Name: analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates
Uploaded: 2018-10-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates at JoVE.com

Diese Arbeit wird durch das Vermächtnis von Moshe Shimon und Judith Weisbrodt unterstützt.

(1) HMCA Platte Prägung
Hinweis: Der komplette Prozess für die Konstruktion und Herstellung von Polydimethylsiloxan (PDMS) Stempel und HMCA Speicherfolie verwendet in diesem Protokoll wird im Detail in unserem vorherigen Artikel15,16beschrieben. PDMS-Stempel (Negativform) wird verwendet, um die HMCA (positive Form) prägen besteht aus rund 450 MCs pro Bohrloch (Abbildung 1A). Wie in Ab...

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Es ist gut dokumentiert, dass lebende Organismen, zeichnet sich durch ihre komplexe 3D mehrzelligen Organisation ziemlich eindeutig aus den gängigen 2D Monolage kultivierten Zellen sind, entscheidende betonend, zelluläre Modelle verwenden die Funktionen besser imitieren und Prozesse des lebenden Organismus für Drug screening. Vor kurzem wurden mehrzelligen Sphäroide, organotypischen Kulturen, Organellen und Organe-on-a-Chip eingeführt8 für den Einsatz in standardisierten Wirkstoffforschung. ...

Krebstod ist vor allem auf die Verbreitung von metastasierenden Zellen an weit entfernten Orten zurückzuführen. Viele Bemühungen in der Krebsbehandlung auf targeting oder verhindern die Bildung von Metastasen Kolonien und das Fortschreiten der systemische Metastasen1konzentrieren. Krebs Zelle Migration ist ein entscheidender Schritt in der Tumor-Metastasen-Prozess, also die Erforschung von Krebs Invasion Kaskade ist sehr wichtig und eine Voraussetzung zur Suche nach Anti-metastatischen Therapeutika.
Die Verwendung von Tiermodellen als Hilfsmittel für das Studium metastasierten Erkrankung wurde sehr teuer und nicht immer repräsentativ für den Tumor beim Menschen festgestellt. Darüber hinaus beeinflussen die extrazelluläre Mikroumgebung Topologie, die Mechanik und die Zusammensetzung stark Krebs Zelle Verhalten2. Da in Vivo Modellen von Natur aus nicht in der Lage zu trennen und so spezifische Parameter, die zu Krebs Invasion und Metastasierung beitragen zu kontrollieren, gibt es eine Notwendigkeit für steuerbare biomimetische in-vitro- Modelle.
Um auf entfernte Organe metastasieren, müssen Krebszellen wandernden und invasive phänotypische Merkmale aufweisen, die für die Therapie ausgerichtet werden können. Da die meisten in-vitro- Krebs Modelle nicht die tatsächlichen Eigenschaften von soliden Tumoren3imitieren, ist es jedoch sehr schwierig, physiologisch relevante Phänotypen erkennen. Darüber hinaus bestimmt die phänotypische Heterogenität, die in den Tumor, besteht die Notwendigkeit für die Analyse von Tumor-Migration bei einem Element Auflösung um Phänotyp gerichtete Therapien, zum Beispiel zu entdecken, indem Sie auf die Metastasen initiieren Zelle Bevölkerung in heterogenen Tumoren4.
Die Studie der Zelle Motilität und kollektiven Migration ist in erster Linie in Monolayer-Kulturen der Epithelzellen auf homogene planaren Flächen. Diese konventionellen Zellmodellen für Krebs Zellwanderung basieren auf die Bevölkerung Analyse einzelner Zellen eindringen durch die Membranen und ECM Komponenten5, aber in einem solchen System können nicht die Unterschiede zwischen den einzelnen Zellen werden studierte. Erzeugung von 3D Sphäroide oder über Gerüste Gerüst-freie Mikrostrukturen gilt als eine überlegene bedeutet, den Tumor zu studieren Zelle Wachstum und Krebs Invasion6,7,8. Jedoch die meisten 3D-Systeme eignen sich nicht zur Hochdurchsatz-Formate und Inter Sphäroid Interaktion kann nicht in der Regel erreicht werden, da in jedes Mikro-gut9isoliert einzelne Sphäroide erzeugt werden. Jüngste Studien mit der Krebs-Migration basieren auf mikrofluidischen Geräten3,10,11,12, jedoch diese anspruchsvolle mikrofluidischen Werkzeuge sind schwer zu produzieren und kann nicht Hochdurchsatz-screening (HTS) von Anti-invasive Drogen verwendet werden.
Zwei wichtigsten Phänotypen, kollektive und individuelle Zellwanderung, die eine Rolle in Tumorzellen die ECM-Barriere zu überwinden und benachbarte Gewebe eindringen wurden nachgewiesene13,14, jede Anzeige unterschiedliche morphologische Eigenschaften, biochemischen, molekularen und genetischen Mechanismen. Darüber hinaus werden zwei Formen der Migration von Tumorzellen, Fibroblasten-Like und amöboiden, in jeder Phänotyp beobachtet. Da beide Invasion Phänotypen und Migration-Modi, zeichnen sich vor allem durch morphologische Eigenschaften, gibt es eine Notwendigkeit für zelluläre Modelle dieser aktivieren Imaging-basierte Erkennung und Untersuchung aller Formen von Tumorinvasion und Migration-Zellen.
