Denne metode kan hjælpe med at besvare vigtige spørgsmål i det eksperimentelle stregfelt, f.eks. Den største fordel ved denne teknik er, at det giver mulighed for re-perfusion via den fælles halspulsåren, og derfor ikke er afhængig af cirklen af Willis, som kan variere anatomisk mellem dyr, og derfor kan bidrage til variabilitet ses i eksperimentelle resultat foranstaltninger. Visuel demonstration af denne metode er afgørende, da CCA-beholderens reparationstrin er vanskelige at lære på grund af de tekniske vanskeligheder, der er forbundet med brug af fugemassen, for at sikre, at CCA er fuldt patent, efter reparation.
Til at begynde, forberede og bedøve musen i henhold til testprotokollen. Brug derefter en række 15 skalpel klinge til at gøre en 1,5 cm midterlinjen snit på den udsatte ventrale hals. Ved hjælp af stumpe dissektion teknikker, forsigtigt trække spytkirtlerne til siden, at udsætte luftrøret.
Derefter dissekere den fælles halspulsåren, eller CCA, fri for det omgivende væv og vagusnerven. Efter dette, passere to små sektioner af en ikke-opløselig 6-0 sutur under CCA, dorsale til CCA, og ventrale til vagus nerve. Tegn en silke slips tættere på kirurgen, og binde det løst omkring CCA.
Derefter løst binde en anden silke slips mod bifurcation af de interne og eksterne halspulsårer. Dernæst anvende en mikrovaskulær klip lige over den distale slips, sikre bifurcation er ikke blokeret. Brug mikro venøs saks til at lave et lille hul i CCA.
Sæt en 7-0 silikone-belagt mikrogløde i CCA, og fremfør den mod den mikrovaskulære clips. Stram derefter det distale slips for at fastgøre glødetråden på plads. Og brug klipholdere til at fjerne den mikrovaskulære clips.
Dernæst fremrykning glødetråden ind i den interne halspulsåren, eller ICA. Når glødetråden hovedet passerer distale slips, trække slips strammere, for at forhindre blodtab. Brug distale silke slips, løft og træk CCA til den ydre side af musens krop, og styre glødetråden til bøje, forbi åbningen af pterygopalatine arterie, eller PPA.
Når glødetråden er på plads, skal du fastgøre den ved at stramme det distale silkeslips yderligere. Ved afslutningen af MCAO-perioden trækkes glødetråden tilbage, indtil det hvide glødehoved er tydeligt synligt. Løsn derefter den distale CCA slips lige nok til at fjerne glødetråden hovedet det meste af vejen, ud af fartøjet.
Fjern derefter glødehovedet helt fra beholderen. Derefter skal du placere en mikrovaskulær clips i vandret position, mod CCA bifurcation, og ved siden af den distale slips. Derefter placere et andet klip under den proksimale CCA slips, mod kirurgen.
Brug forsigtigt Dumont 5-vicesst til at fjerne begge silkebåndene. Og tør området ved hjælp af sterile vatpinde. Derefter tilsættes Fibrinogen og Trombin fugemasse opløsninger en og to, til en steril petriskål.
Ved hjælp af mikro venøs saks og stump dissektion teknik, opnå en tynd ventral skive sternocleidomastoid muskel. Derefter, ved hjælp af Dumont 5 stæcener, tage væv pad og bland det jævnt på tværs af Fibrinogen og Thrombin fugemasse løsninger. Her er det vigtigt at sikre, at vævspuden er stor nok til at dække CCA-indsnittet.
Og når det er blandet på tværs af de to løsninger, skal det straks placeres over snittet, for at forhindre overkoagulation og dårlig vedhæftning. Når blandet mellem de to opløsninger, fjerne væv pad til CCA snit. Placer vævspuden fladt ned på snittet med medium tryk, og åben fortriver.
Fjern hurtigt den distale mikrovaskulære clips, mens du holder vævspuden på plads. Dernæst langsomt lindre presset fra væv pad, så blodet til at flyde under indsnit område. Nu, langsomt og forsigtigt frigive trykket fra den proksimale mikrovaskulære klip, derefter fjerne helt.
Fjernelse af den øverste klip giver en lille mængde blod til at aktivere fugemasse. En stabil frigivelse af den distale klip giver mulighed for en gradvis trykstigning på indsnit site, aktivering yderligere og bidrage til at forhindre en mislykket reparation. Endelig, når fartøjet er forseglet, sutur såret med opløselige 6-0 suturer.
I denne protokol, mellem cerebral arterie okklusion, eller MCAO, blev udført på 24 voksne mandlige mus. En undgåelse af ECA ligation og tilsætning af analgesi viste en tendens mod reduceret vægttab ved 48 timer efter MCAO. Fem minutter efter fjernelse af glødetråd, den regionale cerebral blodgennemstrømning betydeligt steget i hjernen regionen MCA.
Perfusionen blev opretholdt op til reparationen af fartøjet med en stigning i perfusion til MCA-området efter reparation af CCA-beholderen. Dette tyder på, at CCA reparation tilladt øget blod perfusion til iskæmisk område, i forhold til afhængighed af kredsen af Willis alene. En T2 vægtet MR-scanning blev brugt til at bestemme den samlede LV og DTI scanninger blev brugt til at bestemme kerne LV på 48 timer efter MCAO.
Der var ingen væsentlig forskel mellem disse to grupper. Interessant, at en variation for total og kerne LV blev væsentligt reduceret i CCA reparation gruppe. Vores analyse viste, at færre dyr pr behandling gruppe ville være forpligtet til at påvise en 30% reduktion i LV, efter MCAO, ved hjælp af CCA reparation, versus typiske CCA ligated procedure.
Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske at sikre væv pack er af tilstrækkelig størrelse til at dække CCA snit. Også hastigheden er vigtig, for at forhindre fugemasse over-koagulering, før du placerer puden på CCA.