Name: minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model
Uploaded: 2019-05-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

Bu çalışma Ekonomi Bakanlığı ve Ispanya 'nın rekabet gücü (AGL2017-85162-C2-1-R) ve Generalitat Valenciana araştırma programı (PrometeoII 2014/036) fonları tarafından destekleniyordu. N. Macowan Ingilizce dil hizmeti tarafından revize İngilizce metin sürümü

Bu çalışmada kullanılan tüm deneysel prosedürler, hayvan deneyleri için 2010/63/EU EEC Direktifi uyarınca yapılmıştır ve Universitat Politècnica de València hayvanlarıyla deneyler için Etik Komite tarafından incelenip onaylanmıştır. İspanya (araştırma kodu: 2015/VSC/PEA/00170). XGD, FMJ, MPVC ve JSV hayvanlar üzerinde deney için Valencian devlet idaresi tarafından verilen bir yetkilendirme belgesi tutar. XGD, deney sırasında hayvanların refahı ve bakımını denetlemek için yetkilidir.
...

Transfer edilen embriyolar9' dan ilk belgelenmiş canlı Doğum vakası beri, bu teknik ve tavşan türleri üreme çalışmalarında çok önemli hale gelmiştir. Ayrıca, manipülasyon, üretim, ağoprezervasyon vb. içeren embriyo araştırma çalışmaları, son bir adım olarak embriyo kapasitesinin değerlendirilmesi için sağlıklı tam vadeli yavru üretmek gerektirir. Bu nedenle embriyo transfer tekniği13,28. Yıllarca ...

