Name: analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates
Uploaded: 2018-10-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates at JoVE.com

Ce travail est soutenu par le legs de Moshe Shimon et Judith Weisbrodt.

1. HMCA plaque de gaufrage
Remarque : Le processus complet pour la conception et la fabrication du timbre de polydiméthylsiloxane (PDMS) et plaque d’imagerie HMCA utilisé dans le présent protocole est décrit en détail dans notre précédent article15,16. Le timbre PDMS (forme négative) sert à gaufrer le HMCA (forme positive) qui se compose d’environ 450 MCs / puits (Figure 1 a). Comme le montre <...

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Il est bien documenté que les organismes vivants, caractérisés par leur organisme multicellulaire 3D complexe sont tout à fait distinctes des cellules utilisées monocouche 2D cultivée, en insistant sur la nécessité cruciale d’utiliser des modèles cellulaires qui mieux imitent les fonctions et les processus de l’organisme vivant pour médicament dépistage. Récemment, les sphéroïdes multicellulaires, culture organotypique, organoïdes et organes-on-a-chip ont été introduites8 pour...

Décès par cancer est attribuée principalement à la diffusion des cellules métastatiques à des endroits éloignés. Beaucoup d’efforts dans le traitement du cancer se consacrée sur le ciblage ou de prévenir la formation de colonies métastatiques et la progression de la maladie métastatique systémique1. Migration des cellules du cancer est une étape cruciale dans le processus de métastase tumorale, ainsi, la recherche de la cascade d’invasion du cancer est très important et une condition préalable à la recherche de thérapies anti-métastatique.
L’utilisation de modèles animaux comme outils pour l’étude de la maladie métastatique s’est avérée pour être très coûteux et pas toujours représentatifs de la tumeur chez les humains. En outre, la topologie du microenvironnement extracellulaire, la mécanique et la composition fortement affectent cancer cell comportement2. Car en vivo modèles intrinsèquement n’ont pas la capacité de séparer et de contrôler ces paramètres spécifiques qui contribuent à l’invasion du cancer et des métastases, on a besoin pour biomimétique contrôlables en vitro modèles.
Pour métastaser dans des organes éloignés, cellules cancéreuses doivent présenter des caractéristiques phénotypiques migrateurs et envahissantes qui peuvent être ciblés pour la thérapie. Toutefois, étant donné que la plupart des modèles in vitro du cancer ne pas imiter les caractéristiques réelles des tumeurs solides3, c’est très difficile de détecter des phénotypes physiologiquement pertinents. En outre, l’hétérogénéité phénotypique qui existe au sein de la tumeur, dicte la nécessité pour l’analyse des migrations de la tumeur à élément simple résolution afin de découvrir les thérapies axées sur le phénotype, par exemple, en ciblant les cellules déclenchant les métastases population au sein de tumeurs hétérogènes4.
L’étude de la motilité cellulaire et migration collective est menée principalement dans des cultures monocouches de cellules épithéliales sur des surfaces planes homogènes. Ces modèles cellulaires classiques pour la migration des cellules du cancer sont basées sur l’analyse de populations de cellules individuelles envahir à travers les membranes et les ECM composants5, mais dans ces systèmes, les différences intrinsèques entre les cellules individuelles ne peuvent pas être a étudié. Générer des sphéroïdes 3D par échafaudages ou en microstructures exempte d’échafaudage est considéré comme un supérieur moyen étudier la tumeur de cellules croissance et cancer invasion6,7,8. Cependant, la plupart des systèmes 3D ne sont pas adaptés aux formats à haut débit, et interaction entre sphéroïde habituellement ne peut être atteints depuis sphéroïdes individuels isolés sont générés à chaque micro puits9. Des études récentes portant sur la migration du cancer reposent sur des dispositifs microfluidiques3,10,11,12, cependant, ces complexes microfluidique outils sont difficiles à produire et ne peut pas servir à haut débit (HTS) de dépistage des drogues anti-invasives.
Deux principaux phénotypes, migration des cellules individuelles et collectives, qui jouent un rôle dans les cellules tumorales, surmonter l’obstacle de l’ECM et envahissent les tissus voisins, ont été démontrées13,14, chaque affichage distinct morphologiques caractéristiques, les mécanismes biochimiques, moléculaires et génétiques. En outre, les deux formes de migration des cellules tumorales, fibroblastes-like et amiboïdes, sont observées dans chaque phénotype. Depuis les deux phénotypes de l’invasion et les modes de migration, sont principalement définies par les propriétés morphologiques, il y a un besoin pour cellulaires modèles qu’activer la détection basée sur l’imagerie et l’examen de toutes les formes de l’invasion tumorale et la migration des cellules.
