Name: determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

אני מודה המחברים לתרום העבודה ההתחלתית אשר הוא הבסיס של פרסום זה. תודה Aitor אגירה, ג'נביב א, ריאן ואריקה Schoeller ל' לעזרה בהכנת כתב היד. תודה לי סורה ג'סיקה, אוסטין הסנטר לקבלת סיוע טכני עם כתב היד. H.M.H. נתמכה על ידי יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות & פיתוח אנושי של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R00HD084759.

כל השיטות המתוארות כאן מאושר על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת מישיגן, שנערכו לפי המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה.
1. לקבוע את תחילת המתבגר
<ol><li>פעל לפי ההנחיות מוסדי עבור בגדים, לכל הפחות, יש צורך ללבוש חלוק מעבדה נקייה והכפפות נקיות. תמיד ...

<ol>
	<li>Schneider, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+balance+and+reproduction.">Energy balance and reproduction.</a> Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).</li><li>Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+photoperiod+on+hormones,+behavior,+and+immune+function.">Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function.</a> Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, (2016).</li><li>Kauffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+differentiation+and+the+Kiss1+system:+Hormonal+and+developmental+considerations.">Sexual differentiation and the Kiss1 system: Hormonal and developmental considerations.</a> Peptides. , (2009).</li><li>Bronson, F. H., Dagg, C. P., Snell, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reproduction. , (1966).</li><li>Chehab, F. F., Mounzih, K., Lu, R., Lim, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+onset+of+reproductive+function+in+normal+female+mice+treated+with+leptin.">Early onset of reproductive function in normal female mice treated with leptin.</a> Science. , (1997).</li><li>Yoshimura, S., Yamaguchi, H., Konno, K., Ohsawa, N., Noguchi, S., Chisaka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+Preputial+Separation+is+a+Useful+Tool+for+Evaluating+Endocrine+Active+Chemicals.">Observation of Preputial Separation is a Useful Tool for Evaluating Endocrine Active Chemicals.</a> J Toxicologic Pathology. 18, 141-157 (2005).</li><li>Ahima, R. S., Dushay, J., Flier, S. N., Prabakaran, D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+accelerates+the+onset+of+puberty+in+normal+female+mice.">Leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 99 (3), 391-395 (1997).</li><li>Bohlen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+short-day+photoperiod+delays+the+timing+of+puberty+in+female+mice+via+changes+in+the+kisspeptin+system.">A short-day photoperiod delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system.</a> Frontiers in Endocrinology. 9 (FEB), 1-9 (2018).</li><li>Shahab, M., Mastronardi, C., Seminara, S. B., Crowley, W. F., Ojeda, S. R., Plant, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+hypothalamic+GPR54+signaling:+A+potential+mechanism+for+initiation+of+puberty+in+primates.">Increased hypothalamic GPR54 signaling: A potential mechanism for initiation of puberty in primates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2005).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, 5-9 (2016).</li><li>Navarro, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neurokinin+B+in+the+Control+of+Female+Puberty+and+Its+Modulation+by+Metabolic+Status.">Role of Neurokinin B in the Control of Female Puberty and Its Modulation by Metabolic Status.</a> Journal of Neuroscience. 32 (7), 2388-2397 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Tamrazian, A., Xie, H., P&#233;rez-Mill&#225;n, M. I., Kauffman, A. S., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+deletion+of+ventral+anterior+homeobox+(Vax1)+causes+subfertility+in+mice.">Heterozygous deletion of ventral anterior homeobox (Vax1) causes subfertility in mice.</a> Endocrinology. 155 (10), 4043-4053 (2014).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kisspeptin+Receptor+GPR54+Is+Required+for+Sexual+Differentiation+of+the+Brain+and+Behavior.">The Kisspeptin Receptor GPR54 Is Required for Sexual Differentiation of the Brain and Behavior.</a> Journal of Neuroscience. 27 (33), 8826-8835 (2007).</li><li>Teles, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+report:+A+GPR54-activating+mutation+in+a+patient+with+central+precocious+puberty.">Brief report: A GPR54-activating mutation in a patient with central precocious puberty.</a> New England Journal of Medicine. , (2008).</li><li>Korenbrot, C. C., Huhtaniemi, I. T., Weiner, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preputial+separation+as+an+external+sign+of+pubertal+development+in+the+male+rat.">Preputial separation as an external sign of pubertal development in the male rat.</a> Biology of reproduction. , (1977).</li><li>Gaytan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+precise+dating+of+female+puberty+in+laboratory+rodents:+The+puberty+ovarian+maturation+score+(Pub-Score).">Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: The puberty ovarian maturation score (Pub-Score).</a> Scientific Reports. 7 (March), 1-11 (2017).</li><li>Caligioni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 1-11 (2010).