Name: assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding
Uploaded: 2018-11-14T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding at JoVE.co

يشكر المؤلفون الحارس مانون وشولتز ألكسندرا لمساعدتها في إعداد هذا البروتوكول.

أقر هذه الدراسة برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجان في جامعة كولومبيا ومعهد الطب النفسي الدولة نيويورك.
1-إعداد الأنسجة
<ol><li>ترتيب توقيت الفئران الحوامل من المورد.</li>
	<li>اتبع الفئران الحوامل موقوت بمراقبة على البطن المتزايد في الأسابيع بعد وصولهم وبعد ذلك تبحث عن الجر...

<ol>
	<li>Hietaniemi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+fetal+and+neonatal+rat+offspring+of+energy-restricted+dams.">Gene expression profiles in fetal and neonatal rat offspring of energy-restricted dams.</a> Journal of Nutrigenetics and Nutrigenomics. 2 (4-5), 173-183 (2009).</li><li>Okabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenous+glycine+receptor+expression+in+cortical+plate+neurons+and+Cajal-Retzius+cells+of+neonatal+rat+cerebral+cortex.">Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex.</a> Neuroscience. 123 (3), 715-724 (2004).</li><li>Mailleux, P., Takazawa, K., Erneux, C., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+the+neurons+containing+inositol+1,4,5-trisphosphate+3-kinase+and+its+messenger+RNA+in+the+developing+rat+brain.">Distribution of the neurons containing inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase and its messenger RNA in the developing rat brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 327 (4), 618-629 (1993).</li><li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Human+Evolution.">Oxytocin and Human Evolution.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. , (2017).</li><li>Sippel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Stress-related+Disorders:+Neurobiological+Mechanisms+and+Treatment+Opportunities.">Oxytocin and Stress-related Disorders: Neurobiological Mechanisms and Treatment Opportunities.</a> Chronic Stress (Thousand Oaks). 1, (2017).</li><li>Agnati, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+on+the+integrative+actions+of+the+brain+from+neural+networks+to+"brain-body+medicine".">Aspects on the integrative actions of the brain from neural networks to "brain-body medicine".</a> Journal of Receptors and Signal Transduction Research. 32 (4), 163-180 (2012).</li><li>Welch, M. G., Margolis, K. G., Li, Z., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+regulates+gastrointestinal+motility,+inflammation,+macromolecular+permeability,+and+mucosal+maintenance+in+mice.">Oxytocin regulates gastrointestinal motility, inflammation, macromolecular permeability, and mucosal maintenance in mice.</a> American Journal Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 307 (8), G848-G862 (2014).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+developmental+regulation+of+oxytocin+(OT)+and+oxytocin+receptors+(OTR)+in+the+enteric+nervous+system+(ENS)+and+intestinal+epithelium.">Expression and developmental regulation of oxytocin (OT) and oxytocin receptors (OTR) in the enteric nervous system (ENS) and intestinal epithelium.</a> Journal of Comparative Neurology. 512 (2), 256-270 (2009).</li><li>Prakash, B. S., Paul, V., Kliem, H., Kulozik, U., Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oxytocin+in+milk+of+cows+administered+oxytocin.">Determination of oxytocin in milk of cows administered oxytocin.</a> Analytica Chimica Acta. 636 (1), 111-115 (2009).</li><li>Solangi, A. R., Memon, S. Q., Mallah, A., Khuhawar, M. Y., Bhanger, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+separation+of+oxytocin,+norfloxacin+and+diclofenac+sodium+in+milk+samples+using+capillary+electrophoresis.">Quantitative separation of oxytocin, norfloxacin and diclofenac sodium in milk samples using capillary electrophoresis.</a> Biomedical Chromatography. 23 (9), 1007-1013 (2009).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+markers+of+the+unfolded+protein+response+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin modulates markers of the unfolded protein response in Caco2BB gut cells.</a> Cell Stress and Chaperones. 19 (4), 465-477 (2014).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Hirschberg, D. L., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+mTORC1+pathway+in+the+gut.">Oxytocin modulates mTORC1 pathway in the gut.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 432 (3), 466-471 (2013).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Ludwig, R. J., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colostrum+oxytocin+modulates+cellular+stress+response,+inflammation,+and+autophagy+markers+in+newborn+rat+gut+villi.">Colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi.</a> Biochemical an Biophysical Research Communications. 487 (1), 47-53 (2017).</li><li>Donnet-Hughes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+role+of+the+intestinal+microbiota+of+the+mother+in+neonatal+immune+education.">Potential role of the intestinal microbiota of the mother in neonatal immune education.</a> Proceedings of the Nutritional Society. 69 (3), 407-415 (2010).</li><li>Perez, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+imprinting+of+the+neonatal+immune+system:+lessons+from+maternal+cells?.">Bacterial imprinting of the neonatal immune system: lessons from maternal cells?.</a> Pediatrics. 119 (3), e724-e732 (2007).</li><li>Takeda, S., Kuwabara, Y., Mizuno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrations+and+origin+of+oxytocin+in+breast+milk.">Concentrations and origin of oxytocin in breast milk.</a> Endocrinolcia Japonica. 33 (6), 821-826 (1986).</li><li>Quintana, D. S., Outhred, T., Westlye, L. T., Malhi, G. S., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+oxytocin+administration+on+brain+activity:+a+systematic+review+and+meta-analysis+protocol.">The impact of oxytocin administration on brain activity: a systematic review and meta-analysis protocol.</a> Systematic Reviews. 5 (1), 205 (2016).</li><li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt.">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), 79-83 (1979).</li><li>Orr, M. E., Garbarino, V. R., Salinas, A., Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+Postnatal+Brain+Development+in+the+Longest-Lived+Rodent:+Prolonged+Maintenance+of+Neotenous+Traits+in+the+Naked+Mole-Rat+Brain.">Extended Postnatal Brain Development in the Longest-Lived Rodent: Prolonged Maintenance of Neotenous Traits in the Naked Mole-Rat Brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 504 (2016).