L’objectif global de la méthode actuelle doit fournir un système de biomimétique simple et reproductible 3D in vitro sur les cellules pour l’analyse de la capacité d’invasion dans les grandes populations des sphéroïdes de tumeur. Ici, nous introduisons la plaque d’imagerie basée sur HMCA 6 puits de recherche sur l’invasion tumorale et de la thérapie anti-métastatique. Cette technologie permet la formation d’un grand nombre des sphéroïdes de tumeur 3D uniforme (450 / puits) dans une structure de micro-chambres (MC) d’hydrogel. Divers composants de l’ECM sont ajoutés au tableau sphéroïde pour permettre l’invasion des cellules dans le milieu environnant. Processus d’invasion est surveillée de façon continue par l’observation des cellules individuelles sphéroïdes/envahir même court et long terme et facilite la caractérisation morphologique, coloration fluorescente et récupération des sphéroïdes spécifiques à tout moment. Puisque les sphéroïdes nombreux partagent l’espace et médium, interaction par l’intermédiaire de molécules solubles sphéroïdes individuels et leur impact sur l’autre est possible. Analyse d’images semi-automatique est effectué au moyen de code interne de MATLAB qui permet une collecte plus rapide et plus efficace de grandes quantités de données. La plateforme facilite la mesure précise et simultanée de nombreuses cellules sphéroïdes/envahir temps-efficacement, permettant le criblage de débit moyen des médicaments anti-invasion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 Micro-well Glass Bottom Plates with 14 mm micro-well #1.5 cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P06-14-1.5-N</td>
			<td>Commercial glass bottom plates which are used for HMCA embossing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520100</td>
			<td>A solution of 6% agarose is warmed up to 80&#176;C before use, a solution of 1% agarose is warmed to 37&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA solution B</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM medium, high glucose</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Special Newborn Calf Serum (NBCS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-122-1A</td>
			<td>Heat Inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>02-023-5A</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH, anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5881-500G</td>
			<td>Used for the preparation of 1M NaOH solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Type I collagen from rat tail, 5mg/ml</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronic acid sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5542-10MG</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisetin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F505-100MG</td>
			<td>Added to the culture medium, invasion inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DETA/NO</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>alx-430-014-m005</td>
			<td>Added to the culture medium, nitric oxide donor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Used at very low concenrtation without the need for washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dymax 5000-EC UV flood lamp complete system with light shield &#38; Dymax 400 Watt EC power supply</td>
			<td>Dymax Corporation</td>
			<td>PN 39823</td>
			<td>Used for HMCA plate sterilization by UV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted IX81 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Used for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator for microscope</td>
			<td>Life Imaging Services</td>
			<td></td>
			<td>Essential for time lapse experiments with image acquisition, pre adjusted to 37&#176;C, 5% CO2 and keeping a humidified atmosphere</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sub-micron motorized stage type SCAN-IM</td>
			<td>Marzhauser Wetzlar GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Used to predetermine image acquisition areas, for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14-bit, ORCA II C4742-98 cooled camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td>Highly sensitive, used for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent filter cube for PI detection</td>
			<td>Chroma Technology Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Filter cube specifications: excitation filter 530-550 nm, dichroic mirror 565 nm long pass and emission filter 600-660 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Olympus Cell^P operating software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Software used to control microscope, motorized stage, camera and image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab R2014B analysis software</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Used to develop in house graphic user interface for image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Used for data management, calculation, plot creation and statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
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analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates

Métastases du cancer est connu pour causer des 90 % de létalité du cancer. Métastase est un processus à plusieurs étapes qui initie avec la pénétration/invasion des cellules tumorales dans les tissus voisins. Ainsi, l’invasion est une étape cruciale à la métastase, rendant l’invasion processus recherche et le développement de médicaments anti-métastatiques, hautement significative. Pour répondre à cette demande, il est nécessaire de développer des modèles 3D dans vitro qui imitent l’architecture des tumeurs solides et leur microenvironnement plus étroitement à l’état in vivo d’une part, mais en même temps être reproductible, robuste et adapté aux haut rendement et hautes teneur Mensurations. Actuellement, la plupart analyses d’invasion se pencher sur technologies microfluidiques sophistiqués qui sont adéquates pour la recherche, mais pas pour le dépistage des drogues un volume élevé. Autres dosages utilisant des dispositifs à base de plaque avec des sphéroïdes individuels isolés dans chaque puits sont matériel consommant et ont la taille de l’échantillon faible par l’État. L’objectif du protocole actuel est de fournir un système de base de cellules 3D biomimétique simple et reproductible pour l’analyse de la capacité d’invasion dans les grandes populations des sphéroïdes de tumeur. Nous avons développé un modèle 3D pour invasion analyse basée sur la plaque d’imagerie HMCA de recherche sur l’invasion tumorale et la découverte de médicaments anti-métastatique. Ce dispositif permet la production de nombreux sphéroïdes uniformes par puits (taille de l’échantillon élevé par État) entouré de composantes d’ECM, tout en permanence et simultanément observer et mesurer les sphéroïdes à élément simple résolution pour les moyennes criblage de médicaments anti-métastatiques. Cette plateforme est présentée ici par la production des sphéroïdes HeLa et MCF7 pour illustrant la cellule individuelle et collective invasion. Nous comparons l’influence de l’ECM composant l’acide hyaluronique (HA) sur les capacités invasives de collagène qui entourent les sphéroïdes HeLa. Enfin, nous ne présentons fisétine (inhibiteur de l’invasion) HeLa sphéroïdes et l’oxyde nitrique () (activateur d’invasion) à MCF7 sphéroïdes. Les résultats sont analysés par un logiciel interne qui permet l’analyse semi-automatique, simple et rapide qui facilite l’examen des paramètre multiples.

L’unique HMCA plaque d’imagerie est utilisée pour le dosage de l’invasion des sphéroïdes tumeur 3D. L’analyse entière, commençant par la formation sphéroïde et finissant avec le processus d’invasion et les manipulations supplémentaires, est réalisée au sein de la même plaque. Pour la formation sphéroïde, cellules HeLa sont chargés dans le bassin de la baie et s’installer dans l’hydrogel MCs par gravité. L’hydrogel MCs, qui présentent des caractéristiques n...

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Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Une plaque d’imagerie basée sur HMCA est présentée pour la performance de série invasion. Cette plaque facilite la formation des sphéroïdes en trois dimensions (3D) tumeur et la mesure de l’invasion des cellules du cancer dans la matrice extracellulaire (ECM). La quantification de dosage d’invasion est obtenue par analyse semi-automatique.

Analyse d’Invasion des cellules du Cancer et des médicaments anti-métastatique dépistage utilisant Hydrogel micro-chambre Array (HMCA)-plaques de base

