Name: humanized nod/scid/il2r&#947;null (hu-nsg) mouse model for hiv replication and latency studies
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Humanized NOD/SCID/IL2rÃŽÂ³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים [להעניק מספרים R01AI29329, R01AI42552, R01HL07470 J.J.R.] מכון הסרטן הלאומי של מכוני הבריאות הלאומיים [מספר גרנט P30CA033572 כדי לתמוך עיר של תקווה אינטגרטיבית גנומיקה פרמקולוגיה אנליטית, ליבות Cytometry אנליטית]. הכימית הבאה הושג באמצעות הפניה ריאגנט התוכנית, חלוקה של איידס, NIAID, ומחקר של איידס NIH NIH: HIV BaL וירוס.

כל טיפול בבעלי חיים והתהליכים בוצעו על פי פרוטוקולים נבדקו ואושרו על ידי עיר של תקווה מוסדיים חיה הטיפול ועל שימוש הוועדה (IACUC) שנערך על-ידי החוקר הראשי של מחקר זה (ד ר ג'ון רוסי, IACUC #12034). רקמת הכבד העובר האנושי הושג ממשאבים מתקדמים Bioscience (Alameda, CA), ארגון ללא מטרות רווח, על פי תקנות פדרליים ועל מ?...

<ol>
	<li>Greiner, D. L., Hesselton, R. A., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SCID+mouse+models+of+human+stem+cell+engraftment.">SCID mouse models of human stem cell engraftment.</a> Stem cells. 16 (3), 166-177 (1998).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual review of pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature reviews. Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature reviews. Immunology. 7, (2007).</li><li>Moir, S., Fauci, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+in+HIV+infection+and+disease.">B cells in HIV infection and disease.</a> Nature reviews. Immunology. 9 (4), 235-245 (2009).</li><li>McCune, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SCID-hu+mouse:+murine+model+for+the+analysis+of+human+hematolymphoid+differentiation+and+function.">The SCID-hu mouse: murine model for the analysis of human hematolymphoid differentiation and function.</a> Science. 241 (4873), 1632-1639 (1988).</li><li>Mosier, D. E., Gulizia, R. J., Baird, S. M., Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+a+functional+human+immune+system+to+mice+with+severe+combined+immunodeficiency.">Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency.</a> Nature. 335, 256 (1988).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> Journal of immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Ohbo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+hematopoiesis+in+mice+with+a+truncated+mutant+of+the+interleukin-2+receptor+gamma+chain.">Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor gamma chain.</a> Blood. 87 (3), 956-967 (1996).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Watanabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+the+functions+of+human+B+and+T+cells+in+humanized+NOD/shi-scid/gammac(null)+(NOG)+mice+(hu-HSC+NOG+mice).">The analysis of the functions of human B and T cells in humanized NOD/shi-scid/gammac(null) (NOG) mice (hu-HSC NOG mice).</a> International immunology. 21 (7), 843-858 (2009).</li><li>McDermott, S. P., Eppert, K., Lechman, E. R., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains.">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li><li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells.">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature. 9 (7), 959-963 (2003).</li><li>Melkus, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1.">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12, 1316 (2006).</li><li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus/liver+and+CD34++cell+transplantation.">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li><li>Brehm, M. A., Bortell, R., Verma, M., Shultz, L. D., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+in+Translational+Immunology.">Humanized Mice in Translational Immunology.</a> Translational Immunology. , 285-326 (2016).</li><li>King, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hu-PBL-NOD-scid+IL2rgnull+mouse+model+of+xenogeneic+graft-versus-host-like+disease+and+the+role+of+host+MHC.">Hu-PBL-NOD-scid IL2rgnull mouse model of xenogeneic graft-versus-host-like disease and the role of host MHC.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 157, 104-118 (2009).</li><li>Halkias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+divergent+aspects+of+human+T-cell+development+and+migration+in+humanized+mice.">Conserved and divergent aspects of human T-cell development and migration in humanized mice.</a> Immunology and cell biology. 93 (8), 716-726 (2015).</li><li>Satheesan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+replication+and+latency+in+a+humanized+NSG+mouse+model+during+suppressive+oral+combinational+ART.">HIV replication and latency in a humanized NSG mouse model during suppressive oral combinational ART.</a> Journal of virology. , (2018).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-targeted+aptamer-siRNA+conjugate-directed+transcriptional+regulation+of+HIV-1.">Receptor-targeted aptamer-siRNA conjugate-directed transcriptional regulation of HIV-1.</a> Theranostics. 8 (6), 1575-1590 (2018).