Das übergeordnete Ziel der aktuellen Methode ist eine einfache und reproduzierbare biomimetische 3D in-vitro- Zelle-basiertes System für die Analyse der Invasion Kapazität in großen Populationen von Tumor Sphäroide zur Verfügung zu stellen. Hier stellen wir die HMCA-basierte 6-Well Bildplatte für die Erforschung der Tumorinvasion und anti-metastatischen Therapie. Die Technologie ermöglicht die Bildung einer großen Zahl von einheitlichen 3D Tumor Sphäroide (450 pro Well) in einem Hydrogel Mikro-Kammern (MC) Struktur. Die Sphäroid Array ermöglichen das Eindringen der Zellen in der Umgebung sind verschiedene ECM-Komponenten hinzugefügt. Invasion-Prozess wird kontinuierlich überwacht, durch kurz- und langfristige Beobachtung der gleichen Sphäroide/Invasion der einzelnen Zellen und erleichtert Morphologische Charakterisierung, fluoreszierende Färbung und Abruf von spezifischen Sphäroide an jedem beliebigen Punkt. Da zahlreiche Sphäroide Raum und Medium teilen, ist die Interaktion über lösliche Moleküle zwischen einzelnen Sphäroide und deren Auswirkungen auf den anderen möglich. Semi-automatische Bildanalyse erfolgt über hauseigene MATLAB-Code schneller und effizienter Sammlung von großen Datenmengen ermöglicht. Die Plattform ermöglicht präzise, gleichzeitige Messung von zahlreichen Sphäroide/eindringenden Zellen Zeit effizient zu nutzen, so dass mittleren Durchsatz Screening von Anti-Invasion Drogen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 Micro-well Glass Bottom Plates with 14 mm micro-well #1.5 cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P06-14-1.5-N</td>
			<td>Commercial glass bottom plates which are used for HMCA embossing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520100</td>
			<td>A solution of 6% agarose is warmed up to 80&#176;C before use, a solution of 1% agarose is warmed to 37&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA solution B</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM medium, high glucose</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Special Newborn Calf Serum (NBCS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-122-1A</td>
			<td>Heat Inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>02-023-5A</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH, anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5881-500G</td>
			<td>Used for the preparation of 1M NaOH solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Type I collagen from rat tail, 5mg/ml</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronic acid sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5542-10MG</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisetin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F505-100MG</td>
			<td>Added to the culture medium, invasion inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DETA/NO</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>alx-430-014-m005</td>
			<td>Added to the culture medium, nitric oxide donor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Used at very low concenrtation without the need for washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dymax 5000-EC UV flood lamp complete system with light shield &#38; Dymax 400 Watt EC power supply</td>
			<td>Dymax Corporation</td>
			<td>PN 39823</td>
			<td>Used for HMCA plate sterilization by UV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted IX81 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Used for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator for microscope</td>
			<td>Life Imaging Services</td>
			<td></td>
			<td>Essential for time lapse experiments with image acquisition, pre adjusted to 37&#176;C, 5% CO2 and keeping a humidified atmosphere</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sub-micron motorized stage type SCAN-IM</td>
			<td>Marzhauser Wetzlar GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Used to predetermine image acquisition areas, for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14-bit, ORCA II C4742-98 cooled camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td>Highly sensitive, used for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent filter cube for PI detection</td>
			<td>Chroma Technology Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Filter cube specifications: excitation filter 530-550 nm, dichroic mirror 565 nm long pass and emission filter 600-660 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Olympus Cell^P operating software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Software used to control microscope, motorized stage, camera and image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab R2014B analysis software</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Used to develop in house graphic user interface for image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Used for data management, calculation, plot creation and statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
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analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates