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Le but de ce système 3D biomimétique simple reproductible basé sur la cellule est de faciliter l’analyse de capacité d’invasion dans une grande population de sphéroïdes de tumeur pour le criblage anti-métastatique de drogue. Le principal avantage de notre tableau de micro-chambre hydrogel est qu’il permet la production d’un grand nombre de sphéroïdes uniformes qui peuplent le même plan focal par puits. La position sphéroïde est conservée en raison de la structure du réseau hydrogel micro-chambre, même après l’ajout de matrice extracellulaire, facilitant la surveillance continue précise des sphéroïdes et le processus d’invasion.En outre, la caractérisation morphologique et la coloration fluorescente de nombreux sphéroïdes et cellules envahissantes peuvent être effectuées in situ et analysées à une résolution à un seul élément d’une manière efficace dans le temps. Maria Sobolev, de notre laboratoire, présentera la procédure de production de plaques d’imagerie à six puits hydrogel. Pour préparer les plaques de tableau de micro-chambre hydrogel, préchauffer d’abord six polydimethylsiloxane, ou PDMS, timbres à 70 degrés Celsius, et placer un six puits, plaque de fond de verre sur un bain sec préchauffé à 75 degrés Celsius pendant plusieurs minutes.Lorsque la plaque est chaude, versez une goutte de 400 microlitres d’agarose préchauffée à faible fond fondant sur le fond de chaque puits de la plaque de six puits, et placez doucement un timbre sur chaque goutte. Laisser refroidir la configuration de cinq à dix minutes à température ambiante, suivie de 20 minutes à quatre degrés Celsius pour une gelation complète de l’agarose. Lorsque l’agarose s’est solidifiée, décoller délicatement le PDMS de chaque puits, laissant les gels agarose modelés avec des micro-chambres.Après avoir permis à la lampe UV d’atteindre sa plus grande intensité, placez la plaque en relief dans le système de séchage léger pendant trois minutes et remplissez les macro-puits stérilisés aux UV de PBS stériles. Ensuite, couvrez la plaque et enveloppez-la de parafilm pour un stockage de quatre degrés Celsius jusqu’à utilisation. Pour charger les cellules, retirez le PBS de chaque puits et chargez doucement 50 microlitres des cellules d’intérêt au-dessus de chaque tableau d’hydrogel.Après avoir permis aux cellules de se déposer par gravité pendant 15 minutes, ajouter soigneusement six à huit aliquots de 500 microlitres de milieu frais au bord du fond en plastique macro-puits à l’extérieur de l’anneau et du tableau hydrogel. Incuber les cellules pendant la période appropriée à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone avec l’humidité pour la formation de sphéroïdes. Ensuite, transférez les sphéroïdes dans une hotte de biosécurité sur la glace pendant 10 minutes.Lorsque la plaque est refroidie, penchez une pointe de pipette sur le bord du fond en plastique macro-bien à côté du tableau hydrogel, et retirez tout le milieu autour du tableau. Ensuite, retirez le milieu du réservoir de tableau, penchez une pointe de pipette de gel-chargement sur le bord du réservoir de tableau très soigneusement, prenant soin de ne pas déranger les micro-chambres et les sphéroïdes. Ensuite, utilisez une pointe de pipette fine prégelée pour ajouter deux aliquots de 150 microlitres du mélange de collagène d’intérêt au bord du tableau un à la fois, libérant le mélange lentement pour éviter la dislocation sphéroïde.Après la deuxième série de collagène a été ajouté à chaque puits, retourner les sphéroïdes à l’incubateur pendant une heure pour la gelation complète de la matrice extracellulaire. Lorsque la matrice s’est solidifiée, ajouter 400 microlitres d’agarose préchauffée de 1 % à faible fondant sur le gel et incuber la plaque, recouverte à température ambiante, pendant cinq à sept minutes, avant de la refroidir pendant deux minutes à quatre degrés Celsius pour une gelation agarose. Puis, en appuyant sur la pipette sur le bord du fond en plastique macro-bien, ajouter délicatement deux millilitres de milieu complet à chaque puits.Pour effectuer un test d’invasion, chargez la plaque de tableau de microchôle hydrogel sur un stade de microscope inversé motorisé équipé d’un incubateur de dioxyde de carbone de 37 degrés Celsius et de 5 % avec une atmosphère humidifiée, et utilisez un objectif de quatre ou 10 x pour prédéterminer les positions de l’acquisition d’images dans chaque puits afin que l’ensemble de la zone du réseau soit évalué. Ensuite, acquérir des images en champ lumineux toutes les deux à quatre heures pour un total de 24 à 72 heures pour suivre l’invasion cellulaire du corps sphéroïde dans la matrice extracellulaire environnante. À la fin de l’acquisition de l’image, exportez les images en time-lapse du