Name: visualization of tangential cell migration in the developing chick optic tectum
Uploaded: 2018-10-24T14:30:00
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इस काम को JSPS KAKENHI ग्रांट नंबर 15K06740 को सपोर्ट किया गया Y.W.

1. Ovo में Electroporation
<ol><li>उच्च एकाग्रता में फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए अभिव्यक्ति प्लाज्मिड डीएनए तैयार करें । जीवाणु संस्कृति के २०० मिलीलीटर से डीएनए अलग आयनों का उपयोग करके क्षारीय lysis विधि द्वारा निर्म?...

<ol>
	<li>Mar&#237;n, O., Rubenstein, J. L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+in+the+forebrain.">Cell migration in the forebrain.</a> Annual Reviews of Neuroscience. 26, 441-483 (2003).</li><li>Nadarajah, B., Alifragis, P., Wong, R. O. L., Parnavelas, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+migration+in+the+developing+cerebral+cortex:+Observations+based+on+real-time+imaging.">Neuronal migration in the developing cerebral cortex: Observations based on real-time imaging.</a> Cerebral Cortex. 13, 607-611 (2003).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipolar+migration:+the+third+mode+of+radial+neuronal+migration+in+the+developing+cerebral+cortex.">Multipolar migration: the third mode of radial neuronal migration in the developing cerebral cortex.</a> Journal of Neuroscience. 23, 9996-10001 (2003).</li><li>Martini, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration.">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. 136, 41-50 (2009).</li><li>Polleux, F., Whitford, K. L., Dijkhuizen, P. A., Vitalis, T., Ghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cortical+interneuron+migration+by+neurotrophins+and+PI3-kinase+signaling.">Control of cortical interneuron migration by neurotrophins and PI3-kinase signaling.</a> Development. 129, 3147-3160 (2002).</li><li>Watanabe, Y., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tangential+cell+migration+during+layer+formation+of+chick+optic+tectum.">Tangential cell migration during layer formation of chick optic tectum.</a> Development, Growth and Differentiation. 57, 539-543 (2015).</li><li>Watanabe, Y., Sakuma, C., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NRP1-mediated+Sema3A+signals+coordinate+laminar+formation+in+the+developing+chick+optic+tectum.">NRP1-mediated Sema3A signals coordinate laminar formation in the developing chick optic tectum.</a> Development. 141, 3572-3582 (2014).</li><li>Watanabe, Y., Sakuma, C., Yaginuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersing+movement+of+neuronal+tangential+migration+in+superficial+layers+of+the+developing+chick+optic+tectum.">Dispersing movement of neuronal tangential migration in superficial layers of the developing chick optic tectum.</a> Developmental Biology. 437, 131-139 (2018).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-92 (1951).</li><li>Cordelie&#768;res, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+tracking+and+analysis+in+phase-contrast+videos+(iTrack4U):+development+of+Java+software+based+on+combined+mean-shift+processes.">Automated cell tracking and analysis in phase-contrast videos (iTrack4U): development of Java software based on combined mean-shift processes.</a> PLOS One. 8, e81266 (2013).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li></ol>

प्रोटोकॉल ऊपर वर्णित सतही परतों6,8में सेल प्रवास का पता लगाने के लिए अनुकूलित है । यह मध्य परत प्रवासन धाराओं ( 5फिल्म )6,7का पता लगाने के लिए लागू ह?...

