Name: use of autometallography to localize and semi-quantify silver in cetacean tissues
Uploaded: 2018-10-04T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues at JoVE.com

Vi takker Taiwan Cetacean Stranding nettverket for prøvetaking og oppbevaring, inkludert Taiwan Cetacean samfunnet, Taipei; Cetacean Research Laboratory (Prof Lien-Siang Chou), Institutt for økologi og evolusjonsbiologi, National Taiwan University, Taipei; National Museum of Natural Science (Dr. Chiou-Ju Yao), Taichung; og marinbiologi & Cetacean Research Center, National Cheng Kung University. Vi takker også skogbruk Bureau, Council of Agriculture, Executive Yuan om deres tillatelse.

Studien ble utført i henhold til internasjonale retningslinjer, og bruk av cetacean ble tillatt av rådet av landbruk av Taiwan (forskning tillater 104-07.1-SB-62).
1. vev eksempel forberedelse for ICP-MS analyse
Merk: Lever og nyre vev ble Hentet fra ferske døde og moderate autolyzed strandet cetaceans24, inkludert 6 strandet cetaceans av 4 ulike arter, 1 Grampus griseus (Gg), 2 Kogia spp. (Ko), 2 Lagenodelphis hosei</...

<ol>
	<li>McGillicuddy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+in+the+environment:+Sources,+detection+and+ecotoxicology.">Silver nanoparticles in the environment: Sources, detection and ecotoxicology.</a> Science Total Environment. 575, 231-246 (2017).</li><li>Yu, S. J., Yin, Y. G., Liu, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+in+the+environment.">Silver nanoparticles in the environment.</a> Environmental Science: Processes and Impacts. 15 (1), 78-92 (2013).</li><li>Hansen, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoproducts-+what+is+actually+available+to+European+consumers?.">Nanoproducts- what is actually available to European consumers?.</a> Environmental Science: Nano. 3 (1), 169-180 (2016).</li><li>Vance, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+in+the+real+world:+Redeveloping+the+nanomaterial+consumer+products+inventory.">Nanotechnology in the real world: Redeveloping the nanomaterial consumer products inventory.</a> Beilstein Journal of Nanotechnology. 6, 1769-1780 (2015).</li><li>Farre, M., Gajda-Schrantz, K., Kantiani, L., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecotoxicity+and+analysis+of+nanomaterials+in+the+aquatic+environment.">Ecotoxicity and analysis of nanomaterials in the aquatic environment.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 393 (1), 81-95 (2009).</li><li>Walters, C. R., Pool, E. J., Somerset, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecotoxicity+of+silver+nanomaterials+in+the+aquatic+environment:+a+review+of+literature+and+gaps+in+nano-toxicological+research.">Ecotoxicity of silver nanomaterials in the aquatic environment: a review of literature and gaps in nano-toxicological research.</a> Journal of Environmental Science and Health. Part A, Toxic/hazardous Substances &amp; Environmental Engineering. 49 (13), 1588-1601 (2014).</li><li>Levard, C., Hotze, E. M., Lowry, G. V., Brown, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+transformations+of+silver+nanoparticles:+impact+on+stability+and+toxicity.">Environmental transformations of silver nanoparticles: impact on stability and toxicity.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (13), 6900-6914 (2012).</li><li>Massarsky, A., Trudeau, V. L., Moon, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+the+environmental+impact+of+nanosilver.">Predicting the environmental impact of nanosilver.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 38 (3), 861-873 (2014).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity,+bioaccumulation,+and+biotransformation+of+silver+nanoparticles+in+marine+organisms.">Toxicity, bioaccumulation, and biotransformation of silver nanoparticles in marine organisms.</a> Environmental Science and Technology. 48 (23), 13711-13717 (2014).