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+RNA+aptamer+against+human+CCR5+specifically+targets+HIV-1+susceptible+cells+and+inhibits+HIV-1+infectivity.">Cell-specific RNA aptamer against human CCR5 specifically targets HIV-1 susceptible cells and inhibits HIV-1 infectivity.</a> Chemistry &amp; biology. 22 (3), 379-390 (2015).</li><li>Brechtl, J. R., Breitbart, W., Galietta, M., Krivo, S., Rosenfeld, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+highly+active+antiretroviral+therapy+(HAART)+in+patients+with+advanced+HIV+infection:+impact+on+medical,+palliative+care,+and+quality+of+life+outcomes.">The use of highly active antiretroviral therapy (HAART) in patients with advanced HIV infection: impact on medical, palliative care, and quality of life outcomes.</a> Journal of pain and symptom management. 21 (1), 41-51 (2001).</li><li>Richman, D. D., Margolis, D. M., Delaney, M., Greene, W. C., Hazuda, D., Pomerantz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Challenge+of+Finding+a+Cure+for+HIV+Infection.">The Challenge of Finding a Cure for HIV Infection.</a> Science. 323 (5919), 1304-1307 (2009).</li><li>Pace, M. J., Agosto, L., Graf, E. H., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+reservoirs+and+latency+models.">HIV reservoirs and latency models.</a> Virology. 411 (2), 344-354 (2011).</li><li>Van Herck, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sampling+from+the+retro-orbital+plexus,+the+saphenous+vein+and+the+tail+vein+in+rats:+comparative+effects+on+selected+behavioural+and+blood+variables.">Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables.</a> Laboratory animals. 35 (2), 131-139 (2001).</li><li>Autissier, P., Soulas, C., Burdo, T. H., Williams, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+12-color+flow+cytometry+panel+to+study+lymphocyte,+monocyte,+and+dendritic+cell+subsets+in+humans.">Evaluation of a 12-color flow cytometry panel to study lymphocyte, monocyte, and dendritic cell subsets in humans.</a> Cytometry. 77 (5), 410-419 (2010).</li><li>Lu, W., Mehraj, V., Vyboh, K., Cao, W., Li, T., Routy, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4:CD8+ratio+as+a+frontier+marker+for+clinical+outcome,+immune+dysfunction+and+viral+reservoir+size+in+virologically+suppressed+HIV-positive+patients.">CD4:CD8 ratio as a frontier marker for clinical outcome, immune dysfunction and viral reservoir size in virologically suppressed HIV-positive patients.</a> Journal of the International AIDS Society. 18, 20052 (2015).</li><li>van't Wout, A. B., Schuitemaker, H., Kootstra, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+HIV-1+on+peripheral+blood+mononuclear+cells.">Isolation and propagation of HIV-1 on peripheral blood mononuclear cells.</a> Nature protocols. 3, 363 (2008).</li><li>Reagan-Shaw, S., Nihal, M., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+translation+from+animal+to+human+studies+revisited.">Dose translation from animal to human studies revisited.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 22 (3), 659-661 (2008).</li><li>Han, Y., Wind-Rotolo, M., Yang, H. -. C., Siliciano, J. D., Siliciano, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+approaches+to+the+study+of+HIV-1+latency.">Experimental approaches to the study of HIV-1 latency.</a> Nature reviews. Microbiology. 5 (2), 95-106 (2007).</li><li>Marsden, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+Latency+in+the+Humanized+BLT+Mouse.">HIV Latency in the Humanized BLT Mouse.</a> Journal of virology. 86 (1), 339-347 (2012).</li><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection.">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li><li>Durand, C. M., Blankson, J. N., Siliciano, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+strategies+for+HIV-1+eradication.">Developing strategies for HIV-1 eradication.</a> Trends in immunology. 33 (11), 554-562 (2012).</li><li>Van Lint, C., Bouchat, S., Marcello, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+transcription+and+latency:+an+update.">HIV-1 transcription and latency: an update.</a> Retrovirology. 10, 67 (2013).</li><li>Xu, L., Zhang, Y., Luo, G., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+stem+cell+memory+T+cells+in+hematological+malignancies.">The roles of stem cell memory T cells in hematological malignancies.</a> Journal of hematology &amp; oncology. 8, 113 (2015).</li><li>Chun, T. -. W., Moir, S., Fauci, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+reservoirs+as+obstacles+and+opportunities+for+an+HIV+cure.">HIV reservoirs as obstacles and opportunities for an HIV cure.</a> Nature immunology. 16 (6), 584-589 (2015).</li><li>Redel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+regulation+of+latency+in+the+monocyte-macrophage+lineage+and+in+CD4++T+lymphocytes.">HIV-1 regulation of latency in the monocyte-macrophage lineage and in CD4+ T lymphocytes.</a> Journal of leukocyte biology. 87 (4), 575-588 (2010).</li><li>Laird, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Quantification+of+the+Latent+Reservoir+for+HIV-1+Using+a+Viral+Outgrowth+Assay.">Rapid Quantification of the Latent Reservoir for HIV-1 Using a Viral Outgrowth Assay.</a> PLoS pathogens. 9 (5), e1003398 (2013).</li></ol>

