Name: combining histochemical staining and image analysis to quantify starch in the ovary primordia of sweet cherry during winter dormancy
Uploaded: 2019-03-20T12:30:00
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Die Autoren danken dankbar Maria Herrero und Eliseo Rivas für ihre hilfreiche Diskussion und Beratung. Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Ministerio de Economía y Competitividad – europäischer Fonds für regionale Entwicklung, Europäische Union [Grant-Nummer BES-2010-037992, E. F.]; Das Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria [Grant-Nummern RFP2015-00015-00, RTA2014-00085-00, RTA2017-00003-00]; und des Gobierno de Aragón – Europäische Sozialfonds, Europäische Union [Grupo Consolidado A12-17R].

(1) Dormanz Entschlossenheit und Pflanze Materialkollektion
<ol><li>Probieren Sie die Blütenknospen im Feld. Dormanz Studien sind Langzeitexperimente und benötigen Erwachsene groß genug Bäume Knospen zu sammeln und schießt den ganzen Winter ohne die Bäume Entwicklung im nächsten Frühjahr. Spezielle Obstgarten Management könnte je nach dem Trainingssystem erforderlich; so kann Beschneidung weniger schwerwiegend als für Produktionszwecke Obst sein.<ol>
<li>Jede Woche von Anfang Herbst bis zum Beginn des austrei...

<ol>
	<li>Kurokura, T., Mimida, N., Battey, N. H., Hyt&#246;nen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+seasonal+flowering+in+the+Rosaceae.">The regulation of seasonal flowering in the Rosaceae.</a> Journal of Experimental Botany. 64 (14), 4131-4141 (2013).</li><li>Rohde, A., Bhalerao, R. 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Morphological changes in flower primordia in relation to endodormancy in sweet cherry (Prunus avium L.).</a> Trees - Structure and Function. , (2018).</li><li>Fad&#243;n, E., Herrero, M., Rodrigo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dormant+flower+buds+actively+accumulate+starch+over+winter+in+sweet+cherry.">Dormant flower buds actively accumulate starch over winter in sweet cherry.</a> Frontiers in Plant Science. 9 (171), (2018).</li><li>Loescher, W. H., Mccamant, T., Keller, J. 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I., Herrero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovary+starch+reserves+and+flower+development+in+apricot+(Prunus+armeniaca).">Ovary starch reserves and flower development in apricot (Prunus armeniaca).</a> Physiologia Plantarum. 108 (1), 35-41 (2000).</li><li>Julian, C., Rodrigo, J., Herrero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stamen+development+and+winter+dormancy+in+apricot+(Prunus+armeniaca).">Stamen development and winter dormancy in apricot (Prunus armeniaca).</a> Annals of Botany. 108 (4), 617-625 (2011).</li><li>Alcaraz, M. L., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pistil+starch+reserves+at+anthesis+correlate+with+final+flower+fate+in+avocado+(Persea+americana).">Pistil starch reserves at anthesis correlate with final flower fate in avocado (Persea americana).</a> PLoS One. 8 (10), e78467 (2013).</li><li>Smith, A. M., Zeeman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+starch+in+plant+tissues.">Quantification of starch in plant tissues.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1342-1345 (2006).</li><li>Eliceiri, K. 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I., Rodrigo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovary+starch+reserves+and+pistil+development+in+avocado+(Persea+americana).">Ovary starch reserves and pistil development in avocado (Persea americana).</a> Physiologia Plantarum. 140 (4), 395-404 (2010).</li><li>Suarez, C., Castro, A. J., Rapoport, H. F., Rodriguez-Garc&#237;a, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological,+histological+and+ultrastructural+changes+in+the+olive+pistil+during+flowering.">Morphological, histological and ultrastructural changes in the olive pistil during flowering.</a> Sexual Plant Reproduction. 25, 133-146 (2012).</li><li>Lang, G. A., Early, J. D., Martin, G. C., Darnell, R. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pollen-pistil+incompatibility+in+Petunia+hybrida:+changes+in+the+pistil+following+compatible+and+incompatible+intraspecific+crosses.">Pollen-pistil incompatibility in Petunia hybrida: changes in the pistil following compatible and incompatible intraspecific crosses.</a> Journal of Cell Science. 36, 1-18 (1979).</li><li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler:+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes.">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biology. 7 (10), R100 (2006).</li></ol>

Dormanz in holzigen Stauden stellt deutliche Auswirkungen im Obstbau und Forstwirtschaft im Klimawandel, obwohl der biologische Prozess hinter Dormanz unklar bleibt. Dormanz Studien aus verschiedenen Blickwinkeln angegangen werden können, aber die Forschung auf der Suche nach einer biologischen Marker für die Winterruhe hat in den letzten Jahren intensiviert. Allerdings wurden die meisten Versuche, eine eindeutige Kennzeichen, wenn eine Knospe Dormanz gebrochen hat zu finden erfolglos3. Die hier...

