يثبت فعاليه التقنيات الموصوفة.

الحد الأدنى الغازية نقل بالمنظار من الاجنه الطازجة أو المزجج يضع الأرنب بين أفضل النماذج الحيوانية للدراسات الانجابيه. ويبين الجدول 1 نتائج الاجنه المنقولة الطازجة في مراحل تنموية مختلفه (الشكل 4). معدل البقاء علي قيد الحياة عند الولادة (النسبة ا...

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

نقل الاجنه طفيف التوغل والتزجيج الجنيني في مرحله الجنين الأمثل في نموذج الأرنب

وتجري تقييمات مستمرة لتقنيات الإنجاب المساعدة (الفنون) لتحسين النتائج والحد من المخاطر المرتبطة بها. تصف هذه المخطوطة اجراء لنقل الاجنه بالحد الأدنى من التوغل مع بروتوكول فعال للحجز بالتبريد يسمح باستخدام الأرانب كنموذج حيواني مثالي لتكاثر البشر.

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

الهدف الرئيسي من هذه التجربة هو وصف إجراء نقل الجنين بالمنظار في الأرنب كنموذج. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن هذا واحد يعمل على نقل الأجنة باستخدام تقنية سهلة، والحد الأدنى من الغازية. وعلاوة على ذلك، يعمل بروتوكول حفظ التبريد الفعال للجنين هنا، كما تم وصفه، على تخزين أجنة الأرانب على المدى الطويل، مما يوفر قدرات لوجستية مرنة زمنياً والقدرة على نقل العينة.وكما نعلم، فإن تكنولوجيات الإنجاب التي تتلقى المساعدة هي قيد التقييم المستمر لتحسين النتائج والحد من المخاطر المرتبطة بها. لذلك، باستخدام كلا التقنيات، يمكن استخدام الأرنب كنموذج حيواني مثالي للتكاثر البشري للإجابة على الأسئلة الرئيسية في هذا المجال، مثل آثار التلاعب الجنين في المختبر على النسل. إن البرهان المرئي لهذه الأمور أمر بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات نقل الأجنة، لأنه يجب أن يتم ذلك بدقة كبيرة لضمان نجاح هذه التقنية.بالنسبة للتبخير الجنيني ، غمر الأجنة في محلول موازين لمدة دقيقتين ، متبوعًا باحتضان لمدة دقيقة واحدة في محلول التعبئة. في نهاية الحضانة، تحميل الأجنة في 125 ميكرولتر البلاستيك القش الصغير، والزوجين نهاية مغلقة من القش الصغير مع مجهرية ملليلتر مناسبة. قاعدة التعرق المتوسطة تصل إلى ثلث طول القش، تليها فقاعة الهواء الصغيرة.بعد ذلك ، استخدم منظار مجسم لاستنشاق الأجنة في 40 ميكرولترات من محلول التكذيب ، تليها فقاعة هواء صغيرة أخرى وقاعدة متوسطة كافية لنقل الكسر السائل الأول إلى قطن القش الصغير. ثم أغلق الطرف المفتوح من القش الصغير بقش بقش، غمس القشة المصغرة مباشرة في النيتروجين السائل لتحقيق التزجيج، وتخزين القش الصغير في سخرية النيتروجين السائل. لإذابة الأجنة لنقلها، ضع القش الصغير أفقياً 10 سنتيمترات من بخار النيتروجين السائل لمدة 20 إلى 30 ثانية.عندما تبدأ عملية التبلور داخل القش الصغير ، غمر القش الصغير في حمام الماء 25 درجة مئوية لمدة 10 إلى 15 ثانية. إزالة فورا المقبس القش والقطن واستخدام microdispenser مقرونة لطرد محتويات القش مصغرة في لوحة تحتوي على 25 درجة مئوية قاعدة المتوسطة تكملها 0.33 محلول السكروز الضروس، والتي يجب أن تبقى الأجنة خلال خمس دقائق. ثم نقل الأجنة إلى لوحة من وسط قاعدة جديدة لاحتضان خمس دقائق أخرى.كما عدة أيام قبل سن الأجنة التي سيتم نقلها، لاحظ turgidity ولون الفرج من الأرانب الإناث 4.5 الشهر الإناث ناضجة المتاحة، والحث على الإباضة في الحيوانات تقبلا مع حقن واحد داخل العضو من ميكروغرام واحد من خلات buserelin بغض النظر عن وزن الجسم. في يوم النقل ، شطف الأجنة الطازجة أو المذابة في 37 درجة مئوية قاعدة المتوسطة تحت منظار مجسم ، وإرفاق تكوين مناسب 17 قياس فوق الجافية القسطرة لحقنة ملليلتر واحد. تعرق سنتيمتر واحد من قاعدة المتوسطة في القسطرة، تليها فقاعة الهواء الصغيرة.ثم تُفطّن خمسة إلى سبعة أجنة و10 ميكرولترات من وسط القاعدة، تليها فقاعة هواء صغيرة أخرى، وآخر سنتيمتر من وسط القاعدة. بمجرد تحميل الأجنة ، ضع أرنب المتلقي المذبق في قفص على مرحلة الاحترار ، وطبق المرهم على عيون الحيوان. بعد التأكد من عدم الاستجابة لدواسة منعكس، حلق الفراء من البطن البطني، وتنظيف المنطقة الجراحية مع صابون غلوكونات الكلورهيكسيدين، وإزالة أي الشعر المتبقية.غطي المنطقة بغطاء معقمة مع ثقب للمنطقة الجراحية، وأدخل تروكار واحد بالمنظار خمسة سنتيمترات في تجويف البطن، سمين السد إلى عملية الزيفويد، واستخدام ضغط ينظم التوفق الميكانيكي لتضخيم تجويف البريتوني. أدخل كاميرا المنظار من خلال التروكر بالمنظار، وأدخل الإبرة فوق الجافية 17 قياسًا في المنطقة الأربية، على بعد سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات من إنفيندبولوم. أدخل القسطرة المحملة من خلال الإبرة فوق الجافية في البطن، وأدخل سنتيمتر أو سمين من القسطرة فوق الجافية من خلال إينفرومبولوم في الأمبولة.اِكتئِبُ بلطف مُضاغط القثطار لإطلاق الأجنة في oviduct. يجب على كل من فقاعات الهواء الخروج من القسطرة. إزالة القسطرة بعد إطلاق الأجنة، والتعرق وإطلاق الوسط المتبقي للتأكد من عدم وجود الأجنة.بعد التأكد من نجاح نقل الأجنة، قم بإزالة الإبرة فوق الجافية وكاميرا المنظار، وإطلاق ثاني أكسيد الكربون البطني من خلال التروكر بالمنظار. تنظيف شق trocar مع محلول الكلورهيكسيدين، وإغلاق الجرح مع الألومنيوم micronised وخلع الملابس البلاستيكية. ثم علاج الحيوان بالمضادات الحيوية المناسبة والتكليس، ومراقبة الحيوان حتى الشفاء التام.ينقل الجنين بالمنظار الحد الأدنى من الغازية يضع الأرنب بين أفضل النماذج الحيوانية للدراسات الإنجابية، مع نسبة عالية من الأجنة الجديدة المنقولة مما يؤدي إلى جرو. وتجدر الإشارة إلى أن القيم الأعلى تتحقق عندما يتم نقل الأجنة الطازجة مع الأجنة في مرحلة المورولا المبكرة أو المدمجة. ويلاحظ نتائج مماثلة بعد مبكرة وضغطت نقل مورولا الأرنب، لا سيما مع morulae المدمجة، مما يؤكد فعالية وموثوقية هذه التقنية لنقل الأجنة الطازجة في vitrified في الأرانب.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل التقنيات الإنجابية المساعدة المشروطة من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل كيف يمكن أن تترتب على إضافة الكثافة تأثير مسكن في وقت لاحق من الحياة. بعد التطور الأخير ، تمهد هذه التقنية الطريق أمام العلماء في مجال التكاثر لاستكشاف هذا التأثير في البشر استنادًا إلى المسافة الفيلوجينية الوثيقة بين الأرانب والبشر. وهكذا، يمكن أن توفر هذه التقنية نتائج قابلة للتحويل بسهولة إلى الطب السريري البشري، وكذلك في أنواع الثدييات الأخرى.لا ننسى أن لدينا طريقة تقدم بعض المزايا الصحية والاقتصادية المطابقة لمفهوم ثلاثة R من رعاية الحيوان، واستبدال، والحد، والصقل، من خلال تنويه الهدف من تحسين معاملة الإنسان من الحيوانات التجريبية.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead زرع الأجنة الزرد