</li><li>Mayer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+completion+of+puberty+in+female+mice+depend+on+estrogen+receptor+-signaling+in+kisspeptin+neurons.">Timing and completion of puberty in female mice depend on estrogen receptor -signaling in kisspeptin neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (52), 22693-22698 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Vaginal+Lavage,+Crystal+Violet+Staining,+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification.">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), 4-9 (2012).</li><li>Hedrich, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Trang, C., Gong, P., Kimura, I., Pandolfi, E. C., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+Vax1+from+Gonadotropin-Releasing+Hormone+(GnRH)+Neurons+Abolishes+GnRH+Expression+and+Leads+to+Hypogonadism+and+Infertility.">Deletion of Vax1 from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Abolishes GnRH Expression and Leads to Hypogonadism and Infertility.</a> Journal of Neuroscience. 36 (12), 3506-3518 (2016).</li><li>Sloboda, D. M., Howie, G. J., Pleasants, A., Gluckman, P. D., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postnatal+nutritional+histories+influence+reproductive+maturation+and+ovarian+function+in+the+rat.">Pre- and postnatal nutritional histories influence reproductive maturation and ovarian function in the rat.</a> PLoS ONE. , (2009).</li><li>Manual, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Strategies+for+Maintaining+Colonies+of+Laboratory+Mice.">Breeding Strategies for Maintaining Colonies of Laboratory Mice.</a> Management. , (2007).</li><li>Kennedy, G. C., Mitra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+weight+and+food+intake+as+initiating+factors+for+puberty+in+the+rat.">Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat.</a> The Journal of Physiology. , (1963).</li><li>Sisk, C. L., Foster, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+basis+of+puberty+and+adolescence.">The neural basis of puberty and adolescence.</a> Nature Neuroscience. 7 (10), 1040-1047 (2004).</li><li>Nelson, J. F., Karelus, K., Felicio, L. S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influences+on+the+timing+of+puberty+in+mice.">Genetic influences on the timing of puberty in mice.</a> Biology of reproduction. , (1990).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. , (1982).</li><li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+and+age+at+puberty+in+female+and+male+mice+of+strains+selected+for+large+and+small+body+size.">Weight and age at puberty in female and male mice of strains selected for large and small body size.</a> Genetical Research. , (1984).</li><li>Rodriguez, I., Araki, K., Khatib, K., Martinou, J. C., Vassalli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vaginal+opening+is+an+apoptosis-dependent+process+which+can+be+prevented+by+the+overexpression+of+Bcl2.">Mouse vaginal opening is an apoptosis-dependent process which can be prevented by the overexpression of Bcl2.</a> Developmental Biology. , (1997).</li><li>Lomniczi, A., Wright, H., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+female+puberty.">Epigenetic regulation of female puberty.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 36, 90-107 (2015).</li><li>Selmanoff, M. K., Goldman, B. D., Ginsburg, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+serum+luteinizing+hormone,+follicle+stimulating+hormone+and+androgen+levels+in+males+of+two+inbred+mouse+strains.">Developmental changes in serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and androgen levels in males of two inbred mouse strains.</a> Endocrinology. 100 (1), 122-127 (1977).</li><li>Larder, R., Clark, D. D., Miller, N. L. G., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+Dysregulation+and+Infertility+in+Mice+Lacking+the+Homeodomain+Protein+Six6.">Hypothalamic Dysregulation and Infertility in Mice Lacking the Homeodomain Protein Six6.</a> Journal of Neuroscience. 31 (2), 426-438 (2011).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+Effects+of+litter+size+and+lactation+number.">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comparative Biochemistry and Physiology -- Part A: Physiology. 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Chahoud, I., Paumgartten, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+litter+size+on+the+postnatal+growth+of+rat+pups:+is+there+a+rationale+for+litter-size+standardization+in+toxicity+studies.">Influence of litter size on the postnatal growth of rat pups: is there a rationale for litter-size standardization in toxicity studies.</a> Environmental research. 109 (8), 1021-1027 (2009).</li><li>Pandolfi, E. C., Hoffmann, H. M., Schoeller, E. L., Gorman, M. R., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+SIX3+Abolishes+Male+Reproductive+Behavior+Through+Disrupted+Olfactory+Development,+and+Impairs+Female+Fertility+Through+Disrupted+GnRH+Neuron+Migration.">Haploinsufficiency of SIX3 Abolishes Male Reproductive Behavior Through Disrupted Olfactory Development, and Impairs Female Fertility Through Disrupted GnRH Neuron Migration.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li></ol>