Krebsmetastasen ist bekannt, 90 % der Letalität Krebs verursachen. Metastasierung ist ein mehrstufiger Prozess, der mit der Durchdringung/Invasion von Tumorzellen in benachbarte Gewebe initiiert. Somit ist Invasion ein entscheidender Schritt in Metastasen, machen die Invasion Prozessforschung und Entwicklung von Anti-metastatischen Drogen hochsignifikant. Um diese Nachfrage zu begegnen, besteht die Notwendigkeit, 3D in-vitro- Modelle zu entwickeln, die die Architektur von soliden Tumoren zu imitieren und ihrer Mikroumgebung am ehesten zu in Vivo Staat auf der einen Seite, aber zur gleichen Zeit werden reproduzierbar, robust und geeignet für hohe Ergiebigkeit und hohe Content Messungen. Derzeit, lehnen die meisten Invasion Assays auf anspruchsvolle mikrofluidischen Technologien, die ausreichend sind für die Forschung aber nicht für hochvolumige Drogen-Screening. Andere Tests mit Platte-basierten Geräten mit isolierten einzelnen Sphäroide in jede Vertiefung sind Material verbrauchen und geringen Stichprobengröße pro Zustand haben. Das aktuelle Protokoll soll eine einfache und reproduzierbare biomimetische zellbasierte 3D-System für die Analyse der Invasion Kapazität in großen Populationen von Tumor Sphäroide schaffen. Wir entwickelten ein 3D-Modell für Invasion Assay anhand HMCA Bildplatte für die Erforschung der Tumorinvasion und anti-metastatischen Wirkstoffforschung. Dieses Gerät ermöglicht die Produktion von zahlreichen einheitliche Sphäroide pro Bohrloch (hohe Stichprobengröße pro Zustand) umgeben von ECM-Komponenten, während gleichzeitig und kontinuierlich beobachten und messen die Sphäroide bei einem Element Auflösung für mittlere Durchsatz-Screening von Anti-metastatischen Drogen. Diese Plattform wird hier durch die Produktion von HeLa und MCF7 Sphäroide zur Veranschaulichung einzelne Zelle und kollektive Invasion vorgestellt. Wir vergleichen den Einfluss der ECM-Komponente-Hyaluronsäure (HA) auf die invasive Kapazität von Kollagen um HeLa Sphäroide. Schließlich stellen wir Fisetin (Invasion Hemmer) HeLa Sphäroide und Stickstoffmonoxid (NO) (Invasion Aktivator), MCF7 Sphäroide. Die Ergebnisse werden von Inhouse-Software analysiert die halbautomatische, einfache und schnelle Analyse ermöglicht die Multi-Parameter-Prüfung erleichtert.

