Name: assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding
Uploaded: 2018-11-14T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding at JoVE.co

המחברים תודה מאנון הפקחים אלכסנדרה שולץ לסיוע שלהם בהכנת פרוטוקול זה.

מחקר זה אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ו שימוש ועדות באוניברסיטת קולומביה, מכון פסיכיאטרי של מדינת ניו יורק.
1. רקמות הכנה
<ol><li>סדר חולדות הרות מתוזמן מן הספק.</li>
	<li>בצע מתוזמן חולדות בהריון על ידי התבוננות שלהם הבטן הגדלה השבועות לאחר הגעתם, לאחר מכן מחפש הגורים על תאר?...

<ol>
	<li>Hietaniemi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+fetal+and+neonatal+rat+offspring+of+energy-restricted+dams.">Gene expression profiles in fetal and neonatal rat offspring of energy-restricted dams.</a> Journal of Nutrigenetics and Nutrigenomics. 2 (4-5), 173-183 (2009).</li><li>Okabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenous+glycine+receptor+expression+in+cortical+plate+neurons+and+Cajal-Retzius+cells+of+neonatal+rat+cerebral+cortex.">Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex.</a> Neuroscience. 123 (3), 715-724 (2004).</li><li>Mailleux, P., Takazawa, K., Erneux, C., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+the+neurons+containing+inositol+1,4,5-trisphosphate+3-kinase+and+its+messenger+RNA+in+the+developing+rat+brain.">Distribution of the neurons containing inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase and its messenger RNA in the developing rat brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 327 (4), 618-629 (1993).</li><li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Human+Evolution.">Oxytocin and Human Evolution.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. , (2017).</li><li>Sippel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Stress-related+Disorders:+Neurobiological+Mechanisms+and+Treatment+Opportunities.">Oxytocin and Stress-related Disorders: Neurobiological Mechanisms and Treatment Opportunities.</a> Chronic Stress (Thousand Oaks). 1, (2017).</li><li>Agnati, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+on+the+integrative+actions+of+the+brain+from+neural+networks+to+"brain-body+medicine".">Aspects on the integrative actions of the brain from neural networks to "brain-body medicine".</a> Journal of Receptors and Signal Transduction Research. 32 (4), 163-180 (2012).</li><li>Welch, M. G., Margolis, K. G., Li, Z., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+regulates+gastrointestinal+motility,+inflammation,+macromolecular+permeability,+and+mucosal+maintenance+in+mice.">Oxytocin regulates gastrointestinal motility, inflammation, macromolecular permeability, and mucosal maintenance in mice.</a> American Journal Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 307 (8), G848-G862 (2014).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+developmental+regulation+of+oxytocin+(OT)+and+oxytocin+receptors+(OTR)+in+the+enteric+nervous+system+(ENS)+and+intestinal+epithelium.">Expression and developmental regulation of oxytocin (OT) and oxytocin receptors (OTR) in the enteric nervous system (ENS) and intestinal epithelium.</a> Journal of Comparative Neurology. 512 (2), 256-270 (2009).</li><li>Prakash, B. S., Paul, V., Kliem, H., Kulozik, U., Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oxytocin+in+milk+of+cows+administered+oxytocin.">Determination of oxytocin in milk of cows administered oxytocin.</a> Analytica Chimica Acta. 636 (1), 111-115 (2009).</li><li>Solangi, A. R., Memon, S. Q., Mallah, A., Khuhawar, M. Y., Bhanger, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+separation+of+oxytocin,+norfloxacin+and+diclofenac+sodium+in+milk+samples+using+capillary+electrophoresis.">Quantitative separation of oxytocin, norfloxacin and diclofenac sodium in milk samples using capillary electrophoresis.</a> Biomedical Chromatography. 23 (9), 1007-1013 (2009).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+markers+of+the+unfolded+protein+response+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin modulates markers of the unfolded protein response in Caco2BB gut cells.</a> Cell Stress and Chaperones. 19 (4), 465-477 (2014).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Hirschberg, D. L., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+mTORC1+pathway+in+the+gut.">Oxytocin modulates mTORC1 pathway in the gut.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 432 (3), 466-471 (2013).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Ludwig, R. J., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colostrum+oxytocin+modulates+cellular+stress+response,+inflammation,+and+autophagy+markers+in+newborn+rat+gut+villi.">Colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi.</a> Biochemical an Biophysical Research Communications. 487 (1), 47-53 (2017).</li><li>Donnet-Hughes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+role+of+the+intestinal+microbiota+of+the+mother+in+neonatal+immune+education.">Potential role of the intestinal microbiota of the mother in neonatal immune education.</a> Proceedings of the Nutritional Society. 69 (3), 407-415 (2010).</li><li>Perez, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+imprinting+of+the+neonatal+immune+system:+lessons+from+maternal+cells?.">Bacterial imprinting of the neonatal immune system: lessons from maternal cells?.</a> Pediatrics. 119 (3), e724-e732 (2007).</li><li>Takeda, S., Kuwabara, Y., Mizuno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrations+and+origin+of+oxytocin+in+breast+milk.">Concentrations and origin of oxytocin in breast milk.</a> Endocrinolcia Japonica. 33 (6), 821-826 (1986).</li><li>Quintana, D. S., Outhred, T., Westlye, L. T., Malhi, G. S., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+oxytocin+administration+on+brain+activity:+a+systematic+review+and+meta-analysis+protocol.">The impact of oxytocin administration on brain activity: a systematic review and meta-analysis protocol.</a> Systematic Reviews. 5 (1), 205 (2016).</li><li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt.">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), 79-83 (1979).</li><li>Orr, M. E., Garbarino, V. R., Salinas, A., Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+Postnatal+Brain+Development+in+the+Longest-Lived+Rodent:+Prolonged+Maintenance+of+Neotenous+Traits+in+the+Naked+Mole-Rat+Brain.">Extended Postnatal Brain Development in the Longest-Lived Rodent: Prolonged Maintenance of Neotenous Traits in the Naked Mole-Rat Brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 504 (2016).