오늘, 우리는 마우스에 있는 사구 여과 또는 tGFR의 경피 측정의 기술을 시연할 것입니다. 내가 언급 할 가치가 있다고 생각하는이 방법의 기능의 숫자가 있습니다. 우선, 현재 tGFR은 마우스에서 신장 기능을 평가하는 가장 정확한 방법입니다.
둘째, tGFR은 마취의 합병증을 피하기 위해 마우스를 의식적으로 자유롭게 이동시켜 수행됩니다. 셋째, 이 기술을 마스터하면 하루에 30~40tGFR 측정을 수행하는 것이 합리적입니다. 마지막으로, tGFR 측정은 체외 마우스에서 반복적으로 수행될 수 있다.
이것이 의미하는 바는 급성 및 만성 질환 환경에서 신장 기능의 직렬 측정을 수행할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 높은 정밀도와 감도로 자유롭게 움직이는 마우스를 의식적으로 구체 여과 속도 또는 GFR을 측정할 수 있다는 것입니다. tGFR 측정 1~2일 전에 발가락 핀치에 대한 반응이 부족하다는 것을 확인한 후, 열패드에 마취된 마우스를 배치한다.
전기 면도기를 사용하여 성장 방향에 따라 잘라 서 마우스 뒤쪽의 한쪽에서 목까지 그리고 갈비뼈를 가로 질러 대부분의 털을 제거합니다. 면 봉오리를 사용하여 노출된 피부에 얇은 탈필 크림을 발라 크림을 피부에 최대한 가깝게 바르고 깨끗한 면봉과 따뜻한 물로 1~3분 후에 크림을 제거합니다. 시술 당일, 패치 뒷면을 벗겨내고 투명 창 바로 위에 배치된 발광 다이오드로 패치의 접착제 측에 장치를 붙이기 전에 GFR 장치의 크기로 6~3cm 의 접착제 패치를 트림한다.
그런 다음 패치의 작은 조각을 배터리에 붙입니다. 모니터를 부착하려면 마취 된 마우스를 경향이있는 위치에 배치하려면 70 %에탄올로 미리 면도 된 피부를 청소하고 길이로 찢어서 약 12 센티미터 크기의 테이프의 폭을 조정합니다. 테이프를 마우스 아래에 2센티미터로 두면 테이프의 오른쪽 가장자리에 접는 후 쉽게 배치하고 제거할 수 있습니다.
다음으로 배터리를 장치에 연결하여 배터리에서 백업을 제거하고 배터리를 장치에 안전하게 배치합니다. 장치를 사용할 준비가 되어 있고 파란색 LED가 깜박이기 시작하면 데이터 수집이 시작됩니다. 장치의 패치에서 백업을 제거하고 LED를 노출하는 창이 테이프로 장치의 오른쪽을 고정하는 갈비뼈 위에 있도록 장치를 면도 된 피부에 놓습니다.
마우스의 이동성을 제한하거나 피부에 너무 많은 압력을 가하지 않고 장치의 안전한 부착을 보장하는 것이 중요합니다. 그런 다음 테이프의 왼쪽을 마우스와 장치 주위에 단단히 감쌉니다. 장치가 3분 동안 안정적인 배경 판독값을 기록하도록 허용합니다.
한편, 헤드 패드로 꼬리를 따뜻하게 하고 가장 가까운 10 마이크로리터로 반올림된 주입을 위해 FITC-sinistrin의 적절한 실험용 부피로 인슐린 주사기를 적재한다. FITC-시니스트린을 매끄럽지만 빠른 볼러스로 정맥 내 투여합니다. 사용자가 성공적으로 하나의 볼루스에서 FITC-sinistrin을 관리 하는 데 필요한 으로 IV 주사에 편안 하 게 하는 것이 중요 한 보다는 통관 곡선에 여러 피크를 초래할 것 이다 여러 시도 이상.
tGFR을 측정하려면 마우스를 전체 재조정이 있을 때까지 모니터링하여 마우스를 자체 케이지에 배치하고 FITC-sinistrin 클리어런스를 1.5시간 동안 기록할 수 있도록 합니다. 측정 기간이 끝나면 마우스를 케이지 위에 와이어 랙에 놓고 마우스가 금속 막대를 잡고 배 아래에서 테이프를 한 번 빠르게 매끄럽게 움직입니다. 그런 다음 장치에서 테이프를 제거하고 배터리가 장치에서 분리되지 않도록주의하는 피부에서 패치를 제거하고 마우스를 케이지로 반환합니다.
데이터를 평가하려면 배터리를 조심스럽게 분리하고 USB 케이블을 사용하여 장치를 컴퓨터에 연결합니다. 읽기 소프트웨어를 열고 연결, 읽기, 이름 바꾸기 및 저장을 클릭합니다. 그런 다음 제조업체의 지침에 따라 프로그램 및 프로세스 및 분석 소프트웨어의 데이터를 평가합니다.
FITC-sinistrin은 건강한 마우스의 순환에서 급속히 제거되는 동안, 이 정리는 급성 신장 손상을 가진 마우스에서 극적으로 연기됩니다. 매우 심각한 급성 신장 손상을 가진 마우스에서는, 전체 90 분 측정 기간 도중 FITC-sinistrin 형광의 아주 작은 또는 전혀 간격이 구체 여과의 완전한 부재를 나타내는 있을 수 있습니다. 경피 GFR 측정은 최소 침습적이므로 여러 시간 지점에서 개별 동물의 신장 기능 변화를 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다.
실제로 이 대표적인 실험에서 순차적인 측정은 허혈 재관류 손상 후 0, 1, 2 및 4 일 에서 신장 기능의 변화를 입증했습니다. 본 마우스 만성 신장질환 모델에서 FITC-시니스트린 의 반감기반감기에서 GFR에 대한 역관계는 이러한 동물에서 관찰된 손상된 신장 기능과 직접 상관관계가 있을 수 있다. 실제로 FITC-sinistrin 반감기는 부상되지 않은 마우스및 허혈 재퍼퓨전 손상으로 인한 급성 신장 손상의 다른 단절을 가진 마우스에서 전체 범위의 GFR 측정에 대한 관 상해의 반정적 조직학적 평가와 밀접한 관련이 있습니다.
대조적으로, 혈청 크레아티닌과 혈액 우레아 질소는 혈청 크레아티닌 또는 혈액 우레아 질소보다 신장 손상의 보다 더 신뢰할 수 있는 측정을 제공한다는 것을 나타내는 FITC-sinistrin 클리어런스와 긍정적이지만 약한 상관관계를 나타낸다. GFR의 경피 측정은 크레아티닌 과 BUN과 같은 전통적인 바이오마커보다 신장 기능의 더 민감한 척도입니다. 이것은 전임상 연구에서 신장 질환에 대한 새로운 치료법의 효능에 대한 보다 정확한 평가를 제공합니다.
이 방법의 가장 중요한 단계는 마우스 뒷면에 장치를 적절히 부착하고 FITC-sinistrin의 성공적인 IV 투여입니다. 이 단계는 마우스에 있는 GFR의 정확한 평가를 얻기 위하여 필수적입니다.