İnsan infertilitesini atlayarak veya yüksek genetik değer ve hayvan genetik kaynaklarını koruyan Hayvancılık yaygınlaştırılması amaçlarıyla, teknik bir dizi topluca yardımcı üreme teknolojileri olarak adlandırılan, süperovülasyon gibi, içinde vitro fertilizasyon, embriyo kültürü veya ağoprezervasyon,1,2geliştirilmiştir. Şu anda, yumurtalıkları uyarmak ve çok sayıda antral ovaryalı folikülleri üretmek için hormonal tedaviler verilir1. Bu foliküllerden toplanan oositler olgunlaşabilir, döllenmiş ve in vitro olarak geliştirilmiştir ya kriokonservirovannogo ya da vekil annelere transfer edilinceye kadar3. Ancak, bu tedaviler sırasında, gamet ve zigotları bu koşullarda hayatta kalmak için embriyo adaptasyon gerektirebilir fizyolojik olmayan süreçler bir dizi maruz4,5. Bu adaptasyon erken embriyo plastisite nedeniyle mümkündür, hangi gen ifade ve gelişimsel programlama embriyo değişiklikleri sağlar6. Ancak, bu değişiklikler yetişkinliğe kadar embriyo gelişiminin sonraki aşamalarını etkileyebilir, ve şimdi yaygın olarak kabul edilir ki Yöntemler, zamanlama, ağkısızlık prosedürü veya kültür koşulları embriyo kaderi farklı sonuçlar göstermek7 , 8. bu nedenle, sanat spesifik indüklenen etkileri aydınlatmak, iyi karakterize hayvan modellerinin kullanımı kaçınılmazdır.
Meme embriyoları transferinden kaynaklanan ilk belgelenmiş canlı Doğum 1890 yılında gerçekleşti9. Bugün, bir vekil dişi embriyo transferi (ET) sonraki embriyo gelişimi aşamalarında Preimplantasyon sırasında sanat kaynaklı etkileri okuyan önemli bir adımdır10. ET teknikleri her hayvanın büyüklüğü ve anatomik yapısına bağlıdır. Büyük ölçekli hayvan modelleri durumunda, transservikal cerrahi dışı ET teknikleri ile ET gerçekleştirmek mümkün olmuştur, ancak daha küçük boyutlu türler serviks kateterizasyon daha karmaşık ve cerrahi teknikler sık kullanılan11. Ancak, cerrahi ET, implantasyon ve embriyo gelişimini zarar verebilecek kanama neden olabilir, kan uterus lümen istila edebilir gibi, embriyo ölümü10neden. Transservikal cerrahi dışı et teknikleri hala insanlarda, babunların, sığır, domuz ve fareler12,13,14,15,16,17, ancak cerrahi uygulanır Etler hala keçiler, koyun veya diğer hayvanlar gibi tür,10,18,19,20,21, tavşan gibi ek zorluklar mevcut kullanılmaktadır (iki bağımsız sertifikalar) veya fareler (küçük boyut). Yine de, cerrahi transfer yöntemleri giderek daha az invaziv yöntemler ile değiştirildi eğilimindedir. Embriyoları transfer etmek için endoskopi kullanıldı, örneğin, tavşan, domuz ve küçük ruminantlarda18,19,20. Bu minimal invaziv endoskopi yöntemleri embriyoları ampulla içine infundibulum üzerinden aktarmak için kullanılabilir, hangi tavşan önemlidir ve bazı türler yararlı etkileri göstermiştir20. Bu oviduct erken embriyo aşamalarında embriyo ve anne arasındaki doğru diyalog önemini dayanır. Yukarıda belirtildiği gibi, ovduct aracılığıyla embriyo göçü sırasında tavşanlar içinde yer alan embriyo remodeling,22,23implant edilebilir embriyolar elde etmek için esastır.
Büyük boyutlu hayvan modelleri, sığır gibi, biyokimyasal ve Preimplantasyon özellikleri insan türlerinin24benzer çünkü ilginç. Ancak, büyük hayvanlar ön denemeler kullanmak için çok pahalıdır, ve kemirgenler ideal bir model olarak kabul edilir (76% model organizmalar kemirgenler) laboratuar araştırması için25. Yine de, tavşan modeli üreme çalışmalarında kemirgenler üzerinde bazı avantajlar sağlar, insanlar tarafından sergilenen bazı üreme Biyolojik süreçler fareler bu daha tavşan benzer. İnsan ve tavşanlar benzer bir kronolojik embriyonik genom aktivasyonu, gastrülasyon ve hemochorial plasenta yapısını sunar. Buna ek olarak, tavşan kullanarak döllenme ve gebelik aşamalarında tam zamanlamasını bilmek mümkündür nedeniyle onların indüklenen yumurtlama25. Tavşan yaşam döngüleri kısa, 31 gün içinde gebelik tamamlama ve yaklaşık 4-5 ay içinde ergenliğe ulaşan; hayvan onun uysal ve agresif olmayan davranışları nedeniyle işlemek kolaydır, ve onun bakım büyük hayvanların pahasına kıyasla çok ekonomiktir. Ayrıca, tavşanların iki bağımsız serviks11,25ile Dubleks rahim var söz önemlidir. Bu, farklı deneysel grupların embriyoları aynı hayvana aktarılabilir, ancak farklı bir uterus boynuz içine, tercihli bir pozisyonda tavşan yerleştirir. Bu, hem deneysel etkileri karşılaştırmak için, sonuçları maternal faktörü azaltarak bize izin verir.
Günümüzde cerrahi olmayan ET yöntemleri tavşan içinde kullanımda değildir. 90 ' ların sonlarında bir transservikal et tekniği kullanılarak yürütülen bazı çalışmalar, cerrahi yöntemlerle% 5,5-20,0%11,26 VERSUS 50-65% arasında değişen düşük teslimat oranlarında sonuçlanan, bunların arasında laparoskopik prosedür Besenfelder ve Brem18. Tavşanların bu ameliyatsız ET yöntemlerinin düşük başarı oranları, transservikal ET 'te önlenmiş olan oviduct 'de gerekli embriyo remodeling eksikliği ile örtüşür. Burada, bir model organizma olarak tavşan kullanarak etkili bir minimal invaziv laparoskopik ET prosedürü tarif. Bu teknik, büyük hayvanların ve insanlarda daha fazla üreme araştırması için bir model sağlar.