רווחתם הכללית של העכברים הוא קריטי עבור assay פוריות מוצלחת21. בעת ביצוע וזמינותו של פוריות, חשוב לבדוק לא פיזית העכברים כל יום כמו זה יכול לגרום ללחץ. דרך נוספת להימנע שינויים תכופים בכלוב, כמו אלה גם מלחיץ. אידיאלי שינויים כלוב ייעשה יותר מ 1 - 2 פעמים בשבוע. לאור החשיפה במהלך שלב כ...

המעבר לבגרות נדרש להשיג בגרות מינית וכשירותם הרבייה. המעבר המתבגר ותחזוקה של פוריות בבגרות מוסדר על ידי הציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים (איור 1). העיתוי של תחילת המתבגר ותחזוקה של פוריות מוסדר בחוזקה על ידי גורמים פנימיים, כמו גם הסביבה כדי להגדיל את סיכויי ההישרדות של הצאצאים וההורים1,2. פרוטוקול זה מספקת גישה פולשנית לקבוע המתבגר התחלתה של עכברים וחולדות לאשר בגרות מינית לפני הגדרת מחקר פוריות כדי להעריך את יכולת הרבייה.
מחקר פוריות מבוצעת בבעלי חיים בגרו, ניתן לאתחל לאחר החיות עברו גיל ההתבגרות. לפני תחילת המתבגר, הציר הרבייה היא השבתה הדרגתית, הנהג מפתח של התבגרות מינית, גונדוטרופין – releasing הורמון (GnRH), הוא שוחרר לתוך בלוטת יותרת המוח בכמויות לא מספיקות כדי ליזום גיל ההתבגרות (איור 1). תחילת המתבגר היא תהליך מורכב שתוצאתו שחרור מוגבר GnRH קדושתו החציוני. GnRH מעודד הורמון מחלמן (LH) ואת זקיק מגרה הפרשת הורמון (FSH) של בלוטת יותרת המוח, שני הורמונים חיוניים עבור ההבשלה האשכים ותפקוד הרבייה (איור 1)3,4,5 .
עלבונות לציר הרבייה לגרום הפריון, ויכול גם מראש או עיכוב התפתחות המתבגר. תנאים ידוע להשפיע על התזמון של תחילת המתבגר וכשירותם הרבייה כוללים את החשיפה משבשי כימיקלים6,7, הגוף עלה/ירד במשקל1,8, שינויים היום אורך2,9 , מוטציות גנטיות10,11,12,13,14,15.
תחילת הבגרות המינית היא צעד קריטי זה צריך להסתיים לפני הגדרת וזמינותו של פוריות. היתרונות של קביעת תחילת המתבגר דרך ההפרדה preputial, פתח הנרתיק, ייחום ראשון, הם המאפיינים לא פולשנית של נהלים אלה, כפי שהם אינם מצריכים איסוף דם או הקרבת בעלי חיים16, 17.
לאחר תחילת המתבגר נקבע, הגדרת כראוי מחקר פוריות יספק מידע חשוב אודות השלמות של הציר הרבייה, בדרך כלל יש היתרון השני של יצירת חיות ניסוי ללימודי (עידון) 18. הגדרת המחקר פוריות שמתואר פרוטוקול זה יכול לזהות חסרונות קטנים וגם גדולים ביכולת הרבייה של זכרים ונקבות. מפתח הערכה שפרמטרים 1) זמן ההמלטה הראשונה, 2) מספר המלטות המופקים גודל מסגרת הזמן וחול 3) נתון. לבסוף, המלצות עבור הסוג של מעקב מחקרים אשר יכול להתבצע כדי לזהות את הגורם ליקוי פוריות הינם כלולים.
הפרוטוקול המתואר מתייחס עכברים ומשקפים הנתונים נציג העבודה העכברים הטרנסגניים. עם זאת, כל הפרוטוקולים כלולים תקפות באותה מידה בחולדות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1092">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Sterile Cotton Balls</td>
			<td style="width:167px;">Fisher</td>
			<td style="width:280px;">22456885</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surface protector</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1420637</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Light meter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21800-014</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope Slides</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>29-101</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Optimouse rack with cages</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C89100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Water Bottle Basket&#160;</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C61011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Filtered Cage Tops</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C78210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimice Standard Feeder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C40100SG</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Card Holder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C43251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Cards</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>M52010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bottle Assambley</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C79122P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bed R&#39;Nest Nesting</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">BRN4WSR</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1/8&#34; Corn Cob bedding&#160;</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">8B</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Standard mouse chow</td>
			<td>Teklad</td>
			<td style="width:280px;">7904 (7004)</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scale</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:280px;">10205-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polypropylene Beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-111F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats

הערכה של יכולת הרבייה היא קריטית להבנת ההשפעה של הטיפול או מניפולציה גנטית על ציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים. הציר הרבייה היא אינטגרטור מפתח של קלט סביבתי ופנימיים בהתאמת לפוריות תנאים נוחים עבור רבייה. לפני היציאה על מחקר פוריות עכברים וחולדות, בגרות מינית מוערך לשלול את האפשרות כי הפנוטיפים הרבייה שנצפה נגרמות על ידי עיכוב או נעדר תחילת המתבגר. פרוטוקול זה מתאר בגישה פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר אצל זכרים באמצעות הקביעה של ההפרדה preputial, אצל נקבות דרך פתח הנרתיק, ייחום ראשון. לאחר האישור של סיום ההתבגרות, ההישג של בגרות מינית, יכול להיות יזם מחקר פוריות. ההליך מתאר את תנאי גידול אופטימליים עבור עכברים, חולדות, כיצד להגדיר מחקר פוריות אילו פרמטרים כדי להעריך ולקבוע אם הטיפול או מחיקה ג'ין יש השפעה על פוריות.

התוצאות שהוצגו מגיעים בשני דגמים שונים בעכבר הטרנסגניים איפה שעתוק מקדם הגחון הקדמי גנים homeobox 1 (Vax1) נמחקה הגוף כולו על אחד אלל, המכונים כאן heterozygote עכברים (HET)13, או Vax1 נמחקה מותנית בתוך GnRH נוירונים22, כאן כינה מותנה KO (cKO). לפני הגדרת המחקר פ?...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות

טיפולים רבים, מוטציות גנטיות להשפיע על התזמון של בגרות מינית ופוריות. פרוטוקול זה מתאר שיטה לא פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר ב עכברים וחולדות לפני הגדרת מחקר פוריות בחיות בגרו.

