Name: investigating mammalian axon regeneration: in vivo electroporation of adult mouse dorsal root ganglion
Uploaded: 2018-09-01T14:30:00
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El estudio fue financiado (otorgado a F-Q. Z.) por NIH (R01NS064288, R01NS085176, R01GM111514, R01EY027347), la Fundación Craig H. Neilsen y la BrightFocus Foundation.

Todos los experimentos con animales se realizaron según el protocolo animal aprobado por la Johns Hopkins institucional Animal cuidado y uso.
1. materiales y reactivos
<ol><li>
Animales
	<ol>
<li>Utilizar ratones CF1 femeninos seis semanas de edad que pesa 30-35 g para los experimentos. Nota: Los ratones fueron alojados en grupo (5 ratones por jaula) en jaulas ventiladas individualmente esterilizados con 1/4" maíz mazorca ropa de cama y 2" cuadrado nestlets para anidar....

<ol>
	<li>Saijilafu, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K-GSK3+signalling+regulates+mammalian+axon+regeneration+by+inducing+the+expression+of+Smad1.">PI3K-GSK3 signalling regulates mammalian axon regeneration by inducing the expression of Smad1.</a> Nature Communications. 4, 2690 (2013).</li><li>Zhang, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Akt-independent+GSK3+inactivation+downstream+of+PI3K+signaling+regulates+mammalian+axon+regeneration.">Akt-independent GSK3 inactivation downstream of PI3K signaling regulates mammalian axon regeneration.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 443 (2), 743-748 (2014).</li><li>Jiang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-26a+supports+mammalian+axon+regeneration+in+vivo+by+suppressing+GSK3beta+expression.">MicroRNA-26a supports mammalian axon regeneration in vivo by suppressing GSK3beta expression.</a> Cell Death &amp; Disease. 6, 1865 (2015).</li><li>Krames, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+dorsal+root+ganglion+in+the+development+of+neuropathic+pain.">The role of the dorsal root ganglion in the development of neuropathic pain.</a> Pain Medicine. 15 (10), 1669-1685 (2014).</li><li>Salimzadeh, L., Jaberipour, M., Hosseini, A., Ghaderi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-viral+transfection+methods+optimized+for+gene+delivery+to+a+lung+cancer+cell+line.">Non-viral transfection methods optimized for gene delivery to a lung cancer cell line.</a> Avicenna Journal of Medical Biotechnology. 5 (2), 68-77 (2013).</li><li>Keeler, A. M., ElMallah, M. K., Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Therapy+2017:+Progress+and+Future+Directions.">Gene Therapy 2017: Progress and Future Directions.</a> Clinical and Translational Science. 10 (4), 242-248 (2017).</li><li>Neumann, E., Schaeferridder, M., Wang, Y., Hofschneider, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene-Transfer+into+Mouse+Lyoma+Cells+by+Electroporation+in+High+Electric-Fields.">Gene-Transfer into Mouse Lyoma Cells by Electroporation in High Electric-Fields.</a> The EMBO Journal. 1 (7), 841-845 (1982).</li><li>Liu, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-138+and+SIRT1+form+a+mutual+negative+feedback+loop+to+regulate+mammalian+axon+regeneration.">MicroRNA-138 and SIRT1 form a mutual negative feedback loop to regulate mammalian axon regeneration.</a> Genes &amp; Development. 27 (13), 1473-1483 (2013).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Saijilafu, E. M., Hur, F. Q., Zhou, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+axon+regeneration+via+in+vivo+electroporation+of+adult+mouse+sensory+neurons.">Genetic dissection of axon regeneration via in vivo electroporation of adult mouse sensory neurons.</a> Nature Communications. 2, 543 (2011).</li><li>Pan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shrinkage-mediated+imaging+of+entire+organs+and+organisms+using+uDISCO.">Shrinkage-mediated imaging of entire organs and organisms using uDISCO.</a> Nature Methods. 13, 859 (2016).</li><li>Rao, R. D., Bagaria, V. B., Cooley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posterolateral+intertransverse+lumbar+fusion+in+a+mouse+model:+surgical+anatomy+and+operative+technique.">Posterolateral intertransverse lumbar fusion in a mouse model: surgical anatomy and operative technique.</a> Spine Journal. 7 (1), 61-67 (2007).</li><li>Dommisse, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood+supply+of+the+spinal+cord.+A+critical+vascular+zone+in+spinal+surgery.">The blood supply of the spinal cord. A critical vascular zone in spinal surgery.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. British Volume. 56 (2), 225-235 (1974).</li><li>Sorensen, D. R., Leirdal, M., Sioud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Silencing+by+Systemic+Delivery+of+Synthetic+siRNAs+in+Adult+Mice.">Gene Silencing by Systemic Delivery of Synthetic siRNAs in Adult Mice.</a> Journal of Molecular Biology. 327 (4), 761-766 (2003).</li></ol>

