Name: isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00
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Wir danken Dr. Wei Qi He (Soochow University, Suzhou, China) und Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi ' an, China) für die technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 und 81473420) und das Projekt finanziert die Priorität akademischen Programm Entwicklung von Jiangsu Hochschuleinrichtungen (Grant Nr. unterstützt. Ysxk-2016).

Tierische Manipulationen stimmten die institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) Modell Animal Research Center der Nanjing Universität.
1. Vorbereitung der Lösung
<ol><li>Bereiten Sie HEPES-Tyrode-Lösung (H-T) mit 137,0 mM NaCl, KCl 2,7 mM, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-Glukose und 10 mM HEPES, pH 7,3-7,4.</li>
	<li>Bereiten Sie HEPES-Tyrode-Lösung ohne Calcium (Ca2 +-freien H-T) mit 140,6 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM M...

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

Hypertonie ist eine weit verbreitete gesundheitspolitische Herausforderung aufgrund seiner schweren Komplikationen, einschließlich Herz-Kreislauf- und Nieren-Erkrankungen-16. Verständnis der Pathogenese der Hypertonie und mehr blutdrucksenkende Medikamenten zu erkunden ist eine dringende Aufgabe auf diesem Gebiet geworden. Blutdruck wird erstellt und gepflegt von peripheren Widerstand der Zirkulation. Nach dem Poiseuille Gesetz relativ kleinen Arterien erzeugen einen Großteil der Kreislauf Wide...

Das kleine Schiff Myograph System hier verwendet wurde zur Messung die isometrische Kontraktion der kleinen Widerstand Schiffe mit Innendurchmesser von 100 bis 400 µm. isolierte kleine Schiffe (etwa 2 mm lang) durch zwei 40 µm Durchmesser Drähte eingefügt wurden und waren dann nacheinander montiert auf den Mikrometer und Wandler-Side backen. Diese Myograph Technik wurde erstmals im Jahr 19721 vorgeschlagen und dann in erster Linie durch Mulvany und seine Kollegen2,3,4,5,6entwickelt. Es ist jetzt eine ausgereifte Technik mit Stalleinrichtungen, einfach Leistung und ein standard Normalisierung Verfahren7,8,9. Wir nutzten diese Methode mit einigen Modifikationen für Messungen in der Maus mesenterialen Arterie.
Vaskulären glatten Muskelzellen Linien die Wände fast alle Blutgefäße. Ihre grundlegende Funktion ist es, Kräfte durch Kontraktion in Reaktion auf verschiedene Reize erzeugen. Die normalen Kontraktilität von vaskulären glatten Muskelzellen ist unerlässlich für die Blutdruckregulation und Ernährung zu ergänzen10. Abnorme Regulation des Blutdrucks führt zu einer Vielzahl von Erkrankungen wie Bluthochdruck, Herzinsuffizienz und Ischämie. Mehrere Studien haben vorgeschlagen, dass abnorme Blutdruck immer dysfunktionalen vaskulären glatten Muskelzellen Kontraktilität7,11,12,13zugeordnet ist. Die Myograph-Methode erlaubt die Untersuchung von isometrischen Kontraktilität der Maus Schiffe durch verschiedene Reize wie vasokonstriktoren, Inhibitoren und Drogen induziert. Erfolgreiche Messungen der Kontraktion hilft uns zu verstehen, die Mechanismen der Blutdruck Wartung und die Pathogenese der vaskulären glatten Muskelzellen-assoziierten Erkrankungen und neue therapeutische Ansätze zu erkunden.
Viele chinesische Kräuter sind weit verbreitet für die klinische Behandlung von Gefäßerkrankungen benutzt worden; Ihre wirksamen Bestandteile sind jedoch in der Regel unbekannt. Somit, Isolierung und Identifizierung der wirksamen Komponenten ist sehr wichtig für die Entwicklung neuartiger Medikamente. Mehradrigen Myograph Technologie bietet eine einfache Methode für das screening von aktiver Komponenten in Kräutern. Wir haben mehrere Studien mit dem kleinen Schiff Myograph System um zu untersuchen, Maus mesenterialen Arterie Kontraktion berichtet und Naturstoffe mit Anti-Hypertonie Aktivität12,13,14gekennzeichnet. Hier beschreiben wir das ausführliche Protokoll für die Myograph-Methode und die entspannende Wirkung der Neoliensinine isoliert von Embryonen von Lotus Samen (Nelumbo Nucifera Gaertn.) 14.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Multi wire myograph system</td>
			<td>DMT</td>
			<td>610-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel wire</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geuder dissection scissor</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps</td>
			<td>DMT</td>
			<td>300413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab/8SP</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>LabChart 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100511-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

