Name: humanized nod/scid/il2r&#947;null (hu-nsg) mouse model for hiv replication and latency studies
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Humanized NOD/SCID/IL2rÃŽÂ³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies at JoVE.com

Эта работа была поддержана национальных институтов здравоохранения [предоставить номера R01AI29329, R01AI42552 и R01HL07470 J.J.R.] и Национальный институт рака, национальные институты здравоохранения [номер гранта P30CA033572 для поддержки город надежды интегративной геномики Аналитических фармакологии и аналитических цитометрии ядер]. Следующие реагент был получен через низ исследования СПИДа и ссылка реагент программы, Отдел СПИДа, NIAID, низ: вирус ВИЧ бал.

Все Уход за животными и процедуры выполнены согласно протоколов рассмотрены и утверждены, города из надежды институциональный уход за животными и использования Комитет (IACUC) проведены главным следователем этого исследования (д-р Джон Росси, IACUC #12034). Человеческого плода ткани печени бы?...

<ol>
	<li>Greiner, D. L., Hesselton, R. A., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SCID+mouse+models+of+human+stem+cell+engraftment.">SCID mouse models of human stem cell engraftment.</a> Stem cells. 16 (3), 166-177 (1998).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual review of pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature reviews. Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature reviews. Immunology. 7, (2007).</li><li>Moir, S., Fauci, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+in+HIV+infection+and+disease.">B cells in HIV infection and disease.</a> Nature reviews. Immunology. 9 (4), 235-245 (2009).</li><li>McCune, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SCID-hu+mouse:+murine+model+for+the+analysis+of+human+hematolymphoid+differentiation+and+function.">The SCID-hu mouse: murine model for the analysis of human hematolymphoid differentiation and function.</a> Science. 241 (4873), 1632-1639 (1988).</li><li>Mosier, D. E., Gulizia, R. J., Baird, S. M., Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+a+functional+human+immune+system+to+mice+with+severe+combined+immunodeficiency.">Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency.</a> Nature. 335, 256 (1988).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD/LtSz-scid+mice.">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> Journal of immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li><li>Ohbo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+hematopoiesis+in+mice+with+a+truncated+mutant+of+the+interleukin-2+receptor+gamma+chain.">Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor gamma chain.</a> Blood. 87 (3), 956-967 (1996).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Watanabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+the+functions+of+human+B+and+T+cells+in+humanized+NOD/shi-scid/gammac(null)+(NOG)+mice+(hu-HSC+NOG+mice).">The analysis of the functions of human B and T cells in humanized NOD/shi-scid/gammac(null) (NOG) mice (hu-HSC NOG mice).</a> International immunology. 21 (7), 843-858 (2009).</li><li>McDermott, S. P., Eppert, K., Lechman, E. R., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains.">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li><li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells.">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature. 9 (7), 959-963 (2003).</li><li>Melkus, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1.">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12, 1316 (2006).</li><li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus/liver+and+CD34++cell+transplantation.">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li><li>Brehm, M. A., Bortell, R., Verma, M., Shultz, L. D., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+in+Translational+Immunology.">Humanized Mice in Translational Immunology.</a> Translational Immunology. , 285-326 (2016).</li><li>King, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hu-PBL-NOD-scid+IL2rgnull+mouse+model+of+xenogeneic+graft-versus-host-like+disease+and+the+role+of+host+MHC.">Hu-PBL-NOD-scid IL2rgnull mouse model of xenogeneic graft-versus-host-like disease and the role of host MHC.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 157, 104-118 (2009).</li><li>Halkias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+divergent+aspects+of+human+T-cell+development+and+migration+in+humanized+mice.">Conserved and divergent aspects of human T-cell development and migration in humanized mice.</a> Immunology and cell biology. 93 (8), 716-726 (2015).</li><li>Satheesan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+replication+and+latency+in+a+humanized+NSG+mouse+model+during+suppressive+oral+combinational+ART.">HIV replication and latency in a humanized NSG mouse model during suppressive oral combinational ART.</a> Journal of virology. , (2018).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-targeted+aptamer-siRNA+conjugate-directed+transcriptional+regulation+of+HIV-1.">Receptor-targeted aptamer-siRNA conjugate-directed transcriptional regulation of HIV-1.</a> Theranostics. 8 (6), 1575-1590 (2018).