Name: analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates
Uploaded: 2018-10-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates at JoVE.com

Questo lavoro è supportato dal lascito di Moshe Shimon e Judith Weisbrodt.

1. HMCA piastra goffratura
Nota: Il processo completo per la progettazione e la fabbricazione di polidimetilsilossano (PDMS) timbro e piastra imaging HMCA utilizzato in questo protocollo è descritto in dettaglio nel nostro precedente articoli15,16. Il timbro PDMS (forma negativa) viene utilizzato per imprimere il HMCA (forma positiva) che consiste di circa 450 MCs per pozzetto (Figura 1A). Come dimostrato i...

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È ben documentato che gli organismi viventi, caratterizzati dalla loro organizzazione pluricellulare 3D complessi sono abbastanza distinti dalle cellule comunemente usato monostrato 2D coltivata, sottolineando la necessità cruciale di utilizzare modelli cellulari che meglio imitano le funzioni e processi dell'organismo vivente per droga di screening. Recentemente, sferoidi multicellulari, colture organotipiche, organoids e organi-on-a-chip sono stati introdotti8 per l'uso nella scoperta della dr...

Morte per cancro è attribuita principalmente alla diffusione delle cellule metastatiche in luoghi distanti. Molti sforzi nel trattamento del cancro concentrano sul targeting o prevenire la formazione di colonie metastatiche e la progressione della malattia metastatica sistemica1. Migrazione delle cellule di cancro è un passo cruciale nel processo di metastasi del tumore, così, la ricerca della cascata di invasione del tumore è molto importante e un prerequisito per trovare terapie anti-metastatica.
L'uso di modelli animali come strumenti per lo studio della malattia metastatica è stato trovato per essere molto costoso e non sempre rappresentativo del tumore in esseri umani. Inoltre, la topologia del microambiente extracellulare, la meccanica e la composizione possono influenzare fortemente cancro cella comportamento2. Dato che in vivo modelli intrinsecamente mancano la capacità di separare e controllare tali parametri specifici che contribuiscono alla invasione tumorale e metastasi, c'è un'esigenza biomimetici controllabile in vitro modelli.
Per riprodurrsi per metastasi agli organi distanti, le cellule tumorali devono esibire tratti fenotipici migratori e invasivi che possono essere mirati per la terapia. Tuttavia, poiché la maggior parte dei modelli in vitro del cancro non imitare le effettive caratteristiche di tumori solidi3, è molto difficile da rilevare fenotipi fisiologicamente rilevanti. Inoltre, l'eterogeneità fenotipica che esiste all'interno del tumore, impone la necessità per l'analisi di migrazione di tumore a elemento singolo risoluzione al fine di scoprire terapie fenotipo-diretto, per esempio, prendendo di mira la cella d'inizio metastasi popolazione all'interno di tumori eterogenei4.
Lo studio della motilità cellulare e migrazione collettiva avviene principalmente in colture monostrato di cellule epiteliali su superfici piane omogenee. Questi modelli di cellulari convenzionali per migrazione delle cellule di cancro sono basati sull'analisi della popolazione delle singole cellule che invadono attraverso le membrane ed ECM componenti5, ma in tali sistemi, le differenze intrinseche tra le singole celle non possono essere ha studiato. Sferoidi 3D generazione tramite impalcature o in micro-strutture senza impalcatura è considerato come superior significa studiare il tumore delle cellule di cancro e crescita invasione6,7,8. Tuttavia, più sistemi 3D non sono adatti ad elevato throughput formati e interazione inter-sferoide solitamente non può essere realizzato poiché isolati sferoidi individuali vengono generati in ogni micro-pozzo9. Gli studi recenti che coinvolgono la migrazione di cancro si basano su microfluidic dispositivi3,10,11,12, tuttavia, questi sofisticati microfluidici strumenti sono difficili da produrre e non può essere utilizzato per high throughput screening (HTS) di farmaci anti-dilaganti.
Due fenotipi principali, migrazione cellulare collettiva e individuale, che svolgono un ruolo in cellule del tumore, superando la barriera di ECM e invadendo il tessuto vicino, sono stati dimostrati13,14, ogni visualizzazione distinte morfologica caratteristiche, meccanismi biochimici, molecolari e genetici. Inoltre, due forme di migrazione delle cellule del tumore, fibroblasto-come e ameboidi, sono osservate in ogni fenotipo. Dato che entrambi, fenotipi di invasione e le modalità di migrazione, principalmente sono definiti da proprietà morfologiche, c'è una necessità per cellulari modelli che attiva la rilevazione basata su formazione immagine e l'esame di tutte le forme di invasione del tumore e la migrazione di cellule.
