Name: automated image-based quantification of neutrophil extracellular traps using netquant
Uploaded: 2019-11-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Image-Based Quantification of Neutrophil Extracellular Traps Using NETQUANT at JoVE.com

Het werk werd gefinancierd door de Crafoord Foundation (TM en PN), de Zweedse overheids onderzoeksbeurs (PN, TM), de Zweedse Onderzoeksraad (PN) en de Groschinsky Foundation (TM, PN).

De ethische commissie van de Universiteit van Lund keurde de verzameling van veneuze bloed van gezonde vrijwilligers goed in overeenstemming met de verklaring van Helsinki (2013/728). Alle vrijwilligers hebben hun schriftelijke geïnformeerde toestemming gegeven.
1. isolatie van perifere bloed neutrofielen met behulp van dichtheid-gradiënt centrifugeren
<ol><li>Verzamel humaan veneuze bloed in buisjes die heparine bevatten en laat de buisjes op kamertemperatuur komen. Opmerking: een mini...

<ol>
	<li>Nauseef, W. M., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+at+work.">Neutrophils at work.</a> Nature Immunology. 15 (7), 602-611 (2014).</li><li>Borregaard, N., Cowland, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granules+of+the+human+neutrophilic+polymorphonuclear+leukocyte.">Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte.</a> Blood. 89 (10), 3503-3521 (1997).</li><li>Nordenfelt, P., Tapper, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagosome+dynamics+during+phagocytosis+by+neutrophils.">Phagosome dynamics during phagocytosis by neutrophils.</a> Journal of Leukocyte Biology. 90 (2), 271-284 (2011).</li><li>Brinkmann, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+kill+bacteria.">Neutrophil extracellular traps kill bacteria.</a> Science. 303 (5663), 1532-1535 (2004).</li><li>Sorensen, O. E., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+-+the+dark+side+of+neutrophils.">Neutrophil extracellular traps - the dark side of neutrophils.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (5), 1612-1620 (2016).</li><li>Yipp, B. G., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NETosis:+how+vital+is+it?.">NETosis: how vital is it?.</a> Blood. 122 (16), 2784-2794 (2013).</li><li>Jorch, S. K., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+role+for+neutrophil+extracellular+traps+in+noninfectious+disease.">An emerging role for neutrophil extracellular traps in noninfectious disease.</a> Nature Medicine. 23 (3), 279-287 (2017).</li><li>Fuchs, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+cell+death+program+leads+to+neutrophil+extracellular+traps.">Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps.</a> J Cell Biol. 176 (2), 231-241 (2007).</li><li>Mohanty, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mechanism+for+NETosis+provides+antimicrobial+defense+at+the+oral+mucosa.">A novel mechanism for NETosis provides antimicrobial defense at the oral mucosa.</a> Blood. 126 (18), 2128-2137 (2015).</li><li>Hakkim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+Raf-MEK-ERK+pathway+is+required+for+neutrophil+extracellular+trap+formation.">Activation of the Raf-MEK-ERK pathway is required for neutrophil extracellular trap formation.</a> Nature Chemical Biology. 7 (2), 75-77 (2011).</li><li>Brinkmann, V., Goosmann, C., Kuhn, L. I., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+quantification+of+in+vitro+NET+formation.">Automatic quantification of in vitro NET formation.</a> Frontiers in Immunology. 3, 413 (2012).</li><li>Coelho, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+determination+of+NET+(neutrophil+extracellular+traps)+coverage+in+fluorescent+microscopy+images.">Automatic determination of NET (neutrophil extracellular traps) coverage in fluorescent microscopy images.</a> Bioinformatics. 31 (14), 2364-2370 (2015).</li><li>Mohanty, T., Sorensen, O. E., Nordenfelt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NETQUANT:+Automated+Quantification+of+Neutrophil+Extracellular+Traps.">NETQUANT: Automated Quantification of Neutrophil Extracellular Traps.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1999 (2017).</li><li>Kaplan, M. J., Radic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+double-edged+swords+of+innate+immunity.">Neutrophil extracellular traps: double-edged swords of innate immunity.</a> Journal of Immunology. 189 (6), 2689-2695 (2012).</li><li>Cedervall, J., Olsson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+Gone+Astray+-+NETs+in+Cancer.">Immunity Gone Astray - NETs in Cancer.</a> Trends in Cancer. 2 (11), 633-634 (2016).</li><li>Ginley, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+detection+and+quantification+of+human+and+mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+flow+cytometry+and+confocal+microscopy.">Computational detection and quantification of human and mouse neutrophil extracellular traps in flow cytometry and confocal microscopy.</a> Scientific Reports. 7 (1), 17755 (2017).</li></ol>