Gemäßigte waldige Stauden passen sich den Jahreszeiten durch die Modulation, ihr Wachstum und ihre Entwicklung. Während sie im Frühling und Sommer zu entwickeln, aufhören sie zu wachsen im Herbst, im Winter1schlafend gehen. Obwohl Dormanz bei niedrigen Temperaturen im Winter überleben kann, ist chillen Voraussetzung für eine ordnungsgemäße Knospenaustrieb im Frühjahr2. Die wichtigen Implikationen der Vegetationsruhe in gemäßigten Obstproduktion und Forstwirtschaft führten zu vielfältigen Bemühungen zu bestimmen und Vorhersage der Dormanz Periode3. In Obst-Baum-Spezies, empirischer Experimente Übertragung Triebe zu zwingen, Bedingungen und statistische Vorhersagen basierend auf Daten der Blüte sind aktuelle Ansätze feststellen, das Datum für das Brechen der Keimruhe, wodurch Forscher schätzen die Chillen Anforderungen für jede Sorte. So erkennen Sie die Dormanz Status basierend auf biologische Prozesse bleibt jedoch unklar3.
Blüte im gemäßigten Obstbäume wie Süßkirsche (Prunus Avium L.), tritt einmal im Jahr und dauert etwa zwei Wochen. Allerdings beginnen Blumen zu differenzieren und rund 10 Monate früher, während der vergangenen Sommer4zu entwickeln. Blume Primordia aufhören zu wachsen im Herbst ruhend innerhalb der Knospen im Winter zu bleiben. In dieser Zeit muss jeder Sorte eine besondere kühle Voraussetzung für richtige Blüte4ansammeln. Trotz des Fehlens der phänologischen Veränderungen in den Knospen im Winter Blume Primordia sind physiologisch aktiv während der Vegetationsruhe und die Anhäufung von kühlen Temperaturen wurde vor kurzem assoziiert mit der Dynamik der Stärke Anhäufung oder verringern innerhalb der Zellen von der Eierstock Primordium bietet einen neuen Ansatz für Dormanz Bestimmung5. Die geringe Größe und die Position des Eierstocks Primordium erfordern jedoch eine spezielle Methodik.
Stärke ist das große Speicher-Kohlenhydrat im Gehölz Arten6. So haben Veränderungen in Stärke auf die physiologische Aktivität der Blume Gewebe, die brauchen Kohlenhydrate zur Unterstützung ihrer Entwicklung7,8in Verbindung gebracht. Andere wichtige Ereignisse während der reproduktiven Prozesses beziehen sich auch auf Variationen in Stärkegehalt in verschiedenen floralen Strukturen, z. B. Anthere Meiose9, das Wachstum der Pollenschläuche durch den Stil oder Ovulum Befruchtung10. Histochemische Techniken ermöglichen die Erkennung von Stärke in jedem bestimmten Gewebe Blume Primordia während der Vegetationsruhe. Allerdings bleibt die Schwierigkeit bei der Quantifizierung dieser Stärke, im Anschluss an ihre Muster der Akkumulation/Abnahme über die Zeit oder die Stärke zu vergleichen zwischen Gewebe, Sorten oder Jahre Inhalte zulassen. Dies ist aufgrund der kleinen Menge an Gewebe für die analytische Techniken11zur Verfügung. Als Alternative ermöglicht Bildanalyse, Mikroskopie12 verbunden die Quantifizierung der Stärke in sehr kleine Proben von pflanzlichen Gewebe13.
Ansätze, die Kombination von Mikroskopie und Bildanalyse wurden zur quantifizieren des Inhalts der verschiedenen Komponenten in pflanzlichen Geweben, wie Kallose14, Mikroröhrchen15, oder16, durch Messung der Größe des Bereichs gefärbt durch spezifische Stärke Flecken. Für Stärke, kann leicht erkannt werden mit Kaliumiodid-Jod (ich2KI) Reaktion17. Diese Methode ist sehr spezifisch; Ich2KI Plasmamembrane innerhalb der laminaren Struktur der Stärke Körner und bildet eine dunkle blaue oder rötlich-braune Farbe, abhängig von der Amylosegehalt Stärke18. Abschnitte mit ich befleckt2KI Fleck zeigen ausreichenden Kontrast zwischen Stärke und dem Hintergrund Gewebe, so dass eine eindeutige Stärke-Erkennung und der anschließenden Quantifizierung durch die Bild-Analyse-System19. Obwohl dieser Farbstoff nicht stöchiometrischen ist, ist die Anhäufung von Jod proportional zur Länge des Stärke-Moleküls, die17stark variieren kann. So kann die Größe des verschmutzten Bereich ausgedrückt als die Anzahl der Pixel nicht genau den Inhalt der Stärke, da hohe Unterschiede im Stärkegehalt zwischen Feldern mit gefärbten Bereiche ähnlicher Größe gefunden werden konnte. Als Alternative kann der Stärkegehalt ausgewertet werden durch die Messung der optischen Dichte der gefärbten Körnchen auf schwarz / weiß Bilder von dem Mikroskop ausgewiesen in verschiedenen Geweben in Apricot8,13 , 19, Avocado10,20und Olive21.
Hier beschreiben wir eine Methodik, die die experimentelle Bestimmung der Dormanz Status mit der Quantifizierung der Stärkegehalt in Primordium Eierstockgewebe vom Herbst kombiniert bis zum Frühling in süßen Kirschen, bietet ein neues Tool für das Verständnis und die Vorhersage der Vegetationsruhe basierend auf der Studie der biologischen Mechanismen im Zusammenhang mit Keimruhe.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="767">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Precision scale</td>
			<td style="width:251px;">Sartorius</td>
			<td style="width:133px;">CP225D</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stereoscopic microscope</td>
			<td style="width:251px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:133px;">MZ-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Drying-stove</td>
			<td style="width:251px;">Memmert</td>
			<td style="width:133px;">U15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraffin Embedding station</td>
			<td style="width:251px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:133px;">EG1140H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rotatory microtome</td>
			<td style="width:251px;">Reichert-Jung</td>
			<td style="width:133px;">1130/Biocut</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microtome blade</td>
			<td style="width:251px;">Feather</td>
			<td style="width:133px;">S35</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bright field microscope</td>
			<td style="width:251px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:133px;">DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Digital Camera</td>
			<td style="width:251px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:133px;">DC-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Image Analysis System</td>
			<td style="width:251px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:133px;">Quantiment Q550</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining histochemical staining and image analysis to quantify starch in the ovary primordia of sweet cherry during winter dormancy