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+RNA+aptamer+against+human+CCR5+specifically+targets+HIV-1+susceptible+cells+and+inhibits+HIV-1+infectivity.">Cell-specific RNA aptamer against human CCR5 specifically targets HIV-1 susceptible cells and inhibits HIV-1 infectivity.</a> Chemistry &amp; biology. 22 (3), 379-390 (2015).</li><li>Brechtl, J. R., Breitbart, W., Galietta, M., Krivo, S., Rosenfeld, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+highly+active+antiretroviral+therapy+(HAART)+in+patients+with+advanced+HIV+infection:+impact+on+medical,+palliative+care,+and+quality+of+life+outcomes.">The use of highly active antiretroviral therapy (HAART) in patients with advanced HIV infection: impact on medical, palliative care, and quality of life outcomes.</a> Journal of pain and symptom management. 21 (1), 41-51 (2001).</li><li>Richman, D. D., Margolis, D. M., Delaney, M., Greene, W. C., Hazuda, D., Pomerantz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Challenge+of+Finding+a+Cure+for+HIV+Infection.">The Challenge of Finding a Cure for HIV Infection.</a> Science. 323 (5919), 1304-1307 (2009).</li><li>Pace, M. J., Agosto, L., Graf, E. H., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+reservoirs+and+latency+models.">HIV reservoirs and latency models.</a> Virology. 411 (2), 344-354 (2011).</li><li>Van Herck, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sampling+from+the+retro-orbital+plexus,+the+saphenous+vein+and+the+tail+vein+in+rats:+comparative+effects+on+selected+behavioural+and+blood+variables.">Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables.</a> Laboratory animals. 35 (2), 131-139 (2001).</li><li>Autissier, P., Soulas, C., Burdo, T. H., Williams, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+12-color+flow+cytometry+panel+to+study+lymphocyte,+monocyte,+and+dendritic+cell+subsets+in+humans.">Evaluation of a 12-color flow cytometry panel to study lymphocyte, monocyte, and dendritic cell subsets in humans.</a> Cytometry. 77 (5), 410-419 (2010).</li><li>Lu, W., Mehraj, V., Vyboh, K., Cao, W., Li, T., Routy, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4:CD8+ratio+as+a+frontier+marker+for+clinical+outcome,+immune+dysfunction+and+viral+reservoir+size+in+virologically+suppressed+HIV-positive+patients.">CD4:CD8 ratio as a frontier marker for clinical outcome, immune dysfunction and viral reservoir size in virologically suppressed HIV-positive patients.</a> Journal of the International AIDS Society. 18, 20052 (2015).</li><li>van't Wout, A. B., Schuitemaker, H., Kootstra, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+HIV-1+on+peripheral+blood+mononuclear+cells.">Isolation and propagation of HIV-1 on peripheral blood mononuclear cells.</a> Nature protocols. 3, 363 (2008).</li><li>Reagan-Shaw, S., Nihal, M., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+translation+from+animal+to+human+studies+revisited.">Dose translation from animal to human studies revisited.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 22 (3), 659-661 (2008).</li><li>Han, Y., Wind-Rotolo, M., Yang, H. -. C., Siliciano, J. D., Siliciano, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+approaches+to+the+study+of+HIV-1+latency.">Experimental approaches to the study of HIV-1 latency.</a> Nature reviews. Microbiology. 5 (2), 95-106 (2007).</li><li>Marsden, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+Latency+in+the+Humanized+BLT+Mouse.">HIV Latency in the Humanized BLT Mouse.</a> Journal of virology. 86 (1), 339-347 (2012).</li><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection.">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li><li>Durand, C. M., Blankson, J. N., Siliciano, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+strategies+for+HIV-1+eradication.">Developing strategies for HIV-1 eradication.</a> Trends in immunology. 33 (11), 554-562 (2012).</li><li>Van Lint, C., Bouchat, S., Marcello, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+transcription+and+latency:+an+update.">HIV-1 transcription and latency: an update.</a> Retrovirology. 10, 67 (2013).</li><li>Xu, L., Zhang, Y., Luo, G., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+stem+cell+memory+T+cells+in+hematological+malignancies.">The roles of stem cell memory T cells in hematological malignancies.</a> Journal of hematology &amp; oncology. 8, 113 (2015).</li><li>Chun, T. -. W., Moir, S., Fauci, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+reservoirs+as+obstacles+and+opportunities+for+an+HIV+cure.">HIV reservoirs as obstacles and opportunities for an HIV cure.</a> Nature immunology. 16 (6), 584-589 (2015).</li><li>Redel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+regulation+of+latency+in+the+monocyte-macrophage+lineage+and+in+CD4++T+lymphocytes.">HIV-1 regulation of latency in the monocyte-macrophage lineage and in CD4+ T lymphocytes.</a> Journal of leukocyte biology. 87 (4), 575-588 (2010).</li><li>Laird, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Quantification+of+the+Latent+Reservoir+for+HIV-1+Using+a+Viral+Outgrowth+Assay.">Rapid Quantification of the Latent Reservoir for HIV-1 Using a Viral Outgrowth Assay.</a> PLoS pathogens. 9 (5), e1003398 (2013).</li></ol>

