Name: mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine
Uploaded: 2019-02-26T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי גרנט מוגבל ל פרופסור Jens Juul הולסט מהמרכז נובו נורדיסק למחקר בסיסי מטבולית (נובו נורדיסק קרן, דנמרק), מענק נפרד מן הקרן נובו נורדיסק עושה מחקרים זלוף מכרסמים (מענק. לא. NNF15OC0016574), מענק הולסט פרופסור מן המועצה האירופית למחקר (גרנט no.695069) ו theEuropean האיחוד הוא תכנית המסגרת השביעית למחקר, TechnologicalDevelopment של פעילויות הדגמה (מענק מס 266408), כמו גם של פוסט דוקטורט להעניק לרון אי Kuhre של הקרן לונדבק (R264-2017-3492). אנו מודים ג'נה אי האנט, קרולין פ דיקון להגהת זהיר.

כל המחקרים נערכו באישור ניסויים חיה דנית Inspectorate (2013-15-2934-00833), הוועדה האתית המקומית, בהתאם להנחיות של חקיקה דנית בבע ח (1987) וסמכות הלאומית המכונים לבריאות (פרסום מס ' 85-23).
1. חיות ניסוי
<ol><li>לקבל Wistar זכר חולדות (250 גרם) ואת בית 2 לכל כלוב, עם גישה ad libitum תקן האוכל והמים, ולשמור גם עם 12...

<ol>
	<li>Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&amp;#34;normal&amp;#34;+endocrine+cell+of+the+gut:+changing+concepts+and+new+evidences.">The &amp;#34;normal&amp;#34; endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).</li><li>Brighton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acids+Trigger+GLP-1+Release+Predominantly+by+Accessing+Basolaterally+Located+G+Protein-Coupled+Bile+Acid+Receptors.">Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors.</a> Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+are+important+direct+and+indirect+regulators+of+the+secretion+of+appetite-+and+metabolism-regulating+hormones+from+the+gut+and+pancreas.">Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li><li>Roberge, J. N., Brubacker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+Proglucagon-Derived+Peptides+in+Response+to+Intestinal+Luminal+Nutrients.">Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients.</a> Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).</li><li>Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glucagon-like+peptide-1+synthesis+and+secretion+in+the+GLUTag+enteroendocrine+cell+line.">Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line.</a> Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).</li><li>Jacobsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+Gastrointestinal+Hormone+Responses,+Insulin+Sensitivity,+and+Beta-Cell+Function+Within+2+Weeks+After+Gastric+Bypass+in+Non-diabetic+Subjects.">Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects.</a> Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+glucose-stimulated+GLP-1+secretion+from+perfused+rat+small+intestine.">Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine.</a> Diabetes. 64, 370 (2014).</li><li>Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+gut+hormone+secretion.+Studies+using+isolated+perfused+intestines.">Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines.</a> Peptides. 77, 47-53 (2016).</li><li>Ratner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Peripheral+Neurotensin+on+Appetite+Regulation+and+Its+Role+in+Gastric+Bypass+Surgery.">Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery.</a> Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).</li><li>Wewer Albrechtsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+glucagon+secretion+in+mice+and+rats+revealed+using+a+validated+sandwich+ELISA+for+small+sample+volumes.">Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).</li><li>Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+elimination+rates+of+glucagon-like+peptide-1+in+obese+type+2+diabetic+patients+and+healthy+subjects.">Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).</li><li>Windelov, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+is+it+so+difficult+to+measure+glucagon-like+peptide-1+in+a+mouse?.">Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?.</a> Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).</li><li>Gorboulev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+-d-glucose+Cotransporter+SGLT1+is+Pivotal+for+Intestinal+Glucose+Absorption+and+Glucose-Dependent+Incretin+Secretion.">Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion.</a> Diabetes. 61, 187-196 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+stimulates+neurotensin+secretion+from+the+rat+small+intestine+by+mechanisms+involving+SGLT1+and+GLUT2,+leading+to+cell+depolarization+and+calcium+influx.">Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+relationship+between+glucose+absorption+and+glucose-stimulated+secretion+of+GLP-1,+neurotensin,+and+PYY+from+different+intestinal+segments+in+the+rat.">On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat.</a> Physiological Reports. 5, (2017).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+cosecretion+and+coexpression+of+gut+hormones+from+male+rat+proximal+and+distal+small+intestine.">An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine.</a> Endocrinology. 156, 847-857 (2015).</li><li>Goldspink, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+insights+into+the+detection+of+free+fatty+and+bile+acids+by+ileal+glucagon-like+peptide-1+secreting+cells.">Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells.</a> Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).</li><li>Sun, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+Controlling+Glucose-Induced+Glp-1+Secretion+in+Human+Small+Intestine.">Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine.</a> Diabetes. , (2017).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+production+and+secretion+in+GLUTag,+NCI-H716+and+STC-1+cells:+a+comparison+to+native+L-cells.">Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11 (2016).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensing+in+L+cells:+a+primary+cell+study.">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+role+of+voltage+gated+cation+conductances+in+the+glucagon-like+peptide-1+secreting+GLUTag+cell+line.">Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line.</a> The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fructose+stimulates+GLP-1+but+not+GIP+secretion+in+mice,+rats+and+humans.">Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).</li><li>Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-Protein-Coupled+Receptors+in+Intestinal+Chemosensation.">G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation.</a> Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).</li><li>Parker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+underlying+bile+acid-stimulated+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion.</a> British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).</li><li>Petersen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+L+cells+in+mouse+and+human+small+intestine+organoids.">Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids.</a> Diabetes. 63, 410-420 (2014).</li><li>Parker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+active+versus+facilitative+glucose+transport+for+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion.</a> Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).</li><li>Roberts, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Human+and+Murine+Enteroendocrine+Cells+by+Transcriptomic+and+Peptidomic+Profiling.">Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling.</a> Diabetes. , (2019).</li><li>Reimann, F., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-Sensing+in+Glucagon-Like+Peptide-1-Secreting+Cells.">Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells.</a> Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).</li><li>Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proglucagon+gene+transcription+by+protein+kinase-A+in+a+novel+mouse+enteroendocrine+cell+line.">Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line.</a> Molecular Endocrinology. 8, 1646-1655 (1994).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLP1-+and+GIP-producing+cells+rarely+overlap+and+differ+by+bombesin+receptor-2+expression+and+responsiveness.">GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness.</a> The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).</li><li>Bak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+commercially+available+assays+for+glucagon-like+peptide-1+(GLP-1):+implications+for+GLP-1+measurements+in+clinical+studies.">Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies.</a> Diabetes, Obesity &amp; Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).</li><li>Jacobsen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastric+bypass+surgery+on+glucose+absorption+and+metabolism+during+a+mixed+meal+in+glucose-tolerant+individuals.">Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals.</a> Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).</li></ol>