Varios pasos quirúrgicos requieren especial atención. La L4 y L5 DRGs (localización del Soma), que dominan el nervio ciático, necesitan ser correctamente identificados e inyectado con construcciones de genes. De lo contrario, el etiquetado de GFP estará ausente en los axones del nervio ciático. Las crestas ilíacas pueden verse como puntos de referencia anatómicas útiles localizar L4 y L5 GRD. En la mayoría de ratones, empalme entre las vértebras L5 y L6 de la faceta es proximal a las crestas ilíacas<sup class...

Lesiones del sistema nervioso causaron por un traumatismo neural o diversas enfermedades neurodegenerativas generalmente son el resultado de defectos en las funciones de motor, sensoriales y cognitivas. Recientemente, se ha dedicado mucho esfuerzo al restablecimiento de potencia regenerativa en neuronas adultas para restaurar la functionsof fisiológica herido las neuronas1,2,3. Las neuronas sensoriales en el DRG son un grupo de células nerviosas que transmiten diferentes estímulos sensoriales, tales como dolor, temperatura, tacto o postura del cuerpo, al cerebro. Cada uno de estas neuronas seudo unipolar y contiene un único axón que se bifurca con una rama que se extiende hacia la periferia y la otra rama hacia la médula espinal4. Las neuronas sensoriales adultos en DRGs son entre unas neuronas maduras de mamíferas conocidas para regenerar sus axones activamente después de la lesión. Por lo tanto, lesiones de los axones sensoriales han sido ampliamente utilizados como un modelo fundamental para el estudio de los mecanismos de regeneración axonal en vivo.
En vivo técnicas de transfección génica, que son generalmente menos desperdiciador de tiempo configurar y más flexible que el uso de animales transgénicos, han jugado papeles esenciales en el estudio de las funciones de genes y señalización de vías en el sistema nervioso. Las principales técnicas pueden dividirse en dos enfoques: instrumento y virus5. Viral basado en vivo entrega de genes en neuronas adultas puede proporcionar precisa manipulación espacio-temporal de gene expresión6. Sin embargo, procesos que requieren mucho trabajo participan en métodos basados en virales, tales como la producción y purificación de partículas virales que contiene el gen deseado. Además, muchos vectores virales podrían activar el sistema inmune del huésped, que puede interferir con la adquisición de datos, análisis de datos y posiblemente confundir la interpretación de resultados experimentales. Electroporación, un enfoque basado en el instrumento típico de la transfección, utiliza un impulso eléctrico para aumentar la permeabilidad celular y las membranas nucleares transitoriamente, que favorece la afluencia de vectores del gene o pequeño RNA oligos de espacio fuera de las células7 . Electroporación in vitro es reconocida ampliamente como una estrategia transitoria pero muy eficiente para manipular la expresión de genes específicos en muchos tipos celulares. Aunque en vivo electroporación sólo conduce a la expresión génica transitoria con baja eficiencia de transferencia en comparación con vectores virales, tiene diversas ventajas sobre enfoques virales. Por ejemplo, se puede aplicar a casi todas las células y tejidos7,8,9. Además, ambos plásmidos que codifican genes de interés o pequeños RNA oligos (p. ej., siRNAs, microRNA) contra ciertas transcripciones pueden ser inyectados directamente en el tejido de la blanco y entonces pulsados eléctricamente, que hacer el procedimiento menos mano de obra - y tiempo - consumiendo. Además, es posible transfectar múltiples plásmidos y RNA oligos simultáneamente con electroporación sola.
Hemos establecido un método de electroporación en vivo para manipular genes en neuronas sensoriales de ratón adulto y aplicado con éxito y validado dicho enfoque en numerosos estudios pioneros de1,2,3 ,8,10. Aquí, presentamos un protocolo detallado para facilitar el uso de este enfoque para futuros estudios de la regeneración del axón mamífero.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1039px;" width="1037">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:335px;">ECM 830 Square wave electroporation system</td>
