Name: evaluation of zika virus-specific t-cell responses in immunoprivileged organs of infected ifnar1-/- mice
Uploaded: 2018-10-17T13:00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice at JoVE.com

Авторы благодарят Гарри Вонг за английская редакция. Эта работа была поддержана национальной ключ научных исследований и развития программа Китая (Грант 2017YFC1200202), майор специальных проектов для инфекционных заболевания исследования из Китая (Грант 2016ZX10004222-003). F. Джордж Гао является ведущих главным следователем национальной естественных наук фонд из Китая инновационных исследований группы (Грант 81621091).

<ol>
	<li>Dick, G. W., Kitchen, S. F., Haddow, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus.+I.+Isolations+and+serological+specificity.">Zika virus. I. Isolations and serological specificity.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 46 (5), 509-520 (1952).</li><li>Hazin, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computed+Tomographic+Findings+in+Microcephaly+Associated+with+Zika+Virus.">Computed Tomographic Findings in Microcephaly Associated with Zika Virus.</a> The New England Journal of Medicine. 374 (22), 2193-2195 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+diversified+Zika+viruses+imported+to+China,+2016.">Highly diversified Zika viruses imported to China, 2016.</a> Protein &amp; Cell. 7 (6), 461-464 (2016).</li><li>Cauchemez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+Zika+virus+and+microcephaly+in+French+Polynesia,+2013-15:+a+retrospective+study.">Association between Zika virus and microcephaly in French Polynesia, 2013-15: a retrospective study.</a> The Lancet. 387 (10033), 2125-2132 (2016).</li><li>Turtle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T+cell+responses+to+Japanese+encephalitis+virus+in+health+and+disease.">Human T cell responses to Japanese encephalitis virus in health and disease.</a> The Journal of Experimental Medicine. 213 (7), 1331-1352 (2016).</li><li>Dudley, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rhesus+macaque+model+of+Asian-lineage+Zika+virus+infection.">A rhesus macaque model of Asian-lineage Zika virus infection.</a> Nature Communications. 7, 12204 (2016).</li><li>Osuna, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+viral+dynamics+and+shedding+in+rhesus+and+cynomolgus+macaques.">Zika viral dynamics and shedding in rhesus and cynomolgus macaques.</a> Nature Medicine. 22 (12), 1448-1455 (2016).</li><li>Stettler, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cross-reactivity,+and+function+of+antibodies+elicited+by+Zika+virus+infection.">cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection.</a> Science. 353 (6301), 823-826 (2016).</li><li>Zhao, M., Zhang, H., Liu, K., Gao, G. F., Liu, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell+immunity+against+the+emerging+and+re-emerging+viruses.">Human T-cell immunity against the emerging and re-emerging viruses.</a> Science China Life Sciences. 60 (12), 1307-1316 (2017).</li><li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+Cell+Immune+Response+in+Immunocompetent+Mice+during+Zika+Virus+Infection.">CD8+ T Cell Immune Response in Immunocompetent Mice during Zika Virus Infection.</a> Journal of Virology. 91 (22), 00900-00917 (2017).</li><li>Elong Ngono, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+and+Role+of+the+CD8++T+Cell+Response+During+Primary+Zika+Virus+Infection+in+Mice.">Mapping and Role of the CD8+ T Cell Response During Primary Zika Virus Infection in Mice.</a> Cell Host &amp; Microbe. 21 (1), 35-46 (2017).</li><li>Marques, E. T. A., Burke, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tradition+and+innovation+in+development+of+a+Zika+vaccine.">Tradition and innovation in development of a Zika vaccine.</a> The Lancet. 391 (10120), 516-517 (2017).</li><li>Xu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+Chimpanzee+Adenovirus+Vaccine+AdC7-M/E+Protects+against+Zika+Virus+Infection+and+Testis+Damage.">Recombinant Chimpanzee Adenovirus Vaccine AdC7-M/E Protects against Zika Virus Infection and Testis Damage.</a> Journal of Virology. , 01722-01817 (2018).</li><li>Jama, B. P., Morris, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+alloantigen-specific+T+cells+from+peripheral+blood.">Generation of human alloantigen-specific T cells from peripheral blood.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52257 (2014).</li><li>Legoux, F. P., Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide:MHC+tetramer-based+enrichment+of+epitope-specific+T+cells.">Peptide:MHC tetramer-based enrichment of epitope-specific T cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (68), e4420 (2012).</li><li>Govindarajan, S., Elewaut, D., Drennan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Optimized+Method+for+Isolating+and+Expanding+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+from+Mouse+Spleen.">An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), e53256 (2015).</li><li>Posel, C., Moller, K., Boltze, J., Wagner, D. C., Weise, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Flow+Cytometric+Analysis+of+Immune+Cells+from+the+Ischemic+Mouse+Brain.">Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53658 (2016).</li><li>Altman, J. o. h. n. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Analysis+of+Antigen-Specific+T+Lymphocytes.">Phenotypic Analysis of Antigen-Specific T Lymphocytes.</a> Science. 274, 94-96 (1996).</li><li>Li, H., Zhou, M., Han, J., Zhu, X., Dong, T., Gao, G. F., Tien, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+murine+CTL+by+a+hepatitis+B+virus-specific+peptide+and+evaluation+of+the+adjuvant+effect+of+heat+shock+protein+glycoprotein+96+and+its+terminal+fragments.">Generation of murine CTL by a hepatitis B virus-specific peptide and evaluation of the adjuvant effect of heat shock protein glycoprotein 96 and its terminal fragments.</a> J Immunol. 174 (1), 195-204 (2005).</li><li>Valkenburg, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preemptive+priming+readily+overcomes+structure-based+mechanisms+of+virus+escape.">Preemptive priming readily overcomes structure-based mechanisms of virus escape.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (14), 5570-5575 (2013).</li><li>Shang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor-initiated+testicular+innate+immune+responses+in+mouse+Leydig+cells.">Toll-like receptor-initiated testicular innate immune responses in mouse Leydig cells.</a> Endocrinology. 152 (7), 2827-2836 (2011).</li><li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primer+for+immunohistochemistry+on+cryosectioned+rat+brain+tissue:+example+staining+for+microglia+and+neurons.">Primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52293 (2015).</li><li>Zhou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+and+identification+of+severe+acute+respiratory+syndrome-associated+coronavirus-specific+CTL+epitopes.">Screening and identification of severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus-specific CTL epitopes.</a> The Journal of Immunology. 177 (4), 2138-2145 (2006).</li><li>Barzon, L., Lavezzo, E., Palu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+infection+in+semen:+effect+on+human+reproduction.">Zika virus infection in semen: effect on human reproduction.</a> The Lancet Infectious Diseases. 17 (11), 1107-1109 (2017).</li><li>Ma, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Causes+Testis+Damage+and+Leads+to+Male+Infertility+in+Mice.">Zika Virus Causes Testis Damage and Leads to Male Infertility in Mice.</a> Cell. 167 (6), 1511-1524 (2016).</li><li>Li, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+2016+Clinical+Isolate+of+Zika+Virus+in+Non-human+Primates.">Characterization of a 2016 Clinical Isolate of Zika Virus in Non-human Primates.</a> EBioMedicine. 12, 170-177 (2016).</li></ol>

