Name: preparing a 68ga-labeled arginine glycine aspartate (rgd)-peptide for angiogenesis
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate RGD-peptide for Angiogenesis at JoVE.com

Bu eser bir nükleer araştırma ve geliştirme programı Kore hükümeti (No. 2017M2A2A6A02019904) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı, Kore (NMG) hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri yönergelere uygun olarak bakım ve kullanım araştırma hayvanlar için Kore Enstitüsü radyolojik ve Tıbbi Bilimler hayvan çalışmalar Komitesi tarafından onaylanmış protokolleri altında yapılmıştır. Tüm reaktifler ve çözücüler satın ve daha fazla arıtma kullanılır. NOTA-RGD-peptidler edebiyat yöntemleri15göre hazırlanmıştır.
Dikkat: 68Ga pozitron ve gama ışınları yayar. Radyoaktif maddeler ile doğrudan...

<ol>
	<li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins.">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li><li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model.">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li><li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+&#945;v&#946;3+integrin+directed+therapeutics.">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as &#945;v&#946;3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li><li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting,+imaging,+and+therapy+of+tumors.">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li><li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+imaging+of+&#945;v&#946;3+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-,+di-+and+tetrameric+RGD+peptides.">PET imaging of &#945;v&#946;3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li><li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers:+Promising+agents+for+tumor+integrin+&#945;v&#946;3+PET+imaging.">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin &#945;v&#946;3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li><li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+&#945;v&#946;3expression.">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin &#945;v&#946;3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates.">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li><li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycosylated+RGD-containing+peptides:+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics.">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li><li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide.">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li><li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+Imaging+of+&#945;v&#946;3+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography.">Noninvasive Imaging of &#945;v&#946;3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li><li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-,+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles.">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li><li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilities+of+the+Fe(III),+Ga(III)+and+In(III)+chelates+of+N,N&#8242;,N&#8243;-triazacyclononanetriacetic+acid.">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N&#8242;,N&#8243;-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li><li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography.">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li><li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK)+for+the+Quantification+of+Integrin+&#945;v&#946;3.">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin &#945;v&#946;3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li><li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis.">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, 113-128 (2008).</li></ol>

Mevcut çalışma, biz αvβ3 integrin ve onun biyolojik değerlendirme hedefleyen bir radiopeptide hazırlamak için bir protokol tanıttı. Geleneksel ilaç geliştirme karmaşık bir yordam içerir. Başvuru bilgileri ve görece uzun değerlendirme zaman büyük miktarda gerektirir. Her ne kadar önerilen metodoloji hassas değerlendirme sürecinin yerini alamaz, bu sistem amaçlar eleme için kullanılabilir. Bu sistemi önemli ölçüde zaman ve maliyeti azaltmak önerdi.
<p class="jove_con...

