आज, हम चूहों में ग्लोमेरुलर निस्पंदन या टीजीएफआर के ट्रांसडरमल माप की तकनीक का प्रदर्शन करेंगे। इस विधि की कई विशेषताएं हैं जो मुझे लगता है कि उल्लेख करने लायक हैं। सबसे पहले, वर्तमान में टीजीएफआर चूहों में गुर्दे के कार्य का आकलन करने का सबसे सटीक तरीका है।
दूसरे, टीजीएफआर को सचेत, स्वतंत्र रूप से चलती चूहों में किया जाता है ताकि यह संज्ञाहरण की जटिलताओं से बचा जा सके। तीसरा, एक बार जब आप तकनीक में महारत हासिल कर लेते हैं, तो एक ही दिन में 30 से 40 टीजीएफआर माप करने में सक्षम होना उचित है। अंत में, टीजीएफआर माप इन विट्रो चूहों में बार-बार किया जा सकता है।
इसका मतलब यह है कि हम तीव्र और पुरानी बीमारी सेटिंग्स में गुर्दे समारोह के धारावाहिक माप प्रदर्शन कर सकते हैं। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह शोधकर्ताओं को सचेत में ग्लोमरुलर निस्पंदन दर या जीएफआर को मापने की अनुमति देता है, स्वतंत्र रूप से उच्च परिशुद्धता और संवेदनशीलता के साथ चूहों को आगे बढ़ाता है। टीजीएफआर माप से एक से दो दिन पहले, पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, एक गर्मी पैड पर प्रवण स्थिति में एक एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें।
एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करना, गर्दन तक और पसलियों के पार पिछले पैरों के ऊपर से माउस की पीठ के एक तरफ से अधिकांश फर को हटाने के लिए विकास की दिशा के खिलाफ ट्रिम करें। विकास की दिशा के खिलाफ उजागर त्वचा के लिए डेपिलेशन क्रीम की एक पतली परत लागू करने के लिए एक कपास की कली का उपयोग करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि क्रीम को त्वचा के करीब के रूप में लागू किया जाए और साफ सूती झाड़ू और गर्म पानी के साथ एक से तीन मिनट के बाद क्रीम को हटा दें। प्रक्रिया के दिन, पैच के पीछे छीलने से पहले जीएफआर डिवाइस के आकार में छह से तीन सेंटीमीटर चिपकने वाले पैच को ट्रिम करें और डिवाइस को स्पष्ट खिड़की के तुरंत ऊपर तैनात प्रकाश उत्सर्जक डायोड के साथ पैच के चिपकने वाले पक्ष में चिपका दें।
फिर बैटरी के लिए पैच का एक छोटा सा टुकड़ा छड़ी। प्रवण स्थिति में एनेस्थेटाइज्ड माउस के साथ मॉनिटर संलग्न करने के लिए, 70% इथेनॉल के साथ पूर्व-मुंडा त्वचा को साफ करें और इसे लंबाई में फाड़ कर लगभग 12 सेंटीमीटर के टेप के टुकड़े की चौड़ाई को समायोजित करें। माप के बाद आसान प्लेसमेंट और हटाने के लिए टेप के दाईं ओर के एक किनारे पर दो सेंटीमीटर के साथ दो सेंटीमीटर के साथ टेप रखें।
इसके बाद, बैटरी को डिवाइस से कनेक्ट करें, बैटरी से बैकिंग को हटाएं और सुरक्षित रूप से बैटरी को डिवाइस पर रखें। डिवाइस उपयोग करने के लिए तैयार है और डेटा अधिग्रहण तब शुरू होता है जब ब्लू एलईडी टिमटिमाने लगते हैं। डिवाइस पर पैच से समर्थन निकालें और मुंडा त्वचा पर डिवाइस जगह ऐसी है कि एलईडी को उजागर खिड़की टेप के साथ डिवाइस के दाईं ओर सुरक्षित पसलियों पर है ।
माउस की गतिशीलता को प्रतिबंधित किए बिना या त्वचा पर बहुत अधिक दबाव रखने के बिना डिवाइस की सुरक्षित लगाव सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है। फिर माउस और डिवाइस के चारों ओर टेप के बाईं ओर मजबूती से लपेटें। डिवाइस को तीन मिनट के लिए एक स्थिर पृष्ठभूमि पढ़ने को रिकॉर्ड करने की अनुमति दें।