Ослабленным иммунитетом мышей прижившимися с клеток/тканей человека являются физиологические характеристики человека как и огромную ценность для иммунологии, патологии и патофизиологии исследований, касающихся человека конкретных заболеваний. Среди нескольких штаммов ослабленным...

Поскольку создание подходящих животных моделей для заболеваний человека является ключом к поиску лечения, соответствующие животных модели долго преследовал и улучшить со временем. Были разработаны несколько штаммов ослабленным мышиных моделях, которые позволяют приживления человеческих клеток или тканей и последующего исполнения гуманизированные функций1,2. Такие модели гуманизированные мыши являются критическими для исследования человека конкретных заболеваний3,4,5.
Одним из примеров является синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) в результате заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). До создания моделей гуманизированные мышей этические и технические ограничения замкнутых ВИЧ/СПИДа доклинические исследования на животных в нечеловеческих приматов3. Однако исследования ВИЧ/СПИДа в типичных академических параметры препятствуют высокие расходы и требования к специализированной помощи для таких животных. Главным образом ВИЧ заражает CD4 + Т-клеток человека и влияет на развитие и иммунные реакции других людей иммунных клеток, такие как B-клетки, макрофаги и дендритные клетки6; Таким образом малые животные модели, пересаженные с функциональной иммунной системы человека пользуются высоким спросом.
Прорыв произошел в 1988 году, когда CB17 -ТКИД мышей с Prkdcscid мутации были разработаны и показал успешного приживления иммунной системы человека1. Результаты мутации Prkdcscid дефектные Т - и B-клеток функций и ablated адаптивной иммунной системы мышей, тем самым позволяя приживления человека периферической крови мононуклеаров (получения), гемопоэтических стволовых клеток (СКК), и 7,фетальных кроветворных тканей8. Тем не менее низкий уровень приживления часто наблюдаются в этой модели; возможные причины являются 1) остаточных врожденной иммунной активности, модулированные через естественный убийца (NK)-клетки и 2) поздней стадии развития мыши Т - и B-клетки (утечки)5. Последующее развитие-ожирением диабетом (НОД)-модель мышиscid достигнуто резкое вниз регулирование активности НК клеток; Таким образом она может поддерживать более высокий уровень и более устойчивого приживления компоненты иммунной системы человека9. Для дальнейшего подавления или препятствуют развитию врожденного иммунитета, мыши модели с учетом усечения или всего нокаут рецептора интерлейкина-2 γ-цепи (Il2rg) (НОД) -ТКИД фон были созданы. Il2rg, также известный как общие cytokine рецептор γ-цепи, является неотъемлемым компонентом различных цитокинов рецепторов10,11,12,13. Штаммы например КИВНУЛ. CG -PrkdcscidIl2rgtm1Wji (ГЯП) и NODShi.Cg -PrkdcscidIl2rgtm1Sug (Нагель) представлять надежные срыв мыши цитокина сигнализации и полное аблация развития НК клеток, в дополнение к серьезным сбоям в работе адаптивного иммунитета14,,1516.
Три модели гуманизированные мыши, учитывая scid , мутации и Il2rg нокаут часто заняты в исследований ВИЧ/СПИДа: BLT (костного мозга/печени/Thymus) модели, ПБЛ (лейкоцитов периферической крови) и SRC (SCID заселив клеток) модель 3. BLT модель создается через хирургической трансплантации человеческих фетальной печени и тимуса под капсулу почки мыши, наряду с внутривенным введением плода печени СКК3,17,18. BLT мыши модель предлагает высокий приживления эффективность, развитие гемопоэтических клеток человека в всех родов и создание сильной иммунной системы человека; Кроме того Т-клетки обучаются в человека аутологичной тимуса и выставку HLA-ограничено иммунных ответов4,5,17,19. Однако потребность в хирургических процедур остается основным недостатком модели BLT. ПБЛ мыши модель устанавливается внутривенные инъекции с периферических лимфоидных клеток человека. ПБЛ модель предлагает удобство и дает успешного приживления Т-клеток, но его применение ограничено из-за недостаточного B-клеток и приживления миелоидных клеток, низкой приживления уровни общего и наступления заболевания тяжелой трансплантат – versus – хост (GVHD)3 ,20. SRC мыши модель устанавливается путем инъекции человеческого СКК в новорожденного или молодых взрослых SCID мышей. Его экспонаты приживления средняя эффективность выше 25% (по оценке как периферической крови CD45 процент) и поддерживает множественные линии развития вводят СКК и разработке врожденной иммунной системы человека. Однако модель SRC ограничены, что Т-клеточный ответ является мыши H2-ограниченных вместо человека HLA-ограничена14,21.