</li><li>Buffet, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+marine+mesocosm+study+on+the+environmental+fate+of+silver+nanoparticles+and+toxicity+effects+on+two+endobenthic+species:+the+ragworm+Hediste+diversicolor+and+the+bivalve+mollusc+Scrobicularia+plana.">A marine mesocosm study on the environmental fate of silver nanoparticles and toxicity effects on two endobenthic species: the ragworm Hediste diversicolor and the bivalve mollusc Scrobicularia plana.</a> Science of the Total Environment. 470, 1151-1159 (2014).</li><li>Chen, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baseline+metal+concentrations+in+sediments+and+fish,+and+the+determination+of+bioindicators+in+the+subtropical+Chi-ku+Lagoon,+S+W+Taiwan.">Baseline metal concentrations in sediments and fish, and the determination of bioindicators in the subtropical Chi-ku Lagoon, S W Taiwan.</a> Marine Pollution Bulletin. 44 (7), 703-714 (2002).</li><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+silver+(Ag)+deposition+in+tissues+from+stranded+cetaceans+by+autometallography+(AMG).">Investigation of silver (Ag) deposition in tissues from stranded cetaceans by autometallography (AMG).</a> Environmental Pollution. , 534-545 (2018).</li><li>Chen, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+concentrations+of+four+Taiwanese+toothed+cetaceans+indicating+the+silver+and+cadmium+pollution+in+the+western+Pacific+Ocean.">Tissue concentrations of four Taiwanese toothed cetaceans indicating the silver and cadmium pollution in the western Pacific Ocean.</a> Marine Pollution Bulletin. 124 (2), 993-1000 (2017).</li><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotoxicity+of+silver+nanoparticles+(AgNPs)+on+the+leukocytes+of+common+bottlenose+dolphins+(Tursiops+truncatus).">Immunotoxicity of silver nanoparticles (AgNPs) on the leukocytes of common bottlenose dolphins (Tursiops truncatus).</a> Scientific Reports. , (2018).</li><li>Bornhorst, J. A., Hunt, J. W., Urry, F. M., McMillin, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+sample+preservation+methods+for+clinical+trace+element+analysis+by+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry.">Comparison of sample preservation methods for clinical trace element analysis by inductively coupled plasma mass spectrometry.</a> American Journal of Clinical Pathology. 123 (4), 578-583 (2005).</li><li>Bonta, M., Torok, S., Hegedus, B., Dome, B., Limbeck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+sample+preparation+strategies+for+biological+tissues+and+subsequent+trace+element+analysis+using+LA-ICP-MS.">A comparison of sample preparation strategies for biological tissues and subsequent trace element analysis using LA-ICP-MS.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (7), 1805-1814 (2017).</li><li>Bischoff, K., Lamm, C., Erb, H. N., Hillebrandt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+formalin+fixation+and+tissue+embedding+of+bovine+liver+on+copper,+iron,+and+zinc+analysis.">The effects of formalin fixation and tissue embedding of bovine liver on copper, iron, and zinc analysis.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 20 (2), 220-224 (2008).</li><li>Miller, D. L., Yu, I. J., Genter, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Autometallography+in+Studies+of+Nanosilver+Distribution+and+Toxicity.">Use of Autometallography in Studies of Nanosilver Distribution and Toxicity.</a> International Journal of Toxicology. 35 (1), 47-51 (2016).</li><li>Anderson, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+persistence+and+clearance+of+aerosolized+silver+nanoparticles+in+the+rat+lung.">Influence of particle size on persistence and clearance of aerosolized silver nanoparticles in the rat lung.</a> Toxicological Sciences. 144 (2), 366-381 (2015).