Name: assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding
Uploaded: 2018-11-14T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding at JoVE.co

लेखकों ने इस प्रोटोकॉल को तैयार करने में उनकी सहायता के लिए Manon रेंजर और एलेक्जेंड्रा Schulz का धन्यवाद किया ।

इस अध्ययन के संस्थागत पशु देखभाल और कोलंबिया विश्वविद्यालय और ंयूयॉर्क राज्य मनोरोग संस्थान में उपयोग समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया था ।
1. टिशू वडा
<ol><li>आदेश विक्रेता से समय पर गर्भवती ?...

<ol>
	<li>Hietaniemi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+fetal+and+neonatal+rat+offspring+of+energy-restricted+dams.">Gene expression profiles in fetal and neonatal rat offspring of energy-restricted dams.</a> Journal of Nutrigenetics and Nutrigenomics. 2 (4-5), 173-183 (2009).</li><li>Okabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenous+glycine+receptor+expression+in+cortical+plate+neurons+and+Cajal-Retzius+cells+of+neonatal+rat+cerebral+cortex.">Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex.</a> Neuroscience. 123 (3), 715-724 (2004).</li><li>Mailleux, P., Takazawa, K., Erneux, C., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+the+neurons+containing+inositol+1,4,5-trisphosphate+3-kinase+and+its+messenger+RNA+in+the+developing+rat+brain.">Distribution of the neurons containing inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase and its messenger RNA in the developing rat brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 327 (4), 618-629 (1993).</li><li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Human+Evolution.">Oxytocin and Human Evolution.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. , (2017).</li><li>Sippel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+Stress-related+Disorders:+Neurobiological+Mechanisms+and+Treatment+Opportunities.">Oxytocin and Stress-related Disorders: Neurobiological Mechanisms and Treatment Opportunities.</a> Chronic Stress (Thousand Oaks). 1, (2017).</li><li>Agnati, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+on+the+integrative+actions+of+the+brain+from+neural+networks+to+"brain-body+medicine".">Aspects on the integrative actions of the brain from neural networks to "brain-body medicine".</a> Journal of Receptors and Signal Transduction Research. 32 (4), 163-180 (2012).</li><li>Welch, M. G., Margolis, K. G., Li, Z., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+regulates+gastrointestinal+motility,+inflammation,+macromolecular+permeability,+and+mucosal+maintenance+in+mice.">Oxytocin regulates gastrointestinal motility, inflammation, macromolecular permeability, and mucosal maintenance in mice.</a> American Journal Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 307 (8), G848-G862 (2014).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+developmental+regulation+of+oxytocin+(OT)+and+oxytocin+receptors+(OTR)+in+the+enteric+nervous+system+(ENS)+and+intestinal+epithelium.">Expression and developmental regulation of oxytocin (OT) and oxytocin receptors (OTR) in the enteric nervous system (ENS) and intestinal epithelium.</a> Journal of Comparative Neurology. 512 (2), 256-270 (2009).</li><li>Prakash, B. S., Paul, V., Kliem, H., Kulozik, U., Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oxytocin+in+milk+of+cows+administered+oxytocin.">Determination of oxytocin in milk of cows administered oxytocin.</a> Analytica Chimica Acta. 636 (1), 111-115 (2009).</li><li>Solangi, A. R., Memon, S. Q., Mallah, A., Khuhawar, M. Y., Bhanger, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+separation+of+oxytocin,+norfloxacin+and+diclofenac+sodium+in+milk+samples+using+capillary+electrophoresis.">Quantitative separation of oxytocin, norfloxacin and diclofenac sodium in milk samples using capillary electrophoresis.</a> Biomedical Chromatography. 23 (9), 1007-1013 (2009).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+markers+of+the+unfolded+protein+response+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin modulates markers of the unfolded protein response in Caco2BB gut cells.</a> Cell Stress and Chaperones. 19 (4), 465-477 (2014).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Hirschberg, D. L., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+mTORC1+pathway+in+the+gut.">Oxytocin modulates mTORC1 pathway in the gut.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 432 (3), 466-471 (2013).</li><li>Klein, B. Y., Tamir, H., Ludwig, R. J., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colostrum+oxytocin+modulates+cellular+stress+response,+inflammation,+and+autophagy+markers+in+newborn+rat+gut+villi.">Colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi.</a> Biochemical an Biophysical Research Communications. 487 (1), 47-53 (2017).</li><li>Donnet-Hughes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+role+of+the+intestinal+microbiota+of+the+mother+in+neonatal+immune+education.">Potential role of the intestinal microbiota of the mother in neonatal immune education.</a> Proceedings of the Nutritional Society. 69 (3), 407-415 (2010).</li><li>Perez, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+imprinting+of+the+neonatal+immune+system:+lessons+from+maternal+cells?.">Bacterial imprinting of the neonatal immune system: lessons from maternal cells?.</a> Pediatrics. 119 (3), e724-e732 (2007).</li><li>Takeda, S., Kuwabara, Y., Mizuno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrations+and+origin+of+oxytocin+in+breast+milk.">Concentrations and origin of oxytocin in breast milk.</a> Endocrinolcia Japonica. 33 (6), 821-826 (1986).</li><li>Quintana, D. S., Outhred, T., Westlye, L. T., Malhi, G. S., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+oxytocin+administration+on+brain+activity:+a+systematic+review+and+meta-analysis+protocol.">The impact of oxytocin administration on brain activity: a systematic review and meta-analysis protocol.</a> Systematic Reviews. 5 (1), 205 (2016).</li><li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt.">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), 79-83 (1979).</li><li>Orr, M. E., Garbarino, V. R., Salinas, A., Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+Postnatal+Brain+Development+in+the+Longest-Lived+Rodent:+Prolonged+Maintenance+of+Neotenous+Traits+in+the+Naked+Mole-Rat+Brain.">Extended Postnatal Brain Development in the Longest-Lived Rodent: Prolonged Maintenance of Neotenous Traits in the Naked Mole-Rat Brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 504 (2016).