Angiogenez yeni kan damarları geliştirme tarafından karakterize biyolojik bir süreçtir. İntegrin son derece anjiogenik tümör damarlarının ifade edilir ama yoktur çünkü birçok angiogenetic faktörler arasında αvβ3 integrin invasiveness ile ilişkili normal doku1.
Radiolabeled reseptör-bağlama peptidler αvβ3 integrin reseptörleri doğru yüksek bir yakınlık vardır, umut verici angiogenez ajanlar2,3 Imaging olarak kabul edilir arginin glisin aspartat (RGD) etki alanıyla , 4 , 5 , 6 , 7. birkaç Radyofarmasötikler evde beslenen hayvan için oluşturulmuş ve biyolojik özellikleri çeşitli hayvan modelleri8,9,10,11doğrulanmış. Bir radyonüklid açısından 68Ga diğer radioisotopes birçok avantajı vardır. İlk olarak, bu kullanıcılar için yüksek erişilebilirlik ve bir cyclotron gerekli değildir çünkü ekonomik açıdan avantajlıdır. İkinci olarak, 68Ga tabanlı Radyofarmasötikler daha doğru miktar sağlayan tek foton emisyon bilgisayarlı tomografi ile (SPECT), karşılaştırıldığında yüksek uzaysal çözünürlük üretmek. Son olarak, 67.71 dakika half-life 68Ga küçük peptidler veya proteinler hazırlanması için yeterli olabilir.
68Ga ile istikrarlı bir karmaşık üretmek için birçok şelatörlerin geliştirilmiştir. Temsilcisi şelatörlerin vardır 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic asit (TETA), diethylenetriaminepentaacetic 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic asit (DOTA), 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacetic asit (NOTA) asit (DTPA) ve N, N'-di(2-hydroxybenzyl) ethylenediamine-N, N'-diacetic asit (HBED). NOTA 68Ga (günlük istikrar sürekli 30.98)12,13,14ile son derece kararlı bir kompleks oluşturmak üzere bildirilmiştir.
Bu da çalışmanın amacı yeni radiopeptide (Şekil 1) gelişimi için özlü bir protokol sağlamaktır. Örnek olarak, 68Ga etiketli RGD-peptidler ve mevcut yöntemleri xenograft modelinde bu analogları biyolojik değerlendirilmesi için hazır olun.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:231px;">68Ga/68Ge generator</td>
			<td style="width:187px;">ITG Company</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:239px;">10 mCi&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Hydrogen chloride solution</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-aldrich</td>
			<td>84429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Sodium acetate</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">C18 reverse-phase cartridge</td>
			<td style="width:187px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">WAT020515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:231px;">0.22-&#956;m sterile filter</td>
			<td style="width:187px;">Milllipore</td>
			<td style="width:119px;">SLGV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Radio-TLC scanner</td>
			<td style="width:187px;">Bioscan</td>
			<td style="width:119px;">AR2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">ITLC paper</td>
			<td style="width:187px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">SGI001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Citric acid</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-aldrich</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">HPLC</td>
			<td style="width:187px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:239px;">Waters 1525 system containing binary pump, photo diode array (Waters 2998), radioactivity detector (Raytest, Gabi)</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:231px;">C-18 colunm</td>
			<td style="width:187px;">Develosil</td>
			<td style="width:119px;">HG31546150W</td>
			<td>ODS-HG-5, 150 &#8569; 4.6 mm, 5&#956;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:187px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:119px;">14-650-359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:119px;">302031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Dulbecco&#39;s modified Eagle media&#160;</td>
			<td style="width:187px;">Thermo fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:187px;">Thermo fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">T175 flasks&#160;</td>
			<td style="width:187px;">Corning</td>
			<td>CLS431080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:187px;">Thermo fisher scientific</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:187px;">Thermo fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">15240112</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">&#947;-counter</td>
			<td style="width:187px;">Perkin Elmer</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:239px;">1480 Wizard 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Insunlin syringe</td>
			<td style="width:187px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">326105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Synringe pump</td>
			<td style="width:187px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">70-4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">micro-PET/CT</td>
			<td style="width:187px;">Siemens Inveon</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparing a 68ga-labeled arginine glycine aspartate (rgd)-peptide for angiogenesis

αvβ3 integrin tümör hücre göç ve anjiogenezi dahil bir heterodimeric yapışma moleküldür. İntegrin nerede genellikle düşük bir konsantrasyonu vardır anjiogenik tümör endotel hücreleri, overexpressed. Bu belirli ifade αvβ3 anjiogenik ve görüntüleme uyuşturucu için geçerli bir biyomarker kolaylaştırır. Fonksiyonel bir görüntüleme yöntemi pozitron emisyon tomografisi (PET) biyokimyasal ve fizyolojik hakkında bilgi vivo içindebenzersiz yüksek hassasiyeti nanomolar ölçekte nedeniyle değişiklikleri sağlar. Bu nedenle, evde beslenen hayvan Radyofarmasötikler radiometal tabanlı tümör angiogenez non-invaziv miktar için büyük bir dikkat aldık. Bu İnceleme angiogenez değerlendirme için yeni bir radiometal etiketli peptid hazırlamak için sistemik bir protokol sağlar. Bu iletişim kuralı radiochemical güvenilirlik, lipophilicity, hücre alımı, serum istikrar ve farmakokinetik özellikleri hakkında bilgi içerir. 68Ga-RGD-peptid temsilcisi evde beslenen hayvan ligandlar αvβ3 integrin doğru biridir. Burada, bir 68Ga-RGD-peptid ve onun biyolojik etkinliği değerlendirilmesi hazırlamak için bir protokol tanıtmak.