			<td style="width:232px;">BTX Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:121px;">45-0052</td>
			<td style="width:351px;">For in vivo electroporation</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:335px;">Tweezertrodes electrodes</td>
			<td style="width:232px;">BTX Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:121px;">45-0524</td>
			<td>For in vivo electroporation, 1 mm flat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Picospritzer III</td>
			<td style="width:232px;">Parker Instrumentation</td>
			<td style="width:121px;">1096</td>
			<td>Intracellular Microinjection Dispense Systems</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Glass Capillary Puller</td>
			<td style="width:232px;">NARISHIGE</td>
			<td>PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Borosilicate Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:121px;">1902328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Stereo Dissection Microscope</td>
			<td style="width:232px;">Leica</td>
			<td style="width:121px;">M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Microsurgery Rongeur</td>
			<td style="width:232px;">F.S.T</td>
			<td style="width:121px;">16221-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Microsurgery Forceps</td>
			<td style="width:232px;">FST by DUMONT, Switzerland</td>
			<td style="width:121px;">11255-20</td>
			<td>Only for sciatic nerve crush</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Glass Capillary</td>
			<td style="width:232px;">World Precision Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:121px;">TW100-4</td>
			<td>10 cm, standard wall</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Tape</td>
			<td style="width:232px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:121px;">15-901-30</td>
			<td>For fixing the mouse on the corkboard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2, 2, 2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td style="width:232px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">T48402</td>
			<td>Avertin stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol</td>
			<td style="width:232px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">152463</td>
			<td>Avertin stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">siRNA Fluorescent Universal Negative Control #1</td>
			<td style="width:232px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">SIC003</td>
			<td>Non-target siRNA with fluorescence</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:335px;">microRNA Mimic Transfection Control with Dy547</td>
			<td style="width:232px;">Dharmacon</td>
			<td style="width:121px;">CP-004500-01-05</td>
			<td>Non-target microRNA with fluorescence</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Plasmids preparation kit</td>
			<td style="width:232px;">Invitrogen Purelink</td>
			<td style="width:121px;">K210016</td>
			<td>GFP-coding plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Fast Green Dye</td>
			<td style="width:232px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:121px;">F7252</td>
			<td>For better visualization of the DRG outline during injection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:335px;">Ketamine</td>
			<td style="width:232px;">Putney, Inc</td>
			<td style="width:121px;">NDC 26637-731-51</td>
			<td>Anesthesia induction</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:335px;">Xylazine</td>
			<td style="width:232px;">AnaSed</td>
			<td style="width:121px;">NDC 59399-110-20</td>
			<td>Anesthesia induction</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:335px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:232px;">McNeil Consumer Healthcare</td>
			<td style="width:121px;">NDC 50580-449-36</td>
			<td>Post-surgical pain relief</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating mammalian axon regeneration: in vivo electroporation of adult mouse dorsal root ganglion

