Name: the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt von der National Natural Science Foundation of China (Grant Nr. 31400936, 31460260) und der naturwissenschaftlichen Grundlage der Jiangxi Provinz in China (20171BAB215020). Wir danken auch das gemeinsame Programm zwischen Nanchang University und Queen Mary University of London für diese Arbeit zu unterstützen.

Alle hier beschriebene Methoden wurden von der Animal Care und Nutzung Ausschuss von Nanchang University genehmigt.
1. Montieren Sie das Gerät und schließen Sie das Mikrotom
<ol><li>Entwerfen Sie den Parameter gemäß den Anforderungen (ergänzende Abbildung 1).</li>
	<li>Einreichen des Parameters zu einer Fabrik zur Herstellung von Acryl-Boards.</li>
	<li>Montieren Sie alle Teile in der Reihenfolge: Verwenden Sie Chloroform, um 7 gewerbliche ...

<ol>
	<li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography.">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li><li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+zebrafish+histology.">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li><li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid-Cut:+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples.">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).</li><li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles.">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis.">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies.">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li><li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification.">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).</li><li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus.">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).</li><li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD163:+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples.">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li><li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets.">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).</li></ol>

Zur Verbesserung von Paraffin Abschnitt Morphologie und lösen das Problem der verschwendete Zeit während konventioneller Paraffin-Schnitt, haben wir eine verbesserte Paraffin-Schnitt-Methode, die schneiden und Entfaltung verbindet. Diese verbesserte Methode beruht auf einfache Geräte, die einen Abschnitt-Kanal, ein Wasserbad und eine Heizung mit Erkennung Temperaturschalter umfasst. Der Abschnitt Band betritt das Wasserbad durch den Abschnitt Kanal und entfaltet sich automatisch beim Schneiden. Daher verbessert diese ...