Veränderungen in Stärke in kleinen Strukturen sind verbunden mit wichtigen Ereignissen während mehreren Pflanze Entwicklungsprozesse, einschließlich der reproduktiven Phase von der Bestäubung zur Befruchtung und das Einsetzen der Fruchtkörper. Jedoch sind Abweichungen in der Stärke während der Blüte Differenzierung nicht vollständig, vor allem auf die Schwierigkeiten bei der Quantifizierung des Stärkegehalts in den besonders kleinen Strukturen der Blume Primordia bekannt. Hier beschreiben wir eine Methode zur Quantifizierung der Stärke in den Eierstock Primordia der Süßkirsche (Prunus Avium L.) mithilfe einer Bildanalysesystem angeschlossen an das Mikroskop, wodurch im Zusammenhang mit den Veränderungen im Stärkegehalt mit den verschiedenen Phasen der Vegetationsruhe vom Herbst bis zum Frühling. Zu diesem Zweck wird die Dormanz Blütenknospen Statusermittlung durch die Auswertung der Knospe Wachstum der Triebe, die zu verschiedenen Zeitpunkten in der Winterzeit in kontrollierten Bedingungen übertragen. Für die Quantifizierung der Stärke in den Eierstock Primordia Blütenknospen sind sequentiell gesammelt, fixiert, eingebettet in Paraffinwachs, geschnitten und gefärbt mit I2Kl (Kaliumjodid-Jod). Die Vorbereitungen sind unter dem Mikroskop beobachtet und analysiert, indem ein Bild-Analysator, der Stärke deutlich vom Hintergrund unterscheidet. Inhaltswerte Stärke erhält man durch Messung der optischen Dichte des Bildes, die die gefärbten Stärke entspricht, unter Berücksichtigung der sich aus der optischen Dichte der einzelnen Pixel als eine Schätzung des Stärkegehalts des Rahmens studierte.

Dormanz Studien erfordern die Festlegung des Zeitpunkts, wann die abschreckenden Voraussetzungen erfüllt sind. Trotz des Fehlens der phänologischen Veränderungen während des Winters unter Feldbedingungen (Abbildung 1A) wiederherstellen Kirschbäume nicht die Kapazität des Wachstums unter geeigneten Bedingungen, bis sie einen bestimmten Zeitraum unter niedrigen Temperaturen passieren. Die regelmäßige Übertragung der Triebe zu einer kontrollierten Bedin...