עכברים immunocompromised engrafted עם תאים/רקמה אנושית להציג מאפיינים פיזיולוגיים דמוי אדם, ערך עצום ללימודי פתולוגיה, פתופיזיולוגיה ו אימונולוגיה לגבי אדם ספציפי במחלות. בין הזנים מרובים של עכברים immunocompromised, הסימן. Cg -PrkdcscidIl2rgtm1Wji (NSG) הדגם הוא immunodeficient ביותר בשל חוסר חסינות מולדת והן א?...

כי הקמת בדגמים בעלי חיים מסוימים עבור מחלות אנושיות היא המפתח למציאת תרופה, מודלים בעלי חיים המתאימים זמן היה נרדף, שיפור לאורך זמן. פותחו זנים מרובים של מודלים מאתר immunocompromised, כי היתר את engraftment של רקמות או תאים אנושיים והוצאה לפועל עוקבות של פונקציות humanized1,2. מודל העכבר humanized שכזה הם קריטיים עבור חקירות של מחלות האדם הספציפי3,4,5.
אידס (איידס) הנובע זיהום עם וירוס הכשל החיסוני האנושי (HIV) הוא דוגמה אחת. לפני הקמת העכבר humanized מודלים, אתיים ומגבלות טכניות מוגבלת HIV/איידס פרה מחקרים שנעשו בבעלי חיים קופים3. עם זאת, הוצאות גבוהה ודרישות עבור טיפול מיוחדים עבור חיה כזאת לעכב HIV/איידס בלימודים אקדמיים הגדרות אופייניות. HIV בעיקר מדביק CD4 + T-תאים אנושיים, משפיעה על פיתוח, תגובות מערכת החיסון של תאים חיסוניים אנושיים אחרים כגון תאי-B, מקרופאגים תאים דנדריטים6; לכן, מודלים בעלי חיים קטנים מושתלים עם תפקודי מערכות החיסון האנושית יש ביקוש גבוה.
פריצת דרך הגיע בשנת 1988, כאשר היו עכברים CB17 -scid עם מוטציה Prkdcscid פיתח והראה engraftment מוצלחת של מערכת החיסון האנושית1. התוצאות Prkdcscid מוטציה בפונקציות פגומים T - ו B-cell, מערכת חיסונית אדפטיבית ablated בעכברים, ובעקבותיו את engraftment של האדם ההיקפית תאי תאי (PBMCs), תאי גזע hematopoietic (HSCs), הדם, רקמות העובר hematopoietic7,8. עם זאת, רמות נמוכות של engraftment הם נצפו לעתים קרובות במודל זה; סיבות אפשריות הן 1) שיורית הפעילות החיסונית מולדת מאופנן באמצעות הרוצח הטבעיים (NK)-תאים ופיתוח 2) בשלב מאוחר של העכבר T - ו B-תאים (leakiness)5. התפתחות סוכרת שאינו שמנים (הנד) עוקבות-scid העכבר דגם מושגת דרמטי למטה-ויסות פעילות תאי NK; לפיכך, הוא מסוגל לתמוך לרמה גבוהה יותר engraftment בר-קיימא של רכיבי מערכת החיסון האנושית9. בכדי לדכא או לעכב התפתחות של מולדת חסינות, מודלים העכבר זוקף לחיתוך או מהממת של interleukin-2 קולטן γ-הרשת (Il2rg) (הנד) -scid רקע הוקמו. Il2rg, הידוע גם בשם נפוץ ציטוקין קולטן γ שרשרת, היא מרכיב חיוני של שונים ציטוקין קולטנים10,11,12,13. זנים כמו במנוד ראש. Cg -PrkdcscidIl2rgtm1Wji (NSG) NODShi.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug (ליקר) נוכח שיבוש חזקים העכבר ציטוקין איתות ו אבלציה מלאה של התפתחות תאי NK, ב בנוסף ליקוי חמור של חסינות מסתגלת14,15,16.
שלושה דגמים העכבר humanized הנושאת scid מוטציה, נוקאאוט Il2rg לעתים קרובות המועסקים ב- HIV/איידס המחקר: המודל בייקון (מח עצם הכבד קורנית) את מודל למידה (ליקוציט דם היקפיים), המודל SRC (SCID לאכלס מחדש תא) 3. בייקון מודל נוצר באמצעות ניתוח השתלת כבד עוברי אנושי, התימוס מתחת הקפסולה כליות העכבר בליווי ורידיות העובר בכבד HSCs3,17,18. המודל העכבר BLT מציע יעילות גבוהה engraftment, התפתחות תאים אנושיים hematopoietic בתוך כל שושלות, והקמת מערכת חיסונית חזקה האנושי; בנוסף, תאי-T משכילים ב בלוטת התימוס עצמיים אנושית ולהציג מוגבלת הלע תגובות חיסוניות4,5,17,19. עם זאת, הדרישה ניתוחים נשאר החיסרון העיקרי של המודל BLT. המודל העכבר למידה נוסדה על ידי זריקה תוך ורידי עם תאי הלימפה היקפי אדם. מודל למידה מציע נוחות ותשואות engraftment T-cell מוצלחת, אבל היישום שלו הוא מוגבל בשל תאי B לא מספיק מיאלואידית תא engraftment, רמות נמוכות engraftment הכללית, ואת תחילתה של חמור שתל – מול – מארח מחלות (GVHD)3 ,20. המודל העכבר SRC נקבעת באמצעות הזרקה של האדם HSCs לתוך עכברים SCID היילוד או צעירים למבוגרים. זה מוצגים engraftment הממוצע יעילות מעל 25% (העריכו דם היקפיים CD45 אחוז) ותומך פיתוח מרובת-השושלת HSCs מוזרק, לפתח את מערכת החיסון האנושית מולדת. עם זאת, המגבלה של המודל SRC היא כי התגובה תא T הוא עכבר H2-מוגבל במקום האנושי מוגבלת הלע14,21.