सेल प्रवास के अध्ययन लाइव इमेजिंग की तकनीक को आगे बढ़ाने के साथ प्रगति कर रहा है । फ्लोरोसेंट सेल लेबलिंग के बाद, एक संस्कृति डिश में या vivo में लेबल कोशिकाओं के लौकिक आंदोलन वीडियो माइक्रोस्कोपी के तहत दर्ज किया जा सकता है । तंत्रिका विकास के अध्ययन में, प्रवास कोशिकाओं या लंबी axons के रूपात्मक परिवर्तन समय-चूक इमेजिंग का उपयोग कर विश्लेषण किया गया है । प्रभावी इमेजिंग के लिए, यह फ्लोरोसेंट सेल लेबलिंग और ऊतक तैयारी, प्रयोग और विश्लेषण के उद्देश्य पर आधारित के लिए एक उपयुक्त विधि लागू करने के लिए आवश्यक है । विकासशील मस्तिष्क में कक्ष माइग्रेशन का विश्लेषण करने के लिए, स्लाइस कल्चर का उपयोग सामान्यतः स्लाइस अनुभाग के समानांतर कक्ष माइग्रेशन का अवलोकन करने के लिए किया जाता है, जैसे रेडियल सेल माइग्रेशन1,2,3. स्लाइस संस्कृति प्रणाली भी स्पर्श सेल प्रवास4,5का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है, लेकिन यह उन मामलों में दिशात्मक विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है जहां कोशिकाओं टुकड़ा अनुभाग के लिए सीधा फैलाने ।
ऑप्टिक tectum एक multilayered संरचना से बना है, भ्रूण के विकास के दौरान रेडियल और स्पर्श सेल प्रवास द्वारा गठित । Tectal परत गठन वेंट्रिकुलर क्षेत्र से postmitotic ंयूरॉन अग्रदूत कोशिकाओं के रेडियल प्रवास पर मुख्य रूप से निर्भर करता है, और उनके परतों में अंतिम गंतव्य वेंट्रिकुलर क्षेत्र6में उनके जंम की तारीख के साथ संबद्ध । के रूप में स्पर्श प्रवास के लिए, हम पहले एक विकासशील लड़की ऑप्टिक tectum में मध्य और सतही परतों में प्रवास के दो धाराओं की सूचना दी । E6-E8 के दौरान बीच परतों में, एक लंबे समय अग्रणी प्रक्रिया और एक पतली पीछे की प्रक्रिया के साथ द्विध्रुवी कोशिकाओं को पृष्ठीय या fasciculus tectal efferent कि रन axons-dorso7के axon ventrally साथ ventrally माइग्रेट । इस axophilic प्रवास के बाद, कोशिकाओं multipolar न्यूरॉन्स गहरी परतों में स्थित में अंतर. E7-E14 के दौरान सतही परतों में, माइग्रेट कक्ष क्षैतिज रूप से एक branched अग्रणी प्रक्रिया को सुधारना और कई दिशाओं में स्कैटर द्वारा फैलाएं8। माइग्रेशन फैलाने के बाद, उत्तरार्द्ध कोशिकाएँ अंततः विभिन्न morphologies के सतही न्यूरॉन्स में अंतर करती हैं. दोनों ही मामलों में, एक फ्लैट माउंट संस्कृति pial सतह के लिए सेल आंदोलन समानांतर निरीक्षण करने के लिए कुशल है ।
यहां, हम समय चूक इमेजिंग के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद के लिए विकासशील लड़की ऑप्टिक tectum7,8में स्पर्श सेल प्रवास कल्पना । ovo मेंelectroporation द्वारा सेल लेबलिंग का संयोजन, और सेल कल्चर डालने पर बाद में फ्लैट-माउंट कल्चर को माइग्रेट सेल मूवमेंट और माइग्रेशन दिशा का पता लगाने में सक्षम बनाता है । इस विधि के लक्ष्य को लंबे समय में दोनों व्यक्तिगत कोशिका व्यवहार और क्षैतिज विमान में कोशिकाओं के एक समूह की सामूहिक कार्रवाई की खोज की सुविधा है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoBond Xtra Midi Plus EF</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740422.5</td>
			<td>endotoxin-free plasmid DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 ml syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-20ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 gauge needle</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-1838R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Wako</td>
			<td>061-00031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x penicillin and streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass capillary tube</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>G-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture insert</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Millicell CM-ORG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>L2020</td>
			<td>coating of culture insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-L-Lysine</td>
			<td>Peptide Institute</td>
			<td>3075</td>
			<td>coating of culture insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bottom dish</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>D11130H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11765-054</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12483</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chick serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16110082</td>
			<td>culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10xHBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14065-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microsurgical knife</td>
			<td>Surgical specialties cooperation</td>
			<td>72-1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>curved scissors</td>
			<td>AS ONE</td>
			<td>No.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipette processor</td>
			<td>SUTTER INSTRUMENT</td>
			<td>P97/IVF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps-type electrode</td>
			<td>BEX</td>
			<td>LF646P3x3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pulse generator</td>
			<td>BEX</td>
			<td>CUY21EX</td>
			<td>electroporator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescence stereoscopic microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gas controller</td>
			<td>Tokken</td>
			<td>MIGM/OL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>temperature controller</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>MI-IBC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laser confocal unit</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of tangential cell migration in the developing chick optic tectum