Авторы не имеют ничего объявить.

Иммуногенность epitope Т-клеток играет значительную роль в клеточный иммунитет против патогенов23. Таким образом обнаружение ZIKV-специфических Т-клеток в immunoprivileged органах является методология критической понять Т-клеточные ответы против естественной ZIKV инфекции. Тем временем Т-клеточного ответа обнаружения является отличным инструментом для изучения эффективности вирусных вакцин. Здесь, мы покажем всеобъемлющий протокол визуализировать эксперименты, которые включают изоляцию лимфоцитов из селезенки, мозг и яичек ZIKV-инфицированных мышей, подготовка Тетрамер294-302 epitope E immunodominant и признание ZIKV-конкретных CD8 клетки+ T в immunoprivileged органах ZIKV-инфицированных мышей.
Предыдущие исследования показали, что живой ZIKV или его РНК могут быть обнаружены в сперме пациентов мужского пола, который указывает, что ZIKV может обойти барьер крови яички и повторить себя в репродуктивной системе24. Ранее мы также показали, что ZIKV может вызвать повреждение яичек и привести к мужского бесплодия в25мышей. ZIKV инфекция может привести к виремии в макаках, и вирусной РНК могут быть обнаружены в центральной нервной системе (ЦНС), а также в висцеральных органов. Иммуногистохимия показали, что ZIKV-специфические антигены были представлены в ЦНС и несколько периферийных органов26. Кроме того, в мышиных моделях, ZIKV инфекция может вызвать надежные противовирусное CD8+ Т-клеточный ответ в селезенке и СНК26.
По сравнению с предыдущей работы, это исследование устанавливает систематические методы для обнаружения ZIKV-конкретных CD8+ Т-клеточных реакций в мозге и яичек, которые immunoprivileged сайтов. Важно оценить функциональность вирус специфических Т-клеток в immunoprivileged органах ZIKV-инфицированных мышей. Использование тетрамера для обнаружения ZIKV-конкретных CD8+ Т-клеток ответов в immunoprivileged органах значительно укрепит наше понимание ZIKV инфекций и их принимающих иммунных реакций. Используя E Тетрамер294-302 , вирус специфических Т-клеток в головном мозге и яички могут быть изолированы проточной цитометрии, расследовать клеточных механизмов защиты и иммунопатогенезе во время ZIKV инфекции. Между тем, это полезно для исследователей на изучение функций CD8 клетки+ T для управления ZIKV, или для повышения иммунопатогенезе в этих органах во время ZIKV инфекции.
Для анализа мышиных CD8 антиген специфические+ Т-клеток ответы в immunoprivileged органах, мы подготовили H-2Db-E294-302 Тетрамер и обнаружен CD8 клетки+ T подачей cytometry. Тетрамера являются мощным инструментом для выявления антигена специфичные Т-клетки. Здесь были созданы три типа флюрохром конъюгированных стрептавидина (APC, PE и BV421). Хотя Есть никаких статистически значимых отличий в APC-, BV421-и PE-меченых тетрамера для обнаружения антиген специфические Т-клеток, PE-меченых реализует-я тетрамера принесли наилучшие результаты. Следовательно PE-помечены Тетрамер был использован на протяжении всего этого исследования. Интересно, что основываясь на PE-меченых H-2Db-E Тетрамер294-302 , мы обнаружили высокое соотношение антиген специфические Т-клеток в головном мозге и яичек, которые показывают способность миграции вирус специфических Т-клеток из крови immunoprivileged органов.
Однако существуют некоторые ограничения к протоколу. H-2Db-E294-302 Тетрамер не является полезным для обнаружения человека Т-клеток, потому что Тетрамер обнаружения зависит от ограничений MHC. Показ immunodominant HLA-ограничено пептиды по-прежнему необходима. Кроме того ретро орбитальной инфекции эффективна для ZIKV инфекции, но может быть не удобно операции для некоторых следователей. Таким образом другие маршруты инфекции, включая брюшной полости, подкожно или внутривенно, также рекомендуется.
В протоколе, описанные здесь важнейшим шагом является изоляция моноциты из мозга и яички. Важно приобрести высококачественные лимфоцитов; Таким образом важно обратить внимание, например, центробежный скорость, прочность шлифовальных ткани и рассечение тканей мозга и яички. Кроме того для подготовки Тетрамер, Ингибиторы протеаз (PMSF, pepstatin, leupeptin) полезны при защите белок от ухудшается. Поэтому имеет смысл добавить ингибитор протеазы в refolding буфер и обмениваться буфера во время процесса подготовки Тетрамер.
В заключение мы представляем методы обнаруживать антиген специфические Т-клеток ответов в органах immunoprivileged модели Ifnar1- / - мышь для ZIKV инфекции. Эта платформа может широко применяется для расследования иммунные механизмы новых и вновь возникающих вирусов, которые могут обойти барьеры между кровью и immunoprivileged органов. Кроме того это исследование может проложить путь для будущего развития вакцин и immunotherapies.