L'obiettivo generale del metodo corrente è quello di fornire un sistema semplice e riproducibile biomimetici 3D in vitro basati su cellule per l'analisi della capacità di invasione in grandi popolazioni di sferoidi del tumore. Qui, presentiamo la piastra di imaging 6 pozzetti HMCA-based per la ricerca di invasione del tumore e la terapia anti-metastatica. La tecnologia consente la formazione di un gran numero di sferoidi tumore 3D uniforme (450 per pozzetto) in una struttura di micro-chambers (MC) di idrogel. Vari componenti della ECM vengono aggiunti alla matrice sferoide per abilitare l'invasione delle cellule nell'ambiente circostante. Processo di invasione è costantemente monitorato tramite l'osservazione a breve e a lungo termine delle stesse cellule individuali degli sferoidi che invade e facilita la caratterizzazione morfologica, colorazione fluorescente e il recupero di specifici sferoidi in qualsiasi punto. Poiché numerose sferoidi condividono spazi e medio, è possibile interagire tramite molecole solubili tra sferoidi individuali e il loro impatto su un altro. Analisi semi-automatica dell'immagine viene eseguita utilizzando il codice MATLAB in-House che consente la raccolta più veloce ed efficiente di grandi quantità di dati. La piattaforma facilita la misurazione accurata, simultanea di numerose cellule di sferoidi/invadendo in maniera efficiente, consentendo di screening su vasta scala medio di farmaci anti-invasione.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 Micro-well Glass Bottom Plates with 14 mm micro-well #1.5 cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P06-14-1.5-N</td>
			<td>Commercial glass bottom plates which are used for HMCA embossing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520100</td>
			<td>A solution of 6% agarose is warmed up to 80&#176;C before use, a solution of 1% agarose is warmed to 37&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA solution B</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM medium, high glucose</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Special Newborn Calf Serum (NBCS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-122-1A</td>
			<td>Heat Inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>02-023-5A</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH, anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5881-500G</td>
			<td>Used for the preparation of 1M NaOH solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Type I collagen from rat tail, 5mg/ml</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronic acid sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5542-10MG</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisetin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F505-100MG</td>
			<td>Added to the culture medium, invasion inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DETA/NO</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>alx-430-014-m005</td>
			<td>Added to the culture medium, nitric oxide donor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Used at very low concenrtation without the need for washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dymax 5000-EC UV flood lamp complete system with light shield &#38; Dymax 400 Watt EC power supply</td>
			<td>Dymax Corporation</td>
			<td>PN 39823</td>
			<td>Used for HMCA plate sterilization by UV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted IX81 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Used for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator for microscope</td>
			<td>Life Imaging Services</td>
			<td></td>
			<td>Essential for time lapse experiments with image acquisition, pre adjusted to 37&#176;C, 5% CO2 and keeping a humidified atmosphere</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sub-micron motorized stage type SCAN-IM</td>
			<td>Marzhauser Wetzlar GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Used to predetermine image acquisition areas, for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14-bit, ORCA II C4742-98 cooled camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td>Highly sensitive, used for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent filter cube for PI detection</td>
			<td>Chroma Technology Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Filter cube specifications: excitation filter 530-550 nm, dichroic mirror 565 nm long pass and emission filter 600-660 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Olympus Cell^P operating software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Software used to control microscope, motorized stage, camera and image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab R2014B analysis software</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Used to develop in house graphic user interface for image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Used for data management, calculation, plot creation and statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
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analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates

Metastasi del cancro è conosciuta per causare il 90% della mortalità del cancro. La metastasi è un processo a più stadi che inizia con la penetrazione/invasione delle cellule del tumore nei tessuti vicini. Così, l'invasione è un passo cruciale nella metastasi, rendendo l'invasione processo ricerca e sviluppo di farmaci anti-metastatici, altamente significativo. Per rispondere a questa domanda, c'è una necessità di sviluppare modelli 3D in vitro che imitano l'architettura dei tumori solidi e loro microambiente maggiormente allo stato di in vivo su una mano, ma allo stesso tempo essere riproducibile, robusto e adatto per ad alto rendimento e alta misura del contenuto. Attualmente, la maggior parte delle analisi di invasione appoggiano microfluidici sofisticate tecnologie che sono sufficienti per la ricerca, ma non per lo screening di stupefacenti ad alto volume. Altre analisi utilizzando dispositivi basati su piastra con sferoidi isolati individuali in ciascun pozzetto sono materiale che consumano e hanno le dimensioni campione basso condizione. L'obiettivo del protocollo attuale è quello di fornire un sistema semplice e riproducibile biomimetici 3D basati su cellule per l'analisi della capacità di invasione in grandi popolazioni di sferoidi del tumore. Abbiamo sviluppato un modello 3D per analisi di invasione basato sul HMCA piatto imaging per la ricerca di invasione del tumore e di scoperta della droga anti-metastatica. Questo dispositivo consente la produzione di numerose sferoidi uniforme per pozzetto (dimensione del campione di alta condizione) circondato da componenti della MEC, mentre continuamente e contemporaneamente osservare e misurare le sferoidi a elemento singolo risoluzione per mezzo screening di resa di farmaci anti-metastatiche. Questa piattaforma è presentata qui dalla produzione di sferoidi HeLa e MCF7 per esemplificando la cella singola e collettiva invasione. Mettiamo a confronto l'influenza dell'ECM componente acido ialuronico (HA) sulla capacità invasiva del collagene circostante HeLa sferoidi. Infine, vi non presentiamo Fisetin (inibitore di invasione) a HeLa sferoidi e ossido nitrico () (attivatore di invasione) di MCF7 sferoidi. I risultati sono analizzati dal software interno che consente l'analisi semi-automatica, semplice e veloce che facilita l'esame multi-parametro.

L'unico HMCA piastra di imaging viene utilizzato per l'analisi di invasione di sferoidi 3D del tumore. Il test intero, inizia con la formazione della sferoide e termina con il processo di invasione e ulteriori manipolazioni, viene fatto all'interno della placca stessa. Per la formazione della sferoide, cellule HeLa sono caricate nel bacino di matrice e stabilirsi in idrogel MCs per gravità. L'idrogel MCs, che hanno caratteristiche di non-aderente/basso attaccamento, facilitare l'interazi...

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Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Un piatto di imaging basata su HMCA è presentato per prestazioni di test di invasione. Questa piastra facilita la formazione di sferoidi tridimensionali (3D) del tumore e la misurazione dell'invasione della cellula tumorale nella matrice extracellulare (ECM). La quantificazione di dosaggio di invasione avviene mediante analisi semi-automatica.

Analisi di invasione della cellula tumorale e anti-metastatica utilizzando Hydrogel Micro-camera matrice (HMCA) di Screening di stupefacenti-piastre di base