La electroporación es un enfoque de transfección de genes no virales esenciales para introducir ADN plásmidos o pequeñas moléculas de ARN en células. Una neurona sensorial en el ganglio de raíz dorsal (GRD) extiende un solo axón con dos ramas. Una rama va al periférico del nervio (rama periférica) y la otra rama entra en la médula espinal a través de la raíz dorsal (rama central). Después de la lesión neuronal, la rama periférica regenera robusta mientras que la rama central no se regenera. Debido a la gran capacidad regenerativa, regeneración del axón sensorial ha sido ampliamente utilizada como un sistema modelo para estudiar la regeneración del axón mamífero en sistema nervioso periférico (PNS) y sistema nervioso central (SNC). Aquí, describimos un protocolo de acercamiento previamente establecido para manipular genes en neuronas sensoriales maduras en vivo a través de electroporación. Basado en la transfección con plásmidos o pequeño oligos de RNA (siRNAs o microRNA), el enfoque permite para que ambos experimentos de pérdida y ganancia de función estudiar el papel de los genes de interés o microRNA en regulación de la regeneración de axones en vivo. Además, la manipulación de la expresión génica en vivo puede ser controlada tanto espacial como temporal dentro de un curso de tiempo relativamente corto. Este sistema de modelo constituye una herramienta única para investigar los mecanismos moleculares que regeneración del axón mamíferos es regulado en vivo.

Para cuantificar la citotoxicidad del protocolo actual y para validar que tipo de transfección de en vivo DRG electroporación es lo suficientemente alta, inyectamos y electroporated fluorescencia etiquetada microRNA o siRNA en L4 y L5 GRD. Los DRGs separadas fueron procesados a través de cryo-seccionamiento e inmunohistoquímica (figura 1A-B). Estimación de la tasa de supervivencia de la célula después de la inyección y electr...

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Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

La electroporación es un enfoque efectivo para entregar genes de interés en las células. Al aplicar este enfoque en vivo en las neuronas del ganglio de la raíz dorsal de ratón adulto (DRG), se describe un modelo para el estudio de la regeneración del axón en vivo.

Investigadora de axón mamífero de regeneración: En Vivo electroporación de ganglio de raíz Dorsal de ratón adulto