ZIKV является flavivirus комарами, который был впервые выделен в 1947 году в Уганде от лихорадочного резус макака. Недавно ZIKV стал общественного здравоохранения чрезвычайной ситуации, из-за его быстрое распространение в Америке и его неожиданные связи с микроцефалия и Гийена-Барре синдром1,2,3. Эпидемиологических данных ZIKV было подозрение, чтобы быть причиной синдрома Гийена-Барре в около 1 на 4000 инфицированных взрослых4. Кроме того была продемонстрирована связь между ZIKV и яичках инфекции/повреждения в модель мыши, предполагая, что ZIKV инфекции, при определенных обстоятельствах, может обойти барьер крови яичка и в конечном итоге привести к мужского бесплодия5 . Эти выводы подчеркивают важность полностью понимания индукции защитных или патологические иммунные реакции при ZIKV инфекции.
Многое еще предстоит узнать о сотовых иммунной реакции на ZIKV. CD4+ и CD8+ Т-клеточных реакций к капсидному, конверт и неструктурных протеин 1 (NS1) были обнаружены в ZIKV-инфицированных обезьян и людей6,,7,8. В мышей, несколько исследований показали что CD8+ T клетки играют защитную роль в контроле ZIKV репликации9,10,11. Важно отметить, что Хурадо et al. показал, что ZIKV инфекции приводит к распаду blood - brain барьер и периваскулярной инфильтрации CD8+ клеток-эффекторов T в семенниках мышей- / - Ifnar1. Кроме того, они показали, что CD8+ T клетки провоцируют связанные ZIKV паралич и появляются играть определенную роль в неонатальной мозга иммунопатологии. В предыдущем исследовании, мы подготовили Тетрамер294-302 ZIKV-E и показал, что ZIKV-конкретных CD8+ T клетки существуют в мозги и шнуры спинного мозга мышей- / - ZIKV-инфицированных Ifnar1, которые могут иметь важные последствия для разработки и разработка вакцин ZIKV10.
В ответ на настоятельную необходимость вакцинации для предотвращения инфекции ZIKV несколько вакцин в доклинических стадиях развития, включая вакцины, рекомбинантных вакцин на основе векторной и очищенный протеин Субблок вакцин РНК. В фазе 1 клинические испытания12вакцины ДНК плазмиды. Оценка безопасности и эффективности вакцин ZIKV, таким образом, важное значение. Одним из преимуществ вакцин является их способность добиться конкретных ответов в Т-клеток, которые могут быть важны для защиты от ZIKV. С помощью связанных с epitope тетрамера ZIKV-производные Т-клеток, иммунореактивности Т-клеток, вызванные аденовируса векторной ZIKV вакцины могут быть обнаружены в иммунизированной мыши, и M и E гликопротеинов были показаны побудить надежные антиген специфические CD8+ Т-клеток иммунореактивности13.
Во время вирусной инфекции признание пептидные антигены, представленных сложных молекул гистосовместимости (MHC) Т-клеточных рецепторов (TCR) является важным механизмом для защиты принимающих14T-cell-mediated. На основе этой теории, технологии Тетрамер является уникальным инструментом для выяснения роли, которые антиген специфические клетки T играть в регулировании иммунной реакции15. Этот протокол описывает создание модели Ifnar1- / - мышь для ZIKV инфекций и обнаружение реактивных Т-клеток в селезенку, мозг и семенниках мышей с использованием технологии Тетрамер. Кроме того мы использовали Тетрамер294-302 ZIKV-E для выявления и оценки иммунореактивности Т-клеток, индуцированных ZIKV вакцина (AdC7-M/E) в иммунизированной мыши. Это исследование обеспечивает руководство для изучения ответов Т-клеток в immunoprivileged органах и предоставляет ссылку для потенциальных приложений в плаценты или мозг плода.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1007px;" width="1006">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Z6</td>
			<td style="width:131px;">our lab</td>
			<td style="width:185px;"></td>
			<td style="width:475px;">Ma W, Li S, Ma S, et al. Zika virus causes testis damage and leads to male infertility in mice. Cell, 2016, 167: 1511-1524 e1510</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CD3</td>
			<td style="width:131px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:185px;">sc-1127; RRID: AB_631128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Fluorescein-Conjuated Affinipure Goat anti-human IgG(H+L)</td>
			<td style="width:131px;">ZSGB-BIO</td>
			<td style="width:185px;">ZF-0308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rabbit Anti-Goat IgG, FITC Conjugated</td>