</li><li>Hansson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+quantitative+proteome+analysis+of+in+vivo+intestinal+development.">Time-resolved quantitative proteome analysis of in vivo intestinal development.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 10 (3), (2011).</li><li>Mochizuki, K., Yorita, S., Goda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+in+the+jejunum+of+rats+during+the+transient+suckling-weaning+period.">Gene expression changes in the jejunum of rats during the transient suckling-weaning period.</a> Journal of Nutritional Science and Vitaminology (Tokyo). 55 (2), 139-148 (2009).</li><li>Rinaman, L., Banihashemi, L., Koehnle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+life+experience+shapes+the+functional+organization+of+stress-responsive+visceral+circuits.">Early life experience shapes the functional organization of stress-responsive visceral circuits.</a> Physiology and Behavior. 104 (4), 632-640 (2011).</li><li>Johannes, G., Sarnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cap-independent+polysomal+association+of+natural+mRNAs+encoding+c-myc,+BiP,+and+eIF4G+conferred+by+internal+ribosome+entry+sites.">Cap-independent polysomal association of natural mRNAs encoding c-myc, BiP, and eIF4G conferred by internal ribosome entry sites.</a> RNA. 4 (12), 1500-1513 (1998).</li><li>Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindbrain+noradrenergic+A2+neurons:+diverse+roles+in+autonomic,+endocrine,+cognitive,+and+behavioral+functions.">Hindbrain noradrenergic A2 neurons: diverse roles in autonomic, endocrine, cognitive, and behavioral functions.</a> American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (2), R222-R235 (2011).</li><li>Walker, C. D., Toufexis, D. J., Burlet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+and+limbic+expression+of+CRF+and+vasopressin+during+lactation:+implications+for+the+control+of+ACTH+secretion+and+stress+hyporesponsiveness.">Hypothalamic and limbic expression of CRF and vasopressin during lactation: implications for the control of ACTH secretion and stress hyporesponsiveness.</a> Progress in Brain Research. 133, 99-110 (2001).</li><li>Montiel-Castro, A. J., Gonzalez-Cervantes, R. M., Bravo-Ruiseco, G., Pacheco-Lopez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiota-gut-brain+axis:+neurobehavioral+correlates,+health+and+sociality.">The microbiota-gut-brain axis: neurobehavioral correlates, health and sociality.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 7, 70 (2013).</li><li>Blevins, J. E., Ho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxytocin+signaling+in+the+regulation+of+body+weight.">Role of oxytocin signaling in the regulation of body weight.</a> Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 14 (4), 311-329 (2013).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+administration+of+secretin+and+oxytocin+inhibits+chronic+colitis+and+associated+activation+of+forebrain+neurons.">Combined administration of secretin and oxytocin inhibits chronic colitis and associated activation of forebrain neurons.</a> Neurogastroenterology Motility. 22 (6), 654 (2010).</li><li>Berthoud, H. R., Neuhuber, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+chemical+anatomy+of+the+afferent+vagal+system.">Functional and chemical anatomy of the afferent vagal system.</a> Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 85 (1-3), 1-17 (2000).</li><li>Taniuchi, S., Miyake, M., Tsugawa, K., Oyadomari, M., Oyadomari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+stress+response+of+vertebrates+is+regulated+by+four+eIF2alpha+kinases.">Integrated stress response of vertebrates is regulated by four eIF2alpha kinases.</a> Scientific Reports. 6, 32886 (2016).</li><li>Altschuler, S. M., Bao, X. M., Bieger, D., Hopkins, D. A., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscerotopic+representation+of+the+upper+alimentary+tract+in+the+rat:+sensory+ganglia+and+nuclei+of+the+solitary+and+spinal+trigeminal+tracts.">Viscerotopic representation of the upper alimentary tract in the rat: sensory ganglia and nuclei of the solitary and spinal trigeminal tracts.</a> Journal of Comparative Neurology. 283 (2), 248-268 (1989).</li><li>Shapiro, R. E., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+central+neural+connections+of+the+area+postrema+of+the+rat.">The central neural connections of the area postrema of the rat.</a> Journal of Comparative Neurology. 234 (3), 344-364 (1985).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).</li><li>Nayak, R., Pintel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viruses+can+induce+phosphorylation+of+eIF2alpha+via+PKR+activation,+which+can+be+overcome+by+helper+adenovirus+type+5+virus-associated+RNA.">Adeno-associated viruses can induce phosphorylation of eIF2alpha via PKR activation, which can be overcome by helper adenovirus type 5 virus-associated RNA.</a> Journal of Virology. 81 (21), 11908-11916 (2007).</li><li>Zaborske, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+tRNA+charging+and+activation+of+the+eIF2+kinase+Gcn2p.">Genome-wide analysis of tRNA charging and activation of the eIF2 kinase Gcn2p.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (37), 25254-25267 (2009).</li><li>Hollis, J. H., Lightman, S. L., Lowry, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+systemic+and+visceral+sensory+information+by+medullary+catecholaminergic+systems+during+peripheral+inflammation.">Integration of systemic and visceral sensory information by medullary catecholaminergic systems during peripheral inflammation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1018, 71-75 (2004).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+opposes+effects+of+bacterial+endotoxin+on+ER-stress+signaling+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin opposes effects of bacterial endotoxin on ER-stress signaling in Caco2BB gut cells.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1860 (2), 402-411 (2016).</li><li>Kaltschmidt, B., Kaltschmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB+in+the+nervous+system.">NF-kappaB in the nervous system.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (3), a001271 (2009).</li></ol>