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Combining Histochemical Staining and Image Analysis to Quantify Starch in the Ovary Primordia of Sweet Cherry during Winter Dormancy

Wir präsentieren eine Methodik zur Quantifizierung des Stärkegehalts in den Eierstock Primordia in Süßkirsche (Prunus Avium L.) während der Winterruhe, mithilfe einer Bild-Analyse-System mit histochemische Techniken kombiniert.

Kombination von histochemische Färbung und Bildanalyse, Stärke in den Eierstock Primordia der Süßkirsche während der Winterruhe zu quantifizieren

Changes in starch in small structures are associated with key events during several plant developmental processes, including the reproductive phase from ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen über das Schlafen in holzigen Pflanzen zu beantworten, wie zum Beispiel, warum die Blütenknospen brauchen, um Kälte im Winter anzusammeln, um richtig zu blühen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Quantifizierung der Stärke in sehr kleinen Proben von Blütenprimordium ermöglicht. Dieser Ansatz ist sehr nützlich, um die physiologische Aktivität der Blüte Primordium während des Ruhezustandes zu erkennen und kann auch auf andere Baumarten wie Aprikosen oder Pflaume angewendet werden.Obwohl diese Methode Einblick in die ruhende Blütenknospe geben kann, kann sie auch auf andere Prozesse wie die Fortpflanzungsphase von der Bestäubung bis zum Beginn der Fruchtung angewendet werden. Zu Beginn, sammeln Sie fünf Schüsse aus dem Feld. Dann wiegen und fixieren 10 Blütenknospen in einem 10-Milliliter-Glasrohr mit fixativer Lösung für mindestens 24 Stunden bei vier Grad Celsius.Danach entsorgen Sie das Fixativ und fügen Sie genügend 75% Ethanol hinzu, um die Proben abzudecken. Erhalten Sie drei Triebe, die 15 bis 30 Zentimeter lang und fünf Millimeter im Durchmesser mit jeweils 10 Blütenknospen sind. Dann legen Sie die Triebe auf wassergetränkten Blumenschaum in eine Wachstumskammer.Nach 10 Tagen in der Wachstumskammer die Blütenknospen von den Trieben entfernen und wiegen. Bewerten Sie jede Woche vom Anfang des Herbstes bis zum Budburst im Frühjahr das Wachstum der Blütenknospen. Entfernen Sie die externen Knospenwaagen aus jeder Probe, und legen Sie dann jede Knospe in ein Uhrmacherglas, das 75 % Ethanol enthält.Verwenden Sie Präzisionszangen und ein ophthalmologisches Skalpell, um die Knospen zu sezieren und mindestens ein Blütenprimordium aus jeder Knospe zu erhalten. Die Proben einzeln in Paraffinwachs einbetten, um einen Block zu bilden, und sie auf ein rotierendes Mikrotom zu sektionieren. Nach dem Schnitt der Proben einen Tropfen frisches Lugol-Jod über einen Abschnitt auftragen.Nach fünf Minuten überschüssigen Fleck mit Blotting-Papier entfernen. Als nächstes einen kleinen Tropfen synthetischer Montagemedien auftragen, ein kleines Deckglas über die Probe legen und hart drücken. Sobald das Montagemedium trocken ist, beobachten Sie den gebeizten Abschnitt unter einem Hellfeldmikroskop.Passen Sie zunächst die Blendenmembran und die Helligkeitssteuerung entsprechend dem Textprotokoll an. Stellen Sie dann sicher, dass sich keine Filter im Filterhalter befinden, und wählen Sie einen Hellfeldzustand im Mikroskop aus. Passen Sie danach die Kameraeinstellungen für das gebeizte Präparat ohne Gewebe an.Fixieren Sie die Helligkeit bei 50%Weiter aktivieren Sie die Überbelichtungs-/Unterbelichtungsfunktion und passen Sie die Belichtungszeit an der Grenze der Überbelichtung an. Wenden Sie die Weißabgleichfunktion und die Schattierungskorrektur an. Messen Sie den Graugrad des resultierenden Schwarz-Weiß-Bildes des gebeizten Präparats ohne Gewebe.Wenden Sie dann einen 4N-Filter an, erfassen Sie ein weiteres Schwarzweißbild der Zubereitung und messen Sie den Graugrad. Als nächstes erfassen Sie ein Bild der gleichen Zubereitung ohne Licht und messen Sie den Graugrad des resultierenden Bildes und kalibrieren Sie. Danach können Sie ein Farbbild eines Beispielabschnitts im TIFF-Format mit einer Auflösung von mindestens 300 dpi erwerben.Erstellen Sie ein binäres Bild, das dem gebeizten Bereich entspricht, und legen Sie dann die drei Farbschwellen fest, bis das binäre Bild genau das gefärbte Stärkegranulat widerspiegelt. Wiederholen Sie diesen Vorgang mit anderen Präparaten und Geweben, um die endgültigen Detektionsstufen zu optimieren. Messen Sie mithilfe des Bildanalysesystems die Summe der optischen Dichte jedes Pixels unter der Maske, um den Stärkegehalt im Feld zu quantifizieren.In diesem Protokoll wurden das Wachstum der Blütenknospen und der Ruhezustand bewertet, indem der Anstieg des Knospengewichts nach 10 Tagen unter geeigneten Bedingungen gemessen wurde. Während des Ruhezustandes wurden nach 10 Tagen unter geeigneten Bedingungen keine Veränderungen beobachtet. Sobald die Ruhe überwunden war, schwollen die Knospen an und platzten in der Wachstumskammer.Der Stärkegehalt im Eierstockprimordium wurde mittels Bildanalyse in jedem mikrotomed Abschnitt quantifiziert. Konsequenterweise hatte die Stärkemenge im frühwinterlichen Winter einen optischen Dichtewert von weniger als 40.000 und die maximale Menge erreichte in beiden Studienjahren einen Wert zwischen 120.000 und 140 000. Unter Berücksichtigung der Ruhezeiten trat die maximale Stärkemenge gleichzeitig mit der kühlenden Erfüllung in beiden Jahren auf.Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass die vom Bildanalysator verwendeten Erkennungsstufen direkt von der Kalibrierung des Systems abhängen. Dazu gehören Lichtzustand, Fleckenintensität und Vergrößerung des Mikroskops. Dieser Zustand muss für alle Zubereitungen festgelegt werden.Die Kombination histochemischer Techniken mit der Bildanalyse hat sehr nützlich zur Untersuchung der Kohlenhydratreserve des Blütenprimordiums während der verschiedenen Phasen des Ruhezustands geführt. Es kann auch auf andere Arten und Gewebe angewendet werden. Die Beziehung zwischen Derruhefreisetzung und Stärkeakkumulation in der Ovarial-Primordie, die durch den Einsatz dieser Methode enthüllt wird, bietet eine solide Grundlage, um die biologische Grundlage der Ruhe- und Schüttelanforderungen zu verstehen.Zukünftige Anstrengungen müssen sich auf die Untersuchung zuverlässiger biologischer Indikatoren konzentrieren, die leicht auf den Ruhezustand des Baumes hinweisen könnten. In der Zwischenzeit kann das Muster der Stärkevariationen entlang des Ruhezustands verwendet werden, um weitere physiologische und genetische Studien zu rahmen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse von Zebrafisch-Larven Skelettmuskel Integrität mit Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Mit Lichtblatt Fluoreszenzmikroskopie Bild Zebrabärbling Augenentwicklung