המודל העכבר SRC נחשב למודל נתיישב ואמין פרה HIV/איידס קטן מחקרים שנעשו בבעלי חיים, ומעוררות את engraftment עקבית של מערכת החיסון האנושית ופיתוח hematopoietic מוצלח. אנו קודם לכן דיווח על הקמת מודל העכבר NSG Hu-SRC-SCID (hu-NSG), תיאר את היישום שלה שכפול HIV, השהיה מחקרים22,23,24. מודל זה העכבר hu-NSG תערוכות רמות גבוהות של מח עצם יונת, הרגישות הידבקות ב- HIV, ואת החוק הביוגנטי של הידבקות ב- HIV ו פתוגנזה. בנוסף, דגם hu-NSG העכבר מגיב כראוי לטיפול תרופתי קומבינטורית (עגלה), recapitulates פלזמה ריבאונד ויראלי על העגלה נסיגה, המאשרת הקמת HIV השהיה מאגר25,26 ,27. זה מאגר השהיה HIV עוד תימוכין על ידי הייצור של המוסמכים-שכפול HIV וירוסים לשעבר vivo המושרה על ידי האדם נח CD4 + T תאים מבודדים של עכברים נגועים ו שטופלו העגלה hu-NSG.
במסמך זה, אנו מתארים את פרוטוקול מפורט עבור הקמת המודל העכבר hu-NSG של עכברים NSG neonatal, לרבות ההליכים הקשורים זיהום ב- HIV וטיפול העגלה לפיתוח השהיה. אנו מצפים פרוטוקול זה להציע סט חדש של גישות במחקרים בעלי חיים HIV לגבי HIV וירולוגיה, השהיה, וטיפול.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td>MiltenyiBiotec</td>
			<td>130-046-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CryoStor CS2</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wji </td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Order breeders instead of experimental mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-806-3204</td>
			<td>Order through animal facility, restricted item</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clidox disinfectant</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>NC9189926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wescodyne</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>19-818-419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton 80508 syringe/needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80508</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube (K2EDTA)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>367843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube (Heparin)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>365965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary tube (Heparinized)</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>22-362574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11814389001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast VIrus 1-step Master Mix</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>4444434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIV-1 P24 ELISA (5 Plate kit)</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>NEK050B001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG from human serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I4506-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG from mouse serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5381-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 Mouse Anti-Human CD45 (clone HI30)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564586</td>
			<td>RRID: AB_2732068, LOT 6347696</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD3 (Clone SK7)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557851</td>
			<td>RRID: AB_396896, LOT 6021877</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacific Blue Mouse Anti-Human CD4 (Clone RPA-T4)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558116</td>
			<td>RRID: AB_397037, LOT 6224744</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUV395 Mouse Anti-Human CD8 (Clone RPA-T8)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563795</td>
			<td>RRID: AB_2722501, LOT 6210668</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Alexa Fluor 750 Mouse Anti-Human CD14 (TuK4)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>MHCD1427</td>
			<td>RRID: AB_10373536, LOT 1684947A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD19 (SJ25-C1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>MHCD1904</td>
			<td>RRID: AB_10373382, LOT 1725304B</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized nod/scid/il2r&#947;null (hu-nsg) mouse model for hiv replication and latency studies