تقنية ميكروديسيكشن من المنفصلة، الغنية OTR نويات الدماغ في الدماغ الفئران حديثي الولادة هو المعروضة في هذه الورقة. من المعروف جيدا أن الخلايا العصبية هي درجة عالية من التخصص، حتى داخل نواة تتسم جيدا في الدماغ. ويمكن هذا النهج استنساخه بدرجة عالية لعزل محددة الغنية OTR نوى اختبار الفرضية قوي?...

وعلى النقيض من فهمنا لتطور الدماغ المبكر التي تحدث على مدى أيام إلى أسابيع بعد الولادة، يعرف سوى القليل نسبيا هو حول عدد كبير التغيرات الدينامية في الساعات الأولى من الحياة في الفئران. وقد يشكل تحديا رئيسيا صغر حجم الدماغ الفئران حديثي الولادة وشرط لأدوات التكنولوجيا العالية لعزل مناطق الدماغ منفصلة أو الخلايا المفردة. وكثيراً ما تقيم الدراسات الجينات النسخ والترجمة لا1،2، التي لا تعطي فهم راسخ للمستويات الوظيفية لتنشيط الجزيئات مما يشير إلى. آخرون دراسة التعبير باستخدام إيمونوهيستوتشيميستري لمناطق الدماغ المرجعية، التي لا تسمح للتقدير الكمي ل مستويات التعبير3. أي دراسة لتاريخ درست تفعيل إشارات المسارات المرتبطة مع اللبأ أول الفئران آر في مناطق الدماغ منفصلة، الأمر الذي يتطلب العزلة السريع والتضحية وقياس التعبير البروتين والبروتين الفسفرة استخدام الغربية النشاف. بينما يتم تنفيذ ميكروديسيكشن الدماغ على أقدم وأكبر العقول، أننا لم نحدد إشارة أداء لكمه الدماغ غير وحيدة الخلية في دماغ P0. وتعرض هذه الورقة على بروتوكول لعزل المناطق المقيدة في الدماغ حديثي الولادة باستخدام تقنية لكمه منخفضة نسبيا والغربية النشاف الداخلي لقياس التعبير البروتين في عينات صغيرة نسبيا. هذا البروتوكول قد تكون مناسبة للأسئلة البحثية التي تتطلب تقييم التعبير البروتين وتعديلات بوستترانسلاشونال (مثلاً.، الفسفرة) في مناطق محدودة نسبيا من العقول الصغيرة من أي الأنواع، شريطة يمكن تحديد المستخدم بصريا منطقة الدماغ للفائدة مع أطلس ومعالم محددة.
تم تطوير هذه التقنية لفهم التغيرات التي تحدث في الدماغ نتيجة الأولى اللبأ الفئران حديثي الولادة آر، وهي غنية في الاوكسيتوسين (OT). أوراسكوم تليكوم معروفا منذ فترة طويلة لقدرته على حفز انكماش الحليب السماح لأسفل والرحم. ومع ذلك، بعد التمديد يعرف الآن بالقيام بمجموعة واسعة من الأدوار في تنظيم العديد من وظائف الجسم والسلوكيات4. على سبيل المثال، بعد التمديد تعارض الإجهاد والتهاب بالاقتران مع السلوكيات التكيفية أفيلياتيفي5ويؤخر إفراغ المعدة، ويبطئ العبور المعوي. قد حددت بعد التمديد مستقبلات (OTR) في الخلايا العصبية المعوية وظهاره الأمعاء6،،من78. آثار الجهاز الهضمي OT تكتسي أهمية خاصة للرضع خلال فترة ما بعد الولادة المبكرة. على سبيل المثال، الرضاعة الطبيعية يرتبط بتسليم كميات كبيرة من الأراضي المحتلة إلى القناة الهضمية المواليد9،10، وتظهر البيانات أن OTR هو أوفيريكسبريسيد بشدة في الزوائد الإثناعشرية خلال لبن الرضاعة فترة8.
وقد أثبتت تجارب في المختبر باستخدام خط خلية القناة الهضمية على المستوى الخلوي أن الاوكسيتوسين ينظم الجزيئات الهامة في الضغط مما يشير إلى مسار11،12 وتقوم بدور تنظيمي في ترجمة بروتينات 12-تشير هذه الدراسات إلى أن مكونات الحليب، بما في ذلك الاوكسيتوسين خارجية من الأم، ذات أهمية في الاستجابة البروتين تكشفت في حديثي الولادة للحد من الإجهاد الخلوي13.
وقد أظهرت الدراسات في فيفو و السابقين فيفو أن ينظم اللبأ بعد التمديد على علامات الإجهاد الخلوي استجابة والتهاب أوتوفاجي في الزوائد القناة الهضمية الفئران حديثي الولادة. انتيروسيتيس حديثي الولادة يعانون الإجهاد الخلوية كبيرة من جانبهم لومينال عندما يتعرض في نفس الوقت القناة الهضمية الحجمية من الأم في اللبأ14،15 والبروتينات العديدة، بما في ذلك الهرمونات مثل ت9 , 10 , 16.
