Name: high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Reconhecemos o Dr. Jesse Kwiek (The Ohio State University) por gentilmente nos terem permitido usar sua plataforma de detecção modo multi para alguns experimentos preliminares. Pesquisa relatada neste artigo foi apoiada pelo Instituto Nacional de alergia e doenças infecciosas dos institutos nacionais de saúde, sob número de prêmio RO1AI107250 para Stephanie Seveau. O conteúdo é exclusivamente da responsabilidade dos autores e não representa necessariamente a opinião oficial do institutos nacionais da saúde.

1. preparação
<ol><li>Chapeamento de célula Nota: Células epiteliais do colo do útero humanas, HeLa e HeLa expressando histona 2B-GFP (H2B-GFP), foram utilizadas neste protocolo, mas este ensaio pode ser adaptado a outras células de mamíferos,19.<ol>
<li>Separe células aderentes de um frasco de cultura de células de2 75cm lavando as células com 2 mL de EDTA-tripsina 0,25%. Substitua a tripsina usada com 2 mL de fresco do trypsin-EDTA 0,25%.</li>
		<li>Incube as celulas em...

Este ensaio mede a eficiência da membrana efectuou a nível de população de células com capacidade de alta produtividade. Pode ser usada para triagem de bibliotecas de drogas que poderiam afetar a reparação da membrana ou componentes celulares. O ensaio descrito usado um formato de placa de 96 poços, mas pode ser adaptado para placas boas 384 para maior rendimento. Uma vantagem deste teste é sua capacidade de obter medidas de fluorescência das células vivas aderentes em tempo real sem a necessidade de célula e...

