اليوم ، سوف نقوم بإظهار تقنية قياس عبر الجلد للترشيح الكبيبي أو tGFR في الفئران. هناك عدد من الميزات من هذا الأسلوب أعتقد أنها تستحق الذكر. أولا وقبل كل شيء، tGFR حاليا هو الطريقة الأكثر دقة لتقييم وظائف الكلى في الفئران.
ثانيا، يتم تنفيذ tGFR في الفئران واعية، تتحرك بحرية لذلك فإنه يتجنب مضاعفات التخدير. ثالثا، بمجرد أن كنت قد أتقنت هذه التقنية، فمن المعقول أن تكون قادرة على تنفيذ 30 إلى 40 tGFR القياسات في يوم واحد. وأخيراً، يمكن إجراء قياسات tGFR بشكل متكرر في الفئران في المختبر.
ما يعنيه هذا هو أننا يمكن أن تؤدي القياسات التسلسلية وظائف الكلى في حالات الأمراض الحادة والمزمنة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح للباحثين بقياس معدل الترشيح الكبيبي أو GFR في الفئران الواعية والمتحركة بحرية مع دقة وحساسية عالية. قبل يوم إلى يومين من قياس tGFR ، بعد التأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القار ، ضع فأرًا مُغَدَّدًا في موضع عرضة على وسادة حرارية.
باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، تقليم ضد اتجاه النمو لإزالة معظم الفراء من جانب واحد من ظهر الفأر من أعلى الساقين الخلفيتين حتى الرقبة وعبر الأضلاع. استخدمي برعم القطن لتطبيق طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر على البشرة المكشوفة ضد اتجاه النمو لضمان تطبيق الكريما أقرب ما يمكن إلى البشرة وإزالة الكريمة بعد دقيقة إلى ثلاث دقائق مع مسحات قطنية نظيفة ومياه دافئة. في يوم الإجراء ، تقليم ستة في ثلاثة سنتيمترات لاصقة التصحيح إلى حجم الجهاز GFR قبل تقشير قبالة الجزء الخلفي من التصحيح والتمسك الجهاز إلى الجانب اللاصق من التصحيح مع الثنائيات الباعث للضوء المتمركزة مباشرة فوق النافذة واضحة.
ثم عصا قطعة صغيرة من التصحيح إلى البطارية. لإرفاق الشاشة، مع الماوس المُعَدَّد في الموضع المُعرض، قم بتنظيف الجلد قبل الحلاقة بنسبة 70٪ الإيثانول وضبط عرض شريط طوله 12 سنتيمترًا تقريبًا عن طريق تمزيقه بالطول. ضع الشريط تحت الماوس مع اثنين من السنتيمترات على جانب واحد من الحيوان قابلة للطي على حافة واحدة من الجانب الأيمن من الشريط لوضع سهلة وإزالتها بعد القياس.
بعد ذلك، قم بتوصيل البطارية بالجهاز، وإزالة الدعم من البطارية ووضع البطارية على الجهاز بشكل آمن. الجهاز جاهز للاستخدام و الحصول على البيانات يبدأ عندما تبدأ مصابيح LED الزرقاء في الوميض. إزالة النسخ الاحتياطي من التصحيح على الجهاز ووضع الجهاز على الجلد حليق بحيث نافذة تعريض المصابيح هو على الأضلاع تأمين الجانب الأيمن من الجهاز مع الشريط.
من المهم ضمان التعلق الآمن للجهاز دون تقييد حركة الماوس أو وضع ضغط كبير على الجلد. ثم التفاف بحزم الجانب الأيسر من الشريط حول الماوس والجهاز. السماح للجهاز بتسجيل قراءة ثابتة للخلفية لمدة ثلاث دقائق.