Die einzigartige HMCA imaging-Platte wird für die Invasion-Assay von 3D Tumor Sphäroide verwendet. Der gesamte Test, mit der Sphäroid Bildung beginnend und endend mit der Invasion und zusätzliche Manipulationen erfolgt innerhalb der gleichen Platte. Für die Bildung der Sphäroid HeLa-Zellen werden in das Array Becken geladen und siedeln in der Hydrogel MCs durch die Schwerkraft. Das Hydrogel MCs, die Anhänger/niedrige Anlage Eigenschaften haben, erleichtern die Zell-Zell-Interaktion...

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Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Eine HMCA-basierte Speicherfolie wird für Invasion Testleistung vorgestellt. Diese Platte erleichtert die Bildung von dreidimensionalen (3D) Tumor Sphäroide und die Messung der Krebs Zelle eindringen in die extrazelluläre Matrix (ECM). Die Invasion-Assay-Quantifizierung wird durch halbautomatische Analyse erreicht.

Analyse der Krebs Zellinvasion und anti-metastatischen Drogen-Screening mit Hydrogel Micro-Kammer Array (HMCA)-basierte Platten

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Das Ziel dieses einfachen reproduzierbaren biomimetischen 3D-Zell-basierten Systems ist es, invasionskapazitätsbasierte Analysen in großer Population von Tumorsphäroid für antimetastatische setische Arzneimittelscreening zu erleichtern. Der Hauptvorteil unseres Hydrogel-Mikrokammer-Arrays ist, dass es die Produktion einer großen Anzahl einheitlicher Sphäroide ermöglicht, die die gleiche Brennebene pro Brunnen bevölkern. Die Sphäroidposition bleibt aufgrund der Hydrogel-Mikrokammer-Arraystruktur auch nach extrazellulärer Matrixaddition erhalten, was die genaue kontinuierliche Überwachung der Sphäroide und des Invasionsprozesses erleichtert.Darüber hinaus können die morphologische Charakterisierung und fluoreszierende Färbung zahlreicher Sphäroide und eindringender Zellen vor Ort durchgeführt und zeiteffizient mit einer Ein-Element-Auflösung analysiert werden. Die Demonstration des Hydrogel-Mikrokammer-Arrays für die Herstellung von Sechs-Well-Bildplatten wird Maria Sobolev aus unserem Labor sein. Um die Hydrogel-Mikrokammer-Arrayplatten vorzubereiten, zuerst sechs Polydimethylsiloxan oder PDMS auf 70 Grad Celsius vorheizen und eine sechswellige Glasbodenplatte auf ein trockenes Bad legen, das mehrere Minuten auf 75 Grad Celsius vorgeheizt wird.Wenn die Platte warm ist, gießen Sie einen 400-Mikroliter-Tropfen vorgeheizter, niedrigschmelzender Agarose auf den Boden jeder Bohrung der Sechs-Brunnen-Platte, und legen Sie vorsichtig einen Stempel über jeden Tropfen. Lassen Sie das Setup für fünf bis 10 Minuten bei Raumtemperatur abkühlen, gefolgt von 20 Minuten bei vier Grad Celsius für volle Agarose-Gelation. Wenn sich die Agarose verfestigt hat, schälen Sie das PDMS vorsichtig von jedem Brunnen ab und lassen Sie die Agarose-Gele mit Mikrokammern gemustert.Nachdem die UV-Lampe ihre höchste Intensität erreicht hat, legen Sie die geprägte Platte für drei Minuten in das Lichthärtungssystem und füllen Sie die UV-sterilisierten Makrobrunnen mit sterilem PBS. Dann bedecken Sie die Platte, und wickeln Sie sie mit Parafilm für vier Grad Celsius Lagerung bis zum Gebrauch. Um die Zellen zu laden, entfernen Sie die PBS aus jedem Brunnen, und laden Sie vorsichtig 50 Mikroliter der von Interesse sindden Zellen auf jedes Hydrogel-Array.Nachdem sie den Zellen erlaubt haben, sich 15 Minuten lang durch Schwerkraft abzusetzen, fügen