Bugün farelerde glomerüler filtrasyon veya tGFR transdermal ölçüm tekniğini göstereceğiz. Ben söz değer olduğunu düşünüyorum bu yöntemin özellikleri vardır. Her şeyden önce, şu anda tGFR farelerde böbrek fonksiyonlarını değerlendirmenin en doğru yoludur.
İkinci olarak, tGFR anestezi komplikasyonları önler böylece bilinçli, serbestçe hareket eden fareler yapılır. Üçüncü olarak, bu teknikte ustalaştıktan sonra, tek bir günde 30-40 tGFR ölçümü yapabilmek mantıklıdır. Son olarak, tGFR ölçümleri in vitro farelerde tekrar tekrar yapılabilir.
Bunun anlamı, akut ve kronik hastalık ortamlarında böbrek fonksiyonlarının seri ölçümlerini gerçekleştirebildiğimizdir. Bu tekniğin en büyük avantajı, araştırmacıların bilinçli, serbestçe hareket eden farelerde Glomerüler Filtrasyon Hızını veya GFR'yi yüksek hassasiyet ve hassasiyetle ölçmelerine olanak sağlamasıdır. TGFR ölçümünden bir ila iki gün önce, parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, bir ısı yastığına yatkın konuma anestezili bir fare yerleştirin.
Bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak, farenin sırtının bir tarafından boynuna kadar arka ayakların üst kısmından ve kaburgalar arasında kürk ün büyük bir kısmını kaldırmak için büyüme yönüne karşı kırpın. Krem mümkün olduğunca cilde yakın uygulandığından emin olmak için büyüme yönünde maruz cilde krem ince bir tabaka uygulamak için bir pamuk tomurcuk kullanın ve temiz pamuk lu bezler ve ılık su ile bir ila üç dakika sonra krem kaldırın. İşlem günü, yamanın arkasını soymadan ve cihazı açık pencerenin hemen üzerine yerleştirilmiş ışık yayan diyotlarla yamanın yapışkan tarafına yapıştırmadan önce GFR aygıtının boyutuna altıila üç santimetrelik yapışkan bir yama kırpın.
Sonra yama küçük bir parça pil sopa. Monitörü takmak için, anestezili fare eğilimli konumda, önceden tıraş edilmiş deriyi %70 etanolile temizleyin ve yaklaşık 12 santimetrelik bir bant parçasının genişliğini uzunlamasına yırtarak ayarlayın. Ölçümden sonra kolay yerleştirilmesi ve çıkarılması için bandın sağ tarafının bir kenarına katlanırken hayvanın bir tarafına iki santimetrelik iki santimetrelik bant yerleştirin.
Ardından, pili cihaza bağlayın, pilin desteğini kaldırın ve pili güvenli bir şekilde aygıta yerleştirin. Cihaz kullanıma hazırdır ve veri toplama, mavi LED'ler yanıp sönmeye başladığında başlar. Cihazdaki yamanın desteğini çıkarın ve cihazı, LED'leri açığa çıkaran pencerenin kaburgaların üzerinde, cihazın sağ tarafını bantla emniyete alan şekilde tıraşlı derinin üzerine yerleştirin.
Farenin hareket kabiliyetini kısıtlamadan veya cilde çok fazla baskı yapmadan cihazın güvenli bir şekilde bağlanmasını sağlamak önemlidir. Ardından bandın sol tarafını fare nin ve cihazın etrafına sıkıca sarın. Aygıtın sabit bir arka plan okumasını üç dakika boyunca kaydetmesine izin verin.
Bu arada, bir baş yastığı ile kuyruk Sıcak ve enjeksiyon için FITC-sinistrin uygun deneysel hacim ile bir insülin şırınga yüklemek en yakın 10 mikrolitre yuvarlatılmış. FITC-sinistrinin intravenöz olarak düzgün ama hızlı bir bolus uygulayın. Fitc-sinistrin'i bir boluda başarılı bir şekilde uygulamak için gerekli olduğu için kullanıcının IV enjeksiyonları ile rahat olması önemlidir, bu da açıklık eğrisinde birden fazla zirveye neden olacak çeşitli girişimlerde yerine.
TGFR'yi ölçmek için fareyi tam recumbency'ye kadar izleyerek kendi kafesine yerleştirin ve FITC-sinistrin açıklığının 1,5 saat boyunca kaydedilmesine izin verin. Ölçüm döneminin sonunda, fareyi kafesin üzerine tel rafa yerleştirin ve farenin metal çubukları kavramasına izin vererek bandı tek bir hızlı hareketle karnının altından çekin. Ardından cihazdaki herhangi bir bandı ve bandı ciltten çıkarın ve pilin cihazla bağlantısını kesmediğini ve fareyi kafesine geri döndürmelerine dikkat edin.
Verileri değerlendirmek için pilin bağlantısını dikkatlice kesin ve cihazı bilgisayara bağlamak için bir USB kablosu kullanın. Okuma yazılımını açın ve Bağlan, Oku, Yeniden Adlandır ve Kaydet'i tıklatın. Daha sonra programı kapatın ve analiz yazılımındaki verileri üreticinin talimatlarına göre değerlendirin.
FITC-sinistrin sağlıklı farelerde dolaşımdan hızla temizlenirken, akut böbrek hasarı olan farelerde bu açıklık önemli ölçüde geciktirilir. Çok ciddi akut böbrek hasarı olan farelerde, 90 dakikalık ölçüm periyodu boyunca, glomerüler filtrasyonun tam bir eksikliğini gösteren FITC-sinistrin floresanının çok az veya hiç temizlenmemesi olabilir. Transdermal GFR ölçümü minimal invazivdir ve bu nedenle birden fazla zaman noktasında bireysel hayvanlarda böbrek fonksiyonlarındaki değişiklikleri izlemek için kullanılabilir.
Nitekim bu temsili deneyde, sıralı ölçümler iskemi reperfüzyon yaralanmasından dört gün sonra böbrek fonksiyonlarında sıfır, bir, iki ve dört gün sonra değişiklikler göstermiştir. Bu fare kronik böbrek hastalığı modelinde, FITC-sinistrin yarı lanma ömrünün GFR ile ters ilişkisi bu hayvanlarda gözlenen bozulmuş böbrek fonksiyonu ile doğrudan ilişkili olabilir. Gerçekten de FITC-sinistrin yarı lanma ömrü, yaralanmamış farelerde ve iskemi reperfüzyonu yaralanmasına bağlı akut böbrek hasarının farklı şiddetine sahip farelerde tüm GFR ölçümlerinde tübüler yaralanmanın yarı kantitatif histolojik değerlendirmesi ile yakından ilişkilidir.
Buna karşılık, serum kreatinin ve kan üre azotu, transkutanöz GFR ölçümlerinin serum kreatinin veya kan üre azotundan daha güvenilir bir renal yaralanma ölçüsü sağladığını gösteren FITC-sinistrin ile pozitif ama daha zayıf bir korelasyon göstermektedir. GFR'nin transdermal ölçümü, kreatinin ve BUN gibi geleneksel biyobelirteçlere göre böbrek fonksiyonlarının daha hassas bir ölçüsüdür. Bu preklinik araştırmalarda böbrek hastalığı için yeni tedavilerin etkinliğini daha doğru bir değerlendirme sağlar.
Bu yöntemdeki en kritik adımlar, cihazın farenin sırtına doğru şekilde bağlanması ve FITC-sinistrin'in başarılı IV uygulamasıdır. Bu adımlar farelerde GFR doğru bir değerlendirme elde etmek için gereklidir.