תקנות אתיות ואתגרים טכניים לחקר פתולוגיה אנושית, אימונולוגיה ופיתוח טיפולית יש להציב מודלים בעלי חיים קטנים ביקוש גבוה. עם קרוב גנטיות והתנהגותיות דימיון של בני אדם, חיות קטנות כמו העכבר הם מועמדים טובים עבור מחלות אנושיות מודלים, שדרכו תסמינים דמויי אנוש ותגובות יכול להיות recapitulated. יתר על כן, ניתן לשנות את הרקע הגנטי של העכבר כדי להתאים לדרישות מגוונות. העכברnull (NSG) הנד/SCID/IL2rγ הוא אחד של זנים העכבר immunocompromised הנפוצה ביותר; זה מאפשר engraftment עם תאי גזע אנושי hematopoietic ו/או ברקמות אנושיות ופיתוח עוקבות של מערכת החיסון האנושית פונקציונלי. . זה יהווה אבן דרך קריטית להבנת הפרוגנוזה של הפתופיזיולוגיה של האדם הספציפי מחלות כמו איידס, סיוע בחיפוש אחר תרופה... במסמך זה, מדווחים פרוטוקול מפורט ליצירת מודל העכבר NSG humanized (hu-NSG) על ידי השתלת תא גזע hematopoietic לתוך עכבר ממוזגים קרינה NSG neonatal. המודל העכבר hu-NSG מציגה פיתוח השושלת רב המושתלים תאי גזע אנושי הרגישות לזיהום נגיפי HIV-1. זה גם recapitulates מאפיינים ביולוגיים מרכזיים בתגובה לטיפול תרופתי קומבינטורית (עגלה).

ניתוח cytometry זרימה מתבצע בתדירות גבוהה כדי לאמת את טוהר HSCs מבודדים, להעריך את רמות engraftment, פרופיל החיסונית התגובות זיהום ויראלי, סקר העגלה היעילות. פאנל נוגדן טיפוסי מכיל נוגדנים fluorescently שכותרתו בודדים 4-6; לפיכך cytometer זרימה עם לייזרים מרובים ומבחר רחב של מסננים חיוני להשגת ת...

