यह विधि प्रयोगात्मक स्ट्रोक क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने में मदद कर सकती है, जैसे कि इन मॉडलों से जुड़े को कैसे कम किया जाए, और प्रजनन क्षमता में सुधार कैसे किया जाए। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह आम कैरोटिड धमनी के माध्यम से फिर से परफ्यूजन की अनुमति देता है, और इसलिए विलिस के सर्कल पर निर्भर नहीं है, जो जानवरों के बीच शारीरिक रूप से भिन्न हो सकता है, और इसलिए प्रयोगात्मक परिणाम उपायों में देखी गई परिवर्तनशीलता में योगदान दे सकता है। इस विधि का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है, क्योंकि सीसीए पोत मरम्मत चरणों को यह सुनिश्चित करने के लिए सीलेंट का उपयोग करते समय शामिल तकनीकी कठिनाई के कारण सीखना मुश्किल है कि सीसीए मरम्मत के बाद पूरी तरह से पेटेंट है।
परीक्षण प्रोटोकॉल के अनुसार माउस को शुरू करने, तैयार करने और एनेस्थेट करना। फिर उजागर वेंट्रल गर्दन पर 1.5 सेमी मिडलाइन चीरा बनाने के लिए एक नंबर 15 स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करें। कुंद विच्छेदन तकनीकों का उपयोग करना, धीरे से लार ग्रंथियों को वापस लेना, श्वासनली का पर्दाफाश करने के लिए।
फिर आम कैरोटिड धमनी, या सीसीए, आसपास के ऊतकों और vagal तंत्रिका से मुक्त विच्छेदन। इसके बाद, सीसीए के नीचे एक गैर-भंग योग्य 6-0 सीवन के दो छोटे वर्गों को पारित करें, सीसीए के लिए पृष्ठीय, और वेगल तंत्रिका के लिए वेंट्रल। सर्जन के करीब एक रेशम टाई ड्रा, और यह सीसीए के आसपास ढीला टाई ।
फिर आंतरिक और बाहरी कैरोटिड धमनियों के विभाजन की ओर एक दूसरे रेशम टाई को शिथिल करें। इसके बाद, डिस्टल टाई के ठीक ऊपर एक माइक्रोवैस्कुलर क्लिप लागू करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि विभाजन बाधित न हो। सीसीए में एक छोटा सा छेद बनाने के लिए माइक्रो वेनस कैंची का प्रयोग करें।
सीसीए में एक 7-0 सिलिकॉन लेपित माइक्रो फिलामेंट डालें, और इसे माइक्रोवैस्कुलर क्लिप की ओर आगे बढ़ाते हैं। फिर जगह में तंतु जकड़ना करने के लिए डिस्टल टाई कस लें। और माइक्रोवैस्कुलर क्लिप को हटाने के लिए क्लिप धारकों का उपयोग करें।
इसके बाद, फिलामेंट को आंतरिक कैरोटिड धमनी, या आईसीए में आगे बढ़ाएं। एक बार फिलामेंट सिर डिस्टल टाई से गुजरता है, तो रक्त की कमी को रोकने के लिए टाई को सख्त खींचें। डिस्टल सिल्क टाई का उपयोग करके, सीसीए को माउस के शरीर के बाहरी हिस्से में उठाएं और खींचें, और पेटीगोपालाटिन धमनी, या पीपीए के उद्घाटन से पहले, मोड़ पर फिलामेंट चलाएं।
एक बार फिलामेंट लागू होने के बाद, डिस्टल सिल्क टाई को और मजबूत करके इसे सुरक्षित करें। एमसीएओ अवधि के अंत में, तब तक फिलामेंट को वापस लें जब तक कि सफेद फिलामेंट सिर स्पष्ट रूप से दिखाई न दे। फिर डिस्टल सीसीए टाई को ढीला करें ताकि फिलामेंट सिर को हटाने के लिए पर्याप्त हो, पोत से बाहर।
इसके बाद, पोत से फिलामेंट सिर को पूरी तरह से हटा दें। इसके बाद, सीसीए विभाजन की ओर, और डिस्टल टाई के बगल में क्षैतिज स्थिति में एक माइक्रोवैस्कुलर क्लिप रखें। फिर सर्जन की ओर, समीपस्थ सीसीए टाई के नीचे एक और क्लिप रखें।
