Name: visualization of tangential cell migration in the developing chick optic tectum
Uploaded: 2018-10-24T14:30:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt von JSPS KAKENHI Grant-Nummer 15K 06740, Y.W.

1. Electroporation In Ovo
<ol><li>Bereiten Sie vor, dass der Ausdruck Plasmid DNA fluoreszierende Kennzeichnung in hoher Konzentration. Isolieren Sie DNA aus 200 mL Bakterienkultur von der alkalischen Lyse-Methode mit Anionen-Austausch Spalten entsprechend des Herstellers Protokoll (Table of Materials). Mischen Sie pCAGGS-EGFP und pCAGGS-mCherryNuc auf eine Endkonzentration von 4 µg/µL. Hinweis: Endotoxin-freie Plasmid DNA Reinigung möglicherweise für die Elektroporation bevorzugt.</li>...

<ol>
	<li>Mar&#237;n, O., Rubenstein, J. L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+in+the+forebrain.">Cell migration in the forebrain.</a> Annual Reviews of Neuroscience. 26, 441-483 (2003).</li><li>Nadarajah, B., Alifragis, P., Wong, R. O. L., Parnavelas, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+migration+in+the+developing+cerebral+cortex:+Observations+based+on+real-time+imaging.">Neuronal migration in the developing cerebral cortex: Observations based on real-time imaging.</a> Cerebral Cortex. 13, 607-611 (2003).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipolar+migration:+the+third+mode+of+radial+neuronal+migration+in+the+developing+cerebral+cortex.">Multipolar migration: the third mode of radial neuronal migration in the developing cerebral cortex.</a> Journal of Neuroscience. 23, 9996-10001 (2003).</li><li>Martini, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration.">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. 136, 41-50 (2009).</li><li>Polleux, F., Whitford, K. L., Dijkhuizen, P. A., Vitalis, T., Ghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cortical+interneuron+migration+by+neurotrophins+and+PI3-kinase+signaling.">Control of cortical interneuron migration by neurotrophins and PI3-kinase signaling.</a> Development. 129, 3147-3160 (2002).</li><li>Watanabe, Y., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tangential+cell+migration+during+layer+formation+of+chick+optic+tectum.">Tangential cell migration during layer formation of chick optic tectum.</a> Development, Growth and Differentiation. 57, 539-543 (2015).</li><li>Watanabe, Y., Sakuma, C., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NRP1-mediated+Sema3A+signals+coordinate+laminar+formation+in+the+developing+chick+optic+tectum.">NRP1-mediated Sema3A signals coordinate laminar formation in the developing chick optic tectum.</a> Development. 141, 3572-3582 (2014).</li><li>Watanabe, Y., Sakuma, C., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersing+movement+of+neuronal+tangential+migration+in+superficial+layers+of+the+developing+chick+optic+tectum.">Dispersing movement of neuronal tangential migration in superficial layers of the developing chick optic tectum.</a> Developmental Biology. 437, 131-139 (2018).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-92 (1951).</li><li>Cordelie&#768;res, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+tracking+and+analysis+in+phase-contrast+videos+(iTrack4U):+development+of+Java+software+based+on+combined+mean-shift+processes.">Automated cell tracking and analysis in phase-contrast videos (iTrack4U): development of Java software based on combined mean-shift processes.</a> PLOS One. 8, e81266 (2013).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li></ol>

Das oben beschriebene Protokoll ist für die Erkennung von Zellwanderung in oberflächlichen Schichten6,8optimiert. Es ist anwendbar für die Erkennung von Mittelschicht Migration Bäche (Movie 5)6,7, nur durch Verschieben der Zeitplan für die Elektroporation (E5.5, E4.5) und dem Beginn der Kultur und Bildgebung (E7.0, E6.0).
Das vorgestellte...