इस बीच, एक सिर पैड के साथ पूंछ गर्म और इंजेक्शन के लिए फिटसी-sinistrin के उचित प्रयोगात्मक मात्रा के साथ एक इंसुलिन सिरिंज लोड निकटतम 10 माइक्रोलीटर के लिए गोल । एक चिकनी लेकिन तेजी से बोलस में नसों के साथ फिटसी-सिनिस्ट्रिन को प्रशासित करें। यह महत्वपूर्ण है कि उपयोगकर्ता चतुर्थ इंजेक्शन के साथ सहज है क्योंकि कई प्रयासों के बजाय एक बोलस में फिटसी-सिनिस्ट्रिन को सफलतापूर्वक प्रशासित करना आवश्यक है जिसके परिणामस्वरूप निकासी वक्र में कई चोटियां होंगी।
टीजीएफआर को मापने के लिए, माउस को पूर्ण अनुलग्नि तक निगरानी के साथ अपने पिंजरे में रखें और फिटसी-सिनिस्ट्रिन क्लीयरेंस को 1.5 घंटे के लिए रिकॉर्ड करने की अनुमति दें। माप अवधि के अंत में, पिंजरे के शीर्ष पर तार रैक पर माउस रखें और माउस को धातु सलाखों को पकड़ने की अनुमति दें, एक त्वरित चिकनी गति में पेट के नीचे से टेप खींचें। फिर डिवाइस से किसी भी टेप और त्वचा से पैच को इस बात का ध्यान रखते हुए हटा दें कि बैटरी डिवाइस से डिस्कनेक्ट नहीं होती है और माउस को उसके पिंजरे में वापस कर देती है।
डेटा का मूल्यांकन करने के लिए, सावधानी से बैटरी डिस्कनेक्ट करें और डिवाइस को कंप्यूटर से कनेक्ट करने के लिए यूएसबी केबल का उपयोग करें। पढ़ने के सॉफ्टवेयर खोलें और कनेक्ट, पढ़ें, नाम बदलने और सहेजें क्लिक करें। फिर कार्यक्रम और प्रक्रिया को बंद करें और निर्माता के निर्देशों के अनुसार विश्लेषण सॉफ्टवेयर में डेटा का मूल्यांकन करें।
जबकि फिटसी-सिनिस्ट्रिन तेजी से स्वस्थ चूहों में परिसंचरण से मंजूरी दे दी है, इस मंजूरी नाटकीय रूप से तीव्र गुर्दे की चोट के साथ चूहों में देरी हो रही है । बहुत गंभीर तीव्र गुर्दे की चोट वाले चूहों में, पूरे 90 मिनट की माप अवधि के दौरान फिटसी-सिनिस्ट्रिन फ्लोरेसेंस की बहुत कम या कोई निकासी नहीं हो सकती है जो ग्लोमरलर निस्पंदन की पूर्ण अनुपस्थिति का संकेत देती है। ट्रांसडरमल जीएफआर माप न्यूनतम आक्रामक है और इसलिए कई समय बिंदुओं पर व्यक्तिगत जानवरों में गुर्दे के कार्य में परिवर्तन की निगरानी के लिए उपयोग किया जा सकता है।
वास्तव में इस प्रतिनिधि प्रयोग में, अनुक्रमिक माप ने इस्केमिया रिपरफ्यूजन चोट के चार दिन बाद शून्य, एक, दो और चार दिनों में गुर्दे के कार्य में परिवर्तन का प्रदर्शन किया। इस माउस क्रोनिक किडनी डिजीज मॉडल में, जीएफआर के लिए फिटसी-सिनिस्ट्रिन आधा जीवन का व्युत्क्रम संबंध सीधे इन जानवरों में मनाए गए बिगड़ा गुर्दे के समारोह से सहसंबद्ध हो सकता है। दरअसल, फिटसी-सिनिस्ट्रिन आधा जीवन अघायल चूहों में जीएफआर माप की पूरी श्रृंखला पर ट्यूबलर चोट के अर्ध-मात्रात्मक हिस्टोलॉजिकल आकलन के साथ और चूहों में इस्केमिया रिपरफ्यूजन चोट-प्रेरित तीव्र गुर्दे की चोट की विभिन्न गंभीरता के साथ निकटता से संबंधित है।
इसके विपरीत, सीरम क्रिएटिनिन और रक्त यूरिया नाइट्रोजन फिटसी-सिनिस्ट्रिन क्लीयरेंस के साथ एक सकारात्मक लेकिन कमजोर संबंध प्रदर्शित करता है जो ट्रांसक्यूटेनियस जीएफआर माप का संकेत देता है या तो सीरम क्रिएटिनिन या रक्त यूरिया नाइट्रोजन की तुलना में गुर्दे की चोट का अधिक विश्वसनीय उपाय प्रदान करता है। जीएफआर का ट्रांसडरमल माप पारंपरिक बायोमार्कर जैसे क्रिएटिनिन और बन की तुलना में गुर्दे के कार्य का एक अधिक संवेदनशील उपाय है। यह प्रीक्लिनिकल अनुसंधान में गुर्दे की बीमारी के लिए उपन्यास चिकित्सा की प्रभावकारिता का अधिक सटीक आकलन प्रदान करता है।
इस विधि में सबसे महत्वपूर्ण कदम माउस की पीठ और फिटसी-सिनिस्ट्रिन के सफल चतुर्थ प्रशासन के लिए डिवाइस का उचित लगाव है। चूहों में जीएफआर का सटीक आकलन प्राप्त करने के लिए ये कदम आवश्यक हैं।