</li><li>Hansson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+quantitative+proteome+analysis+of+in+vivo+intestinal+development.">Time-resolved quantitative proteome analysis of in vivo intestinal development.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 10 (3), (2011).</li><li>Mochizuki, K., Yorita, S., Goda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+in+the+jejunum+of+rats+during+the+transient+suckling-weaning+period.">Gene expression changes in the jejunum of rats during the transient suckling-weaning period.</a> Journal of Nutritional Science and Vitaminology (Tokyo). 55 (2), 139-148 (2009).</li><li>Rinaman, L., Banihashemi, L., Koehnle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+life+experience+shapes+the+functional+organization+of+stress-responsive+visceral+circuits.">Early life experience shapes the functional organization of stress-responsive visceral circuits.</a> Physiology and Behavior. 104 (4), 632-640 (2011).</li><li>Johannes, G., Sarnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cap-independent+polysomal+association+of+natural+mRNAs+encoding+c-myc,+BiP,+and+eIF4G+conferred+by+internal+ribosome+entry+sites.">Cap-independent polysomal association of natural mRNAs encoding c-myc, BiP, and eIF4G conferred by internal ribosome entry sites.</a> RNA. 4 (12), 1500-1513 (1998).</li><li>Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindbrain+noradrenergic+A2+neurons:+diverse+roles+in+autonomic,+endocrine,+cognitive,+and+behavioral+functions.">Hindbrain noradrenergic A2 neurons: diverse roles in autonomic, endocrine, cognitive, and behavioral functions.</a> American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (2), R222-R235 (2011).</li><li>Walker, C. D., Toufexis, D. J., Burlet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+and+limbic+expression+of+CRF+and+vasopressin+during+lactation:+implications+for+the+control+of+ACTH+secretion+and+stress+hyporesponsiveness.">Hypothalamic and limbic expression of CRF and vasopressin during lactation: implications for the control of ACTH secretion and stress hyporesponsiveness.</a> Progress in Brain Research. 133, 99-110 (2001).</li><li>Montiel-Castro, A. J., Gonzalez-Cervantes, R. M., Bravo-Ruiseco, G., Pacheco-Lopez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiota-gut-brain+axis:+neurobehavioral+correlates,+health+and+sociality.">The microbiota-gut-brain axis: neurobehavioral correlates, health and sociality.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 7, 70 (2013).</li><li>Blevins, J. E., Ho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxytocin+signaling+in+the+regulation+of+body+weight.">Role of oxytocin signaling in the regulation of body weight.</a> Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 14 (4), 311-329 (2013).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+administration+of+secretin+and+oxytocin+inhibits+chronic+colitis+and+associated+activation+of+forebrain+neurons.">Combined administration of secretin and oxytocin inhibits chronic colitis and associated activation of forebrain neurons.</a> Neurogastroenterology Motility. 22 (6), 654 (2010).</li><li>Berthoud, H. R., Neuhuber, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+chemical+anatomy+of+the+afferent+vagal+system.">Functional and chemical anatomy of the afferent vagal system.</a> Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 85 (1-3), 1-17 (2000).</li><li>Taniuchi, S., Miyake, M., Tsugawa, K., Oyadomari, M., Oyadomari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+stress+response+of+vertebrates+is+regulated+by+four+eIF2alpha+kinases.">Integrated stress response of vertebrates is regulated by four eIF2alpha kinases.</a> Scientific Reports. 6, 32886 (2016).</li><li>Altschuler, S. M., Bao, X. M., Bieger, D., Hopkins, D. A., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscerotopic+representation+of+the+upper+alimentary+tract+in+the+rat:+sensory+ganglia+and+nuclei+of+the+solitary+and+spinal+trigeminal+tracts.">Viscerotopic representation of the upper alimentary tract in the rat: sensory ganglia and nuclei of the solitary and spinal trigeminal tracts.</a> Journal of Comparative Neurology. 283 (2), 248-268 (1989).</li><li>Shapiro, R. E., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+central+neural+connections+of+the+area+postrema+of+the+rat.">The central neural connections of the area postrema of the rat.</a> Journal of Comparative Neurology. 234 (3), 344-364 (1985).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).</li><li>Nayak, R., Pintel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viruses+can+induce+phosphorylation+of+eIF2alpha+via+PKR+activation,+which+can+be+overcome+by+helper+adenovirus+type+5+virus-associated+RNA.">Adeno-associated viruses can induce phosphorylation of eIF2alpha via PKR activation, which can be overcome by helper adenovirus type 5 virus-associated RNA.</a> Journal of Virology. 81 (21), 11908-11916 (2007).</li><li>Zaborske, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+tRNA+charging+and+activation+of+the+eIF2+kinase+Gcn2p.">Genome-wide analysis of tRNA charging and activation of the eIF2 kinase Gcn2p.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (37), 25254-25267 (2009).</li><li>Hollis, J. H., Lightman, S. L., Lowry, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+systemic+and+visceral+sensory+information+by+medullary+catecholaminergic+systems+during+peripheral+inflammation.">Integration of systemic and visceral sensory information by medullary catecholaminergic systems during peripheral inflammation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1018, 71-75 (2004).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+opposes+effects+of+bacterial+endotoxin+on+ER-stress+signaling+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin opposes effects of bacterial endotoxin on ER-stress signaling in Caco2BB gut cells.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1860 (2), 402-411 (2016).</li><li>Kaltschmidt, B., Kaltschmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB+in+the+nervous+system.">NF-kappaB in the nervous system.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (3), a001271 (2009).</li></ol>