NET Formation is een relatief recente toevoeging aan het gevarieerde neutrofiele armamentarium4 en er is een opvallende Golf van belang om de implicatie van netten te bestuderen in een breed scala aan onderzoeksgebieden5,7,14,15. Het verwerven van beelden met behulp van immunofluorescentie microscopie en daaropvolgende kwantificering op basis van afbeeldingen is een veel...

Neutrofielen zijn cruciale mediatoren van aangeboren gastheer verdediging reacties tegen een breed scala van microbiële pathogenen1. Ze voeren hun antimicrobiële functies uit door hun korrels vrij te geven die een breed scala aan antimicrobiële eiwitten2bevatten, die reactieve zuurstof soorten (Ros) en hypochloriet1produceren, en door fagocytose3. Daarnaast heeft Brinkmann et al. 4 beschreven neutrofiele extracellulaire vallen (netten) als een nieuw mechanisme waarmee neutrofielen vangen en invallende pathogenen elimineren. Sinds hun ontdekking iets meer dan een decennium geleden4, zijn netten betrokken bij een breed scala aan infectieuze5,6 en niet-infectieuze7 morbiiteiten. De netto-vorming is een actief proces en resulteert in de extrusie van chromatine-DNA bedekt met granule afgeleide antimicrobiële eiwitten8. Enkele van de belangrijkste veranderingen in cellulaire en nucleaire morfologie geassocieerd met de netto-vorming omvatten het verlies van nucleaire morfologie, chromatine decondensatie, mobilisatie van korrel eiwitten van cytoplasma tot de Nucleus en een toename van de nucleaire en cellulaire diameter8,9.
De web-achtige netten, die kunnen verschijnen als diffuse structuren iets groter dan de cel of als structuren meerdere malen groter dan een enkele neutrofiele worden beschouwd als indicatoren van netosis5,10. Met behulp van fluorescentiemicroscopie kunnen netten worden gedetecteerd door het indringende DNA met een fluorescerende sonde zoals 4 ', 6-diamidino-2-fenylindole (DAPI) en door immunofluorescentie kleuring tegen netgebonden eiwitten zoals neutrofiele elastase. Kwantificering van overlappende gebieden van kleuring voor DNA en NETGEBONDEN eiwitten bepaalt de totale oppervlakte onder netten in een afbeelding11.
Er zijn een aantal opties voorbeeld analyse beschikbaar voor het uitvoeren van fluorescentie op afbeeldingen gebaseerde kwantificering van netten11,12. Maar deze software opties aanwezig beperkingen in niet gebruiksvriendelijk en/of volledig geautomatiseerd. In dit artikel demonstreren we de werking van NETQUANT13, een vrij beschikbare app die onbevooroordeelde volledig geautomatiseerde immunofluorescentie microscopie beeld gebaseerde netto kwantificering kan uitvoeren. De app heeft een gebruiksvriendelijke grafische interface (GUI) en kan single-cell analyse uitvoeren. De software kwantificeert NETosis in een afbeelding door het detecteren van de morfologische veranderingen in het gebied van DNA-NET-gebonden marker, chromatine decondensatie geassocieerde vervorming van de Nucleus en toename van het DNA: netto-gebonden eiwit ratio. De meervoudige nettodefinitiecriteria maken het mogelijk om op onbevooroordeelde wijze een strikte netto-kwantificering over verschillende gegevensverzamelingen toe te voegen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Heparinised plastic tubes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>367885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Axis-Shield</td>
			<td>114547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 with L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11835-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50mL conical flasks</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15mL conical flasks</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well Tissue culture plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>10626491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#1 Coverslips 10mm</td>
			<td>Menzel Glaser</td>
			<td>CS10100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>Menzel Glaser</td>
			<td>631-0098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary anti-human elastase</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>DAKO rabbit 1373, contract immunization</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary fluorophore conjugated goat anti-rabbit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>A-11072, A-11070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PROLONG-Gold Antifade reagent with DAPI</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>79346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Ti-E Epifluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>Andor Zyla</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan Apochromat 20x, 40x objectives</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windows 10</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>macOS Sierra 10.12</td>
			<td>Apple</td>
			<td></td>
			<td>Operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

automated image-based quantification of neutrophil extracellular traps using netquant

