Name: isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00
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Agradecemos He de Qi de Wei de Dr. (Universidade de Soochow, Suzhou, China) e Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi ' an, China) pela assistência técnica. Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (Grant, 31272311, 81373295 e 81473420) e o projeto financiado pela prioridade acadêmica programa desenvolvimento de Jiangsu instituições de ensino superior (Grant no. ysxk-2016).

Manipulações de animais foram aprovadas pelo cuidado institucional do Animal e Comissão de utilização (IACUC) da Universidade modelo Animal Research Center de Nanjing.
1. preparação da solução
<ol><li>Preparar a solução de Tyrode-HEPES (H-T) usando 137,0 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glicose e 10 mM HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
	<li>Preparar a solução de Tyrode HEPES sem cálcio (Ca2 +-livre H-T) usando 140,...

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li><li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

Hipertensão é um desafio da saúde pública generalizada devido a suas complicações graves, incluindo cardiovascular e renal doenças16. Compreender a patogênese da hipertensão e explorar mais anti-hipertensivos drogas tornou-se uma tarefa urgente neste campo. Pressão arterial é gerado e mantido pela resistência periférica da circulação. De acordo com a lei de Poiseuille, as relativamente pequenas artérias geram uma grande proporção de resistência circulatória e servem como o prod...

O sistema de myograph de pequeno vaso usado aqui foi para medir a contração isométrica dos vasos de resistência pequena com diâmetro interno que variam de 100 a 400 µm. isolados pequenos vasos (cerca de 2 mm de comprimento) foram inseridos por dois fios de diâmetro de 40 µm e foram então montado sobre as garras do micrômetro-lado e lado do transdutor sequencialmente. Esta técnica de myograph foi sugerida primeiramente em 19721 e então desenvolvida principalmente por Mulvany e seus colegas2,3,4,5,6. Agora é uma técnica madura com equipamento estável, desempenho fácil e um padrão de normalização procedimento7,8,9. Utilizamos este método com algumas modificações para medições na artéria mesentérica de rato.
Músculo liso vascular as linhas das paredes de quase todos os vasos sanguíneos. Sua função fundamental é gerar forças através da contração em resposta a vários estímulos. A contratilidade normal do músculo liso vascular é essencial para a regulação da pressão de sangue e nutrição complementar10. Regulamento anormal da pressão arterial resulta em uma variedade de doenças, incluindo hipertensão, insuficiência cardíaca e isquemia. Vários estudos têm sugerido que a pressão anormal de sangue sempre é associada com disfuncional músculo liso vascular contratilidade7,11,12,13. O método myograph permite investigação da contratilidade isométrica dos navios de rato induzida por vários estímulos, incluindo vasoconstritores, inibidores e drogas. Medições bem sucedidas de contração nos ajudará a compreender os mecanismos de manutenção da pressão arterial e a patogênese de doenças associadas a músculo liso vasculares e explorar novas abordagens terapêuticas.
Muitas ervas chinesas têm sido amplamente utilizadas para tratamento clínico de doenças vasculares; no entanto, seus ingredientes eficazes geralmente permanecem desconhecidos. Assim, o isolamento e identificação dos componentes eficazes é muito importante para o desenvolvimento de novos medicamentos. Tecnologia multi fio myograph oferece uma abordagem simples para a seleção de componentes ativos em ervas. Nós temos relatado vários estudos utilizando o sistema de myograph de pequeno vaso para investigar a contração de artéria mesentérica de rato e identificados compostos naturais com atividade anti-hipertensão12,13,14. Aqui, descrevemos o detalhada do protocolo para o método de myograph e avaliar o efeito relaxante do neoliensinine isolada de embriões de sementes de Lótus (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Multi wire myograph system</td>
			<td>DMT</td>
			<td>610-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel wire</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geuder dissection scissor</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps</td>
			<td>DMT</td>
			<td>300413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab/8SP</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>LabChart 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100511-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

A técnica de myograph do fio é usada para avaliar a contratilidade da musculatura de Lisa vascular em resposta à despolarização, GPCR agonistas/inibidores e drogas. É amplamente utilizado em muitos estudos sobre as funções fisiológicas do músculo liso vascular, a patogênese de doenças vasculares, como hipertensão e desenvolvimento de fármacos relaxante músculo liso. O rato é um animal modelo amplamente utilizado com uma grande piscina de doença modelos e variedades geneticamente modificadas. Nós introduzimos esse método para medir a contração isométrica de artéria mesentérica de rato em detalhe. Um segmento de 1,4 mm da artéria mesentérica resistência de rato foi isolado e montado em uma câmara de myograph, passando dois fios de aço por meio de seu lúmen. Após etapas de equilíbrio e normalização, o segmento de navio foi potencializado por uma solução de alta-K+ duas vezes antes do ensaio de contração. Como um exemplo da aplicação desse método no desenvolvimento de drogas, Nós medimos o efeito relaxante de uma substância natural romance, neoliensinine, isolado de uma erva chinesa, embriões da semente de Lótus (Nelumbo nucifera Gaertn.) no mouse mesentérico artérias. Os segmentos de embarcação montados na câmara de myograph foram estimulados com uma solução de alta-K+ . Quando a força de tensão atingiu uma fase estável e sustentada, doses cumulativas de neoliensinine foram adicionadas para a câmara. Encontramos que essa neoliensinine teve um efeito relaxante dose-dependente na contração do músculo liso, sugerindo assim, que tem atividade potencial contra a hipertensão. Além disso, como o segmento de navio pode sobreviver pelo menos 4 horas após a montagem e manter a contratilidade induzida pela solução high-K+ por muitas vezes, sugerimos que o sistema de myograph do fio pode ser utilizado para o moroso processo de despistagem de drogas.

Podemos medir a contratilidade isométrica de artéria mesentérica de rato usando um sistema multi fio myograph e avaliou o efeito relaxante da neoliensinine purificado a partir de embriões de sementes de Lótus (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14. a artéria mesentérica resistência do rato foi isolada, limpo dos tecidos conjuntivos e cortada em segmentos de 1,4 mm. O segmento de artéria foi inserido por dois fios de aço em Ca2 +-livre solução...

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

A técnica de myograph do fio é usada para investigar as funções do músculo liso vascular e tela novas drogas. Nós relatamos um protocolo detalhado para medir a contratilidade isométrica da artéria mesentérica de rato e para a seleção de novos relaxantes do músculo liso vascular.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Medicina

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

A aplicação de ligadura da artéria Cerebral Média Permanente no mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Medida da Pressão Intracraniana peridural em ratos, utilizando um transdutor de pressão de fibra óptica

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

Na medição in vivo da camada superficial do rato pulmonar endotelial

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Avaliando Miogênica Resposta e vasoactividade em artérias mesentéricas de resistência Usando Miografia Pressão

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

Medição da curva pressão-volume no mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Modelo murino de artéria femoral Injury fio com a implantação de uma droga patch Entrega perivascular

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Indução de Aterosclerose Acelerada em Camundongos: O Modelo de "Lesão por Fio"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...