Sie vorsichtig sechs bis acht Aliquots von 500 Mikrolitern frischem Medium an den Rand des Makro-Gut-Kunststoffbodens außerhalb des Ring- und Hydrogel-Arrays. Inkubieren Sie die Zellen für den entsprechenden Zeitraum bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid mit Feuchtigkeit für die Bildung von Sphäroiden. Dann übertragen Sie die Sphäroide für 10 Minuten in eine Biosicherheitshaube auf Eis.Wenn die Platte abgekühlt ist, lehnen Sie eine Pipettenspitze am Rand des Makro-Gut-Kunststoffbodens neben dem Hydrogel-Array an, und entfernen Sie das gesamte Medium um das Array herum. Dann entfernen Sie das Medium aus dem Array-Tank, lehnen Sie eine Gel-Ladepipettenspitze am Rand des Array-Tanks sehr sorgfältig, wobei Sie darauf achten, die Mikrokammern und Sphäroide nicht zu stören. Als nächstes verwenden Sie eine vorgefrorene, feine Pipettenspitze, um zwei Aliquots von 150 Mikrolitern der Kollagenmischung von Interesse am Rand des Arrays nacheinander hinzuzufügen, wodurch die Mischung langsam freigesetzt wird, um Sphäroiddislokationen zu vermeiden.Nachdem die zweite Runde von Kollagen zu jedem Brunnen hinzugefügt wurde, geben Sie die Sphäroide für eine Stunde in den Inkubator zurück, um die extrazelluläre Matrix vollständig zu gelieren. Wenn die Matrix erstarrt ist, fügen Sie 400 Mikroliter vorgewärmt1%niedrigschmelzende Agarose auf die Oberseite des Gels, und inkubieren Sie die Platte, bedeckt bei Raumtemperatur, für fünf bis sieben Minuten, bevor Sie für zwei Minuten bei vier Grad Celsius für Agarose-Gelation abkühlen. Dann, die Pipette am Rand des Makro-Gut-Kunststoffbodens lehnen, fügen Sie vorsichtig zwei Milliliter komplettes Medium zu jedem Brunnen hinzu.Um einen Invasionstest durchzuführen, laden Sie die Hydrogel-Mikrokammer-Arrayplatte auf eine motorisierte invertierte Mikroskopstufe, die mit einem 37-Grad-Celsius- und 5%Kohlendioxid-Inkubator mit einer befeuchteten Atmosphäre ausgestattet ist, und verwenden Sie ein vier- oder zehnfaches Objektiv, um die Positionen für die Bildaufnahme in jedem Brunnen vorab zu bestimmen, so dass der gesamte Arraybereich bewertet wird. Dann erfassen Sie hellfeldbilder alle zwei bis vier Stunden für insgesamt 24 bis 72 Stunden, um die Zellinvasion vom Sphäroidkörper in die umgebende extrazelluläre Matrix zu verfolgen. Exportieren Sie am Ende der Bildaufnahme die Zeitrafferbilder aus der Bildaufnahmesoftware zum Speichern in einem markierten Bilddateiformat in einen dedizierten Ordner.Öffnen Sie als Nächstes die grafische Benutzeroberfläche, und klicken Sie auf Helles Feld laden. Passen Sie die Segmentierungsparameter des Bildes an, um eine präzise Segmentierung der Sphäroide und ihrer Invasionsbereiche zu erreichen, und klicken Sie auf Segmentierung region of Interest, um einen Rahmen um jedes Sphäroid zu erstellen. Wenn die automatische Segmentierung falsch ist, drücken Sie Löschen oder Hinzufügen, und nehmen Sie die entsprechenden Korrekturen manuell vor.Klicken Sie auf Tracking, um die Sphäroide in jedem der Zeitrafferbilder zu nummeriert. Klicken Sie dann auf Messen, um eine Kalkulationstabelle mit allen Parametern zu generieren, und speichern Sie die Kalkulationstabelle in einem geeigneten Format für die Datenverarbeitung und statistische Analyse. Um den Einfluss von Hyaluronsäure auf den spontanen HeLa-Sphäroid-Invasionsprozess zu untersuchen, wurden in diesem Experiment zweitagereife Sphäroide mit Kollagen- und Hyaluronsäure-Gemischlösung