Name: analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates
Uploaded: 2018-10-25T14:00:00
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この作品は、モシェ ・ シモンとジュディス Weisbrodt の遺贈によってサポートされます。

1. HMCA プレート エンボス
注: デザインとポリジメチルシロキサン (PDMS) スタンプとこのプロトコルで使われる HMCA イメージング プレートの製造のための完全なプロセスは、私たちの以前の記事15,16でくわしく説明します。PDMS スタンプ (否定形) を使用して、よく (図 1 a) あたり約 450 MCs から成っている HMCA (?...

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	<li>Guan, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+metastases:+challenges+and+opportunities.">Cancer metastases: challenges and opportunities.</a> Acta pharmaceutica Sinica. 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M., Okochi, M., Honda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Vascular+Formed+Endothelial+Cell+Network+on+the+Invasive+Capacity+of+Melanoma+Using+the+In+Vitro+3D+Co-Culture+Patterning+Model.">Effect of Vascular Formed Endothelial Cell Network on the Invasive Capacity of Melanoma Using the In Vitro 3D Co-Culture Patterning Model.</a> PLoS ONE. 9 (7), e103502 (2014).</li><li>Lee, S. -. H., Moon, J. J., West, J. 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N., Starchenko, A., Williams, R. M., Bonassar, L. J., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+three-dimensional+collagen+matrix+stiffness+independently+of+collagen+concentration+modulates+endothelial+cell+behavior.">Tuning three-dimensional collagen matrix stiffness independently of collagen concentration modulates endothelial cell behavior.</a> Acta biomaterialia. 9 (1), 4635-4644 (2013).</li><li>Raub, C. B., Putnam, A. J., Tromberg, B. J., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+bulk+mechanical+properties+of+cellularized+collagen+gels+using+multiphoton+microscopy.">Predicting bulk mechanical properties of cellularized collagen gels using multiphoton microscopy.</a> Acta Biomaterialia. 6 (12), 4657-4665 (2010).</li><li>Paszek, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tensional+homeostasis+and+the+malignant+phenotype.">Tensional homeostasis and the malignant phenotype.</a> Cancer Cell. 8 (3), 241-254 (2005).</li><li>Rao, S. S., DeJesus, J., Short, A. R., Otero, J. J., Sarkar, A., Winter, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+Behaviors+in+Three-Dimensional+Collagen-Hyaluronan+Composite+Hydrogels.">Glioblastoma Behaviors in Three-Dimensional Collagen-Hyaluronan Composite Hydrogels.</a> ACS Applied Materials &amp; Interfaces. 5 (19), 9276-9284 (2013).</li><li>Kreger, S. T., Voytik-Harbin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan+concentration+within+a+3D+collagen+matrix+modulates+matrix+viscoelasticity,+but+not+fibroblast+response.">Hyaluronan concentration within a 3D collagen matrix modulates matrix viscoelasticity, but not fibroblast response.</a> Matrix Biology. 28 (6), 336-346 (2009).</li><li>Chanmee, T., Ontong, P., Itano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan:+A+modulator+of+the+tumor+microenvironment.">Hyaluronan: A modulator of the tumor microenvironment.</a> Cancer Letters. 375 (1), 20-30 (2016).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+Three-Dimensional+Microenvironment+with+Hyaluronan+of+Different+Molecular+Weights+Alters+Breast+Cancer+Cell+Invasion+Behavior.">Modulating Three-Dimensional Microenvironment with Hyaluronan of Different Molecular Weights Alters Breast Cancer Cell Invasion Behavior.</a> ACS Applied Materials &amp; Interfaces. 9 (11), 9327-9338 (2017).</li><li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+of+low+molecular+weight+hyaluronan+in+breast+cancer+metastasis.">A novel role of low molecular weight hyaluronan in breast cancer metastasis.</a> The FASEB Journal. 29 (4), 1290-1298 (2015).</li><li>Fisher, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+resistance,+high+molecular+weight+hyaluronic+acid,+and+longevity.">Cancer resistance, high molecular weight hyaluronic acid, and longevity.</a> Journal of cell communication and signaling. 9 (1), 91-92 (2015).</li></ol>

それも記載の生きている有機体、複雑な 3 D 多細胞組織によって特徴付けられるより良い機能を模倣細胞モデルを使用する重大な必要性を強調、一般的に使用される 2次元単層培養細胞とは全く異なる・薬物の生きている有機体のプロセスの検診します。最近では、チップ上の臓器、organoids 切片培養スフェロイドは標準化された薬剤の発見の使用のために導入された8をされ?...

