היום, אנו נדגים את הטכניקה של מדידה transdermal של סינון גלומרולרי או tGFR בעכברים. ישנן מספר תכונות של שיטה זו כי אני חושב ששווה להזכיר. קודם כל, כיום tGFR היא הדרך המדויקת ביותר להערכת תפקוד הכלייתי בעכברים.
שנית, tGFR מבוצע בעכברים מודעים, נעים בחופשיות כך שהוא מונע את הסיבוכים של הרדמה. שלישית, לאחר שתשלוט בטכניקה, סביר שתוכל לבצע מדידות של 30 עד 40 tGFR ביום אחד. לבסוף, מדידות tGFR ניתן לבצע שוב ושוב בעכברים במבחנה.
משמעות הדבר היא שאנחנו יכולים לבצע מדידות סדרתיות של תפקוד הכלייתי בהגדרות מחלה חריפה וכרונית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת לחוקרים למדוד את קצב הסינון גלומרולרי או GFR בעכברים מודעים הנעים בחופשיות עם דיוק ורגישות גבוהים. יום עד יומיים לפני מדידת tGFR, לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, מניחים עכבר הרדמה במצב נוטה על כרית חום.
באמצעות מכונת גילוח חשמלית, לקצץ נגד כיוון הצמיחה כדי להסיר את רוב הפרווה מצד אחד של הגב של העכבר מהחלק העליון של הרגליים האחוריות עד הצוואר ועל פני הצלעות. השתמש ניצן כותנה כדי להחיל שכבה דקה של קרם depilation על העור החשוף נגד כיוון הצמיחה כדי להבטיח כי הקרם מוחל קרוב ככל האפשר לעור ולהסיר את השמנת לאחר דקה עד שלוש דקות עם צמר גפן נקי מים חמים. ביום ההליך, לקצץ תיקון דבק שישה על שלושה סנטימטר לגודל של התקן GFR לפני קילוף את החלק האחורי של התיקון דבק המכשיר לצד דבק של התיקון עם דיודות פולטות אור ממוקם מיד מעל החלון הצלול.
ואז לתקוע חתיכה קטנה של התיקון לסוללה. כדי לחבר את הצג, עם העכבר הרדמה במצב נוטה, לנקות את העור מגולח מראש עם 70% אתנול ולהתאים את הרוחב של פיסת קלטת כ 12 ס"מ על ידי קריעתו לאורך. הנח את הקלטת מתחת לעכבר עם שני סנטימטרים בצד אחד של החיה מתקפלת על קצה אחד של הצד הימני של הקלטת למיקום והסרה קלים לאחר המדידה.
לאחר מכן, חבר את הסוללה להתקן, הסר את הגיבוי מהסוללה והצב את הסוללה בהתקן בצורה מאובטחת. ההתקן מוכן לשימוש ורכישת הנתונים מתחילה כאשר ה-LEDS הכחולים מתחילים להבהב. הסר את הגיבוי מהתיקון במכשיר והצב את המכשיר על העור המגולח כך שהחלון החושף את ה-LEDs נמצא מעל הצלעות ומאבטח את הצד הימני של המכשיר עם סרט הדבקה.
חשוב להבטיח התקשרות מאובטחת של המכשיר מבלי להגביל את ניידות העכבר או להפעיל לחץ רב מדי על העור. לאחר מכן לעטוף בחוזקה את הצד השמאלי של הקלטת סביב העכבר וההתקן. אפשר להתקן להקליט קריאת רקע קבועה למשך שלוש דקות.
בינתיים, לחמם את הזנב עם כרית ראש לטעון מזרק אינסולין עם נפח ניסיוני המתאים של FITC-sinistrin עבור הזריקה מעוגל הקרוב 10 microliters. מנהלים את ה-FITC-sinistrin דרך הווריד בבולוס חלק אך מהיר. חשוב כי המשתמש מרגיש בנוח עם זריקות IV כפי שיש צורך לנהל בהצלחה את FITC-sinistrin בבולוס אחד ולא על פני מספר ניסיונות אשר יביא פסגות מרובות בעקומת האישור.
כדי למדוד את tGFR, למקם את העכבר בכלוב שלה עם ניטור עד חקירה מלאה ולאפשר אישור FITC-sinistrin להיות מוקלט במשך 1.5 שעות. בסוף תקופת המדידה, מניחים את העכבר על מתלה התיל על גבי הכלוב ומאפשרים לעכבר לאחוז בפסי המתכת, למשוך את הקלטת מתחת לבטן בתנועה חלקה ומהירה אחת. לאחר מכן הסר כל קלטת מההתקן ואת התיקון מהעור תוך טיפול שכן הסוללה אינה מתנתקת מההתקן ומחזירה את העכבר לכלוב שלו.
כדי להעריך את הנתונים, נתק את הסוללה בזהירות ולהשתמש בכבל USB כדי לחבר את ההתקן למחשב. פתח את תוכנת הקריאה ולחץ על התחבר, קרא, שנה שם ושמור. לאחר מכן סגור את התוכנית ואת התהליך ולהעריך את הנתונים בתוכנת הניתוח בהתאם להוראות היצרן.
בעוד FITC-sinistrin הוא פינה במהירות ממחזור הדם בעכברים בריאים, אישור זה מתעכב באופן דרמטי בעכברים עם פגיעה בכליות חריפה. בעכברים עם פגיעה חמורה מאוד בכליות, ייתכן שיש מעט מאוד או ללא אישור של פלואורסצנטיות FITC-sinistrin במהלך כל תקופת המדידה של 90 דקות המציין היעדר מוחלט של סינון גלומרולרי. מדידת GFR טרנסדרמלית היא זעיר פולשנית ולכן ניתן להשתמש בה כדי לפקח על שינויים בתפקוד הכליות בבעלי חיים בודדים על פני נקודות זמן מרובות.
ואכן בניסוי מייצג זה, מדידות רציפות הראו שינויים בתפקוד הכליות באפס, אחד, יומיים וארבעה ימים לאחר פציעת רש"ם קשה. במודל זה של מחלת כליות כרונית בעכבר, היחסים ההפוכיים של מחצית החיים FITC-sinistrin ל- GFR יכולים להיות בקורלציה ישירה לתפקוד הכלייתי לקוי שנצפה בבעלי חיים אלה. ואכן, מחצית החיים FITC-sinistrin בקורלציה הדוק עם הערכה היסטולוגית כמותית למחצה של פגיעה צינורית על פני הטווח המלא של מדידות GFR בעכברים לא פצועים ובעכברים עם ניתוקים שונים של פגיעה חמורה כתוצאה מפגיעה בכליות כתוצאה מכך כתוצאה מכך.
לעומת זאת, קריאטנין בסרום וחנקן אוריאה בדם מדגימים מתאם חיובי אך חלש יותר עם אישור FITC-sinistrin המציין את מדידות GFR transcutaneous לספק מידה אמינה יותר של פגיעה בכליות מאשר קריאטינין בסרום או חנקן אוריאה בדם. מדידה transdermal של GFR הוא מדד רגיש יותר של תפקוד הכליות מאשר סמנים ביולוגיים מסורתיים כגון קריאטינין ו BUN. זה מספק הערכה מדויקת יותר של היעילות של טיפולים חדשניים למחלות כליות במחקר פרה-קליני.
השלבים הקריטיים ביותר בשיטה זו הם הקובץ המצורף הנכון של ההתקן לגב העכבר והניהוב הרביעי המוצלח של FITC-sinistrin. צעדים אלה חיוניים כדי לקבל הערכה מדויקת של GFR בעכברים.