Neutrofiele extracellulaire vallen (netten) zijn web-achtige antimicrobiële structuren die bestaan uit DNA en korrels afgeleide antimicrobiële eiwitten. Immunofluorescentie microscopie en op afbeeldingen gebaseerde kwantificeringsmethoden blijven belangrijke instrumenten voor het kwantificeren van neutrofiele extracellulaire trap vorming. Er zijn echter belangrijke beperkingen voor de immunofluorescentie methoden die momenteel beschikbaar zijn voor het kwantificeren van netten. Handmatige methoden van op afbeeldingen gebaseerde netto kwantificering zijn vaak subjectief, gevoelig voor fouten en vervelend voor gebruikers, vooral niet-ervaren gebruikers. Ook, momenteel beschikbare software-opties voor kwantificering zijn ofwel semi-automatische of vereisen opleiding voorafgaand aan de werking. Hier tonen we de implementatie van een geautomatiseerde immunofluorescentie-gebaseerde beeldkwantificerings methode om de netto-vorming genaamd NETQUANT te evalueren. De software is eenvoudig te gebruiken en heeft een gebruiksvriendelijke grafische gebruikersinterface (GUI). Het beschouwt biologisch relevante parameters zoals een toename van het oppervlak en DNA: netto marker eiwit ratio, en nucleaire vervorming om de netto-vorming te definiëren. Bovendien is deze tool gebouwd als een vrij beschikbare app, en maakt het mogelijk om kwantificering en analyse van één cel te herleiden.

5 x 105 neutrofielen/ml werden in een 12-well plaat geplaatst op de dekstroken en gestimuleerd met 20 nm PMA of ongeprikkeld gelaten voor 150 min. De monsters werden vervolgens bevlekt met behulp van primaire konijn anti-menselijke neutrofiele elastase antilichamen, secundaire geit anti-konijn de geconjugeerde antilichamen en DAPI-een fluorescently gelabelde kleurstof die DNA vlekken (Zie de tabel met materialen voor details). Een minimum van 5 beelden werd ver...

Watch this Scientific Journal Video about Automated Image-Based Quantification of Neutrophil Extracellular Traps Using NETQUANT at JoVE.com

Automated Image-Based Quantification of Neutrophil Extracellular Traps Using NETQUANT

Hier presenteren we een protocol voor het genereren van neutrofiele extracellulaire vallen (netten) en het bedienen van NETQUANT, een volautomatische software optie voor het kwantificeren van netten in immunofluorescentie beelden.

Geautomatiseerde kwantificering van neutrofiele extracellulaire traps met behulp van NETQUANT

Neutrophil extracellular traps (NETs) are web-like antimicrobial structures consisting of DNA and granule derived antimicrobial proteins. ...