</li><li>Kim, W. Y., Kim, J., Park, J. D., Ryu, H. Y., Yu, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+study+of+gender+differences+in+accumulation+of+silver+nanoparticles+in+kidneys+of+Fischer+344+rats.">Histological study of gender differences in accumulation of silver nanoparticles in kidneys of Fischer 344 rats.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 72 (21-22), 1279-1284 (2009).</li><li>Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+autometallography+to+heavy+metal+toxicology.">Applications of autometallography to heavy metal toxicology.</a> Pharmacology Toxicology. 68 (6), 414-423 (1991).</li><li>Deroulers, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+huge+pathology+images+with+open+source+software.">Analyzing huge pathology images with open source software.</a> Diagnostic Pathology. 8, 92 (2013).</li><li>Shu, J., Dolman, G. E., Duan, J., Qiu, G., Ilyas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+colour+models:+an+automated+digital+image+analysis+method+for+quantification+of+histological+biomarkers.">Statistical colour models: an automated digital image analysis method for quantification of histological biomarkers.</a> BioMedical Engineering Online. 15, 46 (2016).</li><li>Geraci, J. R., Lounsbury, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specimen+and+data+collection.">Specimen and data collection.</a> Marine mammals ashore: a field guide for strandings. , 167-230 (2005).</li><li>Shih, C. -. C., Liu, L. -. L., Chen, M. -. H., Wang, W. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Investigation of heavy metal bioaccumulation in dolphins from the coastal waters off Taiwan. , (2001).</li><li>Liang, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+the+striatal+dopamine+transporter+and+novelty+seeking+and+cognitive+flexibility+in+opioid+dependence.">The relationship between the striatal dopamine transporter and novelty seeking and cognitive flexibility in opioid dependence.</a> Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 74, 36-42 (2017).</li><li>Spiess, A. N., Neumeyer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+R2+as+an+inadequate+measure+for+nonlinear+models+in+pharmacological+and+biochemical+research:+a+Monte+Carlo+approach.">An evaluation of R2 as an inadequate measure for nonlinear models in pharmacological and biochemical research: a Monte Carlo approach.</a> BMC Pharmacology. 10, 6 (2010).</li><li>Stoltenberg, M., Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+differentiation+of+autometallographically+traceable+metals+(Au,+Ag,+Hg,+Bi,+Zn):+protocols+for+chemical+removal+of+separate+autometallographic+metal+clusters+in+Epon+sections.">Histochemical differentiation of autometallographically traceable metals (Au, Ag, Hg, Bi, Zn): protocols for chemical removal of separate autometallographic metal clusters in Epon sections.</a> Histochemical Journal. 32 (11), 645-652 (2000).</li><li>Dimitriadis, V. K., Domouhtsidou, G. P., Raftopoulou, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+Hg+and+Pb+in+the+palps,+the+digestive+gland+and+the+gills+in+Mytilus+galloprovincialis+(L.)+using+autometallography+and+X-ray+microanalysis.">Localization of Hg and Pb in the palps, the digestive gland and the gills in Mytilus galloprovincialis (L.) using autometallography and X-ray microanalysis.</a> Environmental Pollution. 125 (3), 345-353 (2003).</li><li>Loumbourdis, N. S., Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autometallographic+tracing+of+mercury+in+frog+liver.">Autometallographic tracing of mercury in frog liver.</a> Environmental Pollution. 129 (2), 299-304 (2004).</li><li>Stoltenberg, M., Larsen, A., Kemp, K., Bloch, D., Weihe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autometallographic+tracing+of+mercury+in+pilot+whale+tissues+in+the+Faroe+Islands.">Autometallographic tracing of mercury in pilot whale tissues in the Faroe Islands.</a> International Journal of Circumpolar Health. 62 (2), 182-189 (2003).</li></ol>