Mit der fortschreitenden Technik live Imaging hat das Studium der Zellmigration voran. Nach fluoreszierende Zelle beschriften kann die zeitliche Bewegung der markierten Zellen in einer Kulturschale oder in Vivo unter Videomikroskopie aufgezeichnet werden. In der Studie der neuronalen Entwicklung wurden die morphologische Veränderungen der Zellen migrieren oder verlängern Axone mit Zeitraffer Bildgebung analysiert. Für effektive Belichtung ist es wichtig, eine geeignete Methode für fluoreszierende Zelle Kennzeichnung und Gewebe Zubereitung, basierend auf dem Zweck des Experiments und Analyse anwenden. Für die Analyse der Zellwanderung in das sich entwickelnde Gehirn, wurde Slice Kultur allgemein zur Zellwanderung parallel zur Scheibe Abschnitt, z. B. radial Zelle Migration1,2,3beobachten. Die Slice-Kultur-System dient auch zur Erkennung von tangentialen Zelle Migration4,5, aber es ist nicht geeignet für die gerichtete Analyse in Fällen, wo die Zellen senkrecht zum Abschnitt Slice zerstreuen.
Die optic Tectum besteht aus einer vielschichtigen Struktur, gebildet durch radial und tangential Zellwanderung während der Embryonalentwicklung. Tectal Schichtausbildung hängt vor allem von radialen Migration der postmitotischen neuronalen Vorläuferzellen aus der ventrikulären Zone, und ihren endgültigen Bestimmungsort in den Schichten korreliert mit ihr Geburtsdatum in der ventrikulären Zone6. Für tangentiale Migration berichteten wir bereits zwei Ströme von Migrationen in den mittleren und oberflächlichen Schichten in einem entwickelnden Küken optic Tectum. In den mittleren Schichten während E6-E8 migrieren die bipolaren Zellen mit eine lange führende Prozess- und einen dünnen nachgestellten Prozess dorsal oder ventral entlang den Axon Fasciculus tectal ableitenden Axone, die dorsal-ventral7ausgeführt. Nach dieser Axophilic Migration differenzieren die Zellen multipolare Nervenzellen befindet sich in den tieferen Hautschichten. In den oberflächlichen Schichten während E7-E14 zerstreuen die Migration von Zellen horizontal durch eine verzweigte führende Prozess- und Streuung in mehrere Richtungen8zu reformieren. Nach der Migration zu dispergieren, differenzieren die letzteren Zellen schließlich oberflächliche Neuronen von verschiedenen Morphologien. In beiden Fällen ist eine Wohnung-Mount Kultur effizient, Zelle Bewegung parallel zur pial Oberfläche zu beobachten.
Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für Zeitraffer-imaging zu visualisieren, tangentiale Zellwanderung in Entwicklungsländern Küken optic Tectum7,,8. Kombination von Zelle Kennzeichnung durch Elektroporation in Ovound eine anschließende Wohnung-Mount-Kultur auf dem Handy-Kultur-Einsatz ermöglicht Richtungserkennung wandernde Zelle Bewegung und Migration. Das Ziel dieser Methode ist es, Aufdeckung von sowohl einzelnen Zelle Verhalten langfristig und die kollektive Aktion einer Gruppe von Zellen in der horizontalen Ebene zu erleichtern.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoBond Xtra Midi Plus EF</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740422.5</td>
			<td>endotoxin-free plasmid DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 ml syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-20ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 gauge needle</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-1838R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Wako</td>
			<td>061-00031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x penicillin and streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass capillary tube</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>G-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture insert</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Millicell CM-ORG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>L2020</td>
			<td>coating of culture insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-L-Lysine</td>
			<td>Peptide Institute</td>
			<td>3075</td>
			<td>coating of culture insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bottom dish</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>D11130H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11765-054</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12483</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chick serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16110082</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10xHBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14065-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microsurgical knife</td>
			<td>Surgical specialties cooperation</td>
			<td>72-1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>curved scissors</td>
			<td>AS ONE</td>
			<td>No.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipette processor</td>
			<td>SUTTER INSTRUMENT</td>
			<td>P97/IVF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps-type electrode</td>
			<td>BEX</td>
			<td>LF646P3x3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pulse generator</td>
			<td>BEX</td>
			<td>CUY21EX</td>
			<td>electroporator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescence stereoscopic microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gas controller</td>
			<td>Tokken</td>
			<td>MIGM/OL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>temperature controller</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>MI-IBC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser confocal unit</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of tangential cell migration in the developing chick optic tectum