Tavşanların embriyo implantasyonu için özellikle dar bir zaman penceresi olduğu için, bu türdeki ET, ET 'de embriyonun gelişimsel aşaması ile alıcı27' nin fizyolojik durumu arasında yüksek düzeyde senkron gerektirir. Bazı durumlarda, embriyo gelişimini yavaşlatan bir üreme tedavisinden sonra ( In vitro Culture gibi) veya endometrial reseptüsü (superovülasyon tedavileri gibi) değiştirir, embriyo ve maternal uterusun arasında senkron yoktur. Bu durumlar sonucu olumsuz etkileyebilir. Bu bağlamlarda yanıt vermek için, bizi duraklatmak, düzenlemek ve deneyler devam sağlayan etkili bir tavşan Morula vitrifikasyon Protokolü açıklanmaktadır. Bu süreç üreme çalışmaları için Lojistik olarak arzu edilir ve bize embriyoların uzun süreli depolanması için kapasite verir, onların taşıma izin. Laparoskopik prosedür ve ağoprezervasyon stratejileri daha az hayvan ile çalışmaların daha iyi planlamasına olanak sağlar. Böylece, metodolojimiz hijyen ve ekonomik avantajlar sunar ve deneysel hayvanların insan tedavisinin iyileştirilmesi amacı ile hayvan araştırmalarının 3Rs (yedek, azaltma ve arıtma) konseptine uygundur. Böylece, bu yöntemlerle, tavşan in vivo üreme amaçlı ideal bir model organizma oluşturmaktadır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>626</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buserelin Acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B3303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate soap</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCJ500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhexidine digluconate solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>0265DCCA500B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>99921</td>
			<td>CO2 N48.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15385194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W387509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5773</td>
			<td>Without calcium chloride.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric razor</td>
			<td>Oster Golden A5</td>
			<td>078005-140-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope camera</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>OP-714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endoscope trocar with silicone leaflet valve</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>30114GK</td>
			<td>Lightweight trocar model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993046</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epicraneal needle 23G</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>514056353</td>
			<td>Smaller needles can be also used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural catheter</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural needle</td>
			<td>Vygon corporate</td>
			<td>187.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>102466-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>5273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>184</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laparoscopy equipment</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>26003 AA</td>
			<td>Hopkins&#174; Laparoscope, 0&#186;-mm straight-viewing laparoscope, 30-cm length, 5-mm working channel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Optomic Spain S.A</td>
			<td>Fibrolux 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>P1505XXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical CO2 insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>Endoflator&#174;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>9993501</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 35-mm</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic dressing (Nobecutan)</td>
			<td>IBOR medica</td>
			<td>7140028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Straw 0.25 mL</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide solution</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>02656DPYS500S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td>Any regular surgical grade steel small straight scissors will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube for insufflator</td>
			<td>Karl Storz Endoscopia Ib&#233;rica S.A.</td>
			<td>20400040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16F</td>
			<td>There are cheaper options such as Leica MZ8 or Nikon SMZ-10 or SMZ-2B, to name a few.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>087GL010075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>12261501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile mask</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>058B15924B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straw Plug</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>6431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11750425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 5-mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>11773313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urinary catheter</td>
			<td>IMV - technologies</td>
			<td>17722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath</td>
			<td>RAYPA</td>
			<td>BAE-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Alvet Escart&#237;</td>
			<td>525225</td>
			<td>To be ordered by a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbits</td>
			<td>Universitat Polit&#232;cnica de Val&#232;ncia</td>
			<td>Line A</td>
			<td>Other maternal lines, such as Line V or Line HP can be used.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive embryo transfer and embryo vitrification at the optimal embryo stage in rabbit model