</li><li>Hansson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+quantitative+proteome+analysis+of+in+vivo+intestinal+development.">Time-resolved quantitative proteome analysis of in vivo intestinal development.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 10 (3), (2011).</li><li>Mochizuki, K., Yorita, S., Goda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+in+the+jejunum+of+rats+during+the+transient+suckling-weaning+period.">Gene expression changes in the jejunum of rats during the transient suckling-weaning period.</a> Journal of Nutritional Science and Vitaminology (Tokyo). 55 (2), 139-148 (2009).</li><li>Rinaman, L., Banihashemi, L., Koehnle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+life+experience+shapes+the+functional+organization+of+stress-responsive+visceral+circuits.">Early life experience shapes the functional organization of stress-responsive visceral circuits.</a> Physiology and Behavior. 104 (4), 632-640 (2011).</li><li>Johannes, G., Sarnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cap-independent+polysomal+association+of+natural+mRNAs+encoding+c-myc,+BiP,+and+eIF4G+conferred+by+internal+ribosome+entry+sites.">Cap-independent polysomal association of natural mRNAs encoding c-myc, BiP, and eIF4G conferred by internal ribosome entry sites.</a> RNA. 4 (12), 1500-1513 (1998).</li><li>Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindbrain+noradrenergic+A2+neurons:+diverse+roles+in+autonomic,+endocrine,+cognitive,+and+behavioral+functions.">Hindbrain noradrenergic A2 neurons: diverse roles in autonomic, endocrine, cognitive, and behavioral functions.</a> American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (2), R222-R235 (2011).</li><li>Walker, C. D., Toufexis, D. J., Burlet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+and+limbic+expression+of+CRF+and+vasopressin+during+lactation:+implications+for+the+control+of+ACTH+secretion+and+stress+hyporesponsiveness.">Hypothalamic and limbic expression of CRF and vasopressin during lactation: implications for the control of ACTH secretion and stress hyporesponsiveness.</a> Progress in Brain Research. 133, 99-110 (2001).</li><li>Montiel-Castro, A. J., Gonzalez-Cervantes, R. M., Bravo-Ruiseco, G., Pacheco-Lopez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiota-gut-brain+axis:+neurobehavioral+correlates,+health+and+sociality.">The microbiota-gut-brain axis: neurobehavioral correlates, health and sociality.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 7, 70 (2013).</li><li>Blevins, J. E., Ho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+oxytocin+signaling+in+the+regulation+of+body+weight.">Role of oxytocin signaling in the regulation of body weight.</a> Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 14 (4), 311-329 (2013).</li><li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+administration+of+secretin+and+oxytocin+inhibits+chronic+colitis+and+associated+activation+of+forebrain+neurons.">Combined administration of secretin and oxytocin inhibits chronic colitis and associated activation of forebrain neurons.</a> Neurogastroenterology Motility. 22 (6), 654 (2010).</li><li>Berthoud, H. R., Neuhuber, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+chemical+anatomy+of+the+afferent+vagal+system.">Functional and chemical anatomy of the afferent vagal system.</a> Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 85 (1-3), 1-17 (2000).</li><li>Taniuchi, S., Miyake, M., Tsugawa, K., Oyadomari, M., Oyadomari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+stress+response+of+vertebrates+is+regulated+by+four+eIF2alpha+kinases.">Integrated stress response of vertebrates is regulated by four eIF2alpha kinases.</a> Scientific Reports. 6, 32886 (2016).</li><li>Altschuler, S. M., Bao, X. M., Bieger, D., Hopkins, D. A., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscerotopic+representation+of+the+upper+alimentary+tract+in+the+rat:+sensory+ganglia+and+nuclei+of+the+solitary+and+spinal+trigeminal+tracts.">Viscerotopic representation of the upper alimentary tract in the rat: sensory ganglia and nuclei of the solitary and spinal trigeminal tracts.</a> Journal of Comparative Neurology. 283 (2), 248-268 (1989).</li><li>Shapiro, R. E., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+central+neural+connections+of+the+area+postrema+of+the+rat.">The central neural connections of the area postrema of the rat.</a> Journal of Comparative Neurology. 234 (3), 344-364 (1985).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).</li><li>Nayak, R., Pintel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viruses+can+induce+phosphorylation+of+eIF2alpha+via+PKR+activation,+which+can+be+overcome+by+helper+adenovirus+type+5+virus-associated+RNA.">Adeno-associated viruses can induce phosphorylation of eIF2alpha via PKR activation, which can be overcome by helper adenovirus type 5 virus-associated RNA.</a> Journal of Virology. 81 (21), 11908-11916 (2007).</li><li>Zaborske, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+tRNA+charging+and+activation+of+the+eIF2+kinase+Gcn2p.">Genome-wide analysis of tRNA charging and activation of the eIF2 kinase Gcn2p.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (37), 25254-25267 (2009).</li><li>Hollis, J. H., Lightman, S. L., Lowry, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+systemic+and+visceral+sensory+information+by+medullary+catecholaminergic+systems+during+peripheral+inflammation.">Integration of systemic and visceral sensory information by medullary catecholaminergic systems during peripheral inflammation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1018, 71-75 (2004).</li><li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+opposes+effects+of+bacterial+endotoxin+on+ER-stress+signaling+in+Caco2BB+gut+cells.">Oxytocin opposes effects of bacterial endotoxin on ER-stress signaling in Caco2BB gut cells.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1860 (2), 402-411 (2016).</li><li>Kaltschmidt, B., Kaltschmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB+in+the+nervous+system.">NF-kappaB in the nervous system.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (3), a001271 (2009).</li></ol>