وقد آثار بعد التمديد على الدماغ درس17. ومع ذلك، لم تدرس آليات إرسال الإشارات OT تظاهروا في الأمعاء خلال فترة ما بعد الولادة المبكرة في الدماغ. في هذه الورقة، استخدمت طريقة لعزل نويات الدماغ منفصلة في الدماغ الفئران حديثي الولادة وتحت المهاد استخدام التفريد تعريف المناطق المعزولة من المخ. والهدف العام لهذا الأسلوب لالتقاط حالة الخلية إشارات في مناطق الدماغ في أقرب وقت ممكن للولادة، قبل وبعد الحليب الأولى هي ترضع، في أنسجة المخ مع أدنى مؤشر الدبقية/العصبية. والأساس المنطقي لتطوير هذا الأسلوب أنه يتيح لعزل مناطق الدماغ مقيد، المجهرية في المواليد الجراء السريع مع مجموعة أكثر تجانساً من الخلايا العصبية السابقين فيفو الدراسات النشاف غربي الآلي باستخدام المنهجية، وتقديم نتائج متسقة عالية في عينات تشريح صغيرة نسبيا. قصور عمل مسبق يشمل المزيد من التشريح الإجمالي (شرائح المخ أو الدماغ كله) وكبار السن الحيوانات18،19. أدمغة الشباب الجراء الديناميكية بشكل لا يصدق، يتميز بموجات تمايز الدبقية بعد الولادة. من أجل دراسة تغيرات الدماغ تتأثر بتغذية الجراء الأولى، دراسة نويات الخلايا العصبية مقيد بتشريح استنساخه ضروري.
عادة يتم تحليل الأعلاف الحليب لأثره التغذوية والمناعية على الصحة أو مورثة تعبير (على سبيل المثال، في انتيروسيتيس،من2021)، بينما نادراً ما يتم دراسة تأثيره على مناطق الدماغ أثناء نمو الدماغ. وقد تم تحليل أثر العابر الحليب في الأمعاء على وظيفة المخ إشارة إلى ترحيل تحفيزه من سيكريتين من القناة الهضمية مستقبلات إلى نوى جذع الدماغ، لكن ليس إلى داخل الخلايا مما يشير إلى مسارات22. هناك مؤلفات واسعة على ضعف الدماغ الوليد إلى سوء تغذية الأمهات أثناء الحمل23، ولكن لم يتم التصدي لإشارات الإجهاد والتهاب. الأهم من ذلك، يأخذ الأسلوب الحالي ميزة ظاهرة في الأطفال حديثي الولادة الفئران يوم الصفر يعزل المحفزات اللبأ ولد الدم من ترحيل تحفيزه للمحفزات الحشوي. هذا هو فترة هيبو-استجابة الإجهاد ما يسمى تتميز بنواة غير ناضجة tractus solitarius (NTS)-دارة طائي فورا بعد الولادة24،25 يقيد NTS، نواة بارافينتريكولار (التشفيير)، و نواة سوبراوبتيك (الابن) إشارات إلى المنبهات ولد الدم.
هذه الطريقة مفيدة لتحليل مسارات إشارات متعددة ومقيد نسبيا للخلايا العصبية، شريطة أن يتم حصاد أنسجة المخ في 0 يوم الولادة في الفئران، بالإضافة إلى ما إذا كان قد طعن فيها الأمهات أو لا بأي نوع من العلاج أثناء فترة الحمل. يمكن تحليل ليتر لآثار اللبأ آر مقابل قبل تغذية الإشارات. عند مقارنة الإشارات بين مناطق الدماغ مع الفقراء مقابل الغلة البروتين الغنية، يتيح هذا الأسلوب في شعري تحديد مجموع البروتين من العصابات ببتيد في الشعيرات الدموية بموازاة كوانتيتيشن المناعية المستضدات البروتين. هذا الأسلوب يتيح المقارنة الكمية، استخدام وحدات التعسفي، من النتائج التي تحققت بالضد نفسه دون منحنيات كمية قياسية وإشارة إلى مجموع البروتين الشعرية. مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها من أجسام مختلفة من الممكن فقط استخدام المنحنيات القياسية الكمية.
يسمح هذا الأسلوب لتقييم الإشارات التي تحدث بين الأمعاء والدماغ، والتي يمكن أن يؤثر على وظيفة في كل الأجهزة26ثنائي الاتجاه. الرابطة بين المدخول الاوكسيتوسين والأغذية، التي درست على نطاق واسع في السنوات الأخيرة27، يدعم ارتباط بين مما يشير إلى زيادة الاوكسيتوسين وتوافر المغذيات. هذه الدراسات أيضا دعم مفهوم كونفيرس الطاقة هذا العجز تقترن بتخفيضات في إشارات الاوكسيتوسين طائي.
أظهرت دراسات سابقة من أثر بعد التمديد على نشاط الدماغ أن التهاب الأمعاء المستحث أثارت النسخ الماليين في القشرة طائي التشفيير واللوزة، والكمثرى وصهر لقطع المبهم28. مع ذلك، انخفض الجهازية ضخ OT مع سيكريتين استجابة الدماغ الماليين لاستفزاز رد فعل التهابات في القناة الهضمية28. هذا يشير إلى أن تأثير OT خارجية نفذه طرق خلاف مرحلات تحفيزه، ربما عن طريق جزيئات الإشارات المنقولة عن طريق الدم من خلال6،postrema المنطقة29.