טכניקה עבור microdissection של בדידה, OTR-עשיר המוח גרעינים במוח neonatal העכברוש מוצג בעיתון הזה. הוא מוכר היטב כי הנוירונים הם מאוד מיוחדים, אפילו בתוך הגרעינים מאופיין היטב במוח. זו גישה מאוד לשחזור לבודד את הגרעינים OTR-עשיר מסוים מאפשרת בדיקת השערות חזקים. באמצעות סופג המערבי אוטומטיות, העקביות והע?...

בניגוד ההבנה שלנו של התפתחות המוח מוקדם המתרחשים במהלך ימים לשבועות לאחר לידה, יחסית מעט מאוד ידוע על עצום של שינויים דינמיים המתרחשים השעות הראשונות של החיים אצל חולדות. אתגר מפתח כבר גודל קטן של המוח עכברוש neonatal, דרישה עבור ההיי-טק כלים לבודד אזורים במוח דיסקרטית או תאים בודדים. מחקרים להעריך לעיתים קרובות ג'ין תמלול ותרגום לא1,2, אשר לא נותן הבנה מוצקה של רמות פונקציונלי של מולקולות איתות מופעל. אחרים לבחון את הביטוי תוך שימוש אימונוהיסטוכימיה לאזורים במוח הפניה, אשר אינה מאפשרת כימות של רמות הביטוי3. אף מחקר לתאריך בחן את הפעלת איתות מסלולים הקשורים קולוסטרום הראשון של חולדות להאכיל באזורים במוח דיסקרטית, המחייב בידוד מהיר, הקרבה, מדידה של זירחון חלבונים באמצעות ווסטרן וביטוי חלבונים סופג. בעוד microdissection במוח מתבצעת על המוח גדולים יותר ושנמצאת, לא איתרנו הפניה מבצע אגרוף מוח P0 שאינם חד-תאים במוח. מאמר זה מציג פרוטוקול לבידוד אזורים מוגבלים של המוח neonatal באמצעות טכניקה אגרוף יחסית low-tech ומערבון סופג הליך למדוד חלבון ביטוי בדגימות קטן יחסית. פרוטוקול זה עשוי להיות מתאים עבור שאלות המחקר הדורשים את ההערכה של ביטוי חלבונים ושינויים post-translational (למשל., זרחון) באזורים מוגבלים יחסית של מוח קטן של כל מין, ובלבד המשתמש יכול לזהות ויזואלית האזור במוח עניין עם אטלס וציוני לזיהוי.
שיטה זו פותחה כדי להבין את השינויים המתרחשים במוח כתוצאה קולוסטרום של החולדות neonatal הראשון להאכיל, אשר הינה עשירה אוקסיטוצין (OT). OT ידוע זמן רב בשל יכולתו לעורר ההתכווצות אכזבה, הרחם חלב. עם זאת, OT ידוע עכשיו לנגן מגוון רחב של תפקידים בוויסות תפקודים גופניים רבים, התנהגויות4. לדוגמה, OT מתנגדת מתח ודלקת בשיתוף עם התנהגויות affiliative מסתגלת5מעכב ריקון הקיבה, מאט את המעבר במעיים. OT קולטנים (OTR) זוהו העצבים המעית, אפיתל המעי-6,-7,-8. השפעת מערכת העיכול OT חשובים במיוחד הפעוטה במהלך התקופה לאחר הלידה המוקדמת. למשל, הנקה קשורה עם מסירת כמויות משמעותיות של OT9,הבטן neonatal10, הנתונים מראים כי OTR הוא בכבדות overexpressed ב- villi תריסריון במהלך החלב בהנקת התקופה8.
במבחנה ניסויים באמצעות קו תא הבטן הפגינו ברמה התאית שאוקסיטוצין ממיקרו חשוב המולקולות של הלחץ איתות לשביל11,12 , ממלא תפקיד רגולטורי בתרגום של חלבונים 12. מחקרים אלה מראים כי מרכיבי חלב, כולל אוקסיטוצין אקסוגני מהאמא חשובים תגובת חלבונים פרש ב- neonates כדי להפחית מתח הסלולרית13.
In vivo ו- ex-vivo מחקרים הראו כי קולוסטרום OT שמחליש את מתח סלולארית תגובת דלקת, autophagy סמני עכבר היילוד בטן villi. Enterocytes היילוד לסבול משמעותי הסלולר הלחץ בצד luminal שלהם כאשר הבטן חשוף בו זמנית microbiota מהאם קולוסטרום14,15 , חלבונים רבים, כולל הורמונים כגון OT9 , 10 , 16.