Hensikten med artikkelen studien er å etablere en adjuvant metode å evaluere Ag distribusjonen på suborgan nivåer og beregne Ag konsentrasjonene i cetacean vev. Gjeldende protokollene inkluderer 1) bestemme Ag konsentrasjoner i cetacean vev av ICP-MS, 2) AMG analyse av par-matchet med kjente Ag konsentrasjoner, 3) etablering av regresjonsmodellen (CHAA) for å estimere Ag konsentrasjonen av AMG positive verdier, 4) evaluering av nøyaktighet og presisjon CHAA og 5) estimering av Ag konsentrasjoner av CHAA.
<p cla...

Silver nanopartikler (AgNPs) har vært mye brukt i kommersielle produkter, inkludert tekstiler, kosmetikk og helsevesenet elementer, på grunn av deres store antimikrobielle effekter1,2. Produksjon av AgNPs og antall AgNP inneholder produkter er derfor økt tid3,4. Men AgNPs kan bli sluppet inn i miljøet og akkumuleres i havet5,6. De har blitt den største kilden til Ag forurensning, og offentlige bevisstheten om miljømessige toksisitet av Ag er økende.
Statusen for AgNPs og Ag i det marine miljøet er innviklet og stadig skiftende. Tidligere studier har indikert at AgNPs kan forbli partikler, samlet, oppløse, reagere med ulike kjemiske arter, eller regenereres Ag+ ioner7,8. Flere typer Ag forbindelser, som AgCl, har blitt funnet i marine sedimenter, der de kan svelges av bunnlevende organismer og angi næringskjeden9,10. Ifølge en tidligere studie utført i Chi-ku lagune området langs sørvest kysten av Taiwan, Ag konsentrasjonen av marine sedimenter er svært lav og lik crustal overflod, og de av fisk leveren vev er vanligvis under gjenkjenning begrense (< 0.025 μg/g våt/våt)11. Tidligere studier i ulike land har imidlertid vist relativt høy Ag konsentrasjonene i lever cetaceans12,13. Ag konsentrasjonen i lever av cetaceans er alder-avhengige, antyder at kilden til Ag i kroppen er mest sannsynlig deres byttedyr12. Disse funnene videre foreslå biomagnification AG i dyr på høyere nivåer i næringskjeden. Barder kan som apex rovdyr i havet, ha lidd negative helseeffekter forårsaket av Ag/Ag forbindelser12,13,14. Viktigst, som cetaceans er mennesker pattedyr, og den negative helsemessige konsekvenser forårsaket av Ag/Ag forbindelser i cetaceans kan også forekomme i mennesker. Med andre ord, kunne cetaceans sentinel dyr for helse av marine miljø og mennesker. Derfor er helseeffektene, vev distribusjon og konsentrasjonen av Ag i cetaceans til stor bekymring.
Men konsentrasjonen av Ag/Ag forbindelser i cetacean vev kan måles ved Induktivt kombinert plasma masse spektroskopi (ICP-MS), er bruk av ICP-MS begrenset av dens høy kapitalkostnad (instrument og vedlikehold) og kravene til vev lagring /Preparation12,15. I tillegg er det vanligvis vanskelig å samle omfattende vevsprøver i alle undersøkelser av strandet cetacean tilfeller logistiske problemer, mangel på arbeidskraft, og mangel på beslektede ressurser12. Frossent prøvene for ICP-MS analyse lagres ikke lett på grunn av begrenset kjøling plassen og frossent prøver kan bli forkastet på grunn av ødelagte kjøling utstyr12. Disse nevnte hindringene hemme undersøkelser av forurensning i cetacean vev av ICP-MS analyse frossent utvalg. Formalin fast vevsprøver er relativt enkelt å samle under obduksjon av døde-strandet cetaceans. Derfor er det nødvendig å utvikle en brukervennlig og rimelig metode for å oppdage/mål tungmetallene i cetacean vev ved hjelp av formalin fast vevsprøver.
Selv om suborgan distribusjoner og konsentrasjoner av lut og alkaliske metaller kan bli endret under formalin-faste, parafin-embedded (FFPE) prosessen, bare mindre effekter på overgangen metaller, som Ag, har vært kjent16. Derfor har FFPE vev vært ansett som en ideell eksempel ressurs for metall lokalisering og målinger16,17. Autometallography (AMG), en histochemical prosess, kan forsterke tungmetaller som ulik størrelse gyllengul til svart AMG positive signaler på FFPE vev seksjoner, og disse forsterket tungmetaller kan visualiseres under * lys18, 19 , 20 , 21. dermed metoden AMG gir informasjon om suborgan distribusjonen av tungmetaller. Det kan gi viktig tilleggsinformasjon for å studere metabolske veier av tungmetaller i biologiske systemer fordi ICP-MS kan bare måle konsentrasjonen av tungmetaller på orgel nivå18. Digitalt bilde analyseprogramvare, for eksempel ImageJ, er videre utlignet til kvantitativ analyse av histologiske vev deler22,23. Ulik størrelse gyllen gul til svart AMG positive signaler av FFPE vev kan være kvantifisert og brukes til å beregne konsentrasjonen av tungmetaller. Selv om absolutt Ag konsentrasjonen ikke kan direkte bestemmes av AMG metoden med bilde kvantitativ analyse, kan det estimeres ved en regresjonsmodell basert på dataene innhentet fra bildet kvantitativ analyse og ICP-MS, kalt cetacean histologiske Ag analysen (CHAA). Vanskelighetene måle Ag konsentrasjoner av ICP-MS analyse i mest strandet cetaceans, CHAA er en verdifull adjuvant metode for å beregne Ag konsentrasjonene i cetacean vev, som ikke kan bestemmes ved ICP-MS analyse på grunn av manglende frosset vevsprøver. Dette dokumentet beskriver protokollen for en histochemical teknikk (AMG-metoden) for lokalisere Ag på suborgan nivå og analysen kalt CHAA å anslå Ag konsentrasjonen i lever og nyre vev av cetaceans.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58232/58232fig1.jpg"> Figur 1: flytskjema som viser etablering og anvendelse av cetacean histologiske Ag analysen (CHAA) for å estimere Ag konsentrasjoner. CHAA = cetacean histologiske Ag analysen, FFPE = Formalin-fast parafin-innebygd, ICP-MS = Induktivt kombinert plasma masse spectroscopy. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58232/58232fig1large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HQ Silver enhancement kit</td>