في هذه الدراسة، تم تقييم مسارات الإجهاد الخلوية مما يشير إلى أنه قد لوحظ سابقا في القناة الهضمية في الدماغ. وكان الفرضية القائلة بأن مكونات الحليب قد حماية أو أرجاء تأثير الالتهاب على نفاذية الأمعاء إلى الايضات الميكروبية وغيرها، وفي المقابل، آثار على الدماغ الدالة. الاختلافات واضحة معادية في إيكب مقابل إشارات المقاضاة وجدت في الزوائد، قبل وبعد فتيلة من اللبأ13، اقترح أن العقل المدبر لحديثي الولادة، لا تزال عملية تطوير، قد معنى هذه الإشارات القناة الهضمية الناجمة عن اللبأ.
وقيست علامات البروتين إرسال الإشارات المستخدمة في التجارب السابقة في القناة الهضمية المرتبطة بالإجهاد هيولى. وهي تشمل وصي ER المقاضاة، eIF2a عامل بدء الترجمة (الذي يخدم integrator استجابة إجهاد30)، eIF2a كيناز فروبيه باكستانية، وهما البروتينات مما يشير إلى التهاب (NF-كيلو بايت وما المانع، إيكب).
وقد تم اختيار ست مناطق المخ استناداً إلى قدرتها في البالغين لإفراز أو الاستجابة إلى الأراضي المحتلة. NTS، يقع في لب العلوي، يتم ترحيل أول من المدخلات الحشوي ويستقبل إشارات مباشرة من الخلايا العصبية الحسية تحفيزه في القناة الهضمية31 وربما الدم ولد السيتوكينات والسموم، والهرمونات عبر postrema المنطقة المتاخمة32. التشفيير، نواة بريوبتيك الآنسي (الخطة الرئيسية للعمليات) وقشرة الدماغ (CX)، نواة سوبراوبتيك (الابن) والمخطط نوى (STR) تلقي إشارات من القناة الهضمية عن طريق تي إس.
وأظهرت النتائج أنه استجابة الإجهاد الخلوي خلال فترة ما بعد الولادة مباشرة قبل فتيلة اللبأ، ومباشرة بعد التغذية الأولى يختلف في NTS بالمقارنة مع التشفيير وابنه. إشارات في CX، تقارير عن المعاملات المشبوهة، والخطة الرئيسية للعمليات تختلف عن التشفيير وابنه، كذلك. يرجح أن هي لمست الوظائف الحمائية متميزة للتمديد هو موضح سابقا تعدل خلية الإجهاد والتهاب في القناة الهضمية ببعض المناطق في الدماغ. جماعياً، وتشير البيانات إلى أنه على المستوى الخلوي، خلال الساعات الأولى بعد الولادة، والدماغ يستجيب للإجهاد الأيضية المرتبطة بنقص العناصر الغذائية. وتظهر البيانات أيضا أن مدى واتجاه آثار تحوير اللبأ آر لا تعتمد على المنطقة وأنها مرآة في بعض المناطق، وآثار بعد التمديد هو موضح سابقا في القناة الهضمية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bradford solution</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein lysis kit</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>CBS403</td>
			<td>Bicine/CHAPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WES kits</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>WES-Mouse 12-230 master kit (PS-MK15), WES-Rabbit 12-230 master kit (PS-MK14), WES 12-230 kDa total Protein master kit (PS-TP07)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse IgG HRP conjugate</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-eIF2a</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>SER51, 9721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-PKR</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Thr451, 07-886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>12297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAb anti-GAPDH</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-phospho-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>9246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>4814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-BiP</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti GCN2</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-phospho-GCN2</td>
			<td>BIORBYT</td>
			<td>T899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pregnant Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Punch device</td>
			<td>WellTech Rapid Core or Harris Uni-Core</td>
			<td>0.35, 0.50, 0.75, 1.0, 1.20, 1.50</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding

والهدف من هذا البروتوكول عزل نويات الدماغ الغنية مستقبلات الاوكسيتوسين في الدماغ حديثي الولادة قبل وبعد التغذية اللبأ الأولى. وتم قياس التعبير عن البروتينات المعروفة للاستجابة للإجهاد الأيضي في يعزل نويات الدماغ باستخدام النشاف الغربية. وقد تم ذلك لتقييم ما إذا كان التمثيل الغذائي عدم كفاية المواد الغذائية الناجمة عن الإجهاد في الجسم تسبب الضغوط العصبية. قد أثبتنا سابقا أن نقص المغذيات في حديثي الولادة يتسبب الإجهاد الأيضي في القناة الهضمية. وعلاوة على ذلك، ينظم الاوكسيتوسين اللبأ علامات الإجهاد الخلوي استجابة والتهاب أوتوفاجي في الزوائد القناة الهضمية الفئران حديثي الولادة قبل وبعد تغذية الأولى. إشارات علامات البروتين المرتبطة بالإجهاد هيولى [ER وصي ملزم الغلوبولين المناعي البروتين (المقاضاة)، 2 ألف عامل الشروع في ترجمة حقيقية النواة (eIF2a)، و eIF2a كيناز البروتين كيناز R (ف-PKR)]، فضلا عن اثنين البروتينات [النووية عامل-κB (NF-kB) ومثبطات κB (إيكب)]، وقيست في نويات الدماغ الوليد يشير إلى التهاب [نواة المسالك الانفرادي (NTS)، نواة بارافينتريكولار (التشفيير)، ونواة البصرية أعلاه (الابن)، واللحاء (CX)، المخطط نوى (STR)، و نواة بريوبتيك الآنسي (الخطة الرئيسية للعمليات)] قبل تغذية الأولى (أونبريميد من اللبأ) وبعد بداية التمريض (أعدادا من اللبأ). كانت تعبيراً عن المقاضاة/GRP78 وف-eIF2a أوبريجولاتيد في أونبريميد ودوونريجولاتيد في معبي NTS الأنسجة. أبقى NF-كيلوبايت (عالية) في السيتوبلازم معادل، والإبلاغ عن المعاملات المشبوهة، والخطة الرئيسية للعمليات، بينما NF-كيلو بايت أقل ودون تغيير في NTS، التشفيير وابنه في كل الظروف. الهيئة الجماعية والنتائج eIF2 ف تتسق مع استجابة إجهاد. وكان فوسفوريلاتيد eIf2a دسرنا تعتمد كيناز (ف-PKR) في ابنه ومعادل، والإبلاغ عن المعاملات المشبوهة، والخطة الرئيسية للعمليات. ومع ذلك، في تي إس (وإلى حد أقل في التشفيير)، كان فوسفوريلاتيد eIf2a بآخر كيناز، كيناز نونديريبريسيبلي--2 الرقابة العامة (GCN2). آليات تحوير الإجهاد لوحظ سابقا في القناة الهضمية الوليد انتيروسيتيس يبدو أن تكون متطابقة في بعض مناطق المخ الغنية OTR. NTS والتشفيير قد تستخدم إليه الفسفرة مختلفة (تحت عوز المغذيات) من مناطق أخرى ويكون مقاوم لتأثير نقص المغذيات. مجتمعة، هذه البيانات تشير إلى أن استجابات الدماغ لنقص المغذيات الإجهاد تقابلها إشارات من انتيروسيتيس معبي اللبأ.