İn vitro embriyo kültürü veya embriyo ağaloprezervasyon gibi destekli üreme teknikleri (ARTs), perinatal ve postnatal sonuçları ile doğal gelişim desenlerini etkiler. Sanat uygulamalarının zararsız olmasını sağlamak için hayvan modellerinde çalışmalar gereklidir. Buna ek olarak, son bir adım olarak, embriyo geliştirme çalışmaları tam vadeli sağlıklı yavru geliştirmek için kapasitelerinin değerlendirilmesi gerekir. Burada, rahim için embriyo transferi herhangi bir sanat ile ilgili deney gerçekleştirmek için vazgeçilmez.
Tavşan bir yüzyıl boyunca meme üreme çalışması için bir model organizma olarak kullanılmıştır. İnsan türü ve küçük boyutu ve düşük bakım maliyeti onun fitogenetik yakınlığı ek olarak, bu indüklenen yumurtlama gibi önemli üreme özelliklerine sahip, erken embriyonik gelişim bir kronolojisi insanlara benzer ve kısa bir gebelik bize kolayca ART uygulamasının sonuçlarını incelemek için izin. Dahası, sanat (örneğin intrakitoplazmik sperm enjeksiyonu, embriyo kültürü veya ağoprezervasyon) bu türe uygun verimlilik ile uygulanır.
Bu yazıda sunulan laparoskopik embriyo transfer tekniğinin ve ağoprezervasyon protokolünün kullanılması, 1) embriyoları kolay, minimal invazif bir teknik ve 2) tavşan uzun süreli depolanması için etkili bir protokol aracılığıyla nasıl aktarmayı tarif ediyoruz. embriyo zaman esnek lojistik kapasiteleri ve örnek taşıma yeteneği sağlamak için. Tavşan embriyoları farklı gelişimsel aşamalarında aktardıktan sonra elde edilen sonuçlar, Morula 'nın tavşan embriyo kurtarma ve transfer için ideal bir aşama olduğunu göstermektedir. Böylece, cerrahi prosedürü haklı olarak, bir oviduktal embriyo transferi gereklidir. Ayrıca, tavşan morulları başarıyla vitrifiye ve laparoskopik olarak aktarılan, açıklanan teknikleri etkinliğini kanıtlamak.