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

التصوير الهياكل التحت خلوية في الأجنة الحية اسماك الزرد

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

مراقبة قسم الميتوزى وديناميكية في الأجنة الزرد لايف

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

حقن مكروي الجنين و Electroporation في حبلي<em&gt; Ciona المعوية</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

تحديد أسلاف ريدثروميلويد وذريتهم في الجنين الماوس عن طريق التدفق الخلوي

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Use of Immunolabeling to Analyze Stable, Dynamic, and Nascent Microtubules in the Zebrafish Embryo

استخدام إيمونولابيلينج لتحليل Microtubules مستقرة ودينامية، والوليدة في الجنين الزرد

Microtubules (MTs) are dynamic and fragile structures that are challenging to image in vivo, particularly in vertebrate embryos. Immunolabeling methods ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

فؤاد وميكرورهيولوجي في الخلية صفار الجنين الزرد

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) and Brown Trout (Salmo Trutta Morpha fario)

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout Oncorhynchus Mykiss and Brown Trout Salmo Trutta Morpha fario

فعالية "تجريد الهواء" في "اثنين من أسماك السلمون"، تراوت قوس قزح (Oncorhynchus Mykiss) وسمك السلمون المرقط البنى (Salmo Trutta مورفى فريو)

Egg collection is one of the most crucial procedures during fish reproduction in salmonid hatcheries. Classic methods involve the use of hand massage on ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

حركات للوفلر الأنسجة التالية عن طريق فوتوكونفيرسيون خلية في الجنين الزرد

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

النظام القائم على microinjection لفي غرس فيفو Cardiomyocytes الجنينية في جنين الطيور

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...