ההשפעות של OT על המוח כבר למדה17. עם זאת, מנגנוני איתות OT הפגינו בבטן במהלך התקופה לאחר הלידה המוקדמת לא נחקרו במוח. בנייר זה, שיטה אנליטית גרעינים במוח דיסקרטית עכברוש neonatal גזע המוח ואת ההיפותלמוס באמצעות אלקטרופורזה משמש פרופיל אזורי המוח מבודדים. המטרה הכוללת של שיטה זו הוא ללכוד את המצב של התא איתות באזורים במוח קרוב ככל האפשר ללידה, לפני ואחרי את החלב הראשון מצויירת, ברקמת המוח עם גליה/עצביים המדד הנמוך. הרציונל לפיתוח של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת בידוד מהיר של אזורים במוח מוגבלת, מיקרוסקופיים הגורים neonatal עם אוסף יותר הומוגנית של נוירונים עבור ex-vivo מחקרים באמצעות סופג המערבי אוטומטיות מתודולוגיה, המציעה תוצאות עקביות מאוד על דגימות ביתור קטן יחסית. חסרונה של עבודה מוקדמת כולל יותר מגעיל לנתיחה (פרוסות המוח או כל המוח), בעלי חיים בוגרים18,19. המוח של הגורים הצעירים הם מאוד דינמי, ובו גלים של גליה הבידול לאחר הלידה. על מנת ללמוד שינויים במוח מושפע מאכילה הראשון של הגורים, לומד מוגבלת עצביים גרעינים עם ניתוח לשחזור הכרחי.
הזנה חלב בדרך כלל ניתוח ההשפעה שלה חיסוניות, תזונה בריאות או גנים ביטוי (לדוגמה, ב- enterocytes20,21), ואילו השפעתו על אזורים במוח במהלך התפתחות המוח הוא למד רק לעתים רחוקות. השפעת חלב המעבר בבטן על תפקוד המוח נותחו ביחס בטן כוליציסטוקינין קולטנים vagal ממסר גרעינים בגזע המוח, אך לא תאיים איתות המסלולים22. יש ספרות עצומה על פגיעות של המוח המתפתח neonate תזונה של אמהות במהלך ההריון23, אבל אותות מתח ודלקת שאינן מטופלות. חשוב, השיטה הנוכחית מנצלת תופעה ילודים יום-האפס עכברוש שמבודד הגירויים קולוסטרום דם-נולד מן vagal ממסר של גירויים מהבטן. זו התקופה היפו-תגובתיות מתח כביכול מאופיין על ידי גרעין לא בוגר tractus solitarius (NTS)-מעגל היפותלמי מיד לאחר הלידה24,25 המגבילה NTS, גרעין paraventricular (PVN), ו גרעין supraoptic (הבן) אותות לגירויים דם-נולד.
שיטה זו שימושית עבור ניתוח של מספר איתות המסלולים, יחסית מוגבלת תאים עצביים, ובלבד רקמת המוח הוא נקצרו יום לאחר הלידה-0 בחולדות, בנוסף אם יש לדו-קרב אמהות או לא על ידי כל סוג של טיפול במהלך ההריון. המלטות ניתן לנתח על ההשפעות של קולוסטרום להאכיל לעומת מראש האכלה איתות. בעת השוואה בין אותות בין אזורי המוח עם עניים לעומת התשואה עשירים בחלבון, שיטה זו מאפשרת קביעת בנים של חלבון הכולל של להקות מפוליפפטיד ב נימים עוברים במקביל החיסון-כימות של חלבונים אנטיגניים. שיטה זו מאפשרת השוואה כמותית, באמצעות יחידות שרירותי, התוצאות המתקבלות על ידי הנוגדן אותו בלי רגיל עקומות כמותיים על ידי התייחסות חלבונים הכולל בכל נימי. השוואת התוצאות המתקבלות באמצעות נוגדנים שונים אפשרי רק באמצעות עקומות סטנדרט כמותי.
שיטה זו איפשרה ההערכה של דו-כיווניות איתות המתרחשים בין הבטן, המוח יכול להשפיע פונקציה בשני האיברים26. הקשר בין צריכת אוקסיטוצין ומזון, אשר יש נחקרו בהרחבה בשנים האחרונות27, תומך קישור בין אוקסיטוצין מוגברת איתות זמינות חומרי הזנה. מחקרים אלה תומכים גם המושג הנגד אנרגיה גירעונות נמצאים ביחד עם הפחתות אוקסיטוצין היפותלמי איתות.
מחקרים מוקדמים יותר של השפעת בתנ ך על פעילות מוחית הראה כי דלקת מעיים המושרה elicited cFos שעתוק של קליפת PVN, האמיגדלה, מתוכנות piriform ההיפותלמוס אשר היה עקשן vagotomy28. עם זאת, אינפוזיה מערכתית וויבר עם סקרטין ירד התגובה cFos המוח תגובה דלקתית שעורר הבטן28. זה הציע כי ההשפעה של OT אקסוגני בוצע על ידי מסלולים חוץ ממסרי vagal, ואולי דרך מולקולות איתות נישא בדם מועבר6,postrema29אזור.