המעי הדק מבודד עכברוש perfused הוא כלי מחקר רב עוצמה המאפשר את הדינמיקה ואת המנגנונים המולקולריים שבבסיס בטן הפרשת הורמון שילמדו בפירוט. השלב הקריטי ביותר לייצור מוצלחת של נתונים עם מודל זה הוא הפעולה הכירורגית. טיפול של המעיים באופן בלתי נמנע יגרום נזק אל המעי, לכן ולמורה כדי אבסולוטי מינימל...

הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים לווסת את ספיגת התזונתי ואת תכונותיהם מזין, צמיחה מעיים, לווסת התיאבון1. הבטן הורמונים, לכן, מעורבים תהליכים פיזיולוגיים בסיסיים רבים, והוא להבנת הדפוסים הללו של הפרשת ופרטי מולקולרית הקובעות את הפרשת ההורמונים המתאימים לכן חשוב עבור טירונות פיזיולוגיים הבנה, למיעון היבטים translational מפעולות הורמון תחושת הבטן; אבל איך אחד יכול ללמוד את חישה. המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת בטן? באופן כללי, הפרשת הורמון יכול להילמד אורגניזמים שלמים (בני אדם או חיות ניסוי), ההכנות בטן מבודד או מתרבויות התא הראשי בטן מפריש הורמון או מונצחים תא תרבויות2,3, 4 , 5 , 6. שלנו המודל המועדף הוא המעי הדק מבודד עכברוש perfused, אשר הוא מודל רלוונטי מבחינה פיזיולוגית המאפשר הפרשת הורמונים בטן שילמדו בפירוט עם הזמן