Watch this Scientific Journal Video about Humanized NOD/SCID/IL2rÃŽÂ³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies at JoVE.com

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

פרוטוקול זה מספק שיטה ליצירת עכברים humanized (hu-NSG) באמצעות intrahepatic הזרקה של תאי גזע hematopoietic אנושי לתוך ממוזגים קרינה עכברים NSG neonatal. העכבר hu-NSG חשופה הידבקות ב- HIV טיפול תרופתי קומבינטורית (עגלה), משמש כמודל pathophysiological מתאימים לחקירות שכפול וההשהיה HIV.

העכבר (hu-NSG) humanized הנד/SCID/IL2rγnull מודל עבור שכפול HIV ולימודי השהיה

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

עניינים אלה יכולים לעזור לענות על שאלות מפתח במחקר HIV / איידס, כגון המנגנון המולקולרי ואת הפרוגנוזה של הידבקות ב- HIV, וכיצד והיכן הוקם מאגר ההשהיה. היתרון של טכניקה זו הוא שהיא אינה פולשנית, והקימה עכברי הו-NSG שחייבים לטפל בהתפתחות רב-שושלתית על פני תאי גזע אנושיים מושתלים הרגישים לזיהום ב- HIV והם פתוחים ל- cART. התחל על ידי סינון מתעכל, אדם, עובר, רקמת כבד, דגימת תרחיף באמצעות סטרילי, 70 מיקרומטר, ניילון, מסננת רשת כדי לקבל השעיה תא יחיד, ולהעשיר עבור CD34 + HSCs על ידי מיון תאים מופעל מגנטי על פי הוראות היצרן.לאחר הספירה, להשעות מחדש את HSC ב פעמיים עשר עד השביעי תאים קיימא לכל ריכוז מיליליטר ב DPBS טרי על קרח. במקום הבא כלוב הקרנה אנושי יילודים שלם NOD / SCID / גמא או NSG עכבר לתוך סטרילי, בצורת עוגה, כלוב הקרנה, ולטפל בבעלי החיים עם 200 עד 250 סנטימטרים של קרן גמא ממקור קרינה צסיום-137. לאחר מכן לטעון את התאים לתוך מותאם אישית, המילטון 80508 50 מיקרוליטר מזרק מצויד מחט 30-מד, ולהזריק כל חיה יילודים ישירות לתוך הכבד עם חמש פעמים עשר עד החמישי קיימא CD34 + HSCs ו 25 microliters של DPBS.עשרה עד שתים עשרה שבועות לאחר זיהום, ספין למטה רטרו מסלולית, היקפי, דגימות דם מכל עכבר על ידי צנטריפוגה, ולהעביר את supernates פלזמה צינורות microcentrifuge עבור אחסון שלילי 80 מעלות צלזיוס כמתאים באופן ניסיוני. עבור אימות חריטה HSC, להשעות מחדש את כדורי עם 200 microliters של חיץ תמוגה תא דם אדום, ולמשוך את מתלי התא בצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מילימטר עבור דגירה של עשר דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן לאסוף את תאי הדם הלבנים הנותרים על ידי צנטריפוגה עבור שתי שטיפות ב 0.5 מיליליטר של טרי, 0.01 אחוז אלבומין סרום בקר, או BSA, ב DPBS לכל לשטוף.לאחר הכביסה השנייה, לחסום את התאים עם 100 microliters של חסימת קוקטייל במשך עשרים דקות ב 4 מעלות צלזיוס ואחריו תיוג עם קוקטייל אנטי גוף המתאים של עניין ב 2 microliters של אנטי גוף לריכוז תאים חד פעמיים עד שישית. לאחר 30 דקות ב 4 מעלות צלזיוס, לשטוף את התאים פעמיים DPBS טרי בתוספת BSA, ולהעריך את דגימות הדם ההיקפיות על ידי cytometry זרימה על פי פרוטוקולים סטנדרטיים כדי לכמת את אחוז אנושי CD45 + CD3 + CD14 + או CD19 + תאים לכל מדגם. לאחר מכן לחשב את היחס של CD4 + ל-CD8 + T תאים, ולהעריך את העומס ויראלי עם בדגימות פלזמה על פי רגיל, כמותי, תעתיק הפוך, פרוטוקולי PCR.כדי להעריך את ההשפעות של הידבקות ב- HIV, לספק וירוס HIV bale כדי הרדמה, אדם, עכברי NSG עם יותר מ 20 אחוז אנושי CD45 + אוכלוסיית תאים בדם ההיקפי שלהם, ב 200 ננוגרם של P24 לכל ריכוז העכבר באמצעות ממשל תוך-פרטי, איסוף דגימות דם באמצעות דימום רטרו-מסלולית כל שבועיים, ולנתח הן את יחס CD4-ל-CD8 ואת עומס פלזמה ויראלי כפי שהוכח. עבור אימות דיכוי ויראלי לספק את נגועים, בעלי חיים NSG אנושי עם טרי, קומבינטורית, טיפול אנטי רטרו-ויראלי, או cART, במים ממותקים כל שבוע במשך 4 שבועות, איסוף דגימות דם באמצעות דימום רטרו מסלולית כל שבועיים ולנתח הן את יחס CD4-ל-CD8 ואת העומס נגיפי פלזמה כפי שהודגם. כדי התחת ריבאונד ויראלי כאשר העומסים נגיפי פלזמה הם מתחת למגבלת הזיהוי ואת יחס CD4-ל-CD8 משוחזר בין 1.5 ו 2.5 לאסוף דגימות דם היקפיות באמצעות דימום רטרו-מסלולית כל 2 שבועות לאחר נסיגת cART ולהעריך את הדגימות כפי שהוכח.במהלך אימות חריטה ראשוני, ספירת תאים CD45 + אנושי צריך לנוע בין 20 ל 80 אחוזים, ואת קבוצות המשנה של לויקוציטים אנושיים צריך להופיע כמו אוכלוסיות דיסקרטיות על ידי ניתוח ציטומטרי זרימה. היחס בין תאים CD4+ל-CD8+נשאר בין 1.5 ל-2.5 אצל אנשים בריאים, בעוד דלדול משמעותי של תאי CD4+T נצפה בדרך כלל על זיהום ויראלי. יש לציין, היחס הבריא משוחזר בתגובה לטיפול cART.זיהוי של עומסים נגיפיים פלזמה על ידי PCR RT כמותי לאורך כל הזיהום ואת משטר cART ניתן לתכנן ושמש כדי להעריך את היעילות של משלוח ויראלי ואת הטיפול האנטי ויראלי, בהתאמה. למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה לתוך HIV / איידס וירולוגיה מחקרים ופיתוח טיפולי, זה יכול להיות מיושם גם על מחקרים אחרים הקשורים למחלות אנושיות, כגון סרטן, סוכרת, ומחלות אוטואימוניות. פיתוח מודל העכבר hu-NSG סלל את הדרך לחוקרים באימונולוגיה ובאונקולוגיה לחקור תפקוד לקוי ופתולוגיה חדשים בבני אדם, במיוחד מחקרים מכניים וטיפוליים המכוונים לזיהום כרוני ב- HIV ומאגר ההשהיה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