癌死は遠い場所に転移細胞の普及に主に起因します。がんの治療で多くの努力をターゲットまたは転移性コロニーの形成と全身の転移性疾患1の進行予防に焦点を当てます。がん細胞の遊走は腫瘍転移プロセスの重要なステップ、したがって、がん浸潤翼列の研究は非常に重要な抗転移治療を見つけることへの前提条件。
転移性疾患を研究するためのツールとして動物モデルの使用は、非常に高価で、常に人間の腫瘍の代表ではないに発見されています。さらに、細胞外微小環境のトポロジー、力学や構成強く癌細胞の動作2を影響します。体内モデルは本質的に分離し、癌の浸潤・転移に貢献するような特定のパラメーターを制御する能力を欠いている、制御可能な模倣の in vitroモデルの必要性があります。
遠隔臓器に転移するためにがん細胞は治療の対象にすることができます渡り鳥や侵襲性の分化形質を表わさなければなりません。しかし、ほとんどのがんの in vitroモデルが固体腫瘍3の実際の機能を模倣しないので、生理学的に関連する表現型を検出する非常にやりがいのあります。さらに、表現型の多様性は、腫瘍内に存在する指示転移開始細胞によって表現型指示療法、例えばを発見するために要素が 1 つの解像度での腫瘍移行の分析の必要性異種腫瘍4内人口。
細胞の運動性と集団移動の調査は均一な平面の表面で上皮細胞の単層培養に主にです。がん細胞遊走のこれらの従来の携帯電話モデルは、個々 の細胞膜と ECM コンポーネント5、侵入の人口分析に基づいているが、このようなシステムで個々 の細胞の本質的な違いをすることはできません。勉強しました。優れた腫瘍を研究する手段として足場を経由またはスキャフォールド フリー マイクロ構造のいずれかと見なされます生成 3 D 回転楕円体セル成長および癌浸潤6,7,8。しかし、ほとんどの 3 D システム、高スループットの形式には適していません、分離個々 の回転楕円体、各マイクロも9で生成されますので通常回転楕円体間相互作用を達成することはできません。癌の移行を含む最近の研究は、マイクロ流体デバイス3,10、11,12に基づきます、しかし、これらはマイクロ ツールを生成しにくい、できない洗練されました。ハイスループットス クリーニング (HTS) 反侵襲的な薬の使用。
2 つの主な表現、集団と個々 の細胞遊走と ECM バリアを克服する腫瘍細胞の役割を担い、周辺の組織に侵入されている実証13,14、それぞれ明確な表示を形態学的、生化学的な分子および遺伝のメカニズム、特徴。さらに、移行する腫瘍細胞、線維芽細胞のようなアメーバの 2 つの形式は、それぞれの表現型の観察されます。両方以来侵略の表現型と移行モードは主に形態学的性質によって定義されます、携帯の必要性モデル イメージング ベースの検出を有効にして、細胞の浸潤と移行のすべての形態の検討があります。
現在のメソッドの全体的な目標は、腫瘍回転楕円体の大規模な集団で侵攻能力の分析のセルベースのシステム 3 D体外シンプルで再現性のある生体模倣を提供することです。腫瘍浸潤性および抗転移療法の研究 HMCA ベース 6 ウェル イメージング プレートを紹介します。ハイドロゲル マイクロ室 (MC) 構造における制服 3 D 腫瘍スフェロイド (ウェルあたり 450) の多数の形成を実現します。ECM のさまざまなコンポーネントは、周囲の環境への細胞の侵入を有効にするスフェロイド アレイに追加されます。浸潤過程同じ個々 に回転楕円体/侵入細胞の短期および長期観察によって常時監視し、形態的特性、蛍光染色、任意の時点で特定の回転楕円体の検索が容易になります。多数の回転楕円体は、空間とメディアを共有するので水溶性の分子を介して個々 の回転楕円体と互いへの影響の相互作用が可能です。半自動画像解析は、大量のデータの高速かつ効率的コレクションを可能にする社内の MATLAB のコードを使用して行われます。プラットフォーム反侵略薬の中のスクリーニングを許可する、時間効率の良い方法で多数の回転楕円体/浸潤細胞の正確な同時測定が容易になります。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 Micro-well Glass Bottom Plates with 14 mm micro-well #1.5 cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P06-14-1.5-N</td>
			<td>Commercial glass bottom plates which are used for HMCA embossing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520100</td>
			<td>A solution of 6% agarose is warmed up to 80&#176;C before use, a solution of 1% agarose is warmed to 37&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA solution B</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM medium, high glucose</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Warmed to 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Special Newborn Calf Serum (NBCS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-122-1A</td>
			<td>Heat Inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>02-023-5A</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH, anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5881-500G</td>
			<td>Used for the preparation of 1M NaOH solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Type I collagen from rat tail, 5mg/ml</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronic acid sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5542-10MG</td>
			<td>Kept on ice before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisetin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F505-100MG</td>
			<td>Added to the culture medium, invasion inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DETA/NO</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>alx-430-014-m005</td>
			<td>Added to the culture medium, nitric oxide donor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Used at very low concenrtation without the need for washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dymax 5000-EC UV flood lamp complete system with light shield &#38; Dymax 400 Watt EC power supply</td>
			<td>Dymax Corporation</td>
			<td>PN 39823</td>
			<td>Used for HMCA plate sterilization by UV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted IX81 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Used for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator for microscope</td>
			<td>Life Imaging Services</td>
			<td></td>
			<td>Essential for time lapse experiments with image acquisition, pre adjusted to 37&#176;C, 5% CO2 and keeping a humidified atmosphere</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sub-micron motorized stage type SCAN-IM</td>
			<td>Marzhauser Wetzlar GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Used to predetermine image acquisition areas, for automatic image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14-bit, ORCA II C4742-98 cooled camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td>Highly sensitive, used for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent filter cube for PI detection</td>
			<td>Chroma Technology Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Filter cube specifications: excitation filter 530-550 nm, dichroic mirror 565 nm long pass and emission filter 600-660 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Olympus Cell^P operating software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Software used to control microscope, motorized stage, camera and image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab R2014B analysis software</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Used to develop in house graphic user interface for image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Used for data management, calculation, plot creation and statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of cancer cell invasion and anti-metastatic drug screening using hydrogel micro-chamber array (hmca)-based plates