68GaCl3 NOTA-RGD-peptid ile şelasyon açıktı ve radiolabeling verim % 99 idi. Reaksiyon kirleri Şekil 2' de gösterildiği gibi başarılı bir şekilde kaldırıldı. 68Ga-RGD-peptid radiochemical saflığı 99 %'den büyük ve sentez sonundaki belirli aktivite 90-130 MBq/nmol (Şekil 3).
Hücre alımı değerleri 68için...

Watch this Scientific Journal Video about Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate RGD-peptide for Angiogenesis at JoVE.com

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate RGD-peptide for Angiogenesis

αvβ3 integrin angiogenez geçiren aktive endotel hücreleri son derece ifade yapışma protein türüdür. Böylece, integrin bütünlüğünü değerlendirmek Onkoloji büyük ilgi olmuştur. Burada, 68Ga etiketli radiopeptides hazırlamak için bir yöntem ve biyolojik etkinliğini değerlendirmek için bir yöntem sunar.

68Ga etiketli arginin glisin aspartat (RGD) hazırlama-peptid angiogenez için

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

Bu yöntem, RGD-Peptid etiketli Galyum 68'in hazırlanmasında anahtar soruların ve analoglarının biyolojik değerlendirilmesi yönteminin yanıtlatına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, yeni bir radyometal etiketli peptid gelişimi için basit bir sistemik protokol olmasıdır. Prosedürü gösteren Ki-Hye Jung, enstitümüzden bir post-doc olacak.Radyoetiketli galyum germanyum jeneratöründen radyoetiketli galyum triklorür eute 0.5 azılı hidroklorik asit kullanarak başlayın. 80 santigrat derecede azot gazı ile beş mililitre reaksiyon şişesinde bileşiğin temizlenmesi. Kurutulmuş bileşik bir azı kaşığı sodyum asetat argd peptit arginin glisin asetat veya RGD peptit 100 mikrogram eklenmesi izledi.Reaksiyon karışımını oda sıcaklığına soğumadan önce 5 dakika boyunca 80 derecede ısıtın. Ham ürünü yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile arındırmak için, çözümü bir C18 sütununa ekleyin ve çözümü C18 ters fazlı kartuştan geçirin. Kartuşun iki mililitre salin ile yıkayın ve 0,7 mililitre %95 etanol ile radyoetiketli peptid'i aşındırın ve ardından çözücünün 80 derecede azot gazı altında 20 dakika boyunca çıkarılmasını bekleyin.PBS'deki saflaştırılmış peptidin yeniden oluşturmasını ve radiolabeled ürünü steril 0,22 mikron steril süzgeçten filtrele. Peptiti bir mililitre steril salin çözeltisi içinde formüle edin ve bir mikrolitre peptit çözeltisini anında ince tabaka kromatografi plakasına yerleştirin. Daha sonra, radyo kimyasal verimi belirlemek için noktadan dokuz santimetre uzakta kadar sulu 0,1 molar sitrik asit içeren odada plaka geliştirmek.Peptitin in vivo hücresel alımını değerlendirmek için, bir kez tedavi 10 altı iyi plakalar için altı iyi plakalar başına bir kez 10 radyoetiketli RGD-peptid 111 kilobecquerel ile iyi 37 derece santigrat 30, 60, 90 veya 120 dakika triplicate. Kuluçka sonunda, kuyuları yıkama başına iki mililitre PBS ile iki kez yıkayın ve hücreleri PBS'de %0,25 Tripsin ve %0,02 EDTA ile 37 derecede 37 derecede üç ila beş dakika kaplayın. Daha sonra, bir gama sayacı üzerinde radiolabeled peptid alımını ölçmek için 15 mililitrekonik tüpler içine her kuyudan hücreleri aktarın.Radyoetiketli RGD-peptidin serum stabilitesini değerlendirmek için, 500 mikrolitre taze hazırlanmış fare serumu, 500 mikrolitre insan serumu ve 500 mikrolitre PBS ila 50 mikrolitre her numunenin 50 mikrolitresini ekleyin ve karışımları iki saate kadar 37 derecede kuluçkaya yatırın. Daha sonra her numunenin bir ila iki mikrolitresini 30, 60, 90 ve 120 dakikalık kuluçkadan sonra bir anlık ince tabaka kromatografi plakasına