Minimal invaziv laparoskopi taze veya vitrifiye embriyolar taşıma üreme çalışmaları için en iyi model hayvanlar arasında tavşan yerleştirir. Tablo 1 farklı gelişim AŞAMALARıNDA taze et sonuçlarını gösterir (Şekil 4) aktarılan embriyo. Doğumda hayatta kalma oranı (bir yavru ile sonuçlanan embriyo yüzdesi) Bu yazıda açıklanan laparoskopik tekniğin etkinliğini kanıtladı. Daha yüksek değerler, ET, Morula aşamas?...

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model at JoVE.com

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

Destekli üreme teknikleri (ARTs) sonuçları geliştirmek ve ilişkili riskleri azaltmak için sürekli değerlendirme içindedir. Bu yazıda, tavşanların insan üreme açısından ideal bir hayvan modeli olarak kullanımına izin veren, verimli bir ağoprezervasyon protokolüyle minimal invaziv bir embriyo transfer prosedürü açıklanmaktadır.

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Bu deneyin temel amacı bir model olarak tavşan bir laparoskopik embriyo transferi prosedürü tanımlamaktır. Bu tekniğin en büyük avantajı, bu kolay, minimal invaziv bir teknik kullanarak embriyo transferi için çalışıyor olmasıdır. Ayrıca, burada açıklanan etkili embriyo kriyoprezervasyon protokolü de uzun vadeli depolama tavşan embriyoları için çalışır, zaman esnek lojistik kapasiteleri ve örnek taşıma yeteneği sağlayan.Bildiğimiz gibi, yardımcı üreme teknolojileri sonuçları iyileştirmek ve ilişkili riskleri azaltmak için sürekli değerlendirme de bulunmaktadır. Bu nedenle, her iki teknik kullanarak, tavşan bu alanda anahtar soruları cevaplamak için insan üreme ideal bir hayvan modeli olarak kullanılabilir, yavrular üzerinde in vitro embriyo manipülasyon etkileri gibi. Embriyo transfer adımlarını öğrenmek zor olduğu için bu konuların görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü tekniğin başarısını sağlamak için büyük bir hassasiyetle yapılması gerekir.Embriyonik vitrifikasyon için, iki dakika boyunca denge çözeltisi embriyolar batırın, vitrifikasyon çözeltisi bir dakika kuluçka takip. Kuluçka sonunda, 125 mikrolitrelik plastik mini-saman içine embriyolar yükleyin ve uygun bir mililitre mikrodispenser ile mini-saman kapalı ucunu çift. Hasır uzunluğunun üçte birine kadar aspire tabanı orta, küçük bir hava kabarcığı takip.Daha sonra, embriyoları 40 mikrolitre vitrifikasyon çözeltisi içinde aspire etmek için bir stereomikroskop kullanın, ardından başka bir küçük hava kabarcığı ve ilk sıvı fraksiyonunu mini saman pamuğuna taşımak için yeterli baz ortamı. Daha sonra mini pipetin açılan ucunu bir saman fişi ile kapatın, mini pipeti doğrudan sıvı nitrojene daldırArak vitrifikasyonelde edin ve mini pipeti sıvı nitrojen dewar'da saklayın. Bir transfer için embriyoları eritmek için, 20 ila 30 saniye sıvı azot buharından 10 santimetre yatay olarak mini-saman yerleştirin.Kristalizasyon işlemi mini pipetin içinde başladığında, mini pipeti 25 derece lik su banyosuna 10 ila 15 saniye batırın. Hemen mini-saman ve pamuk fişleri çıkarın ve embriyolar beş dakika boyunca kalması gereken 0,33 molar sakaroz çözeltisi ile takviye 25 derece santigrat baz orta içeren bir plaka içine mini-saman içeriğini çıkarmak için birleştirilmiş mikrodispenser kullanın. Sonra embriyoları bir tabak daha taze baz aparatına aktarın.Transfer edilecek embriyoların yaşı kadar önce birçok gün olarak, mevcut cinsel olgun 4.5 aylık dişi tavşan vulvas ların bulanıklığını ve rengini gözlemlemek ve vücut ağırlığı ne olursa olsun buserelin asetat tek bir intramüsküler enjeksiyon ile alıcı hayvanlarda yumurtlama neden. Transfer günü, taze veya çözülmüş embriyoları stereomikroskop altında 37 derece santigrat baz ortamda durular ve uygun şekilde yapılandırılmış 17 kalibrelik epidural kateteri bir mililitreşşile rendele. Bir santimetrelik taban ortamını katetere aspire edin ve ardından küçük bir hava kabarcığı ekleyin.Sonra 5-7 embriyo ve 10 mikrolitre baz orta, başka bir küçük hava kabarcığı ve baz orta son bir santimetre takip aspire. Embriyolar yüklendikten sonra, anestezi alan tavşanı ısınma evresinde bir kafese yerleştirin ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Pedal refleksyanıt eksikliği doğruladıktan sonra, ventral karın kürk tıraş, klorheksidin glukonat sabun ile cerrahi alanı temizlemek, ve kalan saç kaldırmak.Cerrahi alan için bir delik ile steril bir perde ile alanı kaplayın ve karın boşluğuna bir endoskopik trokar beş santimetre, zyphoid sürecine iki santimetre kaudal yerleştirin ve periton boşluğu şişirmek için mekanik insufflator düzenleyen bir basınç kullanın. Endoskop kamerasını endoskopik trokardan takın ve 17-gauge epidural iğneyi infundibulumdan 2-3 santimetre uzaklıktaki inguinal bölgeye takın. Yüklü kateteri epidural iğneden karın içine yerleştirin ve ampulla infundibulum aracılığıyla epidural kateterin 1-2 santimetre yerleştirin.Yavaşça oviduct içine embriyolar serbest bırakmak için kateter piston depresif. Her iki hava kabarcıkları kateter çıkmak gerekir. Embriyolar serbest bırakıldıktan hemen sonra kateteri çıkarın ve embriyoların yokluğunu doğrulamak için kalan ortamı aspire edin ve bırakın.Embriyoların başarılı bir transferdoğruladıktan sonra, epidural iğne ve endoskop kamera çıkarın, ve endoskopik trokar aracılığıyla karın karbondioksit serbest. Trokar kesisini klorheksidin çözeltisi ile temizleyin ve yarayı mikroniste alüminyum ve plastik bir pansumanla kapatın. Sonra uygun antibiyotik ve analjezikler ile hayvan tedavi ve tam iyileşme kadar hayvan izlemek.Minimal invaziv laparoskopik embriyo transferi üreme çalışmaları için en iyi hayvan modelleri arasında tavşan yerleştirir, transfer taze embriyoların yüksek bir yüzdesi ile bir yavru sonuçlanan. Özellikle, taze embriyo transferi erken veya kompakt morula etabında embriyolarla yapıldığında daha yüksek değerler elde edilir. Benzer sonuçlar erken ve sıkıştırılmış vitrifiye tavşan morula transferi nden sonra gözlenir, özellikle kompakt morula ile, tavşan taze in-vitrified embriyoların transferi için bu tekniğin etkinliğini ve güvenilirliğini doğrulayan.Bu prosedürü takiben, koşullu Yardımcı Üreme Teknolojileri gibi diğer yöntemler yoğunlukları eklenmesi daha sonra hayatında bir analjezik etkiye neden olabilir gibi ek soruları cevaplamak için yapılabilir. Son gelişimden sonra, bu teknik üreme alanında bilim adamları için tavşan ve insanlar arasındaki yakın filogenetik mesafedayalı insanlarda bu etkiyi keşfetmek için önünü açıyor. Böylece, bu teknik insan klinik tıp kolayca aktarılabilir sonuçlar sağlayabilir, hem de diğer memeli türlerinde.Metodumuz, deneysel hayvanların insan tedavisini iyileştirmeyi amaçlayan üç R'lik hayvan refahı, Değiştirme, Azaltma ve Arıtma konseptine uygun hijyenik ve ekonomik avantajlar sunduğunu unutmayın.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Yaşayan Zebra balığı Embriyo Hücre alt yapıları görüntüleme