			<td>Nanoprobes</td>
			<td>#2012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgipath Paraplast</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>39601006</td>
			<td>Paraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ethanol</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>4026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Xylene</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>4328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silane coated slide</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>511614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass (25 x 50 mm)</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>24501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malinol</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>20092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM Haematoxylin Staining</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>3008-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin solution</td>
			<td>Chin I Pao Co., Ltd</td>
			<td>---</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip (1000 &#956;L)</td>
			<td>MDBio, Inc.</td>
			<td>1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPETMAN Classic P1000</td>
			<td>Gilson, Inc.</td>
			<td>F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Centrifuge Tube</td>
			<td>GeneDireX, Inc.</td>
			<td>PC115-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dogfish liver</td>
			<td>National Research Council of Canada</td>
			<td>DOLT-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dogfish muscle</td>
			<td>National Research Council of Canada</td>
			<td>DORM-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS)</td>
			<td>PerkinElmer Inc.</td>
			<td>PE-SCIEX ELAN 6100 DRC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeZone 6 liter freeze dry system</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>7752030</td>
			<td>For freeze drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND&#174; SILBERBRAND volumetric flask</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Z326283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mL standard vial, flat interior with 33 mm closure</td>
			<td>Savillex Corporation</td>
			<td>200-030-12</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitric acid, superpur&#174;, 65.0%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00441</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Plate/Stirrers</td>
			<td>Corning&#174;</td>
			<td>PC-220</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Shear lab mixer</td>
			<td>Silverson</td>
			<td>SL2T</td>
			<td>For homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile polypropylene sample jar (250mL)</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>6186L05</td>
			<td>For homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td>DS-Fi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td>ECLIPSE Ni-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon&#8482; Finesse&#8482; 325 manual microtome</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>A78100001H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu-Cut&#174; SRM&#8482; 200 rotary microtome</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>1429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade S35</td>
			<td>FEATHER&#174;</td>
			<td>207500000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide staining dish and cover</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>#3215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel staining rack</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>#3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon embedding center</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>S-EC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Citadel&#174; tissue processor</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>69800003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmer</td>
			<td>Lab-Line Instruments</td>
			<td>26005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Shandon Capshaw</td>
			<td>3964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1541-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 6.01 for windows</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td>Statistic software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel tissue embedding mould</td>
			<td>Shenyang Roundfin Trade Co., Ltd</td>
			<td>RD-TBM003</td>
			<td>For paraffin emedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of autometallography to localize and semi-quantify silver in cetacean tissues