عصابات إيمونوريكتيفيتي بالنسبة إلى مجموع البروتين الممثل تظهر أن هناك نويات الدماغ مع البروتين المقطوع منخفضة جداً. وهذا يتطلب استخدام هذا الأسلوب الآلي لطخة غربية، وحساسة للغاية مقارنة بوصمة عار الغربية المتعارف عليه. يمكن تشغيل هذا النهج مع فورتيفولد البروتين أقل لل...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding at JoVE.co

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

تقييم الإجهاد الخلوية والتهاب في نويات الدماغ إفراز الاوكسيتوسين المنفصلة في الفئران حديثي الولادة قبل وبعد التغذية اللبأ الأولى

نقدم هنا، بروتوكولا لعزل نويات الدماغ في الدماغ الفئران حديثي الولادة بالاقتران مع تغذية اللبأ الأولى. يسمح هذا الأسلوب دراسة الإجهاد نقص المغذيات في الدماغ كما عن طريق إشارات enterocyte التضمين.

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التنمية بعد الولادة حول الطريقة التي يؤثر بها مص الحليب على الإجهاد الذي يشير إلى الدماغ. ويمكن استخدام هذه التقنية لالتقاط مناطق محددة في الدماغ خلال فترة المجاعة الطبيعية الأولى ومقارنتها بالمناطق المعنية بعد وقت قصير من تغذية اللبأة الطبيعية الأولى. فهم كيف يؤثر الرضاعة الفسيولوجية للسلوك والعاطفة تمكن من استخدام خصم لمختلف المستقبلات خلال السابق vivo تحليل أنسجة الدماغ.للحصول على اللكمات نوكلي، إزالة الجراء الفئران من ذيلهم مع اليد قفاز. بعد حصاد الدماغ، ضع العضو بأكمله بسرعة في قالب دماغ ميثيل الميثريلات في درجة حرارة الغرفة واستخدم على الفور شفرة حلاقة جديدة لصنع شرائح سميكة تبلغ 500 ميكرومتر من الأنسجة. وضع شرائح روسترال إلىcaudal في طبق بيتري كما يتم الحصول عليها للحفاظ على الاتجاه الصحيح من المقاطع.عندما تم تقسيم الدماغ بأكمله ، بسرعة إضافة السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي دون الجلوكوز إلى الطبق واحتضان الشرائح لمدة 60 دقيقة في 28 إلى 30 درجة مئوية مع اثارة مستمرة على شاكر المدارية. استخدام أطلس الدماغ والمعالم التشريحية على كل نسيج لتحديد نواة الدماغ ليتم لكمة ووضع شريحة مع نوات الاهتمام في طبق بيتري جديد تحت مجهر تشريح. مرة واحدة تصور, استخدام أداة الكورس لكمة بسرعة من أربعة إلى ست نوات مختلفة وتزج بسرعة كل نواة لكمة في 0.06 مل من الجليد الباردة استخراج البروتين العازلة في أنبوب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة المسمى بشكل مناسب تحتوي على مثبطات البروتين ومثبطات فوسفاتاز لمدة 60 دقيقة.في نهاية الحضانة، الطرد المركزي النوى المستخرجة في جهاز طرد مركزي صغير المبردة، واستخدام ماصة صغيرة لنقل بعناية 0.055 مل من فوق كل أنبوب في أنبوب جهاز طرد مركزي صغير 1.5 مل مناسبة قبل التبريد على الجليد. قبل التخزين السلبي 20 درجة مئوية، نقل 0.012 مل من متان من كل أنبوب مخزون البروتين في أنبوب 0.5 مل مناسبة قبل تبريد على الجليد لإعداد العينة الأولى. لإعداد العينات لقياس البروتين في الشعيرات الدموية، إضافة 0.003 مل من مُكْشف المزيج الرئيسي من مجموعة بروتينية إلى كل من العينات في الأنابيب التي تحمل 0.5 مل.بعد ذلك، أضف 0.004 مل من كاشف المزيج الرئيسي إلى محلول سلم الوزن الجزيئي الحيوي في 0.016 مل من المياه الأيونية، وتحريف عينات مسالم ومستخرج البروتين في كتلة حرارة 95 درجة مئوية، وتخزين جميع الأنابيب عند أربع درجات مئوية بعد خمس دقائق. لتحليل بروتين الإشارة، إضافة 0.01 مل من محلول بيروكسيد المضيء الطازجة المعدة إلى الآبار E-1 إلى E-25 من لوحة غربية آلية جديدة، 0.01 مل من الأجسام المضادة الثانوية المضادة للماوس إلى الآبار D-2 إلى D-25، وإضافة 0.01 مل من الفرس بيرويداوس streptavidin من مجموعة إلى D-1. إضافة 0.01 مل من الأجسام المضادة الأولية الطازجة المعدة في الآبار C-2 إلى C-25، و0.01 مل من الأجسام المضادة diluent حل اثنين إلى الآبار C-1 و B-1 إلى B-25.اترك الصف F الآبار فارغة وملء المقصورات الخمسة من ثلاثة صفوف تحت الصف F مع 0.45 مل من العازلة الغسيل. بعد ذلك، تدور لفترة وجيزة عينات المبردة لمدة 30 ثانية وإضافة 0.03 مل من كل عينة إلى كل بئر من الصف A، بدءا من A-2. ثم، إضافة 0.005 مل من سلم الوزن الجزيئي biotinylated إلى A-1 جيدا وتغطية لوحة للطرد المركزي.في حين يتم طرد اللوحة ، افتح ملف تشغيل جديد في البرامج المرتبطة الغربية الآلية وبدء مقايسة الحجم الجزيئي. في صفحة الفحص، أدخل أسماء العينات في كل شعرية بالإضافة إلى أسماء الأجسام المضادة الأولية والثانوية. في نهاية الطرد المركزي، ضع اللوحة في الأداة الغربية الآلية وقشر الغطاء من صندوق خرطوشة الشعيرات الدموية.