			<td style="width:131px;">CWBIO</td>
			<td style="width:185px;">CW0115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FITC anti-mouse CD3</td>
			<td style="width:131px;">Biolegend</td>
			<td style="width:185px;">17A2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">APC anti-mouse CD3</td>
			<td style="width:131px;">Biolegend</td>
			<td style="width:185px;">100236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PerCP anti-mouse CD8a</td>
			<td style="width:131px;">Biolegend</td>
			<td style="width:185px;">100732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td style="width:185px;">P8370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PMSF</td>
			<td style="width:131px;">Ameresco</td>
			<td style="width:185px;">0754-5G</td>
			<td>Toxic and corrosive reagent. 
			Handle with care</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Streptadivin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:185px;">S4762-FZ</td>
			<td>Gives a clear solution at 10mg/ml in PBS and&#160; stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pepstatin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:185px;">P4265-5MG</td>
			<td>5 mg in 2.5 ml DMSO, aliquots stored at -20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Leupeptin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:185px;">L8511</td>
			<td>5 mg in 2.5 ml dH 2 O, aliquots stored at - 20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Peptides</td>
			<td style="width:131px;">Scilight-peptide</td>
			<td style="width:185px;"></td>
			<td>Must be resuspended in DMSO and stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:131px;">Hyclone</td>
			<td style="width:185px;">SH30809.01</td>
			<td>Must be stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:131px;">MP</td>
			<td style="width:185px;">219605590</td>
			<td>Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">APC-Streptadivin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:185px;">554067</td>
			<td>Must be stored and maintained at 
			4&#176;C. Do not freeze.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FITC-Streptadivin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:185px;">554060</td>
			<td>Must be stored and maintained at 
			4&#176;C. Do not freeze.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PE-Streptadivin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:185px;">554061</td>
			<td>Must be stored and maintained at 
			4&#176;C. Do not freeze.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BV421-Streptadivin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:185px;">563259</td>
			<td>Must be stored and maintained at 
			4&#176;C. Do not freeze.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PageRuler Unstained Protein Ladder</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:185px;">26614</td>
			<td>Must be stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cell Strainers</td>
			<td style="width:131px;">BF</td>
			<td style="width:185px;">BF10-5040</td>
			<td>Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amicon Ultra 100kDa</td>
			<td style="width:131px;">Millipore</td>
			<td style="width:185px;">UFC510024</td>
			<td>Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ultracentrifuge</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:185px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FACS Cantol</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:185px;"></td>
			<td>Flow cytometer must contain lasers and filters that are compatible with the staining panel used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Superdex 200 Increase 10/300 GL&#160;</td>
			<td style="width:131px;">GE healthcare</td>
			<td style="width:185px;">28990944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">AKTA PURE</td>
			<td style="width:131px;">GE healthcare</td>
			<td style="width:185px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">red blood cell lysis buffer</td>
			<td style="width:131px;">Solarbio</td>
			<td style="width:185px;">R1010</td>
			<td>Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of zika virus-specific t-cell responses in immunoprivileged organs of infected ifnar1-/- mice