במחקר זה, הלחץ הסלולר איתות המסלולים אשר מקיימות בעבר בבטן היו העריכו במוח. ההשערה היתה כי רכיבי חלב עשויה להגן או דחה את ההשפעה של דלקת על הבטן חדירות כדי מטבוליטים מיקרוביאלי ואחרים, בתורו, ההשפעות על תפקוד המוח. הבדלי IkB ברורה עוינת נגד ביפ איתות נמצאו villi, לפני ואחרי לקרקע על ידי קולוסטרום13, הציע כי המוח של neonates, עדיין בתהליך של פיתוח, עשויים לחוש אותות אלה בטן קולוסטרום-induced.
איתות סמני חלבונים המשמשים הקודם ניסויים בטן הקשורים ללחץ תוך-פלזמית נמדדו. הם כוללים המלווה ER ביפ, תרגום חניכה פקטור eIF2a (המשמש כאמצעי לחץ התגובה אינטגרטור30), eIF2a קינאז p-PKR, ואת שני חלבונים איתות דלקת (NF-kB, מעכב שלה, IkB).
ששת אזורי המוח בהתבסס על יכולתם במבוגרים כדי להפריש או להגיב OT נבחרו. NTS, הממוקמת לשד העליון, הממסר הראשונה של הקלט מהבטן, מקבל איתות ישירה מן vagal החישה הניריונים בטן31 ו ציטוקינים וייתכן שנולד דם, רעלים, וכן הורמונים דרך האזור הסמוך-postrema32. PVN, supraoptic גרעין (הבן), גרעינים סטריאטום (STR), קליפת המוח (CX) וגרעין preoptic המדיאלי (MPO) לקבל איתות מהבטן דרך NTS.
תוצאות המחקר הראו כי את תגובת המתח הסלולר במהלך תקופת כמחנכת מיידית לפני קולוסטרום לקרקע, מיד לאחר האכלה הראשון שונה ב- NTS בהשוואה PVN ובנו. איתות ב- CX, STR ו MPO נבדל מזה של PVN ובנו, גם כן. הפונקציות מגן ברורים של OT שהוצג קודם לכן כדי לווסת את מתח התא ודלקת בבטן הם חשו סביר לפי אזורים מסוימים במוח. באופן קולקטיבי, הנתונים מצביעים על כי ברמה התאית, במהלך השעות הראשונות לאחר הלידה, המוח מגיב ללחץ מטבולית הקשורים עם אי ספיקה התזונתי. הנתונים גם מראים כי במידה ואת הכיוון של השפעות קולוסטרום להאכיל modulating הם תלויי האזור כי באזורים מסוימים, ראי תופעות OT הראו בעבר בבטן.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bradford solution</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein lysis kit</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>CBS403</td>
			<td>Bicine/CHAPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WES kits</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>WES-Mouse 12-230 master kit (PS-MK15), WES-Rabbit 12-230 master kit (PS-MK14), WES 12-230 kDa total Protein master kit (PS-TP07)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse IgG HRP conjugate</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-eIF2a</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>SER51, 9721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-PKR</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Thr451, 07-886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>12297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAb anti-GAPDH</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-phospho-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>9246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>4814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-BiP</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti GCN2</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-phospho-GCN2</td>
			<td>BIORBYT</td>
			<td>T899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pregnant Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Punch device</td>
			<td>WellTech Rapid Core or Harris Uni-Core</td>
			<td>0.35, 0.50, 0.75, 1.0, 1.20, 1.50</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding

המטרה של פרוטוקול זה נועד לבודד אוקסיטוצין-קולטן במוח עשיר גרעינים במוח neonatal לפני ואחרי האכלה קולוסטרום הראשון. הביטוי של חלבונים ידוע להגיב על מתח מטבולית נמדדה בהמוח-גרעינים מבודד באמצעות סופג המערבי. זה נעשה כדי להעריך אם חילוף החומרים מפגינות מזין אי ספיקה בגוף עורר מתח עצביים. בעבר הראו כי אי ספיקה התזונתי ב neonates מעורר מתח מטבולית בבטן. יתר על כן, אוקסיטוצין קולוסטרום ממיקרו סמני תגובת דלקת, autophagy מתח סלולארית villi בטן עכברוש היילוד לפני ואחרי ההזנה הראשונה. איתות סמני חלבונים הקשורים עם הלחץ רשתית תוך-פלזמית [אר המלווה מחייב בנוגדנים חלבון (ביפ), תרגום האיקריוטים חניכה גורם 2A (eIF2a), ו eIF2a קינאז קינאז R (p-PKR)], כמו גם שני דלקת איתות חלבונים [הפקטור הגרעיני-κB (NF-kB) ולא מעכב κB (IkB)], נמדדו ב גרעינים במוח היילוד [גרעין של דרכי בודד (NTS), הגרעין paraventricular (PVN), הגרעין העל-אופטיים (הבן), קליפת המוח (CX), גרעינים סטריאטום (STR), ו גרעין preoptic המדיאלי (MPO)] לפני השידור הראשון (unprimed על ידי קולוסטרום) ואחרי תחילת ההנקה (טענתי על ידי קולוסטרום). ביטוי של ביפ/GRP78 ו- p-eIF2a היו upregulated ב unprimed downregulated ברקמות NTS כאשר הבחינה. NF-kB נשמר (גבוהה) CX, STR ו- MPO הציטופלסמה, ואילו NF-kB היה נמוך ב- NTS, PVN, והבן לא השתנה בתוך שני התנאים. ביפ קולקטיבית של p-eIF2 ממצאים עקביים עם תגובת הלחץ. eIf2a היה phosphorylated על ידי dsRNA קינאז תלוי (p-PKR) הבן, CX, STR ו MPO. עם זאת, את NTS (ולא פחותה ב- PVN), eIf2a היה phosphorylated על ידי אחר קינאז, בקרה כלליים nonderepressible-2 קינאז (GCN2). מנגנוני הכוח ויסות מתח שנצפתה בעבר בטן היילוד enterocytes מופיעים כדי לבצע שיקוף של אזורים מסוימים במוח OTR-עשיר. NTS PVN עשויה לנצל את מנגנון זירחון שונים (תחת מחסור תזונתי) מאזורים אחרים, להיות עקשן ההשפעה של מחסור של מזון. באופן קולקטיבי, נתונים אלה עולה כי המוח תגובות סטרס אי-ספיקת מסתם מזין יוסטו על-ידי איתות מן קולוסטרום-איפה זה מונח enterocytes.