Silver nanopartikler (AgNPs) har vært mye brukt i kommersielle produkter, inkludert tekstiler, kosmetikk og helsevesenet elementer, på grunn av sin sterke antimikrobielle effekter. De kan bli sluppet inn i miljøet og akkumuleres i havet. Derfor AgNPs er den viktigste kilden til Ag forurensning, og offentlig bevissthet om miljømessige toksisitet av Ag er økende. Tidligere studier har vist bioakkumulering (i produsenter) og forstørrelsen (i forbrukerne/rovdyr) AG. Cetaceans, kan som apex predators av havet, ha blitt negativt påvirket av Ag/Ag forbindelser. Men konsentrasjonen av Ag/Ag forbindelser i cetacean vev kan måles ved Induktivt kombinert plasma masse spektroskopi (ICP-MS), er bruk av ICP-MS begrenset av dens høy kapitalkostnad og kravet for tissue lagring/forberedelse. Derfor en autometallography (AMG) metode med en bilde kvantitativ analyse ved hjelp av formalin-fast, parafin-embedded (FFPE)-vev kan være en adjuvant metode for å lokalisere Ag distribusjon på suborgan nivå og beregne Ag konsentrasjonen i cetacean vev. AMG positive signaler er hovedsakelig brune til svarte granulater av ulike størrelser i cytoplasma av proksimale nyre rørformede epitel og hepatocytter Kupffer celler. Noen ganger, noen amorfe gyllengul til brun AMG positive signaler er oppført i lumen og kjelleren membran av noen proksimale nyre tubuli. Analysen for å estimere Ag konsentrasjonen kalles den Cetacean histologiske Ag analysen (CHAA), som er en regresjonsmodell etablert av dataene fra bildet kvantitativ analyse av AMG metode og ICP-MS. Bruk av AMG CHAA å lokalisere og semi kvantifisere tungmetaller gir en praktisk metode for spatio-temporale og cross-species studier.