Zeitraffer-Bildgebung ist eine leistungsfähige Methode, wandernde Zelle Verhalten zu analysieren. Nach fluoreszierende Zelle beschriften kann die Bewegung der markierten Zellen in Kultur unter Videomikroskopie aufgezeichnet werden. Für die Analyse der Zellwanderung in das sich entwickelnde Gehirn, ist Stück Kultur verbreitet Zellwanderung parallel zum Abschnitt Slice wie radial Zellwanderung beobachten. Die Slice-Kultur-Methode Zellwanderung senkrecht zur Scheibe Abschnitt, z. B. tangentiale Zellwanderung analysieren kann jedoch nur begrenzte Informationen einzuholen. Hier präsentieren wir Ihnen die Protokolle für Zeitraffer-imaging zu visualisieren, tangentiale Zellwanderung in den Entwicklungsländern Küken optic Tectum. Eine Kombination aus Zelle Kennzeichnung durch Elektroporation in Ovo und eine anschließende Wohnung-Mount-Kultur auf dem Handy-Kultur-Einsatz ermöglicht eine Erfassung der wandernde Zelle Bewegung in der horizontalen Ebene. Darüber hinaus ermöglicht unsere Methode Erkennung der einzelnen Zelle Verhalten und die kollektive Aktion einer Gruppe von Zellen auf lange Sicht. Diese Methode kann potenziell angewendet werden, um die sequenzielle Änderung der Leuchtstofflampen-mit der Bezeichnung Mikro-Struktur, einschließlich der axonalen Dehnung in die neuronale Gewebe oder Zellen Verschiebung im nicht-neuronale Gewebe zu erkennen.

Abbildung 2 zeigt die visualisierte oberflächliche tangentiale Migration in einer Wohnung-Mount-Kultur zu einer verstrichene Zeit (0, 9, 18, 27 h) nach Beginn der Aufzeichnung. Film 1 ist ein Zeitraffer Film von 10 Minuten-Intervallen über einen Zeitraum von 28 h 50 min. Der Rahmen ist für die Fokussierung auf die Migration von Zellen von den beschrifteten unteren linken Ecke des Rahmens auf den unmarkierten Raum (<strong ...

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Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

Visualisierung der tangentialen Zellwanderung in den Entwicklungsländern Küken Optic Tectum

Wir beschreiben die Methoden für die fluoreszierenden Kennzeichnung von tangential Migration Zellen durch Elektroporation und für Zeitraffer-Aufnahmen von der markierten Zelle Bewegung in einer Wohnung-Mount-Kultur um die Migration zu visualisieren Zelle Verhalten in den Entwicklungsländern Küken optic Tectum .