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Räumliche und zeitliche Analyse von Active ERK in der<em&gt; C. elegans</em&gt; Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

Korrelative Höchstauflösung und Elektronenmikroskopie Protein Lokalisierung im Zebrafisch Netzhaut zu lösen

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion, Immunofluorescent Färbung der Pilz Körper und Photorezeptor Neuronen im Gehirn Erwachsener Taufliege melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Anwendung von RNAi und Hitze-Schock-induzierte Transkription Faktor Ausdruck zu programmieren Keimzellen Neuronen in C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Ovarian Tissue Culture Phänomene in der Maus Eierstock zu visualisieren

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Ein Hyperandrogenic Mausmodell, PCO-Syndrom zu studieren

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

An In Vitro 3D Model and Computational Pipeline to Quantify the Vasculogenic Potential of iPSC-Derived Endothelial Progenitors

Ein In-Vitro-3D-Modell und eine Computational Pipeline zur Quantifizierung des vaskulogenen Potenzials von iPSC-derived endotheliaalen Vorläufern

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are a patient-specific, proliferative cell source that can differentiate into any somatic cell type. Bipotent ...

Combining Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Chemical Crosslinking to Detect Multimeric Complexes Stabilized by Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture

Die Kombination von nicht-reduzierender SDS-PAGE-Analyse und chemischer Vernetzung mit Detect Multimerischen Komplexen, die durch Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture stabilisiert wurden