नवजात चूहे के मस्तिष्क में असतत, ओटीआर युक्त मस्तिष्क नाभिक के microdissection के लिए एक तकनीक इस पत्र में प्रस्तुत की गई है. यह अच्छी तरह से पहचाना जाता है कि न्यूरॉन्स अत्यधिक विशिष्ट हैं, यहां तक कि मस्तिष्क मे?...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bradford solution</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein lysis kit</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>CBS403</td>
			<td>Bicine/CHAPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WES kits</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td>WES-Mouse 12-230 master kit (PS-MK15), WES-Rabbit 12-230 master kit (PS-MK14), WES 12-230 kDa total Protein master kit (PS-TP07)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse IgG HRP conjugate</td>
			<td>Protein simple</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-eIF2a</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>SER51, 9721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-phospho-PKR</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Thr451, 07-886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-PKR</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>12297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAb anti-GAPDH</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>2118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-phospho-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>9246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse mAb anti-IKB</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>4814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-BiP</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti GCN2</td>
			<td>Cell Signaling technology</td>
			<td>3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit mAb anti-phospho-GCN2</td>
			<td>BIORBYT</td>
			<td>T899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pregnant Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Punch device</td>
			<td>WellTech Rapid Core or Harris Uni-Core</td>
			<td>0.35, 0.50, 0.75, 1.0, 1.20, 1.50</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing cellular stress and inflammation in discrete oxytocin-secreting brain nuclei in the neonatal rat before and after first colostrum feeding