がんの転移がん致死率の 90% を引き起こす知られています。転移は、周辺の組織に腫瘍細胞の浸透・浸潤を開始する多段プロセスです。したがって、侵略は侵略プロセス研究と抗転移治療薬の開発の非常に重要なを作る転移の重要なステップです。この需要に対処するため固形腫瘍のアーキテクチャを模倣する 3 Dの in vitroモデルを開発する必要性があるし、1 つの手が同時に生体内の状態に最も密接に彼らの微小環境が再現性の高い、堅牢な適した高収量と高糖度を計測。現在、ほとんどの浸潤アッセイは頼る十分ですが洗練されたマイクロ流体技術研究ではなく、大量の薬剤のスクリーニング。他のアッセイ プレート ベースのデバイスを用いた各ウェルに分離個々 スフェロイド材料消費と条件ごとの低いサンプル サイズを持っています。現在のプロトコルの目的は、腫瘍回転楕円体の大規模な集団で侵攻能力の分析のためシンプルで再現性のある生物模倣型 3 D セル ベースのシステムを提供することです。HMCA イメージング プレート腫瘍浸潤性および抗転移性薬剤の発見の研究に基づく侵略の試金のための 3 D モデルを作成しました。このデバイスにより、連続と同時に観察し、媒体の単一要素の解像度で回転楕円体を測定しながら ECM コンポーネントに囲まれた多数の制服スフェロイド (条件あたりの高いサンプル サイズ) ウェルあたりの生産抗転移薬のスクリーニング。このプラットフォームは、単一セルおよび集団の侵入を実証の hela 細胞と MCF7 回転楕円体の生産によってここで紹介です。Hela 細胞スフェロイドを取り巻くコラーゲンの侵襲的な能力で ECM 成分ヒアルロン酸 (HA) の影響を比較します。最後に、紹介 Fisetin (侵入阻害剤) hela 細胞スフェロイドと一酸化窒素 (NO) (侵略アクティベーター) MCF7 回転楕円体に。結果は、マルチパラ メーター検査を容易にする半自動、シンプルで高速な解析を可能にする社内のソフトウェアによって分析されます。

ユニークな HMCA イメージング プレートは、回転楕円体 3 D 腫瘍の浸潤能の測定に使用されます。全体アッセイ、スフェロイドの形成に始まり、浸潤過程と追加の操作までは同じプレート内で実行されます。回転楕円体の形成のため、HeLa 細胞は配列盆地に読み込まれ、重力によってハイドロゲル MCs で解決。ハイドロゲル非付着性/低添付ファイルの特性を持つ、MCs 3 D ...