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

L'obiettivo di questo semplice sistema biomimetico biomimetico a base cellulare 3D è quello di facilitare l'analisi della capacità di invasione in una grande popolazione di sferoidi tumorali per lo screening anti-metastatico dei farmaci. Il vantaggio principale del nostro array di micro-camere idrogel è che consente la produzione di un gran numero di sferoidi uniformi che popolano lo stesso piano focale per pozzo. La posizione dello sferoide viene mantenuta grazie alla struttura dell'array di microcamera dell'idrogel anche dopo l'aggiunta della matrice extracellulare, facilitando l'accurato monitoraggio continuo degli sferoidi e del processo di invasione.Inoltre, la caratterizzazione morfologica e la colorazione fluorescente di numerosi sferoidi e cellule invasori possono essere eseguite in situ e analizzate con una risoluzione a singolo elemento in modo efficiente in termini di tempo. A dimostrare la procedura di produzione di lastre di imaging a sei pozzi hydrogel micro-chamber array sarà Maria Sobolev del nostro laboratorio. Per preparare le piastre di array a microcamera dell'idrogel, preriscaldare prima sei polidimetilsilossano, o PDMS, timbra a 70 gradi Celsius e posizionare una piastra inferiore in vetro a sei pozzi su un bagno asciutto preriscaldato a 75 gradi Celsius per diversi minuti.Quando la piastra è calda, versare una goccia di 400 microliter di agarosio preriscaldato a bassa fusione sul fondo di ogni pozzo della piastra a sei pozzetto e posizionare delicatamente un timbro su ogni goccia. Lasciare raffreddare la configurazione per cinque-10 minuti a temperatura ambiente, seguita da 20 minuti a quattro gradi Celsius per la gelazione completa dell'agarosio. Quando l'agarosio si è solidificato, staccare delicatamente il PDMS da ogni pozzo, lasciando i gel di agarosio modellati con micro-camere.Dopo aver permesso alla lampada UV di raggiungere la sua massima intensità, posizionare la piastra goffrata nel sistema di polimerizzazione della luce per tre minuti e riempire i macro-pozzi sterilizzati uv con PBS sterile. Quindi, coprire la piastra e avvolgerla con Parafilm per una conservazione di quattro gradi Celsius fino all'uso. Per caricare le celle, rimuovere il PBS da ogni pozzo e caricare delicatamente 50 microlitri delle cellule di interesse sopra ogni array di idrogel.Dopo aver permesso alle cellule di depositarsi per gravità per 15 minuti, aggiungere con cura da sei a otto aliquote di 500 microlitri di mezzo fresco al bordo del fondo di plastica macro-pozzo all'esterno dell'anello e dell'array di idrogel. Incubare le cellule per il periodo di tempo appropriato a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica con umidità per la formazione di sferoidi. Quindi, trasferire gli sferoidi in una cappa di biosicurezza sul ghiaccio per 10 minuti.Quando la piastra si è raffreddata, appoggiare una punta di pipetta sul bordo del fondo di plastica macro-pozzo accanto all'array di idrogel e rimuovere tutto il mezzo da tutto l'array. Quindi, rimuovere il mezzo dal serbatoio dell'array, appoggiare con molta attenzione una punta della pipetta a caricamento in gel sul bordo del serbatoio dell'array, facendo attenzione a non disturbare le micro-camere e gli sferoidi. Successivamente, utilizzare una punta di pipetta fine pre-congelata per aggiungere due aliquote di 150 microlitri della miscela di collagene di interesse sul bordo dell'array una alla volta, rilasciando lentamente la miscela per evitare la lussazione dello sferoide.Dopo che il secondo ciclo di collagene è stato aggiunto ad ogni pozzo, riportare gli sferoidi nell'incubatrice per un'ora per la gelazione completa della matrice extracellulare. Quando la matrice si è solidificata, aggiungere 400 microlitri di agarosio pre-riscaldato a bassa fusione dell'1% sopra il gel e incubare la piastra, coperta a temperatura ambiente, per cinque-sette minuti, prima di raffreddare per due minuti a quattro gradi Celsius per la gelazione dell'agarosio. Quindi, appoggiando la pipetta sul bordo del fondo in plastica macro-pozzo, aggiungere delicatamente due millilitri di mezzo completo ad ogni pozzo.Per eseguire un test di invasione, caricare la piastra array a microcamera dell'idrogel su uno stadio di microscopio invertito motorizzato dotato di un incubatore di anidride carbonica di 37 gradi Celsius e 5% con un'atmosfera umidificata e utilizzare un obiettivo quattro o 10x per pre-determinare le posizioni per l'acquisizione dell'immagine in ogni pozzo in modo da valutare l'intera area dell'array. Quindi, acquisisci immagini a campo luminoso ogni due o quattro ore per un totale di 24-72 ore per monitorare l'invasione cellulare dal corpo dello sferoide nella matrice extracellulare