この方法は、これらのモデルに関連付けられている削減方法や再現性を向上させる方法など、実験ストローク分野の主要な質問に答える上で役立ちます。この技術の主な利点は、一般的な頸動脈を介して再灌流を可能にするため、動物間で解剖学的に変化するウィリスの円に依存しないため、実験的な結果測定に見られる変動に寄与する可能性がある。CCA容器の修理手順は、CCAが完全に特許を取得していることを確認するためにシーラントを使用する際に伴う技術的な困難のために、CCAの修理ステップが困難であるため、この方法の視覚的なデモンストレーションは、重要です, 修復後.
まず、テストプロトコルに従ってマウスを準備し、麻酔します。その後、15個のメスブレードを使用して、露出した腹側頸部に1.5cmの正中線切開を行います。鈍解解法を用いて、唾液腺を横に静かに引き込み、気管を露出させる。
その後、周囲の組織および迷走神経から解放された一般的な頸動脈(CCA)を解剖する。この後、CCAの下に解解不可能な6-0縫合糸の2つの小さなセクションを渡し、CCAに後側を、そして腹側を迷走神経に渡す。1つのシルクネクタイを外科医に近づけ、CCAの周りにゆるく結びます。
その後、内側頸動脈と外頸動脈の分岐に向かって2番目のシルクネクタイをゆるやかに結びます。次に、遠位のネクタイのすぐ上に微小血管クリップを適用し、分岐が妨げられないようにします。CCAに小さな穴を作るためにマイクロ静脈はさみを使用してください。
7-0シリコーンコーティングされたマイクロフィラメントをCCAに挿入し、微小血管クリップに向かって進めます。次に、遠位のネクタイを締めてフィラメントを所定の位置に固定します。そして、微小血管クリップを取り外すためにクリップホルダーを使用してください。
次に、フィラメントを内部頸動脈、またはICAに進めます。フィラメントヘッドが遠位のネクタイを通過したら、ネクタイをしっかりと引っ張り、失血を防ぎます。遠位シルクのネクタイを使用して、CCAを持ち上げてマウスの体の外側に引っ張り、フィラメントをベンドに導き、翼状突き動脈(PPA)の開口部を越えて曲がります。
フィラメントが所定の位置に置かれたら、遠位シルクのネクタイをさらに締めて固定します。MCAO期間の終わりに、白いフィラメントヘッドがはっきりと見えるまでフィラメントを引き込む。その後、遠位CCAのネクタイを緩めて、フィラメントヘッドを容器から取り除きます。
次に、フィラメントヘッドを容器から完全に取り外します。この後、微小血管クリップを水平位置に配置し、CCA分岐に向かって、遠位のネクタイの隣に置きます。その後、外科医に向かって、近位CCAネクタイの下に別のクリップを配置します。
慎重にシルクのネクタイの両方を除去するためにDumont 5鉗子を使用してください。そして、滅菌綿棒を使用して領域を乾燥させます。その後、フィブリノーゲンとトロンビンシーラント溶液1と2を無菌ペトリ皿に加えます。
微小静脈はさみと鈍解解法を用いて、胸部腫筋の薄い腹側スライスを得る。次に、Dumont 5鉗子を使用して、組織パッドを取り、フィブリノーゲンおよびトロンビンシーラント溶液全体に均等に混合する。ここでは、組織パッドがCCA切開をカバーするのに十分な大きさであることを確認することが重要です。
そして、それが2つの溶液全体に混合されると、それは過剰凝固および貧弱な接着を防ぐために、切開の上に直ちに置かれなければならない。2つの溶液の間に混合したら、CCA切開部に組織パッドを取り除く。組織パッドを中圧で切開部に平らにし、鉗子を開きます。
組織パッドを所定の位置に保持したまま、遠位微小血管クリップを素早く取り外します。次に、組織パッドからの圧力をゆっくりと緩和し、切開領域の下で血液が流れることを可能にする。さて、ゆっくりと穏やかに近位微小血管クリップからの圧力を解放し、その後、完全に除去する。
トップクリップを除去すると、少量の血液がシーラントを活性化することができます。遠位クリップの安定した解放は切開の場所で徐々に圧力の増加を可能にし、さらに活性化し、失敗した修理を防ぐのに役立つ。最後に、容器が密封されたら、解きもらえる6-0縫合糸で創傷を縫合する。
このプロトコルでは、中大脳動脈閉塞、またはMCAOを、24匹の成体雄マウスに対して行った。ECAライゲーションの回避と鎮痛の追加は、MCAO後48時間で減量を減少させる傾向を示した。フィラメント除去の5分後、MCAの脳領域において、領域的脳血流が有意に増加した。
灌流は、CCA容器の修理後、MCA領土への灌流の増加と、船舶の修理まで維持された。これは、CCAの修復は、ウィリスの円だけに依存と比較して、虚血領域への血液灌流の増加を可能にしたことを示唆している。T2加重MRIを使用して総LVを決定し、DTIスキャンを使用してMCAOの48時間後にコアLVを決定しました。
これら2つのグループの間に有意な差はなかった。興味深いことに、CCA修理グループでは、トータルLVとコアLVの変動性が大幅に減少しました。我々の分析は、典型的なCCA合動手順に対して、MCAOに続いて、LVの30%削減を実証するために必要な動物が治療群あたりより少ないことが示された。
この手順を試みる間、組織パックがCCA切開をカバーするのに十分なサイズであることを確認することが重要です。また、速度が重要であり、シーラント過凝固を防止するために、パッドをCCAに配置する前に。