Легкая и надежная модель для доклинических ВИЧ/СПИДа небольших исследованиях на животных, свидетельствует последовательное приживления иммунной системы человека и успешного развития гемопоэтических считается модель мыши SRC. Ранее мы сообщили о создании модели мыши ГЯП Ху-SRC-ТКИД (hu ГЯП) и описал его применение в репликации ВИЧ и задержка исследования22,23,24. Эта модель мыши Ху ГЯП демонстрирует высокий уровень костного самонаведения, восприимчивость к инфекции ВИЧ и повторение инфекции ВИЧ и патогенез. Кроме того модель мыши Ху ГЯП реагирует надлежащим образом на комбинаторная антиретровирусная терапия (корзину) и резюмирует плазмы вирусный отскок после вывода корзину, подтверждающее создание ВИЧ задержка водохранилище25,26 ,27. Это водохранилище задержка ВИЧ далее подтверждается производства компетентным репликации ВИЧ вирусов ex vivo индуцированных человека отдыха CD4 + T-клетки изолированы от инфицированных и корзину лечение Ху ГЯП мышей.
Здесь мы описываем подробный протокол для создания модели мыши Ху ГЯП от новорожденных мышей ГЯП, включая процедуры, связанные с лечения ВИЧ инфекции и корзину для задержки развития. Мы ожидаем этот протокол предложить новый набор подходов в исследованиях на животных ВИЧ относительно ВИЧ вирусологии, задержки и лечения.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td>MiltenyiBiotec</td>
			<td>130-046-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CryoStor CS2</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wji </td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Order breeders instead of experimental mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-806-3204</td>
			<td>Order through animal facility, restricted item</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clidox disinfectant</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>NC9189926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wescodyne</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>19-818-419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton 80508 syringe/needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80508</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube (K2EDTA)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>367843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube (Heparin)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>365965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary tube (Heparinized)</td>
			<td>Fisher Sicentific</td>
			<td>22-362574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11814389001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast VIrus 1-step Master Mix</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>4444434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIV-1 P24 ELISA (5 Plate kit)</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>NEK050B001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG from human serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I4506-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG from mouse serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5381-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 Mouse Anti-Human CD45 (clone HI30)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564586</td>
			<td>RRID: AB_2732068, LOT 6347696</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD3 (Clone SK7)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557851</td>
			<td>RRID: AB_396896, LOT 6021877</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacific Blue Mouse Anti-Human CD4 (Clone RPA-T4)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558116</td>
			<td>RRID: AB_397037, LOT 6224744</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUV395 Mouse Anti-Human CD8 (Clone RPA-T8)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563795</td>
			<td>RRID: AB_2722501, LOT 6210668</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Alexa Fluor 750 Mouse Anti-Human CD14 (TuK4)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>MHCD1427</td>
			<td>RRID: AB_10373536, LOT 1684947A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD19 (SJ25-C1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>MHCD1904</td>
			<td>RRID: AB_10373382, LOT 1725304B</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized nod/scid/il2r&#947;null (hu-nsg) mouse model for hiv replication and latency studies