circostante. Al termine dell'acquisizione dell'immagine, esportare le immagini time-lapse dal software di acquisizione delle immagini per il salvataggio in un formato di file di immagine con tag in una cartella dedicata.Aprire quindi l'interfaccia utente grafica e fare clic su Carica campo luminoso. Regolate i parametri di segmentazione dell'immagine per ottenere una segmentazione precisa degli sferoidi e delle loro aree di invasione, quindi fate clic su Segmentazione regione di interesse (Region Of Interest Segmentation) per creare un bordo attorno a ogni sferoide. Se la segmentazione automatica non è corretta, premere CANC o Aggiungi e apportare manualmente le correzioni appropriate.Fate clic su Tracciamento (Tracking) per numerare gli sferoidi in ciascuna delle immagini time-lapse. Quindi, fare clic su Misurazione per generare un foglio di calcolo con tutti i parametri e salvare il foglio di calcolo in un formato appropriato per l'elaborazione dei dati e l'analisi statistica. Per esaminare l'influenza dell'acido ialuronico sul processo spontaneo di invasione sferoide HeLa, in questo esperimento, gli sferoidi maturi due giorni sono stati coperti con soluzione di miscela di collagene e acido ialuronico e confrontati con sferoidi maturi due giorni coperti solo con soluzione di collagene.Dopo 50 ore di incubazione, gli sferoidi incorporati nel collagene e nell'acido ialuronico hanno dimostrato una minore dispersione cellulare nella matrice extracellulare circostante rispetto agli sferoidi incorporati nel solo collagene. Infatti, l'analisi della cinetica dell'area di invasione nel tempo per 99 sferoidi a risoluzione a sferoide singolo indica chiaramente che l'aggiunta di acido ialuronico al collagene inibisce la dispersione cellulare fuori dalla sferoide, con conseguente aree di invasione più piccole. Il trattamento della coltura di sferoidi HeLa con un flavonoide bioattivo con proprietà cito-emigratiche per 24 ore si traduce in una dispersione cellulare inibita intorno agli sferoidi rispetto agli sferoidi HeLa non trattati.Infatti, l'analisi delle aree di invasione di 488 sferoidi alla fine dell'esperimento ha rivelato una significativa inibizione dopo il trattamento con appena 10 micromolari del farmaco. A causa della bassa caratteristica di attacco dell'idrogel, questa tecnologia a base di microcamera facilita la formazione di sferoide anche in casi di pochissime cellule. Questo è particolarmente utile nei preziosi campioni di cellule primarie a staminali tumorali o derivati dal paziente.La piastra di imaging a microcamera idrogel consente l'analisi dell'esatta posizione spaziale degli sferoidi durante gli esperimenti a lungo termine per la valutazione del processo di invasione a livello di singolo elemento e fornisce un alto grado di robustezza statistica e precisione. Le applicazioni future di questa metodologia includono la coltivazione multi-cellula affiancata di cellule tumorali e stromali in diverse regioni all'interno del macro-pozzo e il recupero di singoli sferoidi per l'analisi molecolare a valle.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizzando Genomica Funzionale screening per identificare gli obiettivi farmaco potenzialmente romanzo in Cancer Cell Culture Spheroid

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Un modello per perineurale Invasion in testa e del collo carcinoma a cellule squamose

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Generazione di sferoidi tumore tridimensionale High-Throughput per lo Screening di stupefacenti

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Analisi Live Cell Imaging Studio Glioblastoma cerebrale tumore cellule staminali migrazione e invasione

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

Sistema di coltura cellulare 3D per studiare l'invasione e la valutazione terapeutica nel cancro della vescica

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Un flusso di lavoro semplice migrazione/invasione utilizzando un Imager di vivere-cella automatizzata

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Screening farmacologico del paziente primario - Tumore derivato Xenotrapianto nel pesce zebra

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Misurazione in tempo reale dell'invasione e dell'invasione delle cellule tumorali basata sull'impedimento

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Valutazione della morte cellulare utilizzando un surnatante privo di cellule di probiotici in colture sferoidali tridimensionali di cellule tumorali del colon-retto

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

Monitoraggio dell'invasione delle cellule tumorali e della citotossicità delle cellule T nella cultura 3D

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...