überzogen und mit zweitagereifen Sphäroiden verglichen, die allein mit Kollagenlösung bedeckt waren.Nach 50 Stunden Inkubation zeigten die in Kollagen und Hyaluronsäure eingebetteten Sphäroide eine geringere Zelldispersion in die umgebende extrazelluläre Matrix im Vergleich zu den Sphäroiden, die allein in Kollagen eingebettet waren. Tatsächlich zeigt die Analyse der Invasionsbereichskinetik im Laufe der Zeit für 99 Sphäroide mit Single-Spheroid-Auflösung deutlich, dass die Zugabe von Hyaluronsäure zum Kollagen die Zelldispersion aus dem Sphäroid hemmt, was zu kleineren Invasionsbereichen führt. Die Behandlung der HeLa-Sphäroidkultur mit einem bioaktiven Flavonoid mit zyto- und migrastatischen Eigenschaften für 24 Stunden führt zu einer gehemmten Zelldispersion um die Sphäroide im Vergleich zu unbehandelten HeLa-Sphäroiden.Tatsächlich ergab die Analyse der Invasionsbereiche von 488 Sphäroiden am Ende des Experiments eine signifikante Hemmung nach der Behandlung mit nur 10 Mikromolaren des Arzneimittels. Aufgrund der geringen Befestigungscharakteristik des Hydrogels erleichtert diese mikrokammerbasierte Technologie die Bildung von Sphäroidauchen auch bei sehr wenigen Zellen. Dies ist insbesondere bei wertvollen, begrenzten Krebsstamm- oder Patienten-abgeleiteten Primärzellproben von Vorteil.Die Hydrogel-Mikrokammer-Bildgebungsplatte ermöglicht die Analyse der genauen räumlichen Lage der Sphäroide bei Langzeitexperimenten zur Bewertung des Invasionsprozesses auf Ein-Elemente-Ebene und bietet ein hohes Maß an statistischer Robustheit und Genauigkeit. Zukünftige Anwendungen dieser Methode umfassen die nebeneinander liegende Multizellkultivierung von Tumor- und Stromalzellen in verschiedenen Regionen innerhalb des Makrobrunnens und das Abrufen einzelner Sphäroide für die nachgeschaltete molekulare Analyse.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Functional Genomics Screening Verwendung zur Identifizierung möglicher neuer Wirkstoff-Targets in Cancer Cell Sphäroid-Kulturen

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Forschung

Krebsforschung

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Ein Modell für Perineurale Invasion in Kopf- und Hals-Plattenepithelkarzinom

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Generation von Hochdurchsatz-dreidimensionale Tumor Sphäroide für Drogen-Screening

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Live Cell Imaging-Assays Studie Glioblastom Gehirn Tumor Stammzellen Migration und Invasion

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

3-d-Zellkultursystem für die Invasion zu studieren und Bewertung Therapeutika bei Blasenkrebs

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Eine einfache Migration/Invasion Workflow mit einer automatisierten Leben-Zelle-Imager

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Arzneimittel-Screening von Primärpatienten abgeleitetTumor Xenografts in Zebrafischen

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Impedanzbasierte Echtzeitmessung der Krebszellmigration und -invasion

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Evaluierung des Zelltods mit zellfreiem Überstand von Probiotika in dreidimensionalen sphäroiden Kulturen von Darmkrebszellen

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

Überwachung der Krebszellinvasion und T-Zell-Zytotoxizität in der 3D-Kultur

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...