Этические правила и технические проблемы исследований в патологии человека, иммунологии и терапевтические развития поставили небольшие животные модели высоким спросом. С близкое сходство генетических и поведения людей мелких животных, таких как мыши являются хорошими кандидатами для болезней человека модели, через которые можно резюмировалась человека как симптомы и ответы. Кроме того генетический фон мыши могут быть изменены для удовлетворения различных потребностей. Кивок/SCID/IL2rγзначение null (ГЯП) Мышь является одним из наиболее широко используемых штаммов ослабленным мыши; Это позволяет приживления гемопоэтических стволовых клеток человека или ткани человека и последующего развития функциональной иммунной системы человека. Это критически важной вехой в понимании prognosis и Патофизиология человека конкретных заболеваний, как ВИЧ/СПИД и пособничество Поиск для лечения. Здесь мы доклад подробный протокол для генерации гуманизированные модель мыши ГЯП (hu ГЯП), трансплантация гемопоэтических стволовых клеток в мышь излучения кондиционером новорожденных ГЯП. Hu ГЯП мыши модель показывает мульти линии развития пересаженные стволовые клетки человека и восприимчивость к вирусной инфекции ВИЧ-1. Он также повторяет ключевые биологические характеристики в ответ комбинаторная антиретровирусная терапия (корзину).

Cytometry анализ потоков часто выполняется для проверки чистоты изолированных СКК, оценивать уровни приживления, профиль иммунных реакций к вирусной инфекции и обследования эффективности корзину. Типичная антитела группа содержит 4-6 отдельных дневно обозначенные антит?...

Watch this Scientific Journal Video about Humanized NOD/SCID/IL2rÃŽÂ³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies at JoVE.com

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Этот протокол предоставляет метод для создания гуманизированные мышей (hu ГЯП) через внутрипеченочных инъекции гемопоэтических стволовых клеток человека в кондиционерами излучения новорожденных мышей ГЯП. Hu ГЯП мыши подвержены ВИЧ-инфекции и комбинаторная антиретровирусная терапия (корзину) и служит подходящей патофизиологические модели для репликации и задержка расследования ВИЧ.

Гуманизированные NOD/SCID/IL2rγзначение null (hu ГЯП) мыши модель репликации ВИЧ и задержка исследований