Representant bilder av AMG positive signaler i cetacean lever og nyre vev er vist i figur 5. AMG positive signaler inkluderer ulik størrelse brunt til svart granulater av ulike størrelser i cytoplasma av proksimale nyre rørformede epitel og hepatocytter Kupffer celler. Noen ganger amorfe gyllengul til brun AMG positive signaler er oppført i lumen og kjelleren membran av noen proksimale nyre tubuli. Det er en positiv korrelasjon mellom resultatene av ICP-M...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues at JoVE.com

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Bruk av Autometallography å lokalisere og semi kvantifisere sølv Cetacean vev

En protokoll presenteres for å lokalisere Ag i cetacean lever og nyre vev av autometallography. Videre, en ny analysen, kalt cetacean histologiske Ag analysen (CHAA) er utviklet for å beregne de Ag konsentrasjonene i de vev.

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen miljøtoksikologi om underorgandistribusjoner og konsentrasjon av tungmetaller innenfor biologiske systemer. Den største fordelen med denne teknikken er at AMG er en enkel å bruke og billig metodikk, det er en verdifull adjuvans for å undersøke tungmetaller i vev. Vi bruker vevet fra delfiner og hvaler til å demonstrere protokollen.Vi tror imidlertid at protokollen kan brukes i en rekke dyrearter. Demonstrere prosedyren med Wen-Ta Li vil være Shun Theng, en kliniker fra vårt institutt. Begynn med å samle sammen par-matchet lever- og nyrevev for AMG-analyse fra en strandet cetacean, og fikse vevet i 10 ganger volumet av 10% nøytral bufret formalin i 24 til 48 timer.Deretter bruker du engangsmikrotomblader i rustfritt stål til å trimme formalin-fast lever- og nyrevev i to centimeter med en centimeter, tre millimeter seksjoner, og plasser både lever- og nyreseksjoner fra samme person i samme merkede kassetter. Dehydrere seksjonene i en vevsprosessor gjennom en rekke graderte etanol og xylen nedsenking, etterfulgt av en time og to-timers parafin nedsenking. Etter den to-timers parafin nedsenking, overføre vev til bunnen av stål histologi former og legge dehydrert vev prøver med frisk smeltet parafin.Chill formalin-fast, parafin-innebygd vev blokker på en kald plate, til parafin stivner, og trim hver blokk på mikrotomen til vevsoverflaten er utsatt. Chill prøvene på minus 20 grader Celsius i 10 minutter, og få fem-mikrometer vev seksjoner på mikrotomen. Bruk pinsett og børster, løft båndene til vevseksjonen når de er kjøpt, og flyter dem på overflaten av et 45 graders Celsius dobbeltdestillert vannbad, til de kan skilles, og plasser på individuelle mikroskopsklier.Deretter plasserer du lysbildene på en glidevarmer i en time, ved 60 grader Celsius. Deretter plasserer du lysbildene i lysbildestativer, og de-parafiniserer seksjonene i tre forskjellige fargeretter som inneholder 200 til 250 milliliter ren ikke-xylen for åtte-fem- og tre minutters inkubasjoner. Hydrer de de-parrafiniserte prøvene i forskjellige fargingsretter av graderte etanolløsninger, etterfulgt av skylling i dobbeltdestillert vann.Skyll seksjonene en gang i PBS supplert med 5% Triton X 100, flere ganger i PBS alene, og en gang i friskt dobbeltdestillert vann i 30 sekunder per vask. Etter siste vask, merk hver prøve med 300 mikroliter blandet sølv ekstrautstyr kit løsning, for ikke mer enn 15 minutter i mørket ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen vasker du lysbildene med dobbeltdestillert vann, og motflekk seksjonene i 300 mikroliter hematoksylin per lysbilde, i 10 sekunder.Vask skliene med rennende vann fra springen. Tørk dem og monter seksjonene med monteringsmedium. Deretter fanger du 10 tilfeldige histologiske bilder av hver vevsseksjon, under 40X-målet for et lett mikroskop.Hvis du vil analysere autometallografien, eller AMG, positiviteten til prøvene, åpner du bildene i et passende bildeanalyseprogram og velger bilde-, type- og RGB-stakk, for å dele det første bildet i de røde, blå og grønne fargekanalene. I den blå kanalen velger du bilde, justering og terskel for å måle prosentandelen av området med AMG-positive signaler i hvert bilde, manuelt justere cut-off-verdien for terskelen for hvert bilde basert på tilstedeværelsen av falske positive områder i kjernene, eller røde blodlegemer. Klikk analyser, og angi målinger, og kontroller områdefraksjonen for å angi at områdefraksjonen registreres.Klikk analyser, og mål, for å vise det positive prosentområdet for hver histologiske bildeprosentområdekolonne i resultatvinduet. For å evaluere sammenhengen mellom resultatene av induktivt skrevet plasmamassespektroskopi og AMG-positive verdier, åpne riktig grafprogramvare. Opprett en ny prosjektfil, og velg XY og korrelasjon.Skriv inn resultatene av de induktivt koplet plasma massespektroskopi og AMG analyser, og velg analyse, og korrelasjon, for å analysere styrken av sammenheng mellom resultatene av analysen av Pearson korrelasjonsanalyse. Velg en annen regresjonsmodell på tilpasningssiden i parameterne, ikke-lineært regresjonsvinduet, og velg sammenligningsmetodene på sammenligningssiden. Inkluder den ekstra summen av firkanter F test, og Akaike informasjonskriterium.Ifølge resultatene av sammenligningsmetodene velger du en relativt passende regresjonsmodell i cetacean histologisk sølvanalyse, og bruk analysen til å estimere sølvkonsentrasjonene av cetaceanlever- og nyrevevet, med ukjente sølvkonsentrasjoner. AMG-positive signaler inkluderer variert størrelse, brun til svart granulat i cytoplasma av hepatocytter og Kupffer celler, og sporadisk amorfe, gylden gul til brune AMG-positive signaler i lumen og kjellermembranen av noen proksimale nyretubuli. Det er en positiv sammenheng mellom resultatene av induktivt skrevet plasmamassespektroskopi og AMG-positivitetsverdier i de analyserte lever- og nyrevevene, med en foretrukket lineær regresjon gjennom opprinnelsen, i henhold til den ekstra summen av firkanter F-test, og Akaikes informasjonskriterium.Mens du prøver denne prosedyren, Det er viktig å huske at AMG metoden er en adjuvant metode, og må brukes med andre spesifikke metoden, for eksempel ICPMS, for overvåking av den faktiske sammensetningen av tungmetaller i vev.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimize Flue Gas Settings to Promote Microalgae Growth in Photobioreactors via Computer Simulations