Зика вирус (ZIKV) может вызвать воспаление в immunoprivileged органов (например, мозг и яичка), ведущих к синдром Гийена-Барре и повреждение яичек. Во время инфекции с ZIKV иммунные клетки было показано, чтобы проникнуть в ткани. Однако клеточных механизмов, определяющих защиту и/или иммунопатогенезе этих иммунных клеток при ZIKV инфекции по-прежнему в значительной степени неизвестными. Здесь мы описываем методы для оценки функции вирус специфических Т-клеток в этих органах immunoprivileged ZIKV-инфицированных мышей. Эти методы включают) ZIKV инфекции и прививки вакцины в Ifnar1- / - мышей; b) гистопатология, иммунофлюоресценции и иммуногистохимии анализов для выявления вирусной инфекции и воспаления в мозг, яички и селезенки; c подготовка Тетрамер ZIKV-производные Т-клеточных эпитопов; d обнаружение ZIKV-специфических Т-клеток в моноцитов, изолированный от мозг, яички и селезенки. С помощью этих подходов, это можно обнаружить антиген специфические Т-клеток, которые проникли в immunoprivileged органы и оценить функции этих клеток T во время инфекции: потенциал иммунной защиты через вирус Специальные акции и иммунопатогенезе или усугубить воспаление. Эти выводы могут также помочь прояснить вклад Т-клеток, вызванные иммунизации против ZIKV.

