Den här metoden kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i det experimentella strokefältet, till exempel hur du kan minska i samband med dessa modeller, och hur man kan förbättra reproducerbarheten. Den största fördelen med denna teknik är att det tillåter re-perfusion via den gemensamma halspulsådern, och därför inte är beroende av cirkeln av Willis, som kan variera anatomiskt mellan djur, och därför kan bidra till variabiliteten ses i experimentella resultat åtgärder. Visuell demonstration av denna metod är kritisk, eftersom CCA-fartyg reparationssteg är svåra att lära sig på grund av den tekniska svårigheten när du använder tätningsmedel för att säkerställa att CCA är helt patent, efter reparation.
För att börja, förbereda och bedöva musen enligt testprotokollet. Använd sedan ett nummer 15 skalpell blad för att göra en 1.5cm mittlinjen snitt på den exponerade ventrala halsen. Använda trubbiga dissektion tekniker, försiktigt dra tillbaka spottkörtlarna åt sidan, att exponera luftstrupen.
Sedan dissekera den gemensamma halspulsådern, eller CCA, fri från den omgivande vävnaden och vagal nerv. Efter detta passera två små avsnitt av en icke-dissolvable 6-0 sutur under CCA, dorsala till CCA, och ventrala till vagala nerv. Rita en siden slips närmare kirurgen, och knyta den löst runt CCA.
Sedan löst knyta en andra siden slips mot bifurkation av de inre och yttre halspulsådern. Därefter applicera ett mikrovaskulärt klipp strax ovanför den distala slipsen, vilket säkerställer att bifurkationen inte hindras. Använd mikro venös sax för att göra ett litet hål i CCA.
Sätt in en 7-0 silikonbelagd mikroglödtråd i CCA, och för den vidare mot det mikrovaskulära klippet. Dra sedan åt den distala slipsen för att fästa glödtråden på plats. Och använd klipphållare för att ta bort det mikrovaskulära klippet.
Därefter, förväg glödtråden i den inre halspulsådern, eller ICA. När glödtråden huvudet passerar den distala slips, dra slips hårdare, för att förhindra blodförlust. Använda den distala siden slips, lyft och dra CCA till den yttre sidan av musens kropp, och styra glödtråden till böjen, förbi öppnandet av pterygopalatine artär, eller PPA.
När glödtråden är på plats, säkra den genom att dra åt den distala siden slips ytterligare. Vid slutet av MCAO-perioden drar du tillbaka glödtråden tills det vita glödtrådshuvudet är väl synligt. Sedan lossa den distala CCA slips precis tillräckligt för att ta bort glödtråden huvudet större delen av vägen, ur kärlet.
Därefter helt bort glödtråden huvudet från kärlet. Efter detta, placera en mikrovaskulär klämma i det horisontella läget, mot CCA bifurkation, och bredvid den distala slips. Placera sedan ett annat klipp under den proximala CCA slips, mot kirurgen.
Använd försiktigt Dumont 5-forceps för att ta bort båda silkesbanden. Och torka området med hjälp av steril bomullspinnar. Lägg sedan till Fibrinogen och Trombin tätningsmedel lösningar ett och två, till en steril Petriskål.
Med hjälp av mikro venös sax och trubbig dissekering teknik, erhålla en tunn ventrala skiva sternocleidomastoid muskel. Sedan, med hjälp av Dumont 5-tlysen, ta vävnadsdynan och blanda den jämnt över Fibrinogen- och Trombin-tätningsantlösningarna. Här är det viktigt att se till att vävnadsdynan är tillräckligt stor för att täcka CCA-snittet.
Och när det är blandat över de två lösningarna, måste det omedelbart placeras över snittet, för att förhindra överkoagulation och dålig vidhäftning. När blandas mellan de två lösningarna, ta bort vävnadsdynan till CCA snittet. Placera vävnadsplattan platt ner på snittet med medelhögt tryck, och öppna tlyn.
Ta snabbt bort det distala mikrovaskulära klippet, medan du håller vävnadsdynan på plats. Därefter lindrar långsamt trycket från vävnadsdynan, vilket gör att blodet kan flöda under snittet. Nu, långsamt och försiktigt släppa trycket från den proximala mikrovaskulära klippet, sedan ta bort helt.
Borttagning av toppklämman gör att en liten mängd blod kan aktivera tätningsmedlet. En stadig frisättning av det distala klippet möjliggör en gradvis tryckökning vid snittplatsen, aktiveras ytterligare och hjälper till att förhindra en misslyckad reparation. Slutligen, när kärlet är förseglat, suturera såret med dissolvable 6-0 suturer.
I detta protokoll, mellersta cerebral gatan ocklusion, eller MCAO, utfördes på 24 vuxna hane möss. Ett undvikande av ECA ligering och tillägg av analgesi visade en trend mot minskad viktminskning vid 48 timmar post MCAO. Fem minuter efter glödtråden avlägsnande, den regionala cerebrala blodflödet ökade avsevärt i regionen hjärnan i MCA.
Perfusionen upprätthölls fram till fartyget reparation, med en ökning av perfusion till MCA territorium, efter CCA fartyg reparation. Detta tyder på att CCA reparation tillåts ökad blodperfusion till ischemisk territorium, jämfört med beroende av kretsen av Willis ensam. En T2 viktad MRI användes för att bestämma totala LV och DTI skanningar användes för att bestämma core LV på 48 timmar efter MCAO.
Det fanns ingen signifikant skillnad mellan dessa två grupper. Intressant, att en variabilitet för total och core LV minskade avsevärt i CCA reparationsgruppen. Vår analys visade att färre djur per behandling grupp skulle krävas för att visa en 30% minskning av LV, efter MCAO, med hjälp av CCA reparation, kontra typiska CCA ligated förfarande.
Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att se till att vävnaden förpackningen är av tillräcklig storlek för att täcka CCA snitt. Dessutom är hastigheten viktig, för att förhindra tätningsmedel över-koagulera, innan du placerar dynan på CCA.