रेशम संबंधों के दोनों को दूर करने के लिए सावधानी से ड्यूमोंट 5 संदंश का उपयोग करें। और बाँझ कपास की कलियों का उपयोग कर क्षेत्र सूखी। फिर एक बाँझ पेट्री डिश में फिब्रिनोजेन और थ्रोम्बिन सीलेंट समाधान एक और दो जोड़ें।
माइक्रो वेनस कैंची और कुंद विच्छेदन तकनीक का उपयोग करके, स्टर्नोकलिडोमेस्टोस्टोइड मांसपेशियों का एक पतला वेंट्रल टुकड़ा प्राप्त करें। फिर, ड्यूमोंट 5 संदंश का उपयोग करके, टिश्यू पैड लें और इसे फिब्रिनोजेन और थ्रोम्बिन सीलेंट समाधानों में समान रूप से मिलाएं। यहां यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि ऊतक पैड सीसीए चीरा को कवर करने के लिए काफी बड़ा है।
और एक बार जब यह दो समाधानों में मिलाया जाता है, तो इसे तुरंत चीरा पर रखा जाना चाहिए, ताकि अधिक जमाव और खराब आसंजन को रोका जा सके। एक बार दो समाधानों के बीच मिलाया, सीसीए चीरा करने के लिए ऊतक पैड को हटा दें। ऊतक पैड को मध्यम दबाव के साथ चीरा पर नीचे फ्लैट रखें, और खुले संदंश करें।
टिश्यू पैड को जगह में पकड़े हुए डिस्टल माइक्रोवैस्कुलर क्लिप को तेजी से हटा दें। इसके बाद, धीरे-धीरे ऊतक पैड से दबाव को कम करें, जिससे चीरा क्षेत्र के नीचे रक्त प्रवाहित हो सके। अब, धीरे-धीरे और धीरे-धीरे समीपस्थ माइक्रोवैस्कुलर क्लिप से दबाव जारी करें, फिर पूरी तरह से हटा दें।
शीर्ष क्लिप को हटाने से थोड़ी मात्रा में रक्त को सीलेंट सक्रिय करने की अनुमति देता है। डिस्टल क्लिप की एक स्थिर रिहाई चीरा साइट पर एक क्रमिक दबाव वृद्धि की अनुमति देता है, आगे सक्रिय करने और एक असफल मरम्मत को रोकने में मदद । अंत में, एक बार पोत को सील कर दिया जाता है, घाव को भंग करने योग्य 6-0 टांके के साथ सीवन करें।
इस प्रोटोकॉल में, मध्य मस्तिष्क धमनी ऑक्क्यूशन, या एमसीएओ, 24 वयस्क पुरुष चूहों पर किया गया था। ईसीए लिगेशन के एक परिहार और एनाल्जेसिया के अलावा एमसीएओ के बाद ४८ घंटे में कम वजन घटाने की ओर एक प्रवृत्ति दिखाई । फिलामेंट हटाने के पांच मिनट बाद एमसीए के मस्तिष्क क्षेत्र में क्षेत्रीय मस्तिष्क रक्त प्रवाह में काफी वृद्धि हुई ।
परफ्यूजन को सीसीए पोत की मरम्मत के बाद एमसीए क्षेत्र में परफ्यूजन में वृद्धि के साथ पोत की मरम्मत तक बनाए रखा गया था । इससे पता चलता है कि सीसीए की मरम्मत ने अकेले विलिस के सर्कल पर निर्भरता की तुलना में इस्कीमिक क्षेत्र में रक्त परफ्यूजन की अनुमति दी । एक टी 2 भारित एमआरआई कुल एलवी निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था और डीटीआई स्कैन MCAO के बाद ४८ घंटे में कोर एलवी निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया ।
इन दोनों गुटों में कोई खास अंतर नहीं था। दिलचस्प बात यह है कि सीसीए मरम्मत समूह में कुल और कोर एलवी के लिए परिवर्तनशीलता काफी कम हो गई थी। हमारे विश्लेषण से संकेत मिलता है कि उपचार समूह के प्रति कम जानवरों के लिए एलवी में 30% की कमी प्रदर्शित करने की आवश्यकता होगी, एमसीएओ के बाद, सीसीए की मरंमत का उपयोग कर, बनाम ठेठ सीसीए ligated प्रक्रिया ।
इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह सुनिश्चित करने के लिए याद रखना महत्वपूर्ण है कि ऊतक पैक सीसीए चीरा को कवर करने के लिए पर्याप्त आकार का है। इसके अलावा, सीसीए पर पैड रखने से पहले, सीलेंट ओवर-कोडा गुलाटिंग को रोकने के लिए गति महत्वपूर्ण है।