Optimalisere Røykgass Innstillinger for å fremme Mikroalger Vekst i fotobioreaktorer via datasimulering

Flue gas from power plants can promote algal cultivation and reduce greenhouse gas emissions1. Microalgae not only capture solar energy more efficiently ...

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Teknikk for å studere Arthropod og mikrobielle samfunn innen Tre Vev

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Transient Gene Expression in Tobacco using Gibson Assembly and the Gene Gun

Forbigående Gene Expression i Tobacco bruker Gibson forsamling og Gene Gun

In order to target a single protein to multiple subcellular organelles, plants typically duplicate the relevant genes, and express each gene separately ...

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

A Fish-fôring Laboratory Bioassay å Vurdere Antipredatory aktivitet av sekundære metabolitter fra vev av marine organismer

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Bruk av høy oppløsning Infrarød termografi (HRIT) for studier av iskimdannende og Ice Formering hos planter

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

The Use of an Automated System (GreenFeed) to Monitor Enteric Methane and Carbon Dioxide Emissions from Ruminant Animals

The Use of an Automated System GreenFeed to Monitor Enteric Methane and Carbon Dioxide Emissions from Ruminant Animals

Bruk av et automatisert system (GreenFeed) til Monitor Ente metan og utslipp av karbondioksid fra drøvtyggere

Ruminant animals (domesticated or wild) emit methane (CH4) through enteric fermentation in their digestive tract and from decomposition of manure during ...

Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

Bruk av et batteri av kjemiske og økotoksikologiske metoder for vurdering av effekt av renseprosesser for å fjerne estrogenic Potens

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Bruk av en filterpatron for filtrering av vannprøver og Utvinning av Miljø DNA

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

The Calibration and Use of Capacitance Sensors to Monitor Stem Water Content in Trees

Kalibrering og bruk av kapasitans sensorer for å overvåke Stem vanninnhold i trær

Water transport and storage through the soil-plant-atmosphere continuum is critical to the terrestrial water cycle, and has become a major research focus ...

Use of Principal Components for Scaling Up Topographic Models to Map Soil Redistribution and Soil Organic Carbon

Bruk av rektor komponenter for skalering opp topografiske modeller å kartlegge jord distribusjon og jord organisk karbon

Landscape topography is a critical factor affecting soil formation and plays an important role in determining soil properties on the earth surface, as it ...