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य नवजात मस्तिष्क में ऑक्सीटोसिन रिसेप्टर रिच ब्रेन नाभिक को अलग करने से पहले और पहले कोलोस्ट्रम खिलाने के बाद है । चयापचय तनाव का जवाब करने के लिए जाना जाता प्रोटीन की अभिव्यक्ति मस्तिष्क में मापा गया था-नाभिक पश्चिमी सोख्ता का उपयोग कर अलग. यह आकलन करने के लिए किया गया था कि चयापचय तनाव प्रेरित शरीर में पोषक तत्व कमी न्यूरॉन तनाव ट्रिगर. हम पहले दिखा दिया है कि नवजात शिशुओं में पोषक तत्वों की कमी आंत में चयापचय तनाव में लाना । इसके अलावा, कोलोस्ट्रम ऑक्सीटोसिन सेलुलर तनाव प्रतिक्रिया, सूजन, और autophagy मार्कर नवजात चूहे आंत में विल्ली से पहले और पहले फ़ीड के बाद संग्राहक । संकेत प्रोटीन मार्करों endoplasmic जालिका तनाव के साथ जुड़े [एर निगरानी बाध्यकारी immunoglobulin प्रोटीन (बिप), eukaryotic अनुवाद दीक्षा फैक्टर 2a (eIF2a), और eIF2a कळेनासे प्रोटीन कळेनासे आर (पी-PKR)], के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दो सूजन-संकेतन प्रोटीन [नाभिकीय कारक-κB (NF-kB) और अवरोध करनेवाला κB (IkB)], नवजात मस्तिष्क नाभिक में मापा गया [एकांत पथ के नाभिक (एनटीएस), paraventricular नाभिक (PVN), ऊपर अर्थ का उपसर्ग (बेटा) नाभिक, प्रांतस्था (CX), striatum नाभिक (STR), और औसत दर्जे का ऑप्टिक नाभिक (MPO)] पहले फ़ीड से पहले (कोलोस्ट्रम द्वारा प्रधानमंत्री) और नर्सिंग की शुरुआत के बाद (कोलोस्ट्रम द्वारा प्रधानमंत्री) । बिप/GRP78 और पी-eIF2a की अभिव्यक्ति प्रधानमंत्री एनटीएस ऊतक में और downregulated में अनियमित थे । nf-kb (उच्च) CX, STR, और MPO कोशिका द्रव्य में रखा गया था, जबकि nf-kb था कम और अपरिवर्तित में एनटीएस, PVN, और बेटा दोनों स्थितियों में । सामूहिक बिप और पी-eIF2 निष्कर्षों एक तनाव की प्रतिक्रिया के अनुरूप हैं । eIf2a पुत्र, CX, STR, और MPO में dsRNA आश्रित कळेनासे (पी-PKR) द्वारा phosphorylated था । हालांकि, एनटीएस में (और PVN में एक हद तक कम करने के लिए), eIf2a एक और कळेनासे, जनरल नियंत्रण nonderepressible-2 कळेनासे (GCN2) द्वारा phosphorylated था । तनाव संग्राहक पहले नवजात आंत enterocytes में मनाया तंत्र कुछ ओटीआर संपंन मस्तिष्क क्षेत्रों में प्रतिबिंबित होना दिखाई देते हैं । एनटीएस और PVN अंय क्षेत्रों से (पोषक तत्वों की कमी के तहत) एक अलग फास्फारिलीकरण तंत्र का उपयोग कर सकते है और पोषक तत्वों की कमी के प्रभाव को दुर्दम्य । सामूहिक रूप से, इस डेटा पता चलता है कि पोषक तत्वों की कमी तनाव को मस्तिष्क प्रतिक्रियाओं कोलोस्ट्रम-प्रधानमंत्री enterocytes से संकेत द्वारा ऑफसेट हैं ।

कुल प्रोटीन के सापेक्ष immunoreactivity के प्रतिनिधि बैंड बताते हैं कि बहुत कम काटा प्रोटीन के साथ मस्तिष्क नाभिक हैं । यह स्वचालित पश्चिमी दाग तकनीक है, जो विहित पश्चिमी दाग की तुलना में अति संवेदनश...