הלהקות נציג של immunoreactivity ביחס חלבון הכולל להראות כי קיימים גרעינים במוח עם חלבון שנקטפו נמוך מאוד. פעולה זו דורשת שימוש הטכניקה תספיג אוטומטיות, אשר היא רגישה מאוד בהשוואה את תספיג הקנוני. גישה זו ניתן להפעיל עם פחות fortyfold חלבון לכל נימי בהשוואה לכל-השביל בין שהכלים המערבי...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding at JoVE.co

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

הערכת מתח סלולארית, דלקת דיסקרטית מפריש אוקסיטוצין המוח גרעינים בחולדה Neonatal לפני ואחרי האכלה קולוסטרום הראשון

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבודד את המוח גרעינים במוח עכברוש neonatal בשיתוף עם האכלה קולוסטרום הראשון. טכניקה זו מאפשרת המחקר של אי ספיקה מזין הלחץ במוח מווסת על ידי enterocyte איתות.

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הפיתוח שלאחר הלידה על יונק חלב הדרך משפיע על הלחץ איתות במוח. טכניקה זו יכולה לשמש ללכידת אזורים מסוימים במוח במהלך תקופת הרעב הטבעית הראשונה ולהשוות אותם לאזורים המתאימים זמן קצר לאחר הזנת קולוסטרום הטבעית הראשונה. הבנת האופן שבו יונק משפיע על הפיזיולוגיה של התנהגות ורגש מאפשרת שימוש באנטגוניסט לקולטנים שונים במהלך ניתוח רקמת המוח לשעבר של vivo.כדי להשיג את אגרופי הגרעינים, הסר את גורי החולדות בזנבם ביד כפפה. לאחר קצירת המוח, מניחים במהירות את האיבר כולו בתבנית מוח פולימתיל מתקרילט בטמפרטורת החדר ומיד משתמשים בסכין גילוח חדש כדי ליצור פרוסות עובי של 500 מיקרומטר של הרקמה. מניחים את פרוסות rostral כדי caudal בצלחת פטרי כפי שהם מתקבלים כדי לשמור על האוריינטציה הנכונה של החלקים.כאשר המוח כולו נותק, מוסיפים במהירות נוזל מלאכותי בעמוד השדרה המוחי ללא גלוקוז לצלחת ומדגרים את הפרוסות במשך 60 דקות ב 28 עד 30 מעלות צלזיוס עם ערבוב מתמיד על שייקר מסלולית. השתמש אטלס המוח ציוני דרך אנטומיים על כל רקמה כדי לזהות את גרעיני המוח להיות אגרוף ולמקום את הפרוסה עם הגרעינים של עניין צלחת פטרי חדש תחת מיקרוסקופ מנתח. לאחר הדמיה, השתמש בכלי coring כדי אגרוף במהירות החוצה ארבעה עד שישה גרעינים שונים במהירות לטבול כל גרעין אגרוף ב 0.06 מ"ל של חיץ מיצוי חלבון קר קרח בצינור מיקרו צנטריפוגה שכותרתו כראוי המכיל מעכבי פרוטאוס ומעכבי פוספטאז במשך 60 דקות.בסוף הדגירה, צנטריפוגה הגרעינים שחולצו מיני צנטריפוגה מקורר, ולהשתמש מיקרו פיפטה להעביר בזהירות 0.055 מ"ל של על טבעי מכל צינור לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה מקורר מראש מתאים 1.5 מ"ל על קרח. לפני אחסון שלילי של 20 מעלות צלזיוס, מעבירים 0.012 מ"ל של על-טבעי מכל צינור מלאי חלבון לצינור הקירור מראש המתאים של 0.5 מ"ל על הקרח להכנת הדגימה הראשונה. כדי להכין את הדגימות למדידת חלבון נימי, להוסיף 0.003 מ"ל של ריאגנט תערובת הורים מערכת תזה חלבון לכל אחת מהדגימות בצינורות המסומן 0.5 מ"ל.לאחר מכן, להוסיף 0.004 מ"ל של reagent תערובת הורים לתומת סולם משקל מולקולרי biotinylated ב 0.016 מ"ל של מים deionized, ו denature את הסולם ואת דגימות תמצית חלבון בבלוק חום 95 מעלות צלזיוס, אחסון כל הצינורות בארבע מעלות צלזיוס לאחר חמש דקות. לניתוח חלבון אות, להוסיף 0.01 מ"ל של פתרון תחמוצת לומינול טרי מוכן בארות E-1 כדי E-25 של צלחת מערבית אוטומטית חדשה, 0.01 מ"ל של נוגדן נגד עכבר משני בארות D-2 כדי D-25, ולהוסיף 0.01 מ"ל של peroxidase חזרת streptavidin מן הערכה כדי גם D-1. הוסף 0.01 מ"ל של נוגדן ראשוני שהוכן טרי לתוך בארות C-2 כדי C-25, ו 0.01 מ"ל של דילואנט נוגדנים שני פתרון בארות C-1 ו B-1 כדי B-25.השאר את השורה F בארות ריקות ולמלא את חמשת התאים של שלוש השורות מתחת לשורה F עם 0.45 מ"ל של מאגר לשטוף. לאחר מכן, סובבו בקצרה את דגימות הקירור למשך 30 שניות והוסיפו 0.03 מ"ל של כל דגימה לכל באר של שורה A, החל מ- A-2. לאחר מכן, להוסיף 0.005 מ"ל של סולם משקל מולקולרי biotinylated גם A-1 ולכסות את הצלחת עבור צנטריפוגה.בעוד הלוחית היא צנטריפוגה, לפתוח קובץ לרוץ חדש בתוכנה הקשורה המערבית האוטומטית ליזום חקירה בגודל מולקולרי. בדף הבדיקות, הזן את שמות הדגימות בכל נימי וכן את שמות הנוגדנים הראשיים והמשניים. בסוף הצנטריפוגה, מניחים את הצלחת בכלי המערבי האוטומטי ומקלפים את המכסה מקופסת מחסנית נימי.