Células de mamíferos estão sujeitos a estresse mecânico, osmótico e bioquímico, resultando na perda da integridade da membrana plasmática. Sem rápida e eficiente de fechamento, células danificadas rapidamente iria sucumbir à morte programada ou necrótica. Desde a década de 1960, os esforços para compreender a membrana de plasma nesse processo tem sido motivados pelas consequências devastadoras associadas com suas disfunções. Na verdade, doenças como Distrofia Muscular de membro-cinta, diabetes e síndrome de Chediak-Higashi têm sido associadas a reparação da membrana de plasma deficiente devido a mutações no gene dysferlin codificação, produção de produtos finais de glicação avançada e defeitos em o regulador de tráfico dos lisossomos CHS1, respectivamente,1,2,3,4,5,6. No entanto, até à data, nossa compreensão da membrana de fechamento é ainda limitado7. Os estudos iniciais demonstraram que a membrana recelagem é iniciada pelo influxo de extracelular Ca2 + através da membrana de plasma danificado8,9,10. Desde então, vários não mutuamente exclusivas Ca2 +-dependentes mecanismos têm sido propostos para selar as células. A hipótese de remendo propõe que no próximo a ferida, intracelulares vesículas fundem-se com os outros e a membrana plasmática danificada para atuar como um patch11,12,13,14. Um segundo modelo propõe que exocitose de cálcio-dependente de lisossomos para a ferida local libera a enzima lisossomal sphingomyelinase ácido, que converte esfingomielina, a ceramida no folheto externo da membrana plasmática. Esta súbita mudança na composição de lipídios resulta em endocitose ceramida-conduzido a região danificada15,16,17. Por último, o terceiro mecanismo proposto envolve um papel para o CDDP classificação complexa necessária para o transporte (ESCRT) promover a formação de vesículas virados que brote fora da membrana plasmática18. Somente um conjunto limitado de proteínas foi identificado nestes modelos, e suas máquinas devem ser ainda mais elucidada.
Aqui descrevemos um ensaio de alto rendimento que medidas a membrana plasmática recelagem eficiência em células de mamíferos aderentes sujeitos a danos mediadas por recombinação listeriolisina O (LLO)19. LLO é uma toxina formadoras de poros (PFT) secretada pelo patógeno intracelular facultativo Listeria monocytogenes20,21,22 e pertence a MACPF/CDC (complexo de ataque de membrana, perforina, e Superfamília Citolisina dependente de colesterol). MACPF são mamíferos poro-formando proteínas envolvidas em defesas imunitárias, Considerando que os conjuntos são toxinas bacterianas principalmente produziram por patógenos gram-positivos que danificam as células do hospedeiro para promover sua patogenicidade, estilos de vida23. Conjuntos são sintetizados como monômeros Water-soluble ou dímeros que se ligam ao colesterol presente na membrana plasmática e oligomerize em um complexo prepore de até 50 subunidades. O complexo de prepore então se reorganiza para inserir β-vertentes através da bicamada lipídica, formando um poro do β-tambor que se estende por 30-50 nm de diâmetro24,25,26,27.  Estes poros dilatados permitam fluxos de íons e pequenos componentes celulares dentro e fora da célula; no entanto, alguns estudos têm proposto que os poros de tamanhos menores também são formados28,29,30. Entre os conjuntos, LLO exibe propriedades exclusivas, incluindo agregação irreversível e temperatura-dependente do pH, que é propício para análises de alta produtividade31,32. LLO pode ser adicionado ao meio de cultura de células no 4 ˚ c, uma temperatura permissiva a sua ligação às células, mas não para a formação do complexo do poro. Iniciação de formação de poros então pode ser sincronizada, elevando a temperatura a 37 ˚ c, permitindo que pela difusão de moléculas de toxina no plano da membrana oligómeros de forma eficiente e para a remodelação conformacional envolvidos na geração de poros. Portanto, seguir o interruptor de temperatura, a cinética de danos celulares dependerá da quantidade de toxina ligada a membrana plasmática. Importante, LLO solúvel (não ligado a membrana plasmática) rápida e irreversivelmente agrega quando a temperatura atinge 37 ˚ c, que alivia a necessidade de lavar as moléculas da toxina não acoplado e limita a extensão dos danos de membrana ao longo do tempo. Por último, porque LLO vincula-se ao colesterol e forma poros nas membranas celulares ricos em colesterol, este ensaio é passível de uma ampla variedade de células de mamíferos. É importante ter em mente que LLO afeta a célula hospedeira sinalização principalmente através de formação de poros, com poucas exceções em qual célula independente de poro sinalização pode ocorrer33,34,35,36 ,37,38,39. Portanto, não pode ser excluído que LLO sinalização atividades podem influenciar o processo de reparação da membrana.
Este ensaio avalia diretamente a extensão da célula ferindo medindo-se a incorporação de uma célula impermeant fluorocromo (por exemplo, iodeto de propidium) que passivamente entra as células feridas e torna-se altamente fluorescente, uma vez que associa os ácidos nucleicos . Daí, o fluorocromo pode ser mantido em meio de cultura celular durante todo o experimento, permitindo análises em tempo real da célula ferindo. A intensidade da fluorescência do corante ácido nucleico-ligação aumentará a concentração de toxina e, para uma dada concentração de toxina, irá aumentar ao longo do tempo até que todos os poros são formados, e as células são totalmente reparadas ou até saturação é alcançada. O afluxo de extracelular Ca2 + através da membrana poros é um evento de condição sine qua non para selar. Portanto, a eficiência de fechamento pode ser evidenciada indiretamente comparando a célula ferindo em meio de cultura contendo Ca2 + (condição permissiva do reparo) para ferir em um Ca2 +-livre médio (condição restritiva de reparação). Porque a intensidade da fluorescência do corante ácido nucleico-vinculação é diretamente proporcional à concentração de células em cada poço, é importante para as células de semente na mesma concentração em todos os poços. Também é importante enumerar as células em cada poço antes e após o ensaio para garantir que desprendimento celular não ocorre, como flutuante, agregados de células podem obscurecer as leituras de fluorescência que podem complicar a interpretação dos dados. Para enumerar as células, as células expressando nuclear-localizada histona 2B-GFP (H2B-GFP) foram utilizadas neste ensaio. Temperatura controlada, multi-modo, leitores de microplacas combinam rápidas medições, de alto rendimento (usando um formato de placa de 96 ou 384 poços) das intensidades de fluorescência com imagem de microscopia de células vivas, a 37 ° C. Este último pode ser usado para enumerar o número de telemóvel e observar a eventual formação de populações de células distintas.
Em última análise, este ensaio fornece aos usuários a capacidade de expandir seus conhecimentos sobre a complexidade dos mecanismos de reparação da membrana por triagem para moléculas do anfitrião ou reparar de forma exógena adicionados compostos que podem controlar a membrana. O protocolo a seguir descreve as etapas experimentais para medir a eficiência de fechamento de células expostas a LLO e avaliar os efeitos de uma determinada droga ou tratamento celular na eficiência de fechamento.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="610">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">i3x</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">MiniMax 300 Imaging cytometer</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">5024062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">TO-PRO-3</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Propidium Iodide</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa H2B-GFP</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SCC117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td align="left" height="63" style="height:63px;width:216px;">96-well Corning flat bottom black polystyrene tissue culture treated plate</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; balanced Salts</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H4891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">EGTA</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ISC BioExpress</td>
			<td style="width:119px;">0732-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">HEPES</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">D-(+)-Glucose, HybriMax</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G5146-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells

Em seu ambiente fisiológico, células de mamíferos são frequentemente sujeitas a tensões mecânicas e bioquímicas que resultam em danos de membrana plasmática. Em resposta a esses danos, máquinas moleculares complexas rapidamente selar novamente a membrana plasmática para restaurar a sua função de barreira e manter a sobrevivência da pilha. Apesar de 60 anos de investigação neste domínio, ainda falta uma compreensão completa da célula máquinas de fechamento. Com o objetivo de identificar componentes celulares que controle de fechamento de membrana plasmática ou drogas que podem melhorar a recelagem, nós desenvolvemos um ensaio de alto rendimento baseada em fluorescência que mede a membrana plasmática recelagem eficiência em células de mamíferos cultivadas em microplacas. Como um sistema modelo para danos de membrana plasmática, as células estão expostas à bactérias formadoras de poros toxina listeriolisina O (LLO), que forma grandes 30-50 nm de diâmetro proteicas poros em colesterol, contendo membranas. O uso de um leitor de microplacas de modo multi temperatura controlada permite medições de spectrofluorometric rápida e sensível, em combinação com brightfield e imagem de microscopia de fluorescência das células vivas. Análise cinética da intensidade da fluorescência emitida pelo fluorocromo impermeant de ácido nucleico-ligação membrana reflete a extensão da membrana, ferindo e efectuou no nível da população de célula, permitindo o cálculo da célula eficiência de fechamento . Imagem de microscopia de fluorescência permite a enumeração de células, que constitutivamente expressa uma quimera fluorescente de 2B de histona a proteína nuclear, em cada poço do microplate em conta possíveis variações em seu número e permite a eventual identificação de populações de células distintas. Este ensaio de alto rendimento é uma ferramenta poderosa, espera-se expandir a nossa compreensão dos mecanismos de reparação de membrana através de triagem para genes do hospedeiro ou exogenamente adicionados compostos que efectuou de membrana plasmática de controle.

Célula, contando com precisão: as células HeLa são usadas frequentemente como uma linha de células de mamíferos do modelo para explorar mecanismos de reparação da membrana. Ao avaliar a reparação da membrana no nível da população de célula, é importante para as células da placa na mesma concentração em todos os poços para interpretação de dados apropriados. Também é importante verificar no momento do ensaio que celulares sejam equivalentes em poços. Células HeLa q...

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High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

Aqui nós descrevemos um alta produtividade baseada em fluorescência do ensaio que mede a membrana plasmática, efectuou a eficiência por meio de análises fluorométrica e da imagem latente em células vivas. Este ensaio pode ser usado para triagem de drogas ou genes-alvo que regulam a membrana plasmática de fechamento em células de mamíferos.

Medição de alto rendimento da membrana plasmática, efectuou a eficiência em células de mamíferos

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...