Hier presenteren we NETQUANT, een volledig geautomatiseerde aanpak voor het kwantificeren van NETS en immunofluorescentie beelden. Dit zal onderzoekers helpen bij het maken van vergelijkbare beeldanalyse op gegevens gegenereerd door meerdere gebruikers en voorwaarden. De voordelen van deze techniek zijn het gebruiksgemak, eencellige data-analyse, meerdere criteria om NET-vorming te evalueren en een onbevooroordeelde analyse van meerdere afbeeldingen.Installeer en open de analysesoftware. Een up-to-date versie is te vinden op het Zenodo GitHub archief, of de Nordonfelt Lab website. Kies op het tabblad Setup een bronmap voor analyse door op de optie Pad ophalen in het bronmenu te klikken.Selecteer de map met de te analyseren afbeeldingsreeksen. Klik nogmaals op de optie Pad ophalen in het doelmenu en selecteer de doelmap voor het opslaan van de gegevens die de afbeeldingsanalyse volgen. Vervolgens, bij het gebruik van afzonderlijke kanaalbeelden, een naam van de kanaalmappen, zodat het DNA-kanaal overeenkomt met de nucleaire DNA-vlek, en het NET-kanaal toont de neutrofiele elastase vlek in de beelden.Geef ook de map met de besturingselementafbeeldingsbestanden als controle. Klik vervolgens op de knop Afbeeldingsgegevens laden en laad de metagegevens van de afbeelding in de software. Selecteer vervolgens in het submenu kanaalvolgorde de juiste kanaalvolgorde in de afbeeldingen.Dit helpt om toevallige mismatches te voorkomen. Klik nu op de knop Gegevens voorbereiden om primaire afbeeldingseigenschappen uit de ruwe gegevens te verkrijgen en de afbeeldingen om te zetten. De geconverteerde afbeeldingen worden vervolgens weergegeven in het submenu voorbeeldtypen.Klik op het voorbeeldtypemenu, selecteer een afbeelding in het submenu en klik op weergavegegevens om de afbeeldingen weer te geven die zijn opgesplitst in respectievelijk het DNA- en Neutrophil Extracellular Trap of het NET-kanaal. Als u de cellen wilt segmenteren in hun respectieve kanalen, selecteert u het tabblad segmentatiemethode en selecteert u een methode in het submenu methode voor zowel de DNA- als de NET-kanalen. De standaardmethode voor segmentatie is ingesteld op adaptief en is de aanbevolen instelling.Andere opties zijn beschikbaar in de software, waaronder global edge en chanverse. Een keerpunt optie is ook opgenomen om te helpen onderscheid maken tussen nauw geplaatste cellen of NETs. Klik ook op het tabblad segmentatie op de optie segmentbesturingselementen.Selecteer vervolgens PMA in het submenu voorbeeldtype en klik op de batchoptie om te beginnen met het segmenteren van alle afbeeldingen die in de gegevensset zijn opgenomen. Selecteer vervolgens de afbeeldingen in het voorbeeldtypemenu en klik op de knop Weergavegegevens om de binaire afbeeldingsmaskers te visualiseren en te valideren voor zowel de DNA- als NET-maskers die na segmentatie zijn gegenereerd. Klik nu op het tabblad analyse op de knop Drempel bepalen om de besturingselementen te analyseren.Wijzig vervolgens aan de rechterkant het monstertype in PMA en klik op de knop Celeigenschappen ophalen om de analyse van de gestimuleerde monsters te voltooien. Selecteer vervolgens een afbeelding in het submenu voorbeeldtype en klik op de knop Weergavegegevens om de overlay en het aantal cellen en NET-vormende cellen in de afbeelding weer te geven. Begin met het selecteren van het voorbeeld in het submenu voorbeeldtype.Afzonderlijke afbeeldingen kunnen worden geselecteerd uit het submenu van het voorbeeldtype voor analyse of de volledige batch afbeeldingen kan worden geanalyseerd door de batchoptie te selecteren. Eenmaal geselecteerd, klikt u op de knop NETs analyseren om de analyse te voltooien. Pas netcriteria handmatig aan om optimale resultaten te behalen voor een bepaald monster.Vergelijk geïdentificeerde NETs met de originele afbeeldingen om de kwaliteit van de identificatie te beoordelen. Zodra deze stap is voltooid, kunnen de NET-criteria worden toegepast op alle afbeeldingen in de gegevensset. Eventuele wijzigingen in de NET-criteria worden ook gelijktijdig toegepast op alle controlemonsters.Controleer het gegevensoverzicht in het submenu celgegevens, waar het aantal afbeeldingen, het aantal cellen per afbeelding en het percentage NET's per afbeelding worden weergegeven. Voer het uitvoertabblad in om de resultatenuitgangen te selecteren en weer te geven. Verken en vergelijk de verschillende gegevensuitgangen die zijn gegenereerd uit de analyse van besturings- en PMA-behandelde monsters door de vorm van de uitvoer te selecteren en op de knop uitvoerresultaten te klikken.Start vervolgens het CSV-bestand met de resultatengegevenstabel om gegevens met één cel te verkennen en klik op de pdf-bestanden voor de resultaten om de net-gebiedsverdeling en DE VERHOUDING DNA naar NET in de monsters te visualiseren. De rode lijn geeft de drempelwaarde in de grafieken aan. Tot slot, klik op de resultaten bivariate distributiebestand om het NET gebied versus vorm van DNA te bepalen.Hier werden 15 beelden van controlenetrofielen en 15 beelden van PMA-gestimuleerde neutrofielen geanalyseerd in minder dan tien minuten. Het totale aantal cellen werd geteld en het percentage cellen met Neutrophil Extracellular Traps werd bepaald met behulp van de geautomatiseerde kwantificeringsmethode beschreven in dit artikel. Deze resultaten tonen aan dat PMA-gestimuleerde neutrofielen een groter gebied hebben, een toename van nucleaire vervorming en een hogere DNA-tot NET-ratio dan controlemonsters.In combinatie met een 3D-grafiek vertonen de pma-gestimuleerde monsters vaak gebieden van aanscherpingsgroepen dan de controlemonsters. Tijdens het proberen van de procedure, is het belangrijk om te onthouden dat, hoewel de workflow werd getest met behulp van meerdere donoren, is het raadzaam dat de gebruiker moet beslissen over de software parameters op de juiste manier op basis van de individuele gegevensset.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