بعد الطرد المركزي، لا تنسى أن تفقد لفقاعات الهواء، لأن فقاعات الهواء في الشعيرات الدموية يمكن أن تمنع التيار الكهربائي وتفشل الجولة بأكملها. أدخل الكارتريدج في الموضع المعين داخل الجهاز واغلق الباب. انقر فوق ابدأ.عند مطالبتك بنوع الفحص، أدخل اسم التجربة في مربع النص المناسب وانقر فوق Okay. عند المطالبة من قبل تاريخ التشغيل تنشيط ورقم المعرف على ملف التشغيل، دوّن ملاحظة عن الوقت الذي ينتهي فيه التشغيل. في نهاية المدى، والتخلص من خرطوشة الشعيرات الدموية في التخلص الحادة وطبق في التخلص من المواد الحية الخطر.بعد فصل الكهرباء، والتحقق من تشغيل الملفات لقمم التفاعل المناعي من المستضدات في 40 إلى 43 كيلودالتون التي تقف على الفوسفور eukaryotic بدء الترجمة عامل 2A. حيث ذروة الوزن الجزيئية من هذا الحجم مفقودة، انقر بزر الماوس الأيمن أدناه منحنى وحدد إضافة الوزن الجزيئي إلى الذروة لضمان أن يتم تسجيل الأحجام والكميات التعسفية تحت المنحنى. داخل عينات الأنسجة unprimeds، مستويات بروتين الجلوبيولين الأمينية ملزمة في نوى المسار الانفرادي هي أعلى بكثير بالمقارنة مع جميع المناطق الأخرى.فتيلة من أنسجة الأمعاء مع اللبأ يقلل من مستويات بروتين الجلوبيولين الأمينية ملزمة في نوى المسار الانفرادي وليس له أي تأثير على النوى البارافينية والنوية فائقة البصرية. وعلى العكس من ذلك، يزيد فتيلة مستويات بروتين الجلوبيولين الأمينية الملزمة داخل القشرة، نواة التصدع، والنوى المسبقة الوسيطة نسبة إلى الأنسجة غير المخيّمة، مما يعني أن مستويات بروتين الجلوبيولين الأمينية الملزمة في مختلف نوى الدماغ المختبرة تستجيب بشكل مختلف لالإشاتية الأمعاء وليس هناك بعد أي حديث متقاطع واضح بين مختلف النواة التي تم اختبارها. إن عامل بدء الترجمة النيكي 2A وعامل بدء الترجمة eukaryotic الفوسفوري 2A مستويات مرتفعة في حالة غير الأولية نسبة إلى النوى الأخرى.بعد فتيلة، يتم تخفيض مستويات كل من بداية بدء الترجمة eukaryotic عامل 2A وفسفورية مبدأ بدء الترجمة eukaryotic 2A نسبة إلى نوات المسار الانفرادي مقارنة مع الأنسجة غير الأولية. في جميع النوى المختبرة الأخرى، يزيد فتيلة مستويات بدء الترجمة eukaryotic عامل 2A وفسفوريديلي مبدأ بدء الترجمة eukaryotic 2A نسبة إلى الأنسجة غير الأولية. ومع ذلك، مستويات مستقبلات كيناز البروتين الفوسفوري منخفضة في العينات غير الأولية نسبة إلى عينات مهيأة في نوات المسار الانفرادي، مما يشير بقوة إلى أن كيناز آخر تشارك في الفوسفور من عامل بدء الترجمة eukaryotic 2A.بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال التنمية بعد الولادة لاستكشاف مسارات الإشارات المشاركة في نمو الأنسجة والتمايز وما إذا كانت تتأثر أو مستقلة عن الرضاعة. لا ننسى أن العمل مع وكلاء خفض متقلبة مثل, على سبيل المثال, dithiothreitol, يمكن أن تكون خطرة, وينبغي دائما اتخاذ الاحتياطات مثل إعداد في غطاء محرك السيارة الكيميائية عند إعداد هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Seven Steps to Stellate Cells

سبع خطوات لخلايا النجمية

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes

تقييم Hypermutation الجسدية في خلايا B راموس بعد Overexpression أو ضربة قاضية لجينات معينة

B cells start their life with low affinity antibodies generated by V(D)J recombination.  However, upon detecting a pathogen, the variable (V) region of an ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

عزل الخلايا الدبقية الصغيرة الابتدائية المختلطة من زراعات الخلايا الغروية من المواليد الجدد الجرذ أنسجة المخ

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

نموذج غير الغازية من ممرض للأعصاب<em&gt; الإشريكية القولونية</em&gt; العدوى في الأطفال حديثي الولادة الجرذ

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

عزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

تقييم الاستجابة المناعية الخلوية ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، استخدام "في فيفو البلعمه بالانزيم"

In all animals, innate immunity provides an immediate and robust defense against a broad spectrum of pathogens. Humoral and cellular immune responses are ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

النقل عاليه الكفاءة من الضامة الابتدائية مع في المختبر كتب mRNA

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

منع تدفق اللمفاوية عن طريق خياطة الأوعية اللمفاوية Afferent في الفئران

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...