לאחר צנטריפוגה, לא לשכוח לבדוק בועות אוויר, כי בועות אוויר נימי יכול לחסום את הזרם האלקטרופורטי להיכשל בסיבוב כולו. הכנס את המחסנית למיקום המיועד בתוך המכשיר וסגור את הדלת. לחץ על התחל.כאשר תתבקש עם סוג ההתבקשות, הזן את שם הניסוי בתיבת הטקסט המתאימה ולחץ על אישור. כאשר תתבקש על-ידי תאריך ההפעלה הפעיל ומספר המזהה בקובץ ההפעלה, רשום לתשומת לב את השעה שבה מסתיימת ההפעלה. בסוף הריצה, השלך את מחסנית נימי לתוך סילוק החדים ואת הצלחת לתוך סילוק חומרים biohazardous.לאחר הפרדת האלקטרופורזה, בדוק את קבצי הריצה עבור פסגות תגובתיות חיסונית של אנטיגנים ב 40 עד 43 קילודלטונים אשר מייצגים פקטור חניכת תרגום אוקריוטי זרחן 2A. כאשר פסגות משקל מולקולריות בגודל זה חסרות, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני מתחת לעקומה ובחר להוסיף משקל מולקולרי לשיא כדי להבטיח שהגדלים והכמויות השרירותיות מתחת לעקומה יירשמו. בתוך דגימות רקמה unprimeds, מחייב רמות חלבון גלובולין אמינו בגרעין של המסלול הבודד גבוהים באופן משמעותי בהשוואה לכל האזורים האחרים.התעצמות רקמת המעיים עם קולוסטרום מקטינה את רמות החלבון גלובולין אמינו מחייב בגרעיני המסלול הבודד ואין לו השפעה על גרעיני פרה-אונטריים וגוקלי סופר-אופטיים. לעומת זאת, הפרימינג מגביר את רמות החלבון של האמינו גלובולין בתוך קליפת המוח, גרעיני הסטריה וגוקלי הקדם-אופטיים המדיאליים ביחס לרקמה הלא-פריפריאלית, מה שמוכיח כי רמות חלבון האמינו גלובולין בגרעיני המוח שנבדקו מגיבות באופן שונה לפרימינג המעיים ועדיין אין שום הכלאה מוכחת בין הגרעינים השונים שנבדקו. גורם חניכת תרגום Eukaryotic 2A ו phosphorylated אוקריוטית ליזום גורם 2A רמות גבוהות במצב unprimed ביחס גרעינים אחרים.לאחר הפרימינג, רמות של גורם חניכה תרגום eukaryotic 2A ו זרחן פקטור חניכה eukaryotic 2A מופחתים יחסית גרעינים של המסלול הבודד לעומת רקמה unprimed. בכל הגרעינים האחרים שנבדקו, priming מגביר את רמות גורם חניכת תרגום eukaryotic 2A ו phosphorylated גורם חניכה eukaryotic 2A יחסית רקמה unprimed. עם זאת, רמות של קולטן קינאז חלבון זרחן נמוכים בדגימות unprimed יחסית דגימות ראשוניות בגרעיני המסלול הבודד, מאוד מציע כי קינאז אחר מעורב זרחון של גורם חניכה תרגום איקריוטי 2A.לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום ההתפתחות לאחר הלידה לחקור את מסלולי האיתות המעורבים בצמיחת רקמות ובבידול והאם הם מושפעים או אינם תלויים בניקור. אל תשכח כי עבודה עם סוכני צמצום נדיף כמו, למשל, dithiothreitol, יכול להיות מסוכן, אמצעי זהירות כגון הכנה מכסה המנוע הכימי תמיד צריך להילקח בעת הכנת הליך זה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Seven Steps to Stellate Cells

שבעה צעדים Stellate תאים

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes

הערכת Hypermutation תאים סומטיים ב ראמוס B לאחר Overexpression או מציאה של גנים ספציפיים

B cells start their life with low affinity antibodies generated by V(D)J recombination.  However, upon detecting a pathogen, the variable (V) region of an ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

בידוד ראשי microglia מ מעורבים בתרביות תאים גליה של רקמת מוח החולדה ילודים

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia culturing ממערכת העצבים המרכזי וילודים למבוגרים

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

בידוד של סלמונלה typhimurium-המכיל Phagosomes של מקרופאגים

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

הערכת התגובה החיסונית הסלולר של זבוב הפירות, דרוזופילה melanogaster, שימוש ב Vivo Phagocytosis Assay

In all animals, innate immunity provides an immediate and robust defense against a broad spectrum of pathogens. Humoral and cellular immune responses are ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

העברה יעילה במיוחד של מקרופאגים ראשוניים עם מחוץ לגופית

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...