Myograph Leitertechnik dient zur Bewertung der Kontraktilität der vaskulären glatten Muskeln in Reaktion auf depolarization, GPCR-Agonisten/Inhibitoren und Drogen. Es ist in vielen Studien über die physiologischen Funktionen von vaskulären glatten Muskelzellen, die Pathogenese der vaskulären Erkrankungen wie Bluthochdruck und die Entwicklung der Glattmuskel Beruhigungsmittel Drogen verbreitet. Die Maus ist ein weit verbreitetes Modell Tier mit einem großen Pool von Krankheitsmodellen und gentechnisch veränderte Sorten. Wir haben diese Methode zur Messung der isometrischen Kontraktion der Maus mesenterialen Arterie im Detail eingeführt. Ein 1,4-mm-Segment der Maus mesenterialen Widerstand Arterie war isoliert und durch die Übergabe von zwei Drähten durch seine Lumen auf eine Myograph Kammer montiert. Nach Gleichgewichtherstellung und Normalisierung Schritten wurde das Schiff Segment durch eine High-K+ -Lösung zweimal vor der Kontraktion Assay potenzierte. Als ein Beispiel für die Anwendung dieser Methode in der Medikamentenentwicklung wir die entspannende Wirkung einer neuartigen natürlichen Substanz, Neoliensinine, isoliert aus ein chinesisches Kraut, Embryonen von Samen der Lotus (Nelumbo Nucifera Gaertn.) auf Maus mesenterialen gemessen. Arterien. Die Schiff-Segmente auf der Myograph Kammer montiert wurden mit einer High-K+ -Lösung stimuliert. Wenn die Kraft-Spannung eine stabile anhaltende Phase erreicht, wurden die Kammer kumulativen Dosen von Neoliensinine hinzugefügt. Wir fanden, dass Neoliensinine hatte eine dosisabhängige muskelrelaxierende Wirkung auf Kontraktion der glatten Muskulatur, hindeutet, dass es möglichen Aktivität gegen Bluthochdruck trägt. Darüber hinaus wie das Schiff-Segment kann mindestens 4 Stunden nach der Montage überleben und Kontraktilität induziert durch die High-K+ -Lösung für viele Male, wir empfehlen pflegen kann Myograph drahtsystem für die zeitraubende Drogen-Screening verwendet werden.

Wir die isometrische Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit einem mehradrigen Myograph System gemessen und bewertet die entspannende Wirkung der Neoliensinine gereinigt von Embryonen von Lotus Samen (Nelumbo Nucifera Gaertn.) 14. Maus mesenterialen Widerstand Arterie wurde isoliert, gereinigt von Bindegewebe und 1,4 mm Segmente geschnitten. Die Arterie-Segment wurde von zwei Drähten in Ca2 +eingefügt-H-T-Lösung in einer Petrischal...

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Mouse Model of Middle Zerebralarterie

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Forschung

Medizin

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Die Anwendung des dauerhaften mittleren Hirnarterie Ligation in der Maus

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Epidurale Intrakranielle Druckmessung in Ratten mit einem LWL-Druckaufnehmer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Messung der Maus Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Beurteilung Myogenic Antwort und Vasoaktivität In Resistance Mesenterialarterien Mit Druck Myographie

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

Die Messung der Druck-Volumen-Kurve in der Mäuselunge

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Mausmodell der Femoralarterie Draht Verletzung mit Implantation einer Perivaskuläre Drug Delivery-Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Induktion von beschleunigter Atherosklerose bei Mäusen: Das "Wire-Injury"-Modell

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...