टाइम-चूक इमेजिंग माइग्रेटिंग सेल व्यवहार का विश्लेषण करने के लिए एक शक्तिशाली तरीका है । फ्लोरोसेंट सेल लेबलिंग के बाद, संस्कृति में लेबल कोशिकाओं के आंदोलन वीडियो माइक्रोस्कोपी के तहत दर्ज किया जा सकता है । विकासशील मस्तिष्क में कक्ष माइग्रेशन का विश्लेषण करने के लिए, स्लाइस कल्चर का उपयोग सामान्यतः स्लाइस अनुभाग के समानांतर कक्ष माइग्रेशन का पालन करने के लिए किया जाता है, जैसे रेडियल सेल माइग्रेशन. हालांकि, सीमित जानकारी स्लाइस अनुभाग, जैसे स्पर्श कक्ष माइग्रेशन को सीधा कक्ष माइग्रेशन का विश्लेषण करने के लिए स्लाईस कल्चर पद्धति से प्राप्त की जा सकती है । यहां, हम समय के लिए प्रोटोकॉल प्रस्तुत-चूक इमेजिंग के लिए विकासशील लड़की ऑप्टिक tectum में स्पर्श सेल प्रवास कल्पना । ovo में electroporation द्वारा सेल लेबलिंग का एक संयोजन और सेल कल्चर डालने पर बाद में फ्लैट माउंट संस्कृति क्षैतिज विमान में पलायन सेल आंदोलन का पता लगाने में सक्षम बनाता है । इसके अलावा, हमारे विधि दोनों व्यक्तिगत सेल व्यवहार और लंबी अवधि में कोशिकाओं के एक समूह की सामूहिक कार्रवाई का पता लगाने की सुविधा । इस विधि संभावित फ्लोरोसेंट के अनुक्रमिक परिवर्तन का पता लगाने के लिए लागू किया जा सकता है-सूक्ष्म संरचना, तंत्रिका ऊतक या कोशिका विस्थापन में गैर तंत्रिका ऊतक में axonal बढ़ाव सहित लेबल ।

चित्रा 2 रिकॉर्डिंग की शुरुआत के बाद एक फ्लैट में एक गुजरे समय (0, 9, 18, 27 एच) में एक सपाट माउंट संस्कृति में कल्पना सतही स्पर्श प्रवास दिखाता है । मूवी 1 10 मिनट की एक समय चूक ...

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Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

विकासशील लड़की ऑप्टिक Tectum में स्पर्श सेल प्रवास के दृश्य

हम electroporation द्वारा tangentially पलायन कोशिकाओं के फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए तरीकों का वर्णन है, और समय के लिए चूक एक फ्लैट में लेबल सेल आंदोलन की इमेजिंग-संस्कृति के क्रम में विकासशील चिकी ऑप्टिक tectum में सेल व्यवहार पलायन कल्पना के लिए .