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרבייה, כגון כיצד לקבוע התפרצות גיל ההתבגרות בעכברים וחולדות באמצעות הפרדה טרום נרתיקית, פתיחת הנרתיק, והקמת estrus הראשון לפני ביצוע מחקר פוריות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי על ידי הקמת תחילת גיל ההתבגרות באמצעות הגישה הלא פולשנית הפגינו, ניתן לעקוב ולבצע מחקר פוריות בבעלי חיים כי הם בוגרים מינית. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לקראת אבחון של ליקויים רבייה, הנגרמת על ידי מוטציות גנטיות או טיפולים רגישים לפגיעה ביכולת הרבייה, כגון כימיקלים משבשים האנדוקרינית.למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה על יכולת הרבייה בעכברים, זה יכול להיות מיושם גם על מערכות מודל אחרות, כגון חולדות אוגרים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שהיא דורשת כישורי טיפול טובים ועדינים בבעלי חיים. חשוב במיוחד להחזיק את העכברים כראוי לזיהוי החזותי הבא של הפרדה טרום-גולגולתית ופתיחת הנרתיק.כדי להכין את אזור העבודה, מניחים משטח על השולחן. לאחר מכן מניחים חלק עליון של כלוב עכבר נקי כאשר הרשת פונה כלפי מעלה, על הפנקס. לאחר מכן, הגדר קנה מידה באזור העבודה.מניחים מקור נקי 500 עד 1000 מיליליטר על הסולם ו tare אותו. לאחר מכן מקם גיליון לצד אזור העבודה כדי לתעד את הנתונים. לאחר מכן, מקם את כלוב העכברים באזור העבודה.פתח את הכלוב והסר את המכסה, בקבוק המים ומחזיק המזון לשולחן. תוך החזקת העכבר בזנב, מניחים אותו על החלק העליון של כלוב העכבר הנקי. תוך שמירה על אחיזה של הזנב, לאפשר לעכבר לחקור את הרשת של החלק העליון של הכלוב.מושכים בעדינות את הזנב לאחור ומתקרבים ליד השנייה אל העור הקרוב לצוואר ולאוזניים. אחוז בעור הרופף שבין הכתפיים והצוואר עם האגודל והאגודל. ואז לתפוס את העור על הגב עם האצבעות הנותרות ולהחזיק את העכבר על ידי בעדינות לחיצה עליו על היד.עם היד החופשית, בעדינות לדחוף את העור סביב הפין בחזרה. בהפרדה פוטית, העור הפוטנציאלי מחליק לאחור, חושף את הפין העטרה. לאחר הבדיקה, יש לתעד את נוכחותה או היעדרה של הפרדה בין-מוניטין.לאחר מכן, לשקול את העכבר ולתקליט את משקלו. לאחר מכן להחזיר את העכבר לכלוב הדיור על ידי החזקת המק מעל רצפת הכלוב ומאפשר לעכבר לצאת בכוחות עצמו. מניחים כדור צמר גפן, מקור גדול ובקבוק מים סטריליים באזור העבודה.יוצקים מים סטריליים לתוך הבקבוק. לאחר מכן, לחות את כדור הכותנה עם המים הסטריליים בבקבוק, והמקם אותו ליד החלק העליון של הכלוב הנקי. מניחים את כלוב העכברים באזור העבודה.ואז להעביר את העכבר לראש הכלוב על ידי החזקת אותו על ידי הבסיס של הזנב שלה. בעדינות למשוך על הזנב של העכבר כדי לעודד תנועה קדימה על ידי העכבר. לאחר מכן, הרם את הזנב תוך תמיכה בירכיים בשלוש אצבעות.לנקות בעדינות את הפות עם כדור צמר גפן לח, ולאחר מכן לבחון את הפות כדי לקבוע אם הנרתיק פתוח לחלוטין. רשום אם התרחשה פתיחה וגינלית. ואז לשקול את העכבר ולהחזיר אותו לכלוב הבית.הכינו כלוב עכברים נקי עם מכסה, מים, מזון, מצעים וחומר קינון לכל זוג עכברים רבייה. ואז למלא את כרטיסי הכלוב עם המידע הנדרש. מניחים את כלוב המצעים המוכן על שולחן נקי, ואז לאט לאט להציג יד כפפה לתוך כלוב העכבר ולהשאיר אותו בכלוב לתקופה קצרה של זמן.