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Canlı Zebra balığı Embriyo Mitotik Bölümü ve Dinamikleri gözlemleme

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Kordalı embriyo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon<em&gt; Ciona intestinalis</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

Akım Sitometresi ile Fare Embriyosunda Eritromiyeloid Progenitörlerin Ve Döllerinin Belirlenmesi

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Use of Immunolabeling to Analyze Stable, Dynamic, and Nascent Microtubules in the Zebrafish Embryo

Zebra balığı embriyo, dinamik, kararlı ve doğmakta olan mikrotübüller analiz etmek için Immunolabeling kullanımı

Microtubules (MTs) are dynamic and fragile structures that are challenging to image in vivo, particularly in vertebrate embryos. Immunolabeling methods ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

AFM ve Zebra balığı embriyo sarısı hücre Microrheology

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) and Brown Trout (Salmo Trutta Morpha fario)

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout Oncorhynchus Mykiss and Brown Trout Salmo Trutta Morpha fario

Hava sıyırma iki Salmonid balık, etkinliğini gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus Mykiss) ve kahverengi alabalık (Salmo Trutta morfin fario)

Egg collection is one of the most crucial procedures during fish reproduction in salmonid hatcheries. Classic methods involve the use of hand massage on ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Zebra balığı embriyo hücre Photoconversion ile aşağıdaki Endocardial doku hareketleri

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Embriyonik Cardiomyocytes kuş embriyo implantasyonu Vivo için Mikroenjeksiyon tabanlı sistem

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...