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Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

HMCA ベースのイメージング プレートは、浸潤アッセイ パフォーマンスが提示されます。このプレートは、三次元 (3 D) 腫瘍スフェロイドの形成と細胞外マトリックス (ECM) に癌細胞の測定を促進します。浸潤アッセイの定量化は、半自動解析によって実現されます。

がん細胞の浸潤と転移防止薬剤のスクリーニングのハイドロゲル マイクロチャンバー アレイを用いた (HMCA) の解析-ベース プレート

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

この単純な再現性バイオミメティック3D細胞系システムの目標は、抗転移性薬物スクリーニングのための腫瘍スフェロイドの大規模集団における浸潤能力分析を容易にすることである。当社のヒドロゲルマイクロチャンバアレイの主な利点は、ウェルごとに同じ焦点面を取り込む多数の均一なスフェロイドの製造を可能にすることです。スフェロイド位置は、細胞外マトリックス添加後もヒドロゲルマイクロチャンバアレイ構造に起因して保持され、スフェロイドおよび浸潤プロセスの正確な連続的なモニタリングを容易にする。また、多数のスフェロイドや細胞に侵入する形態的特徴付けや蛍光染色を現場で行い、時間効率の高い方法で単一元素分解能で解析することができます。ヒドロゲルマイクロチャンバーアレイ6ウェルイメージングプレートの製造手順を実証することは、当研究室のマリア・ソボレフです。ヒドロゲルマイクロチャンバーアレイプレートを準備するには、まず6つのポリジメチルシロキサン(PDMS)を70°Cにスタンプし、6ウェルのガラス底板を乾いたお風呂に置き、数分間摂氏75度に予熱します。プレートが暖かい場合は、6ウェルプレートの各ウェルの底に400マイクロリットルの予熱低融解アガロースを注ぎ、各滴の上に1つのスタンプをそっと置きます。セットアップを室温で5〜10分間冷却し、続いて摂氏4度で20分冷却し、完全なアガロースゲル化を行います。アガロースが固まったら、各ウェルからPDMSを穏やかに剥がし、マイクロチャンバーでパターン化されたアガロースゲルを残します。UVランプが最高強度に達した後、エンボス加工されたプレートを光硬化システムに3分間置き、UV殺菌されたマクロウェルに無菌PBSを充填します。その後、プレートを覆い、使用するまで4°Cの保存のためにパラフィルムで包みます。細胞をロードするには、各ウェルからPBSを取り除き、各ヒドロゲルアレイの上に対象の細胞の50マイクロリットルを静かにロードします。細胞が重力で15分間沈着した後、リングとヒドロゲルアレイの外側のマクロウェルプラスチック底部の縁に、新鮮な培地の500マイクロリットルの6〜8個のアリコートを慎重に追加します。セルを適時 37 度でインキュベートし、スフェロイドを形成するために湿度が 5%の二酸化炭素を使用します。その後、スフェロイドを氷上のバイオセーフティフードに10分間移します。プレートが冷却されたら、ハイドロゲルアレイの隣にあるマクロウェルプラスチック底部の端にピペットチップを傾け、アレイの周りからすべての媒体を取り除きます。次に、アレイタンクから培地を取り出し、配列タンクの端部にゲルローディングピペットチップを非常に注意深く傾け、マイクロチャンバとスフェロイドを乱さない様に注意してください。次に、予め冷凍された細かいピペットチップを使用して、配列の端に目的のコラーゲン混合物の150マイクロリットルの2つのアリコートを1つずつ加え、スフェロイド脱臼を避けるためにゆっくりと混合物を放出する。コラーゲンの第2ラウンドが各ウェルに加えられた後、細胞外マトリックスの完全なゲル化のために1時間インキュベーターにスフェロイドを戻す。マトリックスが固まったら、ゲルの上に予温1%低融解アガロースアガロース400マイクロリットルを加え、室温で覆われたプレートを5〜7分間インキュベートしてから、アガロースゲル化のために摂氏4度で2分間冷却します。その後、マクロウェルプラスチック底部の端にピペットを傾け、各ウェルに完全な培地の2ミリリットルを静かに加える。浸潤アッセイを実行するには、加湿雰囲気を有する37°Cと5%の二酸化炭素インキュベーターを備えた電動反転顕微鏡ステージにハイドロゲルマイクロチャンバーアレイプレートをロードし、4または10倍の目的を使用して各ウェルの画像取得の位置を事前に決定し、アレイ領域全体を評価します。次に、2~4時間ごとに2~4時間毎に明視野画像を取得し、スフェロイド体から周囲の細胞外マトリックスへの細胞浸潤を追跡します。画像取得の終了時に、タグ付き画像ファイル形式で保存するための画像取得ソフトウェアからタイムラプス画像を専用フォルダにエクスポートします。次に、グラフィックユーザーインターフェイスを開き、[明視野のロード]をクリックします。イメージのセグメンテーション パラメータを調整して、回転楕円体とその侵入領域の正確なセグメンテーションを実現し、[対象領域セグメンテーション]をクリックして各回転楕円体の周囲に境界を作成します。自動セグメンテーションが正しくない場合は、Delete または Add を押して、適切な修正を手動で行います。[トラッキング] をクリックして、各タイムラプス 画像の回転楕円体に番号を付けます。次に、[測定] をクリックしてすべてのパラメータを含むスプレッドシートを生成し、データ処理と統計分析に適した形式でスプレッドシートを保存します。ヒアルロン酸が自発的なHeLaスフェロイド浸潤過程に及ぼす影響を調べるために、この実験では、2日間熟成したスフェロイドをコラーゲンおよびヒアルロン酸混合物溶液で覆い、コラーゲン溶液単独で覆われた2日間成熟したスフェロイドと比較した。50時間のインキュベーションの後、コラーゲンとヒアルロン酸に埋め込まれたスフェロイドは、コラーゲン単独に埋め込まれたスフェロイドと比較して、周囲の細胞外マトリックスへの低い細胞分散を実証した。実際、単一スフェロイド分解能での99個のスフェロイドに対する経時の浸潤領域の反応の分析は、コラーゲンへのヒアルロン酸の添加がスフェロイドからの細胞分散を阻害し、より小さな浸潤領域をもたらすことを明確に示している。細胞およびミグラスタティック特性を有する生物活性フラボノイドを用いたHeLaスフェロイド培養の処理は、非処理HeLaスフェロイドと比較して、スフェロイドの周りの細胞分散を阻害する結果となる。実際、実験終了時の488個のスフェロイドの浸潤領域の分析は、わずか10マイクロモルの薬物で治療後に有意な阻害を明らかにした。ヒドロゲルの添付ファイル特性が低いため、このマイクロチャンバベースの技術は、非常に少数の細胞の場合でもスフェロイドの形成を容易にします。これは、貴重な限られた癌幹細胞様または患者由来の初等細胞サンプルにおいて特に有利である。ヒドロゲルマイクロチャンバイメージングプレートは、単一要素レベルでの浸潤プロセスの評価のための長期実験中にスフェロイドの正確な空間位置を分析し、高度な統計的堅牢性と精度を提供します。この方法論の将来の応用には、マクロウェル内の異なる領域における腫瘍および間質細胞の並んで多細胞培養および下流の分子解析のための個々のスフェロイドの検索が含まれる。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