После этих методов мы разработали модель мышиных ZIKV инфекций. 1 х 104 фокус формирование единиц (ФФУ) из ZIKV Ifnar1- / - мышей в возрасте 6 – 8 недель были заражены retroorbital инъекции. После инфекции с ZIKV в Ifnar1- / - мышей наблюдались патологические симптомы и признаки (рис. 1А), а также изменения веса (рис. 1Б). Мышиных мозги показал очевидное отек и гиперемию (рис. 1C). Тем временем, яички сжал постепенно (рис. 1D). Кроме того патологические изменения и разрушение ткани были найдены в головном мозге и яички (рисA). Мы исполняли assay иммунофлюоресценции для обнаружения ZIKV в мозг и яички (рис. 2B). Высоких вирусных нагрузок были обнаружены в головном мозге и яичка иммуноокрашивания (рис. 2B). Иммуногистохимия показал надежную инфильтрации CD3+ T клеток в головном мозге мышей после инфекции с ZIKV (рис. 2C).
Чтобы обнаружить и оценить ответы ZIKV-специфических Т-клеток, мы подготовили мыши MHC-I H-2Db-E Тетрамер294-302 . Пептид E294-302 может помочь renatureb H-2D должным образом и дают большое количество растворимого MHC-I (рисA). В assay сдвига высокая эффективность в biotinylation можно наблюдать (рис. 3B). Впоследствии три стрептавидина флуоресцирования (APC, PE и BV421) - меткой реализует - я тетрамера были произведены для обнаружения ZIKV-специфических Т-клеток (рис. 3C). PE-помечены Тетрамер был выше эффективность для выявления конкретных CD8+ Т-клеток, по сравнению с надписью APC и BV421 тетрамера, хотя разница не была статистически значимой.
Используя E Тетрамер294-302 , мы обнаружили ZIKV-специфических Т-лимфоцитов в селезенке зараженных мышей подачей cytometry в 7 d после прививки ZIKV (3.49 ± 0,45%). Кроме того аналогично описанному в разделе 3 настоящего Протокола, с 4 недель после вакцинации вакцины AdC7-M/E, ZIKV-специфических Т-лимфоцитов были обнаружены в селезенке (6.89 ± 1,36%) (Рис. 4).
Кроме того мы обнаружили лимфоцитов, проникли в immunoprivileged органах, таких как мозг и яичек, после ZIKV инфекции. Ворота были установлены для выбора CD3+CD8+ T-клеток в общей лимфоцитов мозга и яичках. Высокий коэффициент E294-302 Тетрамер специфичные Т-клетки могут быть обнаружены в головном мозге (42,2% в CD3+CD8+ T клетки) и яичка (26,4% в CD3+CD8+ T клетки) лимфоцитов (рис. 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58110/58110fig1.jpg"> Рисунок 1 : Характеристика ZIKV инфекции в Ifnar1- / - мышей. Ifnar1- / - мышей в возрасте 6 – 8 недель были заражены с 104 фокус формирование единиц (ФФУ) из ZIKV retroorbital инъекции, и мышей, вводится с PBS использовались как неинфицированных элементов управления. Морфология (A) и (B) Вес изменения зараженных Ifnar1- / - мышей наблюдали. Красные стрелки показывают Ifnar1 мышей- / - , представленные с myeloparalysis и мотор парезами после инфекции. (C) мозги на 7 d после прививки и яички (D) на 0, 7, 14 и 30 дней после прививки были собраны. Представитель изображения мозга и яички от мышей отображаются с линейкой для обозначения размеров. Планки погрешностей представляют среднее ± SEM. n = 10 мышей на группу за эксперимент. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58110/58110fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58110/58110fig2.jpg"> Рисунок 2 : Обнаружение ZIKV и лимфоцитов в головном мозге и яички мышей- / - ZIKV-инфицированных Ifnar1. (A) Эта группа показывает гистопатологические изменения в мозге и яички от ZIKV-инфицированных мышей, по сравнению с негативный контроль на 7 d после прививки. Шкалы бар = 25 мкм (левая панель) и 50 мкм (правая панель). (B) иммунофлюоресценции пробирного была выполнена с анти ZIKV Z6 антитела (зеленый). С ZIKV-инфицированных мышей на 7 d после прививки были собраны все образцы тканей. Ядра, окрашивали DAPI (синий). Шкалы бар = 50 µm. (C) иммуногистохимия показывает надежные инфильтрации CD3+ T-клеток в мозг и яички. Шкалы бар = 25 мкм (левая панель) и 50 мкм (правая панель). Фиолетовый указывает гематоксилином, Браун представляет собой Антитело CD3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58110/58110fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58110/58110fig3.jpg"> Рисунок 3 : Подготовка реализует специфичные для ZIKV-я тетрамера. (A) привязки E294-302 до H-2Db выяснены путем в vitro складывая. Голубой означает H-2Db-E294-302 белка. Оранжевый представляет отрицательный контроль без пептид. (B) Эта группа показывает пробирного сдвиг H-2Db-E294-302 . (C) макет представляет элемент управления, PBS. Три стрептавидина флуоресцирования (APC, PE и BV421) - меткой реализует - я тетрамера были использованы для обнаружения ZIKV-специфических Т-клеток. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58110/58110fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58110/58110fig4.jpg"> Рисунок 4 : Гранулярных анализ вирус специфических CD8 потока + Т-клеток селезенки мышей, инфицированных ZIKV и прививки вакцины в. Ifnar1- / - мышей в возрасте 6-8 недель либо были заражены 104 фокус формирование единиц (ФФУ) из ZIKV или получил разовая доза-4 x 1010 вирусных частиц AdC7-M/E или PBS как отрицательный контроль. Через 7 дней после инфицирования или 4 недель после вакцинации splenocytes мыши были собраны и проанализированы подачей cytometry. Данные отображаются как среднее ± SD. Статистический анализ проводился с помощью односторонней ANOVA (не значительные: P > 0,05; *P < 0,05; **P < 0.01; ***P < 0,001; ***P < 0.0001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58110/58110fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58110/58110fig5.jpg"> Рисунок 5 : Стробирования стратегии и представитель результаты CD8 вирус специфических+ T клеток в головном мозге и семенниках мышей, инфицированных ZIKV. Представитель участки отображаются для проникли лимфоцитов в (A), мозг и (B) яички. Правопреемства ворот имеет значение для выбора лимфоидных точечная+ и CD3+ события. Из них, CD8+ события являются воротами для анализа epitope специфичных Т-клеток. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58110/58110fig5large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice at JoVE.com

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Оценка ответов Зика вирус специфических Т-клеток в Immunoprivileged органах зараженных Ifnar1- / - мышей

Протокол для оценки реакции антиген специфические Т-клеток в immunoprivileged органах Ifnar1- / - мышиных модели для вируса Зика (ZIKV) описано. Этот метод имеет решающее значение для изучения клеточных механизмов защиты и иммунопатогенезе ZIKV вакцин и также является ценным для оценки их эффективности.

