Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo experimental de derrame, como como reduzir as associadas a esses modelos e como melhorar a reprodutibilidade. A principal vantagem desta técnica é que ela permite a re-perfusão através da artéria carótida comum, e, portanto, não depende do círculo de Willis, que pode variar anatomicamente entre os animais, podendo, portanto, contribuir para a variabilidade vista em medidas experimentais de desfecho. A demonstração visual deste método é fundamental, pois as etapas de reparo da embarcação CCA são difíceis de aprender devido à dificuldade técnica envolvida ao utilizar o selante para garantir que a CCA esteja totalmente patenteada, após o reparo.
Para começar, prepare e anestesia o mouse de acordo com o protocolo de teste. Em seguida, use uma lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão de linha média de 1,5 cm no pescoço ventral exposto. Usando técnicas de dissecção contundente, retraia suavemente as glândulas salivares para o lado, para expor a traqueia.
Em seguida, dissecar a artéria carótida comum, ou CCA, livre do tecido circundante e nervo vagal. Depois disso, passe duas pequenas seções de uma sutura 6-0 não dissolável abaixo da CCA, dorsal para a CCA, e ventral para o nervo vagal. Desenhe uma gravata de seda mais perto do cirurgião, e amarre-a vagamente ao redor da CCA.
Em seguida, amarre uma segunda gravata de seda em direção à bifurcação das artérias carótidas internas e externas. Em seguida, aplique um clipe microvascular logo acima da gravata distal, garantindo que a bifurcação não seja obstruída. Use uma tesoura micro venosa para fazer um pequeno buraco na CCA.
Insira um micro filamento revestido de silicone 7-0 no CCA e avance-o em direção ao clipe microvascular. Em seguida, aperte a gravata distal para fixar o filamento no lugar. E use os suportes de clipe para remover o clipe microvascular.
Em seguida, avance o filamento para a artéria carótida interna, ou ICA. Uma vez que a cabeça de filamento passe a gravata distal, puxe a gravata mais firmemente, para evitar a perda de sangue. Usando a gravata de seda distal, levante e puxe a CCA para o lado externo do corpo do rato, e guie o filamento até a curva, passando pela abertura da artéria pterygopalatina, ou PPA.
Uma vez que o filamento esteja no lugar, fixe-o apertando ainda mais a gravata de seda distal. No final do período MCAO, retraia o filamento até que a cabeça de filamento branco esteja claramente visível. Em seguida, solte a gravata CCA distal apenas o suficiente para remover a cabeça de filamento a maior parte do caminho, para fora do vaso.
Em seguida, remova totalmente a cabeça de filamento da nave. Depois disso, coloque um clipe microvascular na posição horizontal, em direção à bifurcação CCA, e ao lado da gravata distal. Em seguida, coloque outro clipe abaixo da gravata CCA proximal, em direção ao cirurgião.
Use cuidadosamente dumont 5 fórceps para remover ambos os laços de seda. E seque a área usando brotos de algodão estéreis. Em seguida, adicione soluções de fibrinogen e selante trombina um e dois, a uma placa de Petri estéril.
Utilizando tesoura micro venosa e técnica de dissecção contundente, obtenha uma fina fatia ventral do músculo estenicleidomastoide. Em seguida, usando o Dumont 5 fórceps, pegue o bloco de tecido e misture-o uniformemente através das soluções de fibrinogen e selante thrombin. Aqui é importante garantir que a almofada de tecido seja grande o suficiente para cobrir a incisão CCA.
E uma vez misturado entre as duas soluções, deve ser imediatamente colocado sobre a incisão, para evitar a coquelulação excessiva e a má adesão. Uma vez misturado entre as duas soluções, remova a almofada de tecido para a incisão CCA. Coloque a almofada de tecido plana sobre a incisão com pressão média e asseps abertos.
Remova rapidamente o clipe microvascular distal, mantendo a almofada de tecido no lugar. Em seguida, alivie lentamente a pressão do bloco de tecidos, permitindo que o sangue flua sob a área de incisão. Agora, solte lentamente e suavemente a pressão do clipe microvascular proximal, em seguida, remova completamente.
A remoção do clipe superior permite que uma pequena quantidade de sangue ative o selante. Uma liberação constante do clipe distal permite um aumento gradual de pressão no local da incisão, ativando ainda mais e ajudando a evitar um reparo falho. Finalmente, uma vez que o vaso é selado, suturar a ferida com suturas dissolvíveis 6-0.
Neste protocolo, foi realizada oclusão da artéria cerebral média, ou MCAO, em 24 camundongos adultos. A prevenção da ligadura do ECA e a adição de analgesia mostraram tendência de redução da perda de peso em 48 horas após mcao. Cinco minutos após a remoção do filamento, o fluxo sanguíneo cerebral regional aumentou significativamente na região cerebral do MCA.
A perfusão foi mantida até o reparo da embarcação, com aumento da perfusão ao território mca, após reparo da embarcação CCA. Isso sugere que o reparo da CCA permitiu o aumento da perfusão de sangue ao território isquêmico, em comparação com a dependência do círculo de Willis sozinho. Uma ressonância magnética ponderada T2 foi usada para determinar o total de LV e DTI scans foram usados para determinar a LV do núcleo em 48 horas após mcao.
Não houve diferença significativa entre esses dois grupos. Curiosamente, que uma variabilidade para lv total e núcleo foi significativamente reduzida no grupo de reparação CCA. Nossa análise indicou que menos animais por grupo de tratamento seriam necessários para demonstrar uma redução de 30% na LV, após mcao, utilizando reparo CCA, versus procedimento típico de ligadura CCA.
Ao tentar este procedimento, é importante lembrar para garantir que a embalagem de tecido seja de tamanho suficiente para cobrir a incisão CCA. Além disso, a velocidade é importante, para evitar a sobreagulação do selante, antes de colocar a almofada na CCA.