Este ensaio foi desenvolvido para abordar questões-chave no campo da biologia da membrana plasmática e para estabelecer como as células danificadas eficientemente podem resear sua membrana plasmática. Esta técnica pode ser usada para medir a eficiência da resseção da membrana plasmática em uma capacidade de alto rendimento e para identificar proteínas específicas e caminhos correspondentes que mediam o resealing da membrana plasmática. Comece adicionando 20 mililitros de uma pipeta sorológica de 2,5 vezes a 5 vezes por mililitro de suspensão média de crescimento em uma bacia de pipeta estéril e use uma pipeta sorológica de 10 mililitros para misturar completamente as células.Em seguida, use uma micropipette multicanal para semear 100 microliters de células por poço em triplicado em uma placa tratada de tecido de poliestireno preto de 96 poços. Lembre-se que uma distribuição celular homogênea é a chave para um experimento bem sucedido, pois comparações entre todas as condições experimentais requerem contagem de células equivalentes. Após 24 horas na incubadora de cultura celular umidificada a 37 graus Celsius e 5%CO2, pré-aquece o leitor de placas a 37 graus Celsius e define a configuração óptica para monocromático, o modo de leitura para fluorescência, e o tipo de leitura para cinética.Sob as configurações do comprimento de onda, selecione uma excitação de nove nanômetros e um bandpass de emissão de 15 nanômetros. Para ensaios utilizando iodeto de propídio, coloque os comprimentos de onda de excitação e emissão em 535 nanômetros e 617 nanômetros, respectivamente. Sob o tipo de placa, selecione 96 poços para o formato da placa e selecione uma configuração de placa predefinida correspondente a uma placa inferior clara da parede preta.Na área de leitura, destaque para os poços que serão analisados ao longo do ensaio cinético. Em PMT e óptica, predefinir os flashes por leitura para seis e verificar a caixa para ler a partir de baixo. Em tempo normal, digite zero horas 30 minutos e zero segundos no tempo total de execução para um ensaio cinético de 30 minutos e digite zero horas cinco minutos e zero segundos para o intervalo.Confirme as configurações especificadas nas informações de configurações e clique em OK. Em seguida, clique em ler para iniciar a corrida cinética. Para definir os parâmetros de imagem dentro do modo de configurações, defina MiniMax para a configuração óptica, imagem para o modo de leitura e ponto final para o tipo de leitura. Sob comprimentos de onda, selecione a luz transmitida e as caixas de fluorescência apropriadas correspondentes aos comprimentos de onda experimentais excitação e emissão.Defina o tipo de placa e a área de leitura como apenas demonstrado e sob a configuração da área do poço, defina o número de locais dentro de um poço a ser imageado. Sob as configurações de aquisição de imagem para GFP, defina o dispositivo para imagem do poço inteiro com um tempo de exposição de 20 milissegundos por imagem. Para a luz transmitida, adquira uma única imagem do centro de cada poço com um tempo de exposição de oito milissegundos.Para iodeto de propidium, adquira uma única imagem no centro de cada poço com um tempo de exposição de 20 milissegundos. Em seguida, confirme as configurações nas informações de configurações e clique em OK e leia para iniciar a imagem. Para configurar um ensaio baseado em fluorescência de alto rendimento para as condições permissivas de reparo, lave as células duas vezes com 200 microliters de 37 graus Celsius M1 médio por poço e adicione 100 microliters de 37 graus Celsius M1 médio suplementado com 30 micromolar de iodeto de propidium depois de descartar a segunda lavagem.Para reparar condições restritivas, lave as células uma vez com 200 microlitres de 37 graus Celsius M2 médio suplementados com cinco mililitros EGTA por poço seguido por uma lavagem com 200 microliters de M2 médio sozinho. Depois de descartar a segunda lavagem, adicione 100 microliters de 37 graus Celsius M2 médio suplementado com 30 iodeto de propídio micromolar por poço. Em seguida, imagine a placa sob luz transmitida, GFP e PI como apenas demonstrado.Enquanto a placa está sendo imageda, coloque uma microplacão de polipropileno fundo redondo 96 no gelo e configure a placa como apenas demonstrado para a placa anterior. Para reparar condições permissivas, adicione 100 microliters de meio M1 gelado suplementado com 60 iodeto de propídio micromolar por poço seguido pela adição de 100 microliters de M1 gelado com ou sem listeriolysina 4X O por poço. Para reparar condições restritivas, adicione 100 microliters de meio M2 frio de gelo suplementado com 60 iodeto de propidium micromolar por poço seguido pela adição de 100 microliters de M2 gelado com ou sem listeriolysina 4X O por poço.