yerleştirin ve plakaları gösterildiği gibi geliştirin. Peptidin lipophililinite belirlemek için, bir octanal PBS sistemine radiolabeled RGD-peptid 10 mikrolitre ekleyin ve oda sıcaklığında beş dakika cömertçe şişeleri karıştırın.Daha sonra bir gama sayacı ile ölçmek için her katmandan örnek 100 mikrolitre hasat ile peptid toplamak. Radyoetiketli tümör modelleri oluşturmak için, enjekte edilecek BALB / c çıplak fare başına 28 gauge iğne ile donatılmış yarım inç insülin şırınga içine PBS 100 mikrolitre altıncı insan glioblastoma hücrelerine beş kez 10 yük ve her alıcının sol kanadına deri altında tümör hücreleri teslim. Peptidin pozitron emisyon tomografisi veya PET ile in vivo nicelemesi için, kafaya tümör taşıyan, anestezili fareyi PET gantry'ye yerleştirin ve 200 mikrolitre PBS pbs pbs'de 7,4 megabecquerel satarak liste modunda pet satmayı yaparken kuyruk ven üzerinden her xenograftatif fare modeline uygulayın.Ex vivo biyodistribution analizi için, xenografted, tümör taşıyan bir hayvanın kuyruk damarına 200 mikrolitre PBS radyoetiketli RGD-peptid 0.37 megabecquerel enjekte ve 30, 60, 90 ve 120 dakika enjeksiyon sonrası ilgi dokuları hasat. Sonra dokuları tartın ve radyoaktivitelerini bir gama sayacı ile ölçün. Şelasyondan sonra, reaksiyon kirleri başarıyla gösterildiği gibi yüksek performanslı sıvı kromatografi ile kaldırılabilir.Radyoetiketli RGD peptidin %99'dan daha fazla radyokimyasal saflığı, nanometre başına 90 ile 130 megabecquerel arasında sentezin sonunda belirli bir aktivite ile elde edilebilir. PET analizi karaciğer, böbrek, kalp, kas gibi büyük organlarda ilk yüksek alımı gösterir, yanı sıra tümör içinde. Analizin ilerleyen aşamalarında tümör bölgesi, peptidin kinetik stabilitesini gösteren, kas oranının değişmeden kalmasıyla tümör le açıkça görüntülenebilir.Ex vivo biyodistribution analizi, in vivo PET bulgularından beklendiği gibi tümörde birikmiş radyoaktivitenin zaman içinde azaldığını ortaya koymaktadır. Bu prosedürü denerken, metodolojimizin hassas biyolojik değerlendirme sürecinin yerini alamasa da, geleneksel ilaç geliştirme uygulamalarının zamanını ve maliyetini önemli ölçüde kullanmak için kullanılabileceğini unutmamak gerekir. Radyoaktif maddelerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve kişisel bir dosimetre ve termolüminesans dosimetre gibi uygun koruyucu ekipmanların kullanılması gibi önlemlerin her zaman bu işlemleri gerçekleştirirken alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Tıp

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Flüoresans Konfokal videomikroskopi kullanılarak tümör Angiogenesis İn vivo

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

İnsan Serum içinde N-metil-D-aspartat reseptör ya da dopamin-2 reseptör antikorları algılamak üzere yüksek verimli Flow Cytometry hücre bazlı bir deneyde

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

Sürekli IV İnfüzyon İnme-uyarılmış Beyin ödem Eğitim için Farelerde Arginin-vazopressin Reseptör Engelleyici Conivaptan için seçim Tedavisi Rota olduğunu

Stroke is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Stroke is complicated by brain edema and other pathophysiological events. Among ...

Surgical Angiogenesis in Porcine Tibial Allotransplantation: A New Large Animal Bone Vascularized Composite Allotransplantation Model

Domuz Tibial Allotransplantation cerrahi angiogenez: bileşik Allotransplantation Model yeni bir büyük hayvan kemik skarların

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic ...

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...