הסקה Genotypic של כמיהות HIV-1 שימוש אוכלוסייה מבוססת רצף של V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

אינטראקצית מארח וירוס ביתור בשכפול של וירוס ההרפס ממוסס דגם

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

שימוש בעכבר האנושי של BLT כמודל לתאי גזע מבוסס Gene Therapy גידול

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

אנושי עכבר מודל ללמוד זיהומים חיידקיים מיקוד microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Rapid Screening of HIV Reverse Transcriptase and Integrase Inhibitors

הקרנה מהירה של HIV ההפוך טרנסקריפטאז וintegrase המעכבים

Although a number of anti HIV drugs have been approved, there are still problems with toxicity and drug resistance. This demonstrates a need to identify ...

Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

Pairwise צמיחת התחרות Assay לקביעת כושר השכפול של וירוסי כשל חיסוני אנושיים

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to ...

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

דגם רקמות 3D ריאות אדם ללימודים פונקציונליים ב<em&gt; חפת Mycobacterium</em&gt; זיהום

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

מדידה<em&gt; במבחנה</em&gt; פעילות האינטגרציה של HIV-1 Preintegration מכלולים

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

הקמתה של הומניזציה Dual-TK-חעוגה מודל העכבר עבור הנגיף הקשור HIV פתוגנזה

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...