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Во время вирусной инфекции Зика Т-клетки могут проникать в иммунопривилегированные органы для ликвидации вируса, но могут также способствовать иммунопатогенезу, таким как синдром Гийена-Барре или травмы яивок. Основным преимуществом этого метода является то, что он облегчает обнаружение тетрамерных Т-клеток в иммунопривилегированных органах, как во время инфицирования вирусом Зика, так и после иммунизации против вакцинации. В этой модели, вирус Зика инфекция инициируется в интерферон альфа / бета-рецептор нокаут мышей, что позволяет отслеживать вирус Зика конкретных Т-клеток в головном мозге, яички, и селезенки.Используя подход к окрашивания тетрамеров, можно исследовать только характеристики иммунопривилегированных органов, проникающих в специфические Т-клетки вируса Зика, для изучения вклада Т-клеток в иммунопротекторную и иммунопатогенную клетки. Для инфицирования вирусом Зика, доставить один раз 10 до четырех фокус-образующих единиц вируса Зика в 100 микролитров PBS через ретро-орбитальной прививки в шесть-восемь недель назад интерферон альфа / бета рецептор нокаут мышей. Затем ежедневно следите за весом и клиническими признаками инфицированных животных в течение 15 дней.Семь дней после прививки, обеспечить инфицированное животное в положении на спине на хирургической пены, и использовать стерильный скальпель, чтобы сделать разрез кожи вдоль средней линии живота. Используйте ножницы, чтобы открыть мышцы живота, и осторожно извлечь печень. Затем, удалить селезенку, и промыть ткани три раза в PBS, чтобы удалить кровь.После последней стирки поместите селезенку на 1,5 миллилитров ледяной RPMI среды на льду, пока все селезенки были собраны. Чтобы создать одноклеточную подвеску, поместите селезенку в стерильный, 40-микрометровый сетчатый клеточный ситечко поверх 50-миллилитровой трубки и добавьте два миллилитра ледяной среды RPMI, дополненной сывороткой из 10% плода, или FBS, к ситечко. Затем используйте поршень из пятими миллилитров шприца для мацерата ткани через фильтр, используя свежую среду, чтобы промыть выпущенные клетки через сетку.Перенесите одноклеточную суспензию в 15-миллилитровую коническую трубку для центрифугации и повторно наполните гранулы пятью миллилитров буфера лиза красных кровяных телец. После пяти-шести минут при комнатной температуре, остановитьлиз с 10 миллилитров ледяной RPMI плюс FBS для второй центрифугации, и повторно гранулы в 10 миллилитров полной среды для подсчета. Семь дней после прививки, обездвижить усыпляемый, инфицированный, самец мыши в положении склонных на разделорезной доске, и обеспечить кожу головы с прямыми один на два зуба щипцом.Используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы сделать разрез средней линии на коже головы, подвергая череп, и использовать острые пинцеты, чтобы зажать две стороны орбиты с острыми пинцетом, фиксируя мозг. Размещение одного кончика острых ножниц радужной оболочки глаза в foramen magnum, вырезать боковой в череп с каждой стороны. Тщательно вырезать из той же полости до средней линии, к носу, сохраняя ножницы советы как можно более поверхностным, чтобы избежать травмирования мозга.Поднимите мозг с типсами, и использовать острые ножницы радужной оболочки глаза, чтобы тщательно вскрыть черепных нервных волокон. Затем используйте типсы для переноса мозга в 15-миллилитровую трубку, содержащую пять миллилитров ледяной RPMI плюс FBS. Чтобы изолировать яички, поднимите брюшную кожу с типсами, и использовать ножницы радужной оболочки глаза, чтобы сделать продольный разрез через интеграмент и брюшной стенки и подвергать нижнюю часть живота.Нажмите яички до разреза, и использовать пинцет, чтобы осторожно вытащить жировой слой, чтобы разоблачить шаровые яички с обеих сторон. Используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы тщательно вскрыть жировой слой и эпидидимис, и передать яички в 15-миллилитровую трубку, содержащую пять миллилитров ледяной RPMI плюс FBS. Чтобы создать одноклеточную суспензию из любой из собранных тканей, поместите орган на стерильный клеточный ситечко со 100-микронной сеткой поверх 50-миллилитровой трубки и добавьте два миллилитров ледяной RPMI плюс FBS к ситечко.Используя поршень из пятими миллилитрового шприца, пюре ткани, и мыть фильтр со свежей среде, пока орган был полностью землю через сетку. Перенесите одноклеточную подвеску в 15-миллилитровую трубку для центрифугации и повторно посовелите гранулы в пять миллилитров градиентной среды плотности 30%. Тщательно слой клеточного раствора в течение двух миллилитров 70%плотности градиента среды в новой 15-миллилитровой трубки, и отделить клетки по плотности градиентной центрифугации.