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Entwicklungsbiologie zu beantworten, wie z. B. die Mechanismen der neuronalen Zellmigration. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass Sie die individuelle und kollektive Zellmigration langfristig erkennen können. Nach der Isolierung von 200 Millilitern Bakterienkultur durch die alkalische Lyse-Methode, mischen Sie die beiden Plasmide, so dass die endgültige Konzentration von jedem beträgt vier Mikrogramm pro Mikroliter.Die fruchtbaren Hühnereier horizontal bei 38 Grad Celsius bei 70% relativer Luftfeuchtigkeit bebrüten. Verwenden Sie nach zweieinhalb Tagen eine 20-Milliliter-Spritze mit einer 18-Meter-Nadel, um fünf Milliliter Albumin von der spitzen Seite des Eis zu entfernen. Versiegeln Sie das Loch mit Klebeband.Als nächstes verwenden Sie gekrümmte Schere, um die Oberseite der Eierschale zu schneiden und ein Loch mit zwei Zentimetern Durchmesser zu öffnen. Überprüfen Sie unter einem Stereomikroskop das Entwicklungsstadium des Embryos. Versiegeln Sie dieses größere Loch mit Klebeband.Setzen Sie die Inkubation bei 38 Grad Celsius und 70 Prozent relativer Luftfeuchtigkeit bis E5.5 fort. Bereiten Sie vor der Elektroporation 10 Mikroliter der genannten Plasmid-DNA vor, die mit 0,5 Mikrolitern schnellem Grün gefärbt sind. Bereiten Sie außerdem 10 Milliliter autoklavierter PBS mit 100 Einheiten pro Milliliter Penicillin und 100 Mikrogramm pro Milliliter Streptomycin vor.Verwenden Sie einen Mikropipettenprozessor, um Mikropipetten aus Glaskapillarrohren vorzubereiten. Schneiden Sie die distale Spitze der Mikropipette auf eine geeignete Porengröße für die Menge der zu injizierenden DNA. Verwenden Sie eine Schere, um die versiegelte obere Schale zu schneiden, um ein Loch mit einem Durchmesser von zweieinhalb Zentimetern wieder zu öffnen, und stellen Sie das Ei stabil unter das Stereomikroskop.Legen Sie ein paar Tropfen der vorbereiteten PBS-Lösung in das Ei. Mit zwei feinen Zangen, schälen Sie die allantoische Membran, die den Embryo bedeckt, wobei Sie darauf achten, keine Blutungen zu verursachen. Dann entfernen Sie das Amnion aus dem Kopf des Embryos.Verwenden Sie beim Drehen des Kopfes mit einem Mikrospatzen eine Mikropipette, die mit einem Saugrohr verbunden ist, um zwischen 0,1 und einem Mikroliter der farbigen DNA in die ventrikuläre Höhle des linken optischen Tektums zu injizieren. Legen Sie ein Paar Zangen-Elektroden um den Zielbereich des optischen Tectums. Verwenden Sie den Impulsgenerator, um einen Vorimpuls von 30 Volt für eine Millisekunde mit einem Intervall von fünf Millisekunden und für nachfolgende Impulse von sechs Volt für fünf Millisekunden mit einem Intervall von 10 Millisekunden aufzuladen.Nach all dem, versiegeln Sie das Loch mit Klebeband, und weiterhin inkubieren bei 38 Grad Celsius und 70 Prozent relative Luftfeuchtigkeit. Die Elektroden in einer mit PBS gefüllten Kunststoffschale einweichen und mit einer Interdentalbürste das Albumen entfernen. Wiederholen Sie den Prozess vom ersten Schalenschnitt bis zur Elektroporation für jedes Ei.Einen Tag vor der Flat-Mount-Kultur begann die Vorbereitung der codierten Zellkultur Insert durch Hinzufügen von Autoklav endestilliertem Wasser zu einem 10 Zentimeter zellkulturfreien Gericht. Schwimmen Sie einige Zellkultur Einsätze auf dem Wasser. Bei einer Lösung, die acht Mikrogramm pro Milliliter Laminin und 80 Mikrogramm pro Milliliter Polly L enthält, stellen Sie sicher, dass die Einsätze abgedeckt sind.Über Nacht bei 37 Grad Celsius in der Zellkultur Kohlendioxid-Inkubator inkubieren. Am Tag der Kultur bei E7.0 entfernte die Laminin- und Poly-L-Lysin-Lösung aus dem Insert. Dann übertragen Sie den Insert auf eine Glasbodenschale, gefüllt mit 1,1 Milliliter Kulturmedium.Übertragen Sie die Schale auf die Zellkultur Kohlendioxid-Inkubator bei 37 Grad Celsius. Stellen Sie eine feuchte Kammereinheit auf ein invertiertes konfokales Mikroskop mit einem Gasstrom von 40% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid und einer Temperatur von 38 Grad Celsius. Um mit der Vorbereitung einer Gewebeprobe auf dem Insert zu beginnen, verwenden Sie Zangen, um den Embryokopf in eine sechs Zentimeter große Zellkulturschale zu kneifen, die eiskalte HBSS enthält.Verwenden Sie zwei feine Zangen, um das elektroporated optic tectum zu isolieren. Und dann verwenden Sie einen Plastiktropfen, um es in eine konkave Glasschale mit schwarzem Silizium zu übertragen und mit eiskaltem HBSS gefüllt. Überprüfen Sie die Position der Beschriftung unter fluoreszierendem stereoskopischem Mikroskop.Schneiden Sie mit einem Mikro-Opusmesser das tektale Gewebe aus, das die Etikettierung umgibt, während Sie die Richtung des Gewebes im Tectum notieren. Danach verwenden Sie einen Plastiktropfen, um