في غضون ذلك، تدفئة الذيل مع وسادة الرأس وتحميل حقنة الأنسولين مع حجم التجريبية المناسبة من FITC-sinistrin للحقن مقربة إلى أقرب 10 ميكرولترات. إدارة FITC-sinistrin عن طريق الوريد في واحد على نحو سلس ولكن سريع bolus. من المهم أن يكون المستخدم مرتاحاً مع الحقن الوريدية حيث أنه من الضروري إدارة FITC-sinistrin بنجاح في بولوس واحد بدلاً من عدة محاولات مما سيؤدي إلى قمم متعددة في منحنى الإزالة.
لقياس tGFR، ضع الماوس في قفصها الخاص مع المراقبة حتى إعادة شغل كامل والسماح لتصريح FITC-sinistrin ليتم تسجيلها لمدة 1.5 ساعة. في نهاية فترة القياس، ضع الماوس على رف الأسلاك فوق القفص، والسماح للماوس بقبضة القضبان المعدنية، اسحب الشريط من أسفل البطن بحركة ناعمة سريعة. ثم قم بإزالة أي شريط من الجهاز والتصحيح من الجلد مع الحرص على أن البطارية لا تنفصل عن الجهاز وإعادة الماوس إلى قفصه.
لتقييم البيانات، قم بفصل البطارية بعناية واستخدم كابل USB لتوصيل الجهاز بالكمبيوتر. افتح برنامج القراءة وانقر على الاتصال والقراءة وإعادة تسمية وحفظ. ثم أغلق البرنامج وقم بمعالجة وتقييم البيانات الموجودة في برنامج التحليل وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.
في حين يتم مسح فيتC-سينيسترين بسرعة من الدورة الدموية في الفئران السليمة، وتأخر هذا إزالة بشكل كبير في الفئران مع إصابة حادة في الكلى. في الفئران التي تعاني من إصابة حادة جدا في الكلى، قد يكون هناك القليل جدا أو لا يكون إزالة من الفلور فيتC-sinistrin خلال فترة القياس 90 دقيقة كاملة مما يدل على غياب كامل للترشيح الكبيبي. قياس GFR عبر الجلد هو الحد الأدنى من الغازية، وبالتالي يمكن استخدامها لرصد التغيرات في وظائف الكلى في الحيوانات الفردية على مدى نقاط زمنية متعددة.
في الواقع في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت القياسات المتتالية التغيرات في وظائف الكلى في صفر، واحد، اثنين، وأربعة أيام بعد إصابة إعادة التروية. في هذا النموذج مرض الكلى المزمن الماوس، يمكن أن تكون العلاقة العكسية بين FITC-sinistrin-العمر إلى GFR ترتبط ارتباطا مباشرا إلى اختلال وظيفة الكلى لوحظ في هذه الحيوانات. في الواقع، فيتC-سينيسترين نصف العمر يرتبط ارتباطا وثيقا مع التقييم النسيجي شبه الكمي للإصابة الأنبوبية على مدى مجموعة كاملة من قياسات GFR في الفئران غير المصابة وفي الفئران مع شدة مختلفة من الإقفاري إصابة إصابات إصابات الكلى الحادة.
وعلى النقيض من ذلك، فإن مادة الكرياتينين واليوريا الدموية تدل على وجود علاقة إيجابية ولكنها أضعف مع إزالة FITC-sinistrin مما يشير إلى قياسات GFR عبر الجلد التي توفر مقياسًا أكثر موثوقية للإصابة الكلوية من كرياتينين المصل أو النيتروجين اليوريا في الدم. قياس عبر الجلد من GFR هو مقياس أكثر حساسية من وظائف الكلى من المؤشرات الحيوية التقليدية مثل الكريتينين وBUN. هذا يوفر تقييما أكثر دقة لفعالية العلاجات الجديدة لمرض الكلى في البحوث قبل الكلينيكية.
أهم الخطوات في هذا الأسلوب هي المرفق المناسب للجهاز إلى ظهر الماوس والإدارة IV الناجحة من FITC-sinistrin. هذه الخطوات ضرورية للحصول على تقييم دقيق لGFR في الفئران.