logiciel d’acquisition d’images pour économiser dans un format de fichier d’image marqué vers un dossier dédié.Ensuite, ouvrez l’interface utilisateur graphique et cliquez sur Load Bright Field. Ajustez les paramètres de segmentation de l’image pour obtenir une segmentation précise des sphéroïdes et de leurs zones d’invasion, et cliquez sur Segmentation région d’intérêt pour créer une bordure autour de chaque sphéroïde. Si la segmentation automatique est incorrecte, appuyez sur Supprimer ou Ajouter, et apporter les corrections appropriées manuellement.Cliquez sur Suivi pour numéroter les sphéroïdes dans chacune des images time-lapse. Ensuite, cliquez sur Mesure pour générer une feuille de calcul avec tous les paramètres, et enregistrer la feuille de calcul dans un format approprié pour le traitement des données et l’analyse statistique. Pour examiner l’influence de l’acide hyaluronique sur le processus spontané d’invasion sphéroïde HeLa, dans cette expérience, les sphéroïdes mûris de deux jours ont été couverts de collagène et de solution de mélange d’acide hyaluronique et comparés à des sphéroïdes mûris de deux jours couverts de solution de collagène seul.Après 50 heures d’incubation, les sphéroïdes incorporés dans le collagène et l’acide hyaluronique ont démontré une dispersion cellulaire inférieure dans la matrice extracellulaire environnante par rapport aux sphéroïdes incorporés dans le collagène seul. En effet, l’analyse de la cinétique de la zone d’invasion au fil du temps pour 99 sphéroïdes à résolution monosphéroïde indique clairement que l’ajout d’acide hyaluronique au collagène empêche la dispersion cellulaire hors du sphéroïde, ce qui entraîne de plus petites zones d’invasion. Le traitement de la culture sphéroïde HeLa avec un flavonoïde bioactif avec des propriétés cyto-et migrastatiques pendant 24 heures entraîne une dispersion cellulaire inhibée autour des sphéroïdes par rapport aux sphéroïdes HeLa non traités.En effet, l’analyse des zones d’invasion de 488 sphéroïdes à la fin de l’expérience a révélé une inhibition significative après traitement avec aussi peu que 10 micromolaires du médicament. En raison de la faible caractéristique d’attachement de l’hydrogel, cette technologie à base de micro-chambre facilite la formation de sphéroïdes, même dans les cas de très peu de cellules. Ceci est particulièrement avantageif dans les échantillons limités limités de cellules primaires de type tige de cancer ou d’origine patiente.La plaque d’imagerie hydrogel micro-chambre permet l’analyse de l’emplacement spatial exact des sphéroïdes au cours d’expériences à long terme pour l’évaluation du processus d’invasion au niveau d’un seul élément et fournit un degré élevé de robustesse statistique et de précision. Les applications futures de cette méthodologie incluent côte à côte la culture multicellulculaire des cellules tumorales et stromal dans différentes régions du macro-puits et la récupération de sphéroïdes individuels pour l’analyse moléculaire en aval.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilisant la génomique fonctionnelle de dépistage pour identifier les cibles de médicaments potentiellement nouveaux dans Cancer Cell Cultures Spheroid

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Recherche

Recherche en cancérologie

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Un modèle pour périneural Invasion en tête et du cou Carcinome épidermoïde

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Génération des sphéroïdes High-Throughput tumeur en trois dimensions pour le dépistage des drogues

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Épreuves d’imagerie de cellules vivantes pour étude glioblastome Brain Tumor Stem Cell Migration et Invasion

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

Système de Culture cellulaire 3D pour étudier l’Invasion et l’évaluation thérapeutique dans le Cancer de la vessie

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Un Workflow Simple Migration/Invasion à l’aide d’un imageur automatisé de cellules vivantes

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Dépistage de drogue des xénogreffes dérivées de tumeur de patient primaire dans le poisson-zèbre

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Mesure en temps réel de la migration et de l’invasion des cellules cancéreuses

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Évaluation de la mort cellulaire à l’aide d’un surnageant sans cellules de probiotiques dans des cultures sphéroïdes tridimensionnelles de cellules cancéreuses colorectales

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

Surveillance de l’invasion des cellules cancéreuses et de la cytotoxicité des lymphocytes T dans la culture 3D

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...