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

यह विधि विकासात्मक जीव विज्ञान क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने में मदद कर सकती है, जैसे न्यूरोनल सेल माइग्रेशन के तंत्र। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि आप लंबी अवधि में व्यक्तिगत और सामूहिक सेल माइग्रेशन का पता लगा सकते हैं। क्षारीय लाइसिस विधि द्वारा बैक्टीरियल संस्कृति के 200 मिलीलीटर को अलग करने के बाद, दो प्लाज्मिड को मिलाएं, जैसे कि प्रत्येक की अंतिम एकाग्रता चार माइक्रोग्राम प्रति माइक्रोलीटर है।उपजाऊ चिकन अंडे को क्षैतिज रूप से 70% सापेक्ष आर्द्रता में 38 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। ढाई दिन के बाद अंडे के नुकीले हिस्से से पांच मिलीलीटर एल्बुमिन को खत्म करने के लिए 18 गेज सुई के साथ 20 मिलीलीटर सिरिंज का इस्तेमाल करें । टेप के साथ छेद सील।इसके बाद, अंडे के खोल के शीर्ष को काटने और व्यास में दो सेंटीमीटर एक छेद खोलने के लिए घुमावदार कैंची का उपयोग करें। एक स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत, भ्रूण के विकास के चरण की जांच करें। टेप के साथ इस बड़े छेद सील।E5.5 तक 38 डिग्री सेल्सियस और 70 प्रतिशत सापेक्ष आर्द्रता पर इनक्यूबेशन जारी रखें। इलेक्ट्रोपाउशन से पहले, उल्लिखित प्लाज्मिड डीएनए के 10 माइक्रोलीटर को तेजी से हरे रंग के 0.5 माइक्रोलीटर के साथ तैयार करें। इसके अलावा, 10 मिलीलीटर ऑटोक्लेवेड पीबीएस तैयार करें जिसमें पेनिसिलिन की मिलीलीटर प्रति 100 इकाइयां और स्ट्रेप्टोमाइसिन के 100 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर शामिल हैं।ग्लास केशिका ट्यूब से बने माइक्रोपिपेटेस तैयार करने के लिए माइक्रोपिपेट प्रोसेसर का इस्तेमाल करें। इंजेक्शन लगाने के लिए डीएनए की मात्रा के लिए माइक्रोपिपेट के डिस्टल टिप को उचित ताकना आकार में काट लें। एक छेद, व्यास में ढाई सेंटीमीटर को फिर से खोलने के लिए सील किए गए शीर्ष खोल को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें, और स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे अंडे को स्थिर रूप से सेट करें।तैयार पीबीएस समाधान की कुछ बूंदें अंडे में जमा करें। दो ठीक संदंश का उपयोग करना, भ्रूण को कवर करने वाली एलेंटोइक झिल्ली को छील लें, सावधान रहें कि नकसीर का कारण न हो। इसके बाद भ्रूण के सिर से अमानत को हटा दें।एक माइक्रोस्पटुला के साथ सिर को मोड़ते समय, एक सक्शन ट्यूब से जुड़े माइक्रोपिपेट का उपयोग करें, रंगीन डीएनए के 0.1 और एक माइक्रोलीटर के बीच बाएं ऑप्टिक टेक्टम के वेंट्रिकुलर गुहा में इंजेक्ट करें। ऑप्टिक टेक्टम के लक्ष्य क्षेत्र के चारों ओर संदंश प्रकार इलेक्ट्रोड की एक जोड़ी रखें। पांच मिलीसेकंड अंतराल के साथ एक मिलीसेकंड के लिए 30 वोल्ट की एक पूर्व पल्स चार्ज करने के लिए पल्स जनरेटर का उपयोग करें, और 10 मिलीसेकंड अंतराल के साथ पांच मिलीसेकंड के लिए छह वोल्ट के बाद दालों के लिए।इस सब के बाद, टेप के साथ छेद सील, और ३८ डिग्री सेल्सियस और ७० प्रतिशत सापेक्ष आर्द्रता पर इनक्यूबेटिंग जारी है । इलेक्ट्रोड को पीबीएस से भरे प्लास्टिक के पकवान में भिगो दें, और एल्बुमन को हटाने के लिए एक इंटरडेंटल ब्रश का उपयोग करें। प्रत्येक अंडे के लिए इलेक्ट्रोपॉशन के लिए प्रारंभिक खोल काटने से प्रक्रिया को दोहराएं।फ्लैट-माउंट कल्चर से एक दिन पहले, 10 सेंटीमीटर सेल कल्चर डिश में आसुत पानी में ऑटोक्लेव जोड़कर कोडित सेल कल्चर डालने की तैयारी शुरू की । पानी पर कुछ सेल संस्कृति आवेषण फ्लोट करें। आठ माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर लेमिनिन, और 80 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर पोली एल युक्त समाधान में, आवेषण को कवर करना सुनिश्चित करें।सेल कल्चर कार्बन डाई ऑक्साइड इनक्यूबेटर में रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। E7.0 पर संस्कृति के दिन, डालने से लेमिनिन और पॉली एल-लाइसिन समाधान हटा दिया। फिर, 1.1 मिलीलीटर संस्कृति माध्यम से भरे ग्लास-बॉटम डिश में डालें स्थानांतरित करें।