Name: minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model
Uploaded: 2019-05-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door fondsen van het ministerie van economie en concurrentievermogen van Spanje (AGL2017-85162-c2-1-R) en Generalitat Valencia Research Programme (PrometeoII 2014/036). Engelse tekstversie herzien door N. Macowan English language service

Alle in deze studie gebruikte experimentele procedures werden uitgevoerd overeenkomstig richtlijn 2010/63/EU-EEG voor dierproeven en werden door het ethische Comité voor experimenten met dieren van de Universitat Politècnica de València beoordeeld en goedgekeurd. Spanje (onderzoek code: 2015/VSC/PEA/00170). XGD, FMJ, MPVC en JSV heeft een autorisatie certificaat afgegeven door de regering van Valencia om te experimenteren op dieren. XGD is gemachtigd om in situ toezicht te houden op het welzijn en de verzorging van de...

Sinds het eerste gedocumenteerde levende geboorte geval van overgebrachte embryo's9, zijn deze techniek en de konijn soorten essentieel in reproductieve studies geworden. Daarnaast vereisen embryo-onderzoek met manipulatie, productie, cryopreservatie, enz. , als laatste stap de evaluatie van de embryo capaciteit voor het opwekken van gezonde nakomelingen op volle termijn. Daarom is embryotransfer techniek onmisbaar13,28. In de loo...