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Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

सेलुलर तनाव का आकलन और असतत ऑक्सीटोसिन में सूजन-स्रावी मस्तिष्क नाभिक नवजात चूहे में पहले और बाद में पहली कोलोस्ट्रम खिला

यहाँ, हम पहली कोलोस्ट्रम खिला के साथ संयोजन के रूप में नवजात चूहे मस्तिष्क में मस्तिष्क नाभिक को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद. इस तकनीक मस्तिष्क में पोषक तत्वों की कमी तनाव के अध्ययन के रूप में enterocyte संकेत द्वारा संग्राहक की अनुमति देता है ।

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

इस विधि के बाद प्रसव के विकास के क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब में मदद कर सकते है जिस तरह से दूध दूध पिलाने मस्तिष्क में तनाव संकेत को प्रभावित करता है । इस तकनीक का उपयोग पहले प्राकृतिक भुखमरी अवधि के दौरान विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्रों को पकड़ने और पहले प्राकृतिक कोलोस्ट्रम फ़ीड के तुरंत बाद संबंधित क्षेत्रों से उनकी तुलना करने के लिए किया जा सकता है। यह समझना कि कैसे दूध पिलाना व्यवहार और भावना के शरीर विज्ञान को प्रभावित करता है पूर्व-वीवो मस्तिष्क ऊतक विश्लेषण के दौरान विभिन्न रिसेप्टर्स के विरोधी का उपयोग करने में सक्षम बनाता है।नाभिक घूंसे प्राप्त करने के लिए, एक दस्ताने हाथ से अपनी पूंछ से चूहे पिल्ले को हटा दें। मस्तिष्क की कटाई के बाद, तेजी से पूरे अंग को कमरे के तापमान पर पॉलीमिथाइल मेथाक्रिलेट मस्तिष्क मोल्ड में रखें और तुरंत ऊतक के 500 माइक्रोमीटर मोटी स्लाइस बनाने के लिए एक नए रेजर ब्लेड का उपयोग करें। पेट्री डिश में कौडल के लिए स्लाइस रोस्ट्रल बिछाएं क्योंकि उन्हें वर्गों के सही अभिविन्यास को बनाए रखने के लिए प्राप्त किया जाता है।जब पूरे मस्तिष्क को खंडित किया गया है, तो जल्दी से डिश में ग्लूकोज के बिना कृत्रिम मस्तिष्क रीढ़ की हड्डी का तरल पदार्थ जोड़ें और एक कक्षीय शेखर पर लगातार सरगर्मी के साथ 28 से 30 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट के लिए स्लाइस को इनक्यूबेट करें। मस्तिष्क नाभिक को मुक्का मारने के लिए प्रत्येक ऊतक पर एक मस्तिष्क एटलस और शारीरिक स्थलों का उपयोग करें और एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत एक नई पेट्री डिश में ब्याज की नाभिक के साथ टुकड़ा रखें। एक बार कल्पना करने के बाद, चार से छह अलग-अलग नाभिक को जल्दी से पंच करने के लिए एक स्कोरिंग टूल का उपयोग करें और 60 मिनट के लिए प्रोटियस अवरोधकों और फॉस्फेट अवरोधकों वाले उचित लेबल वाले माइक्रो-अपकेंद्रित्र ट्यूब में बर्फ ठंडे प्रोटीन निष्कर्षण बफर के 0.06 एमएल में प्रत्येक छिद्रित नाभिक को तेजी से विसर्जित करें।