das beschriftete Gewebe auf den Insert zu übertragen, sodass die Stiftseite an der Insert-Seite befestigt ist. Legen Sie das tektale Gewebe in die gewünschte Richtung und entfernen Sie überschüssige HBSS.Wiederholen Sie den Gewebevorbereitungsprozess für alle anderen Gewebeproben, die für denselben Einsatz bestimmt sind. Legen Sie die Schale dann in die vorgeformte Kammer des invertierten konfokalen Mikroskops. Überprüfen Sie mit dem invertierten konfokalen Mikroskop die fluoreszierende Kennzeichnung und fokussieren Sie das mikroskopische Feld.Starten Sie die konfokale Lasereinheit. Probieren Sie den konfokalen Scan, um die Richtung und Position des Gewebes entlang der x- und y-Achse im Feld anzupassen. Wählen Sie als Nächstes die Scangröße aus.Bestimmen Sie das Intervall und den Gesamtbereich des konfokalen Scans entlang der Z-Achse. Nehmen Sie ein Intervall von fünf oder 10 Mikrometern für den Bereich von 100 Mikrometern. Wählen Sie das Zeitintervall der konfokalen Bildgebung und die Gesamtbilddauer aus.Nachdem Sie die Parameter des konfokalen Laufenden programms gesetzt haben, beginnen Sie mit der Bildgebung. Sobald die Bildgebung abgeschlossen ist, kombinierten Sie die konfokalen Bilder an einer anderen C-Achse, um Z-Stack-Bilder mit endgültiger Fokuseinstellung zu jedem Zeitpunkt zu erzeugen. Fügen Sie dann die Z-Stack-Bilder zu verschiedenen Zeitpunkten an, um einen Zeitrafferfilm zu erstellen.In dieser Studie wird die Zellmigration in oberflächlichen Schichten durch Elektroporation in Ovo, flache Zellkultur und zeitraffer-konfokale Bildgebung nachgewiesen. Die tangential wandernden Zellen und die Kerne in den oberflächlichen Schichten des optischen Tectums sind hier null Stunden, neun Stunden, 18 Stunden und 27 Stunden nach Beginn der Aufnahme zu sehen. Ein Zeitrafferfilm mit 10-Minuten-Intervallen über einen Zeitraum von 28 Stunden und 50 Minuten zeigt die Massenbewegung wandernder Zellen und ihrer Kerne.Der zusammengeführte Film zeigt deutlich die Massenbewegung der wandernden Zellen. Die Richtung der Zellmigration kann untersucht werden, indem man sich auf die dispergierenden Zellen vom beschrifteten Zentrum in alle Richtungen konzentriert. Die klaren Bilder der nuklearen Bewegung, ermöglicht die automatische Verfolgung der nuklearen Migration mit einem Partikel-Tracking-Plugin.Zeitliche Veränderungen der Bahnen der tangentialen Migration können visualisiert werden und beweisen, dass die dispergierende Migration omnidirektional ist. Höhere Vergrößerungsbilder können in Fünf-Minuten-Intervallen aufgenommen werden. Untersuchung des individuellen Zellverhaltens mit der sequenziellen morphologischen Veränderung des führenden Prozesses, des Trailing-Prozesses und der Kerne.Nach diesem Verfahren kann die Beschriftung von Beleuchtungsaktionen durchgeführt werden. Um zusätzliche Fragen wie die Mechanismen der Aksum-Führung zu beantworten.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Effizienten Gentransfer in Küken Netzhäute für primäre Zellkulturstudien: Eine<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Elektroporation Ansatz

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Forward Genetic Approach to Uncover Stress Resistance Genes in Mice &#8212; A High-throughput Screen in ES Cells

Vorwärts genetische Ansatz zur Stressresistenz-Gene in Mäuse Entdecken - Hochdurchsatz-Bildschirm in ES-Zellen

Phenotype-driven genetic screens in mice is a powerful technique to uncover gene functions, but are often hampered by extremely high costs, which severely ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimierung der Wund Scratch Assay auf Änderungen in Murine mesenchymale Stromazellen Zellmigration Detect nach der Beschädigung durch lösliche Cigarette Smoke Extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing<em&gt; In Vivo</em&gt; Zellmigration unter Verwendung von Zelltransplantationen und Zeitraffer-Imaging in Zebrafischembryonen

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

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Technik auf Zielmikroinjektions an die Entwicklungs<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Application of Impermeable Barriers Combined with Candidate Factor Soaked Beads to Study Inductive Signals in the Chick

Die Anwendung der undurchlässige Barrieren In Kombination mit Candidate Factor Soaked Beads zu studieren Induktive Signale im Küken

The chick embryo provides a superb vertebrate model that can be used to dissect developmental questions in a direct way. Its accessibility and robustness ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

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Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

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