Met de doelstellingen van het omzeilen van menselijke onvruchtbaarheid of de verbetering van de verspreiding van vee van hoge genetische waarde en het behoud van dierlijke genetische hulpbronnen, een reeks technieken gezamenlijk genoemd ondersteunde reproductie technologieën, zoals superovulatie, in vitro fertilisatie, embryocultuur, of cryopreservatie, werden ontwikkeld1,2. Momenteel worden hormonale behandelingen gegeven aan de eierstokken te stimuleren en produceren een groot aantal antral ovariële follikels1. Oöcyten verzameld uit deze follikels kunnen worden gerijpt, bevrucht, en ontwikkeld in vitro totdat ze ofwel gecryopreserveerde of overgedragen aan surrogaat moeders3. Echter, tijdens deze behandelingen, gameten en zygoten worden blootgesteld aan een reeks van niet-fysiologische processen die kunnen vereisen embryo aanpassing om te overleven in deze omstandigheden4,5. Deze aanpassing is mogelijk door de vroege embryo-plasticiteit, waardoor embryo veranderingen in genexpressie en ontwikkelings programmering6. Echter, deze wijzigingen kunnen invloed hebben op de daaropvolgende stadia van de ontwikkeling van embryo's tot volwassenheid, en het is nu algemeen aanvaard dat methoden, timing, cryopreservatie procedure of cultuur voorwaarden tonen verschillende resultaten op embryo Fate7 , 8. Daarom is het gebruik van goed gekenmerkte diermodellen onvermijdelijk om de specifieke geïnduceerde effecten van kunst te verhelderen.
De eerste gedocumenteerde levende geboorte als gevolg van de overdracht van zoogdier embryo's vond plaats in 18909. Vandaag, embryotransfer (ET) naar een surrogaat vrouwtje is een cruciale stap in het bestuderen van de kunst-geïnduceerde effecten tijdens de pre-implantatie op de daaropvolgende embryo ontwikkeling stadia10. ET de technieken hangen van de grootte en de anatomische structuur van elk dier af. In het geval van grote dierlijke modellen, is het mogelijk geweest om ET door transcervicale niet-chirurgische ET technieken uit te voeren, maar in kleiner-grootte soorten katheterisatie van de cervix is complexer en de chirurgische technieken worden vaak gebruikt11. Echter, chirurgische ET kan leiden tot bloedingen die implantatie en embryo ontwikkeling kunnen schaden, als het bloed kan binnenvallen de baarmoeder lumen, waardoor embryo Death10. Transcervicale niet-chirurgische et technieken worden nog steeds toegepast bij mensen, bavianen, runderen, varkens en muizen12,13,14,15,16,17, maar chirurgische ETS worden nog steeds gebruikt in soorten zoals geiten, schapen of andere dieren die extra moeilijkheden veroorzaken10,18,19,20,21, zoals konijnen (twee onafhankelijke cervices) of muizen (kleine grootte). Niettemin, chirurgische overdracht methoden hebben de neiging geleidelijk te zijn vervangen door minder invasieve methoden. Endoscopie werd gebruikt voor de overdracht van embryo's, bijvoorbeeld bij konijnen, varkens en kleine herkauwers18,19,20. Deze minimaal invasieve endoscopie methoden kunnen worden gebruikt voor de overdracht van embryo's in de ampulla via de infundibulum, die essentieel is bij konijnen en heeft aangetoond gunstige effecten in sommige soorten20. Dit is gebaseerd op het belang van de juiste dialoog tussen embryo en moeder tijdens vroege embryonale stadia in de eileider. Zoals hierboven vermeld, het embryo remodeling dat plaatsvindt in konijnen tijdens de embryo migratie door de eileider is van essentieel belang voor het bereiken van embryo's kunnen inplanteren22,23.
Grotere dierlijke modellen, zoals runderen, zijn interessant, omdat de biochemische en pre-implantatie functies zijn vergelijkbaar met die in de menselijke soort24. Nochtans, zijn de grote dieren te duur om in inleidende proeven te gebruiken, en de knaagdieren worden beschouwd als een ideaal model (76% modelorganismen zijn knaagdieren) voor laboratoriumonderzoek25. Niettemin, het konijn model biedt een aantal voordelen ten opzichte van knaagdieren in reproductieve studies, zoals sommige reproductieve biologische processen tentoongesteld door de mens zijn meer vergelijkbaar in konijnen dan die in muizen. De mens en de konijnen presenteren een gelijkaardige chronologische embryonale genoom activering, gastrulation en hemochorial placenta structuur. Bovendien is het gebruiken van konijnen het mogelijk om de nauwkeurige timing van bemesting en zwangerschapsstadia te kennen toe te schrijven aan hun veroorzaakte ovulatie25. Konijn levenscycli zijn kort, de voltooiing van de zwangerschap in 31 dagen en het bereiken van de puberteit op ongeveer 4-5 maanden; het dier is gemakkelijk te hanteren vanwege zijn volgzaam en niet-agressief gedrag, en het onderhoud is zeer zuinig in vergelijking met de kosten van grotere dieren. Bovendien is het van cruciaal belang te vermelden dat konijnen hebben een duplex baarmoeder met twee onafhankelijke baarmoederhals11,25. Dit plaatst het konijn in een preferentiële positie, aangezien de embryo's van de verschillende experimentele groepen in het zelfde dier, maar in een verschillende baarmoeder hoorn kunnen worden overgebracht. Dit stelt ons in staat om zowel experimentele effecten te vergelijken, het verminderen van de moeder factor van de resultaten.
Vandaag, niet-chirurgische ET methoden zijn niet in gebruik in konijn. Sommige studies uitgevoerd in de late jaren ' 90 met behulp van een transcervicale et techniek resulteerde in lage leverings percentages variërend van 5,5% tot 20,0%11,26 versus 50-65% door chirurgische methoden, waaronder de laparoscopie procedure beschreven door Besenfelder en brem18. De lage slaagpercentages van deze niet-chirurgische ET methoden in konijnen samenvallen met het ontbreken van de noodzakelijke embryo remodeling in de eileider, die wordt vermeden in transcervicale ET. Hier beschrijven we een effectieve minimaal invasieve laparoscopische ET procedure met behulp van konijnen als een modelorganisme. Deze techniek biedt een model voor verder voortplantings onderzoek bij grote dieren en mensen.
Omdat de konijnen een bijzonder smal tijdvenster voor embryo implantatie hebben, vereist ET in deze soort een hoge graad van synchronie tussen de ontwikkelingsfase van het embryo in ET en de fysiologische status van de ontvanger27. In sommige gevallen, na een reproductieve behandeling die embryo ontwikkeling (zoals in vitro cultuur) vertraagt of het endometrium ontvankelijkheid (zoals superovulatie behandelingen) verandert, is er geen synchronie tussen het embryo en de moeder baarmoeder. Deze situaties kunnen een negatieve invloed hebben op het resultaat. Om te reageren in deze context, beschrijven we een effectief konijn morula verglazing protocol dat ons in staat stelt te pauzeren, organiseren en hervatten van de experimenten. Dit proces is logistiek wenselijk voor reproductieve studies en geeft ons de capaciteit voor lange termijn opslag van embryo's, waardoor hun vervoer. De laparoscopische procedure en cryopreservatie strategieën zorgen voor een betere planning van studies met minder dieren. Onze methodologie biedt dus hygiënische en economische voordelen en voldoet aan het concept van de 3V (vervanging, reductie en verfijning) van dier onderzoek met als doel de menselijke behandeling van proefdieren te verbeteren. Aldus, met deze methodes, vormen de konijnen een ideaal modelorganisme voor in vivo reproductieve analyses.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>626</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buserelin Acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B3303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate soap</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCJ500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCA500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>99921</td>
			<td>CO2 N48.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15385194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W387509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5773</td>
			<td>Without calcium chloride.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric razor</td>
			<td>Oster Golden A5</td>
			<td>078005-140-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope camera</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>OP-714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope trocar with silicone leaflet valve</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>30114GK</td>
			<td>Lightweight trocar model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993046</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epicraneal needle 23G</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>514056353</td>
			<td>Smaller needles can be also used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural catheter</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural needle</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>102466-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>5273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>184</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laparoscopy equipment</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>26003 AA</td>
			<td>Hopkins&#174; Laparoscope, 0&#186;-mm straight-viewing laparoscope, 30-cm length, 5-mm working channel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>Fibrolux 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>P1505XXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical CO2 insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>Endoflator&#174;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993501</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 35-mm</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic dressing (Nobecutan)</td>
			<td>IBOR medica</td>
			<td>7140028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Straw 0.25 mL</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>02656DPYS500S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td>Any regular surgical grade steel small straight scissors will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube for insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>20400040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16F</td>
			<td>There are cheaper options such as Leica MZ8 or Nikon SMZ-10 or SMZ-2B, to name a few.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>087GL010075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>12261501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile mask</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>058B15924B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straw Plug</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11750425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 5-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11773313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urinary catheter</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>17722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath</td>
			<td>RAYPA</td>
			<td>BAE-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>525225</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbits</td>
			<td>Universitat Polit&#232;cnica de Val&#232;ncia</td>
			<td>Line A</td>
			<td>Other maternal lines, such as Line V or Line HP can be used.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model