इनक्यूबेशन के अंत में, एक ठंडा मिनी-अपकेंद्रित्र में निकाले गए नाभिक को अपकेंद्रित्र करें, और बर्फ पर उपयुक्त पूर्व-कूल्ड 1.5 एमएल माइक्रो-सेंट्रलाइज ट्यूब में प्रत्येक ट्यूब से 0.055 एमएल सुपरनेट को सावधानीपूर्वक स्थानांतरित करने के लिए माइक्रो-पिपेट का उपयोग करें। नकारात्मक 20 डिग्री सेल्सियस भंडारण से पहले, पहले नमूना तैयार करने के लिए बर्फ पर उपयुक्त 0.5 एमएल पूर्व ठंडा ट्यूब में प्रत्येक प्रोटीन स्टॉक ट्यूब से सुपरनैंट के 0.012 एमएल स्थानांतरित करें। इन-केशिलरी प्रोटीन माप के लिए नमूनों को तैयार करने के लिए, 0.5 एमएल लेबल वाली ट्यूबों में प्रत्येक नमूने में प्रोटीन लाइसिस किट से मास्टर मिक्स रिएजेंट के 0.003 एमएल जोड़ें।इसके बाद, डिओनाइज्ड पानी के 0.016 मिलियन मिलियन में बायोटिनेलेटेड आणविक वजन सीढ़ी समाधान में मास्टर मिक्स रिएजेंट के 0.004 एमएल जोड़ें, और सीढ़ी और प्रोटीन निकालने के नमूनों को 95 डिग्री सेल्सियस हीट ब्लॉक में विकृत करें, पांच मिनट के बाद सभी ट्यूबों को चार डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करें। सिग्नल प्रोटीन विश्लेषण के लिए, एक नई स्वचालित पश्चिमी प्लेट के ई-1 से ई-25 के लिए ताजा तैयार ल्यूमिनोल पेरोक्साइड समाधान के 0.01 मिलियन, माध्यमिक एंटी-माउस एंटीबॉडी के 0.01 मिलियन मिलियन वेल्स डी-2 से डी-25 में जोड़ें, और 0.01 एमएल स्ट्रेप्टाविडिन सहिजन प्रतिऑक्सिडास को किट से अच्छी तरह से डी-1 में जोड़ें। कुओं सी-2 से सी-25 में 0.01 एमएल की ताजा तैयार प्राथमिक एंटीबॉडी और 0.01 मिलियन की मुल् ल कुओं सी-1 और बी-1 से बी-25 के दो समाधान जोड़ें।पंक्ति एफ कुओं को खाली छोड़ दें और 0.45 एमएल वॉश बफर के साथ एफ पंक्ति के नीचे तीन पंक्तियों के पांच डिब्बों को भरें। इसके बाद, 30 सेकंड के लिए रेफ्रिजरेटेड नमूनों को संक्षेप में स्पिन करें और ए-2 से शुरू करते हुए पंक्ति ए के प्रत्येक कुएं में प्रत्येक नमूने का 0.03 एमएल जोड़ें। फिर, बायोटिनेलेटेड आणविक वजन सीढ़ी के 0.005 एमएल को अच्छी तरह से ए-1 में जोड़ें और अपकेंद्रित्र के लिए प्लेट को कवर करें।जबकि प्लेट अपकेंद्रित्र है, स्वचालित पश्चिमी संबद्ध सॉफ्टवेयर में एक नई रन फ़ाइल खोलें और एक आणविक आकार परख शुरू करें। परख पृष्ठ में, प्रत्येक केशिका में नमूना नाम दर्ज करें और साथ ही प्राथमिक और माध्यमिक एंटीबॉडी के नाम। अपकेंद्रित्र के अंत में, प्लेट को स्वचालित पश्चिमी उपकरण में रखें और केशिका कारतूस बॉक्स से कवर छील दें।अपकेंद्रित्र के बाद, हवा के बुलबुले के लिए निरीक्षण करना न भूलें, क्योंकि केशिका में हवा के बुलबुले इलेक्ट्रोफोरेटिक धारा को अवरुद्ध कर सकते हैं और पूरे दौर को विफल कर सकते हैं। उपकरण के भीतर निर्धारित स्थिति में कारतूस डालें और दरवाजा बंद करें। स्टार्ट पर क्लिक करें।जब परख के प्रकार के साथ प्रेरित किया जाता है, तो प्रयोग का नाम उपयुक्त टेक्स्ट बॉक्स में दर्ज करें और ठीक क्लिक करें। जब सक्रिय रन तिथि और रन फ़ाइल पर आईडी नंबर से प्रेरित हो, तो रन समाप्त होने के समय का नोट बनाएं। रन के अंत में, शार्प्स डिस्पोजल में केशिका कारतूस और प्लेट को बायोहैजार्डस सामग्री निपटान में त्यागें।