Neutrofielen Extracellulaire Traps: Hoe te genereren en te visualiseren

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps (NETs) Isolation and Handling

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps NETs Isolation and Handling

Vereenvoudigde Human Neutrophil Extracellular traps (NET) Isolatie en Handling

Neutrophil Extracellular Traps (NETs) have been recently identified as part of the neutrophil&#8217;s antimicrobial armamentarium. Apart from their role ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

Methoden om te studeren Lipidenveranderingen in neutrofielen en de daaropvolgende vorming van neutrofielen Extracellulaire Traps

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

A Simple Fluorescence Assay for Quantification of Canine Neutrophil Extracellular Trap Release

A Simple Fluorescence Assay voor het kwantificeren van Canine neutrofielen extracellulaire inklembeveiliging

Neutrophil extracellular traps are networks of DNA, histones and neutrophil proteins released in response to infectious and inflammatory stimuli. Although ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualiseren van extracellulaire Traps Macrophage met behulp van de Confocal Microscopie

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Identification of Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Feline Arterial Thrombi using Immunofluorescence Microscopy

Identificatie van Neutrophil Extracellular Traps in Paraffine-Embedded Feline Arterial Thrombi using Immunofluorescentie Microscopie

Neutrophil extracellular traps (NETs), composed of cell-free DNA (cfDNA) and proteins like histones and neutrophil elastase (NE), are released by ...

Morphological and Compositional Analysis of Neutrophil Extracellular Traps Induced by Microbial and Chemical Stimuli

Morfologische en compositorische analyse van neutrofiele extracellulaire vallen geïnduceerd door microbiële en chemische stimuli

Neutrophils function as the first line of cellular defense in an innate immune response by employing diverse mechanisms, such as the formation of ...

Quantifying Myeloperoxidase-DNA and Neutrophil Elastase-DNA Complexes from Neutrophil Extracellular Traps by Using a Modified Sandwich ELISA

Kwantificeren van myeloperoxidase-DNA en neutrofiele elastase-DNA-complexen van neutrofiele extracellulaire vallen met behulp van een gemodificeerde sandwich-ELISA

Certain stimuli, such as microorganisms, cause neutrophils to release neutrophil extracellular traps (NETs), which are basically web-like structures ...

Kleuring en beeldvorming om extracellulaire neutrofiele vallen te visualiseren

Immunofluorescence Imaging of Neutrophil Extracellular Traps in Human and Mouse Tissues

Auteur in de schijnwerpers: Neutrofiele extracellulaire vallen beeldvorming in menselijke en muizenweefsels 

Immunofluorescentiebeeldvorming van neutrofiele extracellulaire vallen in menselijke en muizenweefsels

Neutrophil extracellular traps (NETs) are released by neutrophils as a response to bacterial infection or traumatic tissue damage but also play a role in ...