Geassisteerde reproductieve technieken (kunst), zoals in vitro embryocultuur of embryo cryopreservatie, beïnvloeden natuurlijke ontwikkelingspatronen met perinatale en postnatale gevolgen. Om de onschadelijkheid van kunst toepassingen te waarborgen, zijn studies in dierlijke modellen noodzakelijk. Bovendien, als een laatste stap, embryo ontwikkeling studies vereisen evaluatie van hun vermogen om op volledige termijn gezonde nakomelingen te ontwikkelen. Hier, embryotransfer naar de baarmoeder is onmisbaar voor het uitvoeren van een ARTs-gerelateerde experiment.
Het konijn is gebruikt als een modelorganisme om de voortplanting van zoogdieren te bestuderen voor meer dan een eeuw. In aanvulling op haar verwantschap nabijheid van de menselijke soort en de geringe omvang en lage onderhoudskosten, het heeft belangrijke reproductieve kenmerken zoals geïnduceerde ovulatie, een chronologie van de vroege embryonale ontwikkeling vergelijkbaar met de mens en een korte dracht die ons toelaten om de gevolgen van de kunst toepassing gemakkelijk te bestuderen. Bovendien worden kunst (zoals intracytoplasmatische spermainjectie, embryocultuur, of cryopreservatie) toegepast met geschikte efficiency in deze soort.
Met behulp van de laparoscopische embryotransfer techniek en de cryopreservatie protocol gepresenteerd in dit artikel, beschrijven we 1) hoe embryo's overdracht door middel van een eenvoudige, minimaal invasieve techniek en 2) een effectief protocol voor de lange termijn opslag van konijn embryo's om tijd-flexibele logistieke capaciteiten te bieden en de mogelijkheid om het monster te vervoeren. De resultaten verkregen na de overdracht van konijn embryo's in verschillende ontwikkelingsstadia geven aan dat morula is de ideale fase voor konijn embryo herstel en overdracht. Zo is een oviductal embryotransfer vereist, rechtvaardigen de chirurgische procedure. Bovendien, konijn morulae zijn met succes verglaasd en Laparoscopisch overgedragen, waaruit de effectiviteit van de beschreven technieken.

Minimaal invasieve laparoscopische overdracht van verse of verglaasd embryo's plaatst het konijn onder de beste modeldieren voor reproductieve studies. Tabel 1 toont de resultaten van Fresh et in verschillende ontwikkelingsstadia (Figuur 4) van overgebrachte embryo's. De overlevingskans bij de geboorte (percentage van de embryo's die resulteren in een pup) bleek de werkzaamheid van de laparoscopische techniek beschreven in dit document. De ho...