Morphologische Studie ist wichtig in der biologischen Forschung. Obwohl neuer Technologie Forscher beobachten ihre Ziele direkt aus dem gesamten Gewebe oder Organismen1,2,3, schneiden die Probe in Dünnschliffen, gefolgt von Färbung erlaubt hat, bleibt die primäre Methode Fornot nur Gewebe Morphologie, sondern auch Protein targeting direkt im Gewebe. Lichtmikroskopie verwendet drei Schnitttypen: Paraffin, gefrorene und Ansät. Obwohl Kryoschneiden üblich ist, dass Gewebe Antigenität zu schützen und die Probenvorbereitung einfach ist, ist die einbehaltene Gewebe Morphologie Arm und ungeeignet für dünne Stationspunkte4,5. Paraffin-Schnitt ist die am häufigsten verwendeten Methode für die Ausstellung von gut erhaltenen Morphologie. Die Exemplare sind völlig dehydriert und in Wachs eingebettet, können der Paraffin-Blöcke auf unbestimmte Zeit gespeichert werden. Darüber hinaus produziert die Paraffin-Schnitt dünne Abschnitte, die Verbesserung der biologischen Sonde Zugang in weiteren Experimenten und reduzieren Zelle Schicht Overlay in Z-Richtung.
Doch herkömmliche Paraffin-Schnitt ist mühsam und erfordert Betreiber können. Paraffin-Abschnitte durchlaufen Fixierung, Austrocknung, einbetten, schneiden und schweben. Wichtiger ist Abschnitt Bänder aus dem Messerhalter auf dem Wasserbad zu übertragen notwendig, aber schwierig für junior-Betreiber. Besonders bei trockener Luft die Abschnitt-Bänder werden durch statische Elektrizität drehen und sind schwierig, auf dem warmen Wasser entfalten. Zur Verbesserung der Abschnitt sind Qualität, Befeuchtung der exponierten Gewebeoberfläche zwischen Mikrotom Klinge Pässe, die Wachs-Blöcke, Eintauchen in eiskaltes Wasser, oder erhöht die Luftfeuchtigkeit mit einem Luftbefeuchter in der Nähe von Mikrotom Kühlung6,7 empfohlen. . Neuere Methoden zur Verbesserung der Paraffin-Schnitt gehören Hybrid Paraffin einbetten, Kryoschneiden8und Handelsabteilung Transfer System Hilfe9. Obwohl diese Methoden teilweise Paraffin verbessern schneiden, Geschwindigkeit und Qualität, sie schneiden machen viel schwerfälliger und Handelsabteilung Transfersysteme sind teuer.
In diesem Protokoll führen wir flexible, einfache und billige Geräte Schritt für Schritt zu schaffen, die an den Klingenhalter ein rotary Mikrotom angeschlossen werden können. Dieses Gerät umfasst einen Abschnitt-Kanal, ein Wasserbad und eine Heizung mit Erkennung Temperaturschalter. Nach dem Schneiden, Dutzende von Abschnitte fließen in den Abschnitt Kanal und geben Sie das Wasserbad direkt, damit automatisch entfaltet. Dies verbessert die Effizienz der Paraffin-Schnitt und macht diese Technologie noch komfortabler. Mit Hilfe dieser Methode, mehr Erwachsene Maus hippocampal Abschnitte, Erwachsenen Maus Niere Abschnitte, embryonale 15,5 Tage alte (E15.5) Maus Gehirn Abschnitte und Erwachsenen Zebrafisch Auge Abschnitte wurden geerntet in kürzerer Zeit und morphologisch mehr intakt geblieben. Diese Methode kann auch für andere Gewebeproben, die erfordern beschleunigte Paraffin-Schnitt und verhindern, dass der Abschnitt Unterscheidung verwendet werden.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Boekel Scientific</td>
			<td>133000-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol&#160;</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene&#160;</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial acrylic board</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td>
			<td>67-66-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubular electric heating element(12V 200W)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controller(12v 120w)</td>
			<td>Mingsuo</td>
			<td>XH-W3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral silicone sealant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Link the water channel with the microtome knife holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Voltage transformer</td>
			<td>Dearll</td>
			<td>S-250-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable blade</td>
			<td>Accu-Edge</td>
			<td>4689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Baso Diagnostics Inc.</td>
			<td>BA-4025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin&#160;</td>
			<td>Baso Diagnostics Inc.</td>
			<td>BA-4025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microslide</td>
			<td>Sail Brand</td>
			<td>7105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip&#160;</td>
			<td>Citoglas</td>
			<td>10212424C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Xilong Chemical</td>
			<td>7647-01-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath for paraffin sections</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoCore Arcadia C&#160;- Cold Plate</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin repellent spray&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>9990420</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning

Histologie und Pathologie ist das Schneiden von Paraffin-eingebetteten Gewebe verbreitet. Jedoch ist es langweilig. Um diese Methode zu verbessern, haben mehrere Handelsgesellschaften komplexer Abschnitt Transfersysteme mit fließenden Wasser entwickelt. Um diese Technologie zu vereinfachen, haben wir eine einfache Methode mit hausgemachten Ausrüstung, die schneiden und schwimmend in einem einfachen thermostatischen vereint; Geben Sie deshalb die Abschnitte automatisch das Wasserbad auf der Wasseroberfläche. Im Hippocampus von Erwachsenen mäusegehirnen, Erwachsenen Maus Nieren und embryonalen mäusegehirnen Erwachsenen Zebrafisch Augen wurden mit konventioneller Paraffin-Schnitt und die vorgestellte Methode zum Vergleich geschnitten. Statistische Analyse zeigt, dass unsere verbesserte Methode Zeitersparnis und höhere Qualität Teile produziert. Darüber hinaus ist es einfach für junior Operatoren, Paraffin-Schnitt einer ganzen Probe in kurzer Zeit.