癌細胞スフェロイド培養における潜在的に新規薬剤標的を同定するためのスクリーニング機能ゲノミクスを利用

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

頭頸部扁平上皮癌における神経周囲の浸潤のためのモデル

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

創薬スクリーニングの高スループット三次元腫瘍回転楕円体の生成

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

住セルイメージ投射アッセイ研究神経膠腫脳腫瘍幹細胞の遊走と浸潤に

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

侵略を勉強し、膀胱癌の治療を評価するための 3次元細胞培養システム

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

自動生細胞固体撮像素子を使用して単純な移行/侵略ワークフロー

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

ゼブラフィッシュにおける原発性腫瘍異種移植片の薬物スクリーニング

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

がん細胞の移動と浸潤のインピーダンスベースリアルタイム測定

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

大腸癌細胞の3次元スフェロイド培養におけるプロバイオティクスの細胞遊離上清を用いた細胞死の評価

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

3D培養におけるがん細胞浸潤とT細胞毒性のモニタリング

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...

がん細胞の浸潤と転移防止薬剤のスクリーニングのハイドロゲル マイクロチャンバー アレイを用いた (HMCA) の解析-ベース プレート

がん細胞の浸潤と転移防止薬剤のスクリーニングのハイドロゲルマイクロチャンバーアレイを用いた (HMCA) の解析-ベースプレート