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Minimaal invasieve embryo transfer en embryo verglazing bij de optimale embryo fase in konijnen model

Assisted reproductieve technieken (ARTs) worden voortdurend geëvalueerd om de resultaten te verbeteren en de daaraan verbonden Risico's te verminderen. Dit manuscript beschrijft een minimaal invasieve embryotransfer procedure met een efficiënt cryopreservatie protocol dat het gebruik van konijnen als een ideaal dierlijk model van menselijke voortplanting toelaat.

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Het belangrijkste doel van dit experiment is om een laparoscopische embryo overdracht procedure bij konijn te beschrijven als een model. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze werkt om embryo's over te brengen met behulp van een eenvoudige, minimaal invasieve techniek. Bovendien werkt het effectieve hier beschreven protocol voor embryo cryopreservatie ook tot de langdurige opslag van de embryo's van het konijn, waardoor tijdflexibele logistieke capaciteiten en de mogelijkheid om het monster te vervoeren.Zoals we weten, zijn ondersteunde reproductieve technologieën voortdurend geëvalueerd om de resultaten te verbeteren en de bijbehorende risico's te verminderen. Daarom kan konijn met behulp van beide technieken worden gebruikt als een ideaal diermodel van menselijke voortplanting om belangrijke vragen op dit gebied te beantwoorden, zoals de effecten van de in vitro embryomanipulatie op nakomelingen. Visuele demonstratie van deze zaken zijn van cruciaal belang als de embryo-overdracht stappen zijn moeilijk te leren, omdat het moet worden gedaan met grote precisie om het succes van de techniek te waarborgen.Voor embryonale vitrificatie, dompel de embryo's in evenwicht oplossing voor twee minuten, gevolgd door een een minuut incubatie in vitrification oplossing. Laad aan het einde van de incubatie de embryo's in een 125 microliter plastic mini-stro en koppel het gesloten uiteinde van het mini-stro met een geschikte een milliliter microdispenser. Aanzuigen basismedium tot een derde van de strolengte, gevolgd door een kleine luchtbel.Gebruik vervolgens een stereomicroscoop om de embryo's aan te trekken in 40 microliter van vitrificatieoplossing, gevolgd door een andere kleine luchtbel en genoeg basismedium om de eerste vloeibare fractie naar het katoen van het ministro te verplaatsen. Sluit vervolgens het geopende uiteinde van het mini-stro met een stroplug, dompel het mini-stro direct in vloeibare stikstof om vitrificatie te bereiken en bewaar het mini-stro in een vloeibare stikstofdeoorlog. Om de embryo's te ontdooien voor een overdracht, plaats de mini-stro horizontaal 10 centimeter van de vloeibare stikstofdamp voor 20 tot 30 seconden.Wanneer het kristallisatieproces begint in het mini-stro, dompel het mini-stro in het waterbad van 25 graden Celsius gedurende 10 tot 15 seconden onder. Verwijder onmiddellijk de mini-stro- en katoenen pluggen en gebruik een gekoppelde microdispenser om het mini-strogehalte te verdrijven in een plaat met een basismedium van 25 graden Celsius aangevuld met 0,33 molaire sacharoseoplossing, waarin embryo's gedurende vijf minuten moeten blijven. Breng de embryo's vervolgens nog eens vijf minuten over naar een plaat van vers basismedium.Zo vele dagen vóór als de leeftijd van de te overdragen embryo's, waarnemen de turgidity en de kleur van de vulva's van de beschikbare seksueel volwassen 4,5 maanden oude vrouwelijke konijnen, en induceren ovulatie in de ontvankelijke dieren met een enkele intramusculaire injectie van een microgram buserelin acetaat, ongeacht het lichaamsgewicht. Spoel op de dag van de overdracht de verse of ontdooide embryo's in 37 graden Celsius basismedium onder een stereomicroscoop en bevestig een op de juiste wijze geconfigureerde 17-meter epidurale katheter aan een spuit van één milliliter. Spoel een centimeter basismedium in de katheter aan, gevolgd door een kleine luchtbel.Dan aspirate vijf tot zeven embryo's en 10 microliter van basismedium, gevolgd door een andere kleine luchtbel, en een laatste centimeter van de basis medium. Zodra de embryo's zijn geladen, plaats de verdoofde ontvanger konijn in een kooi op een warm podium, en van toepassing zalf op de ogen van het dier. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op pedaalreflex scheert u de vacht uit de buik van de ventrale buik, reinigt u het chirurgische gebied met chloorhexidine gluconaatzeep en verwijdert u het resterende haar.Bedek het gebied met een steriele gordijn met een gat voor het chirurgische gebied, en steek een endoscopische trocar vijf centimeter in de buikholte, twee centimeter caudal aan het zyphoid proces, en gebruik een druk regulerende mechanische insufflator om de buikholte op te blazen. Steek de endoscoopcamera door de endoscopische trocar en steek de 17-meter epidurale naald in het inguinale gebied, twee tot drie centimeter van het infundibulum. Steek de geladen katheter door de epidurale naald in de buik en steek een tot twee centimeter van de epidurale katheter door het infundibulum in de ampulla.Druk de katheterzuiger voorzichtig in om de embryo's in het eivlies vrij te geven. Beide luchtbellen moeten uit de katheter komen. Verwijder de katheter net nadat de embryo's zijn vrijgegeven, en aspiraat en laat het resterende medium om de afwezigheid van de embryo's te bevestigen.Na bevestiging van een succesvolle overdracht van de embryo's, verwijder de epidurale naald en de endoscoopcamera en laat u de buikkoolstofdioxide vrij via de endoscopische trocar. Reinig de trocar-incisie met chlorhexidine-oplossing en sluit de wond met een gemicroniseerd aluminium en een plastic dressing. Behandel het dier vervolgens met de juiste antibiotica en pijnstillers en controleer het dier tot volledig herstel.Minimaal invasieve laparoscopische embryotransfer plaatst het konijn tot de beste diermodellen voor reproductieve studies, met een hoog percentage overgedragen verse embryo's resulterend in een pup. Met name worden hogere waarden bereikt wanneer de overdracht van verse embryo's wordt uitgevoerd met embryo's in het vroege of compacte morulaestadium. Vergelijkbare resultaten worden waargenomen na vroege en verdichte verglaasde konijnmorula-overdracht, met name met compacte morulae, wat de werkzaamheid en betrouwbaarheid van deze techniek voor het overbrengen van verse in-vitrified embryo's bij konijnen bevestigt.Na deze procedure kunnen andere methoden worden uitgevoerd, zoals voorwaardelijke ondersteunende reproductieve technologieën, om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals hoe de toevoeging van dichtheden later in het leven een pijnstillend effect kan hebben. Na recente ontwikkeling maakt deze techniek de weg vrij voor wetenschappers op het gebied van voortplanting om dit effect bij de mens te onderzoeken op basis van de nauwe fylogenetische afstand tussen konijn en mens. Zo kan deze techniek resultaten leveren die gemakkelijk kunnen worden overgedragen op de menselijke klinische geneeskunde, evenals bij andere zoogdiersoorten.Vergeet niet dat onze methode een aantal hygiënische en economische voordelen biedt die voldoen aan het concept van drie R's van dierenwelzijn, vervanging, vermindering en verfijning, door het doel te bereiken om de menselijke behandeling van proefdieren te verbeteren.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microkraal Implantatie in de zebravis embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Beeldvorming Subcellulaire Structuren in het Living zebravis embryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Observeren mitotische deling en Dynamiek in een live zebravis embryo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo micro-injectie en elektroporatie in de chordate<em&gt; Doorschijnende zakpijp</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