इलेक्ट्रोफोरेसिस सेपरेशन के बाद, एंटीजन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाशीलता चोटियों के लिए 40 से 43 किलोडलटन पर रन फाइलों की जांच करें जो फॉस्फोरिलेटेड यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए के लिए खड़े हैं। जहां इस आकार के आणविक वजन चोटियों याद कर रहे हैं, वक्र के नीचे सही क्लिक करें और शिखर को आणविक वजन जोड़ने के लिए सुनिश्चित करें कि आकार और वक्र के नीचे मनमाने ढंग से मात्रा दर्ज कर रहे है का चयन करें । अनप्राइम्ड ऊतक नमूनों के भीतर, एकांत ट्रैक के नाभिक में बाध्यकारी अमीनो ग्लोबुलिन प्रोटीन का स्तर अन्य सभी क्षेत्रों की तुलना में काफी अधिक है।कोलोस्ट्रम के साथ आंत के ऊतकों को भड़काना एकान्त ट्रैक के नाभिक में बाध्यकारी अमीनो ग्लोबुलिन प्रोटीन के स्तर को कम करता है और पैरावेंट्रिकुलर नाभिक और सुपर ऑप्टिक नाभिक पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। इसके विपरीत, भड़काना कॉर्टेक्स के भीतर बाध्यकारी अमीनो ग्लोबुलिन प्रोटीन के स्तर को बढ़ाता है, स्ट्रीशन न्यूक्लियी, और मध्यपूर्व प्रीप्टिक नाभिक अनप्राइम्ड ऊतक के सापेक्ष, जिसका अर्थ है कि विभिन्न परीक्षण किए गए मस्तिष्क नाभिक में बाध्यकारी अमीनो ग्लोबुलिन प्रोटीन का स्तर आंत प्राइमिंग के लिए अलग तरह से प्रतिक्रिया देता है और अभी तक विभिन्न नाभिक परीक्षण के बीच कोई प्रदर्शित क्रॉसटॉक नहीं है। यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए और फॉस्फोरीलेटेड यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए स्तर अन्य नाभिक के सापेक्ष अनप्राइम्ड स्थिति में ऊंचा होते हैं।भड़काने के बाद, यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए और फॉस्फोरिलेटेड यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए के स्तर को अनप्रिम्ड ऊतक की तुलना में एकांत ट्रैक के नाभिक के सापेक्ष कम कर दिया जाता है। अन्य सभी परीक्षण नाभिक में, प्राइमिंग यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए और फॉस्फोरीलेटेड यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए के स्तर को अनप्रिमित ऊतक के सापेक्ष बढ़ाता है। हालांकि, फॉस्फोरिलेटेड प्रोटीन किनेज़ रिसेप्टर का स्तर एकांत ट्रैक के नाभिक में प्राइमेड नमूनों के सापेक्ष अनप्राइम्ड नमूनों में कम है, जो दृढ़ता से सुझाव देता है कि यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2 ए के फॉस्फोरिलेशन में एक और किनेस शामिल है।इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने प्रसव के बाद के विकास के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए ऊतक विकास और भेदभाव में शामिल सिग्नलिंग रास्तों का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया और क्या वे दूध पिलाने से प्रभावित हैं या स्वतंत्र हैं। यह न भूलें कि अस्थिर कम करने वाले एजेंटों के साथ काम करना, उदाहरण के लिए, डिइयोथरेटोल, खतरनाक हो सकता है, और इस प्रक्रिया को तैयार करते समय रासायनिक हुड में तैयारी जैसी सावधानियां हमेशा ली जानी चाहिए।

Research

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फल मक्खी, Drosophila melanogasterके सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आकलन, Vivo Phagocytosis परख में एक का उपयोग

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Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

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