Затем перенесите клетки из межфазы между двумя градиентами плотности в новую 15-миллилитровую трубку, содержащую 10 миллилитров холодного RPMI плюс FBS для другой центрифугации, и повторно посовечите гранулы в 10 миллилитров ледяной RPMI/FBS для подсчета. Чтобы проанализировать клетки по цитометрии потока, разбавить клетки в пять раз от 10 до шести клеток на 100 микролитров в концентрации буфера FACS, и инкубировать образцы клеток с 10 микролитров анти-мышь CD16/CD32 блокирования антител на образец. После 10 минут при комнатной температуре добавьте 20 микролитров клеток в соответствующее количество колодцев 96-хорошо, круглой нижней пластины в соответствии с экспериментальным протоколом окрашивания цитометрии потока, и добавьте 20 микролитров тетраметной смеси E-белка к каждой скважине для 30-минутной инкубации при комнатной температуре в темноте.В конце инкубации добавьте антитела клеточной поверхности, представляющие интерес для клеток, для 30-минутной инкубации при четырех градусах Цельсия, защищенных от света. Далее, мыть клетки два раза с 200 микролитров буфера FACS за стирку, и тщательно повторного перерасхода клеток в каждой хорошо с 200 микролитров свежего буфера FACS. Затем храните образцы при четырех градусах Цельсия, защищенных от света, до их анализа на цитометре потока.Патологические симптомы и признаки, такие как миелопарализ и моторный парапарез наблюдаются в интерферон альфа / бета-рецептор 1 нокаут мышей семь дней после прививки с вирусом Зика. Изменения веса в инфицированных интерферона альфа / бета-рецептор 1 нокаут животных были проверены в течение 15 дней, с потерей веса впервые наблюдается через четыре дня после инфекции и восстановления веса, начиная с седьмого дня после заражения. Репрезентативные изображения инфицированных мозгов мурина показывают очевидный отек и гиперемию семь дней после прививки от вируса Зика.Репрезентативные изображения тестов, зараженных вирусом Зика, свидетельствуют о постепенном сокращении с семи до 30 дней после инфицирования. Гистопатологический анализ секций мозга и яичек, инфицированных вирусом Зика, также иллюстрирует влияние разрушительных патологических изменений по сравнению с неинфицированным контролем. Как и ожидалось в макро- и гистопатологических анализах, высокие вирусные нагрузки также обнаруживаются в головном мозге и яичках инфицированных вирусом Зика мышей путем иммуностимулятора.Это сопровождается надежным CD3-положительным проникновением Т-клеток в мозг после заражения вирусом Зика. Вирус Зика-специфические CD3-положительные, CD8-положительные Т-лимфоциты обнаруживаются как у инфицированных вирусом Зика, так и у вакцин-иммунизированных мышей путем окрашивания тетрамеров Е-белка. E-белок тетрамер-специфических CD8-положительных Т-клеток также могут быть обнаружены в головном мозге и яички семь дней после прививки с вирусом Зика.После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в изучении патоген-специфической характеристики Т-клеток в иммунопревалентных органах во время естественных инфекций в животных моделях. Этот метод также может быть применен к другим иммунным органам, таким как плацента или глаз, а также к вирусной инфекции и раку. После этой процедуры тетрамеры MHC-I могут быть использованы для иммуногистохимического или иммунофлуоресцентного обнаружения патогенных Т-клеток для доступа к распределению Т-клеток мозга или яище.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Ретровирусные трансдукция Т-клеточных рецепторов в мышь Т-клеток

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Измерение бактериальной нагрузки и иммунного ответа в мышей, инфицированных Listeria моноцитогенес</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Использование флуоресцентных целевых массивов для оценки Т-клеточные ответы<em&gt; В естественных условиях</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Обнаружения диагностических Epitope Зика вирус

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Всасывания блистер протокол для изучения человеческий Т-клеточный вспомнить ответы в естественных условиях

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Характеристика тимус зависимых и тимус независимые иммуноглобулина изотипа ответов в мышей, используя энзим соединенный Assay иммуносорбента

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

Оптимизированный интерферона гамма ELISpot Assay мера Т-клеток ответов в модели морской свинки после вакцинации

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Оценка хост возбудитель ответы и эффективность вакцины в мышей

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...