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

This method provides an in-vivo gene transfection technique to manipulate gene expression in adult mouse sensory neurons for future studies of mammalian exo-regeneration. The main advantage of this technique is that it's less labor and time consuming, and can both overexpress and knock down the target genes simultaneously and separately. To begin this procedure, mark both sides of the iliac crest of an anesthetized mouse with a fine marker.Draw a line connecting two points of the iliac crest to facilitate the identification of L5 DRGs positions. Then, make a three centimeter incision along the midline of the lower back with micro scissors. Afterward, detach the paraspinous muscles, such as the musculus multifidus and the musculus longissimus lumborum, from the L3 to S1 spinous processes, and expose the fascia joint of the L4-5 and L5-6.Next, use a micro rongeur to remove the fascia joints of the L4-5 and L5-6. Subsequently, remove the left neural arch of L4 and L5, to expose the dorsal side of the DRGs. For DRG injection, load the DNA plasmids or RNA oligos into the glass capillary pipette.Then, insert the tip of the capillary glass pipette, carefully, into the DRG, and gradually inject one microliter solution of DNA plasmids or RNA oligos using the intracellular micro injection dispense system. For electroporation, pinch the target DRG with the electrodes gently, and apply five square electric pulses with the electroporation system. Subsequently, close the muscle, then the skin layers with nylon sutures.Two or three days after the DRG electroporation, anesthetize the mouse intraperitoneally, tape its limbs on the cork board, and make a one centimeter incision 0.5 centimeters to the left side along the midline. Next, cut the muscles, such as gluteus maximus muscle and piriformis muscle, longitudinally. Then, expose the segment of the sciatic nerve between the greater sciatic foramen, and the sciatic notch.Crush the nerve with microsurgery forceps for 12 seconds, and mark the crush site with a nylon epineural suture. Afterward, close the muscle and skin layers with nylon suture. After profusion, separate the DRGs together with the nerve roots and sciatic nerve, carefully, with micro scissors and micro forceps under the dissection microscope.Then, transfer the sciatic nerve directly in 4%PFA overnight at four degrees celsius. To image and measure the fluorescence labeled sensory axons under the dissection microscope, strip off the attached tissue and membrane on the fixed sciatic nerve with micro scissors and micro forceps, carefully. Then, wash the nerve with PVS three times.Next, place the sciatic nerve on a slide and keep it straight. Add 80 microliters of anti-fade solution around the nerve, then lay a cover slip on it. Flatten the whole mounted tissue with pressure.Afterward, place the flattened tissue under the inverted epifluorescence microscope, equipped with an accessory for mosaic acquisition and image processing. When measuring the length of regenerated axons, trace all identifiable fluorescently labeled axons in the sciatic nerve from the crush site to the distal axon ends. When applying the current, in-vivo electroporation method to study axonal regeneration, the sciatic nerve was flattened and imaged.Every regenerated axon with distinctive trajectory and recognizable distal axon end, can be traced from the crush site indicated by the suture knot. The white arrowhead, arrow, and star, indicate three distinctive axon ends, all of which extend from the crush site. Additionally, the DRGs were electroporated with EGFP plasmids, and the spinal cord was harvested.The EGFP labeled, dorsal column axons, in the spinal cord, were imaged and identified in both the longitudinal and sagittal projecting images. Here is a detailed view of axons in the dorsal column, and here is a detailed view of axons in the the dorsal root entry zone. This image shows the sagittal projection of the EGFP labeled axons within the dorsal column.Alternatively, the confocal images can be processed with microscopy visualization software to reconstruct a 3D image. While attempting this procedure, it's important to remember to position the L4 and the L5 DRGs correctly, and to make a knot on the dural membrane without impaling the sciatic nerve, while labeling the crush site with a suture knot. After its development, this technique pave the way for researchers in the field of axon regeneration to explore genes that are required for PNS, natural axon regeneration, or genes that can further promote regeneration in adult mouse in-vivo.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

La transfección de células de ratón del ganglio de la retina por In vivo La electroporación

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Investigación

Neurociencias

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

Estudio genético de la regeneración axonal en neuronas cultivadas de Adultos ganglio de la raíz dorsal

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

En Vitro Modelado de canceroso Neural Invasion: Modelo del ganglio de la raíz dorsal

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

An Approach to Enhance Alignment and Myelination of Dorsal Root Ganglion Neurons

Un Enfoque para Mejorar la alineación y la mielinización de las neuronas del ganglio de la raíz dorsal

Axon regeneration is a chaotic process due largely to unorganized axon alignment. Therefore, in order for a sufficient number of regenerated axons to ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Inyección de raíz dorsal ganglio de raíz dorsal y Lesión por aplastamiento como modelo para la regeneración del axón sensorial

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Laminotomía para acceso de ganglio de raíz Dorsal Lumbar y de la inyección en los cerdos

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Análisis de las células inmunes en solo de los nervios ciático y de ganglio de raíz Dorsal de un ratón mediante citometría de flujo

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

Aislamiento rápido de macrófagos de ganando de raíz dorsal

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In Situ Visualization of Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures

In situ Visualización del crecimiento de axones y la dinámica de los conos de crecimiento en cultivos agudos de cortes cerebrales embrionarios ex vivo

During neuronal development, axons navigate the cortical environment to reach their final destinations and establish synaptic connections. Growth cones ...

In Vitro Myelination of Peripheral Axons in a Coculture of Rat Dorsal Root Ganglion Explants and Schwann Cells

Mielinización in vitro de axones periféricos en un cocultivo de explantes de ganglio de raíz dorsal de rata y células de Schwann

The process of myelination is essential to enable rapid and sufficient signal transduction in the nervous system. In the peripheral nervous system, ...