Identificatie van Erythromyeloid Progenitors En Hun Nakomelingen In De Muis Embryo Door Flow Cytometry

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Use of Immunolabeling to Analyze Stable, Dynamic, and Nascent Microtubules in the Zebrafish Embryo

Gebruik van Immunolabeling voor het analyseren van ontluikende, stabiele en dynamische microtubuli in de zebravis Embryo

Microtubules (MTs) are dynamic and fragile structures that are challenging to image in vivo, particularly in vertebrate embryos. Immunolabeling methods ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

AFM en Microrheology in de cel van de dooier Zebrafish de Embryo

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) and Brown Trout (Salmo Trutta Morpha fario)

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout Oncorhynchus Mykiss and Brown Trout Salmo Trutta Morpha fario

Doeltreffendheid van het strippen van de lucht in twee Salmonid Fish, regenboogforel (Oncorhynchus Mykiss) en bruine forel (Salmo Trutta Morpha fario)

Egg collection is one of the most crucial procedures during fish reproduction in salmonid hatcheries. Classic methods involve the use of hand massage on ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Volgende Endocardial weefsel mutaties via de cel Photoconversion in het Embryo van de zebravis

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Microinjection-gebaseerd systeem voor In Vivo implantatie van embryonale Cardiomyocytes in het aviaire Embryo

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...