Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål i det eksperimentelle slagfeltet, for eksempel hvordan du reduserer knyttet til disse modellene, og hvordan du kan forbedre reproduserbarheten. Den største fordelen med denne teknikken er at den tillater re-perfusjon via den vanlige halspulsåren, og derfor ikke er avhengig av sirkelen av Willis, som kan variere anatomisk mellom dyr, og derfor kan bidra til variasjon sett i eksperimentelle utfallstiltak. Visuell demonstrasjon av denne metoden er kritisk, da reparasjonstrinnene for CCA-fartøyet er vanskelige å lære på grunn av de tekniske vanskelighetene som er involvert ved bruk av tetningsmassen for å sikre at CCA er helt patent, etter reparasjon.
For å begynne, forberede og bedøve musen i henhold til testprotokollen. Bruk deretter et nummer 15 skalpellblad for å lage et 1,5 cm midtlinjet snitt på den eksponerte ventralhalsen. Ved hjelp av stumpe disseksjonsteknikker, trekk forsiktig spyttkjertlene til siden, for å eksponere luftrøret.
Deretter dissekere den vanlige halspulsåren, eller CCA, fri for det omkringliggende vevet og vagalnerven. Etter dette, passere to små deler av en ikke-oppløselig 6-0 sutur under CCA, dorsal til CCA, og ventral til vagal nerve. Tegn ett silkebånd nærmere kirurgen, og bind det løst rundt CCA.
Deretter knytter du løst et andre silkeslips mot bifurcation av de indre og eksterne halspulsårene. Deretter påfør et mikrovaskulært klips like over det distale slipset, slik at bifurcation ikke er blokkert. Bruk mikro venøs saks for å lage et lite hull i CCA.
Sett inn en 7-0 silikonbelagt mikrofilament i CCA, og sett den mot den mikrovaskulære klemmen. Stram deretter det distale slipset for å feste filamentet på plass. Og bruk klipsholdere til å fjerne den mikrovaskulære klemmen.
Deretter går du filamentet inn i den indre halspulsåren, eller ICA. Når filamenthodet passerer det distale slipset, trekk slipset strammere, for å forhindre blodtap. Bruk det distale silkebåndet, løft og trekk CCA til den ytre siden av musens kropp, og styre filamentet til svingen, forbi åpningen av pterygopalatinarterien eller PPA.
Når filamentet er på plass, fest den ved å stramme det distale silkebåndet videre. På slutten av MCAO-perioden trekker du filamentet tilbake til det hvite filamenthodet er godt synlig. Løsne deretter det distale CCA-slipset akkurat nok til å fjerne filamenthodet mesteparten av veien, ut av fartøyet.
Deretter fjerner du filamenthodet helt fra fartøyet. Etter dette plasserer du en mikrovaskulær klips i horisontal stilling, mot CCA-bifurcation, og ved siden av det distale slipset. Plasser deretter et annet klipp under det proksimale CCA-slipset, mot kirurgen.
Bruk Forsiktig Dumont 5 tang for å fjerne begge silkebåndene. Og tørk området ved hjelp av sterile bomullsknopper. Deretter legger Fibrinogen og Thrombin tetningsmasse løsninger en og to, til en steril petriskål.
Ved hjelp av mikro venøs saks og stump disseksjon teknikk, få en tynn ventral skive sternocleidomastoid muskel. Deretter, ved hjelp av Dumont 5 tang, ta vev pad og bland den jevnt over Fibrinogen og Thrombin tetningsmasse løsninger. Her er det viktig å sikre at vevsputen er stor nok til å dekke CCA-snittet.
Og når det er blandet over de to løsningene, må det umiddelbart plasseres over snittet, for å forhindre overkoagulasjon og dårlig vedheft. Når blandet mellom de to løsningene, fjerne vev pad til CCA snitt. Plasser vevsputen flatt ned på snittet med middels trykk, og åpne tang.
Fjern raskt den distale mikrovaskulære klemmen, mens du holder vevsputen på plass. Deretter lindrer sakte trykket fra vevsputen, slik at blodet kan strømme under snittområdet. Nå, sakte og forsiktig frigjøre trykket fra den proksimale mikrovaskulære klipsen, og fjern deretter helt.
Fjerning av toppklemmen gjør at en liten mengde blod kan aktivere tetningsmassen. En jevn frigjøring av det distale klippet gir en gradvis trykkøkning på snittstedet, aktiverer videre og bidrar til å forhindre en mislykket reparasjon. Til slutt, når fartøyet er forseglet, suturer såret med oppløselige 6-0 suturer.
I denne protokollen ble midtarterien okklusjon, eller MCAO, utført på 24 voksne hannmus. En unngåelse av ECA ligation og tillegg av analgesi viste en trend mot redusert vekttap på 48 timer etter MCAO. Fem minutter etter fjerning av filament økte den regionale hjerneblodstrømmen betydelig i hjerneområdet til MCA.
Perfusjonen ble opprettholdt opp til fartøyets reparasjon, med en økning i perfusjon til MCA-territoriet, etter reparasjon av CCA-fartøy. Dette tyder på at CCA reparasjon tillot økt blod perfusjon til iskemisk territorium, sammenlignet med avhengighet av sirkelen av Willis alene. En T2 vektet MR ble brukt til å bestemme totalt LV og DTI skanner ble brukt til å bestemme kjernen LV på 48 timer etter MCAO.
Det var ingen signifikant forskjell mellom disse to gruppene. Interessant, at en variasjon for total og kjerne LV ble betydelig redusert i CCA reparasjonsgruppen. Vår analyse indikerte at færre dyr per behandlingsgruppe ville være nødvendig for å demonstrere en 30% reduksjon i LV, etter MCAO, ved hjelp av CCA reparasjon, versus typisk CCA ligated prosedyre.
Mens du prøver denne prosedyren, Det er viktig å huske å sikre vev pakning er av tilstrekkelig størrelse til å dekke CCA snitt. Hastigheten er også viktig, for å forhindre at tetningsmassen måse overkoaguleres, før du plasserer puten på CCA.