É imperativo preparar listeriolysina O na concentração experimental apropriada no gelo aproximadamente cinco minutos antes do início do ensaio cinético quando a placa um está no gelo e a placa dois está sendo preparada. Quando a primeira placa estiver pronta, transfira imediatamente a placa para uma folha de alumínio no gelo. Após cinco minutos, transfira 100 microliters de cada poço da segunda placa para o bem correspondente adequado na primeira placa resfriada, inserindo as pontas da pipeta abaixo do menisco da solução em cada poço antes de ejetar o volume sem misturar para a distribuição adequada da toxina.Deixe que a toxina se ligue às células hospedeiras por um minuto e transfira imediatamente a primeira placa para o leitor de placas para o ensaio pós-cinético usando o modo espectrômetro. No final do ensaio cinético, adquira imediatamente uma imagem pós-cinética da imagem da placa, como demonstrado para a imagem pré-cinética. Para determinar a contagem de células com base na fluorescência nuclear, no software de enumeração de células microplacas em configurações, selecione a re-análise e, nas configurações de análise de imagem, selecione a análise discreta do objeto usando 541 como comprimento de onda para encontrar objetos.Dentro da opção encontrar objetos, use o método de localização de imagens, selecione núcleos e clique em aplicar, em seguida, clique em OK e leia para iniciar o algoritmo de contagem de células. A expressão GFP não interfere nas medidas de intensidade de iodeto de propídio na presença ou ausência de tratamento de listeriolysina O. A expressão do iodeto propidium pode sangrar através da fluorescência GFP, como evidenciado por um aumento na intensidade de fluorescência GFP nas células HeLA H2B-GFP no ensaio de imagem pós-cinética em comparação com a análise pré-cinética.É importante ressaltar, porém, que esse cruzamento não afeta a contagem celular, pois o processo de segmentação envolvido na enumeração dos núcleos não é afetado pelo aumento da fluorescência GFP. Na ausência de listeriolysina O, a integridade da membrana plasmática permanece constante na presença ou ausência de cálcio extracelular, enquanto o tratamento de listeriolysina O na presença de meio suplementado de cálcio resulta em um aumento constante na intensidade de fluorescência de iodida de propidato. Na ausência de cálcio extracelular, no entanto, há um aumento significativamente mais acentuado da fluorescência de iodida de propídio, refletindo a ausência de ressequeling de membrana.Alternativamente, um corante de ligação nucleigênica de carbocianina com fluorescência no vermelho distante pode ser substituído por iodeto de propidium para minimizar a sobreposição espectral com GFP. Além disso, o maior coeficiente de excitação para o corante vermelho distante apresenta maior relação sinal/ruído e uma melhor resolução entre as condições permissivas de reparo e reparo. Ao tentar este procedimento, recomenda-se rotular todos os tubos um dia antes do experimento, pois isso irá prepará-lo para toda a preparação do reagente no dia do experimento.Após este procedimento, outros métodos como a citometria de imagem podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como uma toxina formadora de poros danifica todas as células uniformemente ou algumas células são mais suscetíveis do que outras. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores das áreas de doenças infecciosas e reparação de membrana plasmática explorar os efeitos do tamanho dos poros na eficiência de reparo de diferentes tipos celulares.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

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Ensaio in vitro da adesão bacteriana em mamíferos Células Epiteliais

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Imunologia e Infecção

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Alta capacidade método de detecção de vírus Influenza

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Medição da actividade de factor V no plasma humano, utilizando um ensaio de coagulação de Microplacas

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Quantitativo de alta capacidade ensaio de citotoxicidade de célula única para as células T.

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput medição de Extracelular DNA lançamento e Formação NET quantitativa em neutrófilos humanos<em&gt; In Vitro</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Os ensaios baseados em microscopia para high-throughput screening de Fatores Hospedeiros Envolvidos na<em&gt; Brucella</em&gt; A infecção de células HeLa

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

De alto rendimento Gene Tagging no<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Extração Eficiência confiável e alta de rim células imunes

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

Implementação de um Sistema de Infecção baseado em Inserir Permeável Membrana para estudar os efeitos de secretada bacterianas toxinas em células hospedeiras de mamíferos

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Detecção de alto rendimento de patógenos respiratórios em espécimes animais por Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...