לאט לאט מתקרבים לעכברים עם היד הכפפות. כאשר העכברים לדרוס את היד, לתפוס את הזנב של עכבר אחד בין האגודל והאצבע המורה, ולאחר מכן להרים את העכבר על ידי הזנב. העכבר יכול להיות מוחזק על ידי הזנב ללא תמיכה של הגוף עד שתיים עד שלוש שניות.מניחים את העכבר בכלוב הרבייה המוכן, ואז סוגרים את הכלוב לאחר שהבטיחו שלעכברים הזכריים והנקבות יהיה מזון, מים וחומר קינון. בשיטה שהוצגה נחקרו שני מודלים שונים של עכברים מהו מהודרים. פתיחה וגינאלית והפרדה טרום-לידתית התרחשו באותו גיל ומשקל הן בעכברים ההטרוזיגים והן בעכברי הבקרה.לעומת זאת, פתיחה וגינאלית והפרדה פרפוטית התעכבו באופן משמעותי בנוקאאוט מותנה נקבות וזכרים, וקושרו למשקל גוף מוגבר. בגיל 4.5 שבועות, לפקדים הנשיים ולעכברי הנוקאאוט המותנים היה משקל גוף דומה, בעוד שהזכרים המותנים היו מעט כבדים יותר מהפקדים. הדבר מצביע על כך שהעיכוב בפתיחת הנרתיק וההפרדה הקדמה של עכברי הנוקאאוט המותנים לא היו קשורים לעיכוב בעלייה במשקל.לאחר סיום תחילת גיל ההתבגרות, מחקר הפוריות החל בגיל 10 עד 16 שבועות. עכברי הטרוזיגוט זכר ונקבה היו תת-פוריים. נקבות הטרוזיגוטה יצרו פחות פסולת במחקר בן שלושת החודשים, ועכברי הטרוזיגוט זכר ונקבה יצרו מלטה קטנה יותר.כדי להמחיש את החשיבות של אישור התפרצות גיל ההתבגרות לפני הקמת בדיקת פוריות, יכולת הרבייה הוערכה בעכברי נוקאאוט מותנים. במהלך מחקר הפוריות בן 70 הימים, לא זכרי נוקאאוט מותנים ולא נקבות יצרו פסולת. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לטפל בעכברים בזהירות ולהישאר רגועים תוך התקרבות וטיפול בבעלי החיים.בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו מדידת רמות הורמון המין במחזור יכול להתבצע כדי לענות על שאלות נוספות, כמו אם פוריות או תת פוריות אחרת נגרמה על ידי טסטוסטרון חריג, אסטרוגן, הורמון מגרה זקיק, ורמות הורמון מזערי. אל תשכח כי עבודה עם עכברים יכול להיות מסוכן בשל הסיכון של ננשך ופיתוח של אלרגיות. כדי להפחית את החשיפה, אמצעי זהירות כגון לבישת כפפות ומעיל מעבדה, וטיפול זהיר בעכברים, תמיד יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Biology

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

Necropsy לאבחון רקמות אוסף נבחר מדגם של חולדות ועכברים

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

A Rapid and Specific Microplate Assay for the Determination of Intra- and Extracellular Ascorbate in Cultured Cells

Microplate Assay מהיר והספציפי לקביעת Ascorbate Intra-ותאי בתאים בתרבית

Vitamin C (ascorbate) plays numerous important roles in cellular metabolism, many of which have only come to light in recent years. For instance, within ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

צמודים זיהוי פנים של Nitric Oxide ו Superoxide ב שכבת האנדותל של העורקים Intact

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

טכניקת כלית עכבר המבודדת perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

קביעת חומצות סיאליות בדגימות כבד וחלב של סוג הבר<em&gt; CMAH</em&gt; נוק- out עכברים.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

הכריחו ריור כשיטה לנתח מיומנות וקטור של יתושים

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...