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

Эти вопросы могут помочь ответить на ключевые вопросы исследований в области ВИЧ/СПИДа, такие как молекулярный механизм и прогноз ВИЧ-инфекции, а также то, как и где устанавливается резервуар задержки. Преимущество этого метода заключается в том, что он неинвазивный, и создана ху-NSG мышей, которые должны лечить развитие нескольких линий над пересаженных стволовых клеток человека, которые восприимчивы к ВИЧ-инфекции и восприимчивы к cART. Начните с фильтрации переваренного, человека, плода, ткани печени, образца суспензии через стерильный, 70-микрометровый, нейлон, сетчатый ситечко, чтобы получить одноклеточную подвеску, и обогатить для CD34'HSCs магнитной активированной сортировки клеток в соответствии с инструкциями производителя.После подсчета, повторно приостановить HSC в два раза десять-седьмой жизнеспособных клеток на миллилитр концентрации в свежем DPBS на льду. Далее поместите весь неонатальный человеческий NOD/SCID/gamma или NSG мышиный помет в стерильную, в форме пирога, клетку облучения, и лечить животных с 200 до 250 центриградов гамма-лучей из источника излучения цезия-137. Затем загрузите клетки в изготовленный на заказ, Гамильтон 80508 50-микролитровый шприц оснащен 30-го калибра иглы, и вводить каждое неонатального животного непосредственно в печень с пяти раз десять-пятый жизнеспособный человек CD34-HSCs и 25 микролитров DPBS.Десять-двенадцать недель после инфекции, спина вниз ретро-орбитальных, периферических, образцов крови от каждой мыши центрифугации, и передачи плазменных супернатов в микроцентрифуг трубки для отрицательного 80 градусов по Цельсию хранения в экспериментальном порядке. Для проверки HSC engraftment повторно приостанавливайте гранулы с 200 микролитров буфера лиза красных кровяных телец, и потяните клеточные суспензии в 1,5-миллиметровой микроцентрифугной трубке для десятиминутной инкубации при комнатной температуре. Затем соберите оставшиеся белые кровяные тельца путем центрифугации для двух моет в 0,5 миллилитров свежих, 0,01 процента бычьего альбумин сыворотки, или BSA, в DPBS за стирку.После второй стирки, блокировать клетки с 100 микролитров блокирующего коктейля в течение двадцати минут при 4 градусах по Цельсию, а затем маркировки с соответствующим анти-тела коктейль интерес на 2 микролитера анти-тела на один раз один-к-шестой концентрации клеток. После 30 минут при 4 градусах по Цельсию, мыть клетки два раза в свежем DPBS плюс BSA, и оценить периферические образцы крови по цитометрии потока в соответствии со стандартными протоколами для количественной оценки процент человека CD45 -CD3-CD14 "или CD19" клеток на образец. Затем вычислите соотношение клеток CD4 и CD8-T и оцените вирусную нагрузку в образцах плазмы в соответствии со стандартными, количественными, обратными транскриптазами, протоколами ПЦР.Чтобы оценить последствия ВИЧ-инфекции, доставить вирус Тюка ВИЧ для анестезированные, человеческие, NSG мышей с более чем 20 процентов человека CD45-клеток населения в периферической крови, на 200 нанограммов P24 на мышь концентрации через внутриперитонеальной администрации, сбор образцов крови через ретро-орбитальных кровотечений каждые две недели, и анализировать как CD4-к-CD8 соотношение и вирусная нагрузка плазмы , как попродемонстрировано. Для проверки вирусного подавления питания инфицированных, человека NSG животных со свежими, комбинаторные, антиретровирусной терапии, или cART, в подслащенной воде каждую неделю в течение 4 недель, сбор образцов крови через ретро-орбитальных кровотечений каждые две недели и анализировать как CD4-к-CD8 соотношение и плазменной вирусной нагрузки, как попродемонстрировано. Чтобы ослов вирусный отскок, когда плазменные вирусные нагрузки ниже предела обнаружения и CD4-к-CD8 соотношение восстанавливается между 1,5 и 2,5 собирать образцы периферической крови через ретро-орбитальных кровотечений каждые 2 недели после вывода АРТ и оценить образцы, как попродемонстрировано.Во время первоначальной проверки на цинплантацию количество клеток CD45-клеток человека должно варьироваться от 20 до 80 процентов, а подмножества человеческих лейкоцитов должны отображаться в качестве дискретных популяций путем цитометрического анализа потока. Соотношение клеток CD4 и CD8 остается между 1,5 и 2,5 у здоровых людей, в то время как значительное истощение клеток CD4-T обычно наблюдается при вирусной инфекции. Примечательно, что здоровое соотношение восстанавливается в ответ на лечение АРТ.Обнаружение плазменных вирусных нагрузок с помощью количественных РТР на протяжении всей инфекции и режима АРТ может быть построено и использовано для оценки эффективности вирусной доставки и антивирусного лечения, соответственно. Хотя этот метод может дать представление об исследованиях в области вирусологии ВИЧ/СПИДа и терапевтическом развитии, он также может быть применен к другим исследованиям, связанным с болезнями человека, таким как рак, диабет и аутоиммунные заболевания. Разработка модели мыши hu-NSG проложила путь для исследователей в области иммунологии и онкологии для изучения новой дисфункции и патологии у людей, особенно механистических и терапевтических исследований, направленных на хроническую инфекцию ВИЧ и резервуар задержки.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Генотипическая вывода ВИЧ-1 тропизм Использование Популяционные Секвенирование V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

Пройдя Host-вирус Взаимодействие в Литические репликации Модель Herpesvirus

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Использование BLT Humanized мышь в качестве стволовых клеток на основе модели генной терапии опухолей

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanized мышь моделью для изучения Бактериальные инфекции Ориентация микрососудов

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Rapid Screening of HIV Reverse Transcriptase and Integrase Inhibitors

Быстрого скрининга ВИЧ обратной транскриптазы и ингибиторы интегразы

Although a number of anti HIV drugs have been approved, there are still problems with toxicity and drug resistance. This demonstrates a need to identify ...

Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

Парные Рост конкуренции Анализ для определения репликации Фитнес человека вируса иммунодефицита

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to ...

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

3D-человека легочной ткани Модель функциональных исследований по<em&gt; Микобактерии туберкулеза</em&gt; Инфекция

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Измерение<em&gt; In Vitro</em&gt; Интеграция активность ВИЧ-1 Preintegration Комплексы

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Исследования вирусов гриппа A в мышиной модели инфекции

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Создание двойной гуманизированной модели мыши TK-NOG для ВИЧ-ассоциированного патогенеза печени

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...