Die verbesserte Methode stieg die Zahl der intakten Paraffin Abschnitte. Wir haben diese neue Methode auf Erwachsenen Maus hippocampal Gewebe, Erwachsenen Maus Nieren und embryonalen mäusegehirnen Zebrafisch Augen getestet. Wasser wurde hinzugefügt, um den Tank, und die Wassertemperatur war zwischen 38,0 ° C bis 40,0 ° c gehalten Sie waren nach einem seriell Vorbereitung der Gewebeproben, geschnitten und im Vergleich zu herkömmlichen schneiden. Die neue Methode Abschnitt Verlust zu v...

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The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Das Schneiden und schwimmende Methode für Paraffin-eingebetteten Gewebe für Schneiden

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Verbesserung der Paraffin-Schnitt. Diese Methode verbindet schneiden und schweben mit einer einfachen thermostatischen Kammer, um den Transfer-Prozess erforderlich, nach der herkömmlichen Methode zu vermeiden. Infolgedessen wurden die Effizienz und die Anzahl der intakten Paraffin Abschnitte erheblich verbessert.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

This method can help answer key questions in morphological field, such as paraffin sectioning. The main advantage of this technique is that culminates cutting and the folding procedure and avoid transfer process that required by conventional method. To begin, gather all of the pre-manufactured parts in a fume hood.Use chloroform to combine the seven acrylic boards, as shown here. The end product will be a tank equipped with a section channel and a water bath. Install the tubular electrical heating element through the hole in acrylic board number two.Using an electric drill, make a small hole in acrylic board number seven, and install a digital thermostat on the tank, making sure that it is at least one centimeter below the level of the intended water surface, which is indicated by the black dot on the tank. Adjust the voltage so that it is below 24 volts before turning on the equipment. Remove the section waste tray from the microtome.Next, use neutral silicone sealant to link the sections channel to the microtome blade holder, making sure not to get any sealant above the top of the blade. Let the setup dry overnight to give the chloroform and neutral silicone sealant time to solidify. The next day, install the blade in the blade holder.Add water to the water bath, making sure that the water surface just touches the top of the blade. After performing conventional paraffin sectioning, turn on the equipment to begin improved paraffin sectioning. Use the temperature detection switch to open the heater.Set the targeted temperature between 38 degrees Celsius and 40 degrees Celsius for one hour to warm the water. Use a knife to modify the paraffin block acquired by paraffin embedding. Then, place the block on the microtome's cassette clamp, and lock it.Cut the thicker sections to quickly approach the sample. Adjust to a suitable section thickness for the samples. Turning the hand wheel will automatically load the sections into sections channel and bath.Next, section the specimen in a slow and uniform cutting stroke. Guide the sections into the bath chamber so that they float in a line. If the head section adheres to the chamber wall, use a brush guide to keep it floating.After the sections fully unfold in the water bath, use tweezers to separate several, and then pick them up on a microscope slide. Transfer the slides to an oven set to 42 degrees Celsius to dry overnight. The slides can then be stored at room temperature indefinitely until ready to analyze.When ready to analyze, use hematoxylin-eosin staining to evaluate the sections using the improved method. In this study, an improved method is used to prepare paraffin sections for adult mouse hippocampal tissue, adult mouse kidneys, embryonic mouse brains, and zebrafish eyes. As shown here, the new method avoids section loss and increases the proportion of intact sections in each type of examined tissue.When performing whole-series sectioning, this method is seen to accelerate the paraffin sectioning speed in all tested samples. In other words, this method provides higher quality paraffin sectioning in less time than the conventional method. Series sections of zebrafish optic retina are then observed by hematoxylin-eosin staining.The sections harvested from the improved method are seen to have better integrity than those harvested from the conventional paraffin sectioning method. While there are no significant differences in the quality of most harvested sections when comparing these two methods, some sections harvested from the conventional method are seen to have relatively low quality. Don't forget that working with chloroform can be extremely hazardous, and precautions such as fume hood should always be taken while performing this procedure.While attempting this procedure, it's important to remember, add water carefully and avoid overfill.

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