डिश को सेल कल्चर कार्बन डाई ऑक्साइड इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर ट्रांसफर करें। 40% ऑक्सीजन और 5% कार्बन डाइऑक्साइड के गैस प्रवाह के साथ एक उल्टे कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप पर एक आर्द्र कक्ष इकाई सेट करें, और 38 डिग्री सेल्सियस का तापमान। डालने पर एक ऊतक नमूना तैयार करने शुरू करने के लिए, एक छह सेंटीमीटर सेल संस्कृति बर्फ से युक्त पकवान में भ्रूण सिर चुटकी के लिए संदंश का उपयोग करें ठंड HBSS ।इलेक्ट्रोपोरेटेड ऑप्टिक टेक्टम को अलग करने के लिए दो बारीक संदंश का उपयोग करें। और फिर एक प्लास्टिक ड्रॉपर का उपयोग करने के लिए यह एक अवतल ग्लास काले सिलिकॉन के साथ आधारित पकवान में स्थानांतरित करने और बर्फ ठंडा HBSS से भरा । फ्लोरोसेंट स्टीरियोस्कोप के तहत लेबलिंग की स्थिति की जांच करें।एक माइक्रो सर्जिकल चाकू का उपयोग करना, टेक्टम में ऊतक की दिशा को देखते हुए लेबलिंग के आसपास टेक्टल ऊतक को काट दें। इसके बाद, लेबल किए गए ऊतक को डालने के लिए स्थानांतरित करने के लिए प्लास्टिक ड्रॉपर का उपयोग करें ताकि पिन साइड डालने से जुड़ा हो। टेक्टल टिश्यू को मनचाही दिशा में बिछाएं और किसी भी अतिरिक्त एचबीएसएस को हटा दें।एक ही डालें के लिए इरादा किसी भी अन्य ऊतक नमूनों के लिए ऊतक तैयारी प्रक्रिया दोहराएं। इसके बाद डिश को उल्टे कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के प्रीफेड चैंबर में रखें। उल्टे कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, फ्लोरोसेंट लेबलिंग की जांच करें और माइक्रोस्कोपिक क्षेत्र पर ध्यान केंद्रित करें।लेजर कॉन्फोकल यूनिट शुरू करें। क्षेत्र में एक्स और वाई कुल्हाड़ियों के साथ ऊतक की दिशा और स्थिति को समायोजित करने के लिए कॉन्फोकल स्कैन का नमूना लें। इसके बाद, स्कैनिंग आकार का चयन करें।जेड-एक्सिस के साथ कॉन्फोकल स्कैन के अंतराल और कुल रेंज तय करें। 100 माइक्रोमीटर रेंज के लिए पांच या 10 माइक्रोमीटर का अंतराल लें। कॉन्फोकल इमेजिंग और टोटल इमेजिंग अवधि का समय अंतराल चुनें।कॉन्फोकल रनिंग प्रोग्राम के मापदंडों को सेट करने के बाद, इमेजिंग शुरू करें। एक बार इमेजिंग पूरा हो जाने के बाद, हर समय बिंदु पर अंतिम फोकल समायोजन के साथ जेड-स्टैक छवियों का उत्पादन करने के लिए एक अलग सी धुरी पर कॉन्फोकल छवियों को संयुक्त करें। फिर एक समय-चूक फिल्म का निर्माण करने के लिए अलग-अलग समय बिंदुओं पर जेड स्टैक छवियों को संलग्न करें।इस अध्ययन में ओवो, फ्लैट माउंट सेल कल्चर और टाइम-लैप्स कॉन्फोकल इमेजिंग में इलेक्ट्रोपॉशन के जरिए सतही परतों में सेल माइग्रेशन का पता लगाया जाता है। ऑप्टिक टेक्टम की सतही परतों में स्पर्शोन्मुखी रूप से माइग्रेट कोशिकाओं और नाभिक को रिकॉर्डिंग की शुरुआत के शून्य घंटे, नौ घंटे, 18 घंटे और 27 घंटे बाद देखा जाता है। 28 घंटे और ५० मिनट की अवधि में 10 मिनट के अंतराल की एक समय-चूक फिल्म, पलायन कोशिकाओं और उनके नाभिक के जन आंदोलन को दर्शाती है ।मर्ज की गई फिल्म में पलायन करने वाली कोशिकाओं के जनांदोलन को साफ तौर पर दिखाया गया है । लेबल वाले केंद्र से सभी दिशाओं तक फैलाव कोशिकाओं पर ध्यान केंद्रित करके सेल माइग्रेशन की दिशात्मकता की जांच की जा सकती है। परमाणु आंदोलन की स्पष्ट छवियां, एक कण ट्रैकिंग प्लगइन का उपयोग कर परमाणु प्रवास की स्वचालित ट्रैकिंग के लिए अनुमति देता है ।स्पर्शरेखा प्रवास के प्रक्षेप पथ के लौकिक परिवर्तनों की कल्पना की जा सकती है और यह साबित कर सकते हैं कि फैलाव प्रवास सर्वदिशात्मक है। उच्च आवर्धन छवियों को पांच मिनट के अंतराल में लिया जा सकता है। अग्रणी प्रक्रिया, पीछे की प्रक्रिया, और नाभिक के अनुक्रमिक रूपात्मक परिवर्तन के साथ व्यक्तिगत सेल व्यवहार की जांच करना।इस प्रक्रिया के बाद, रोशन कार्यों की लेबलिंग की जा सकती है। आदेश में Aksum मार्गदर्शन के तंत्र की तरह अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए।

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The Drosophila optic lobe, comprised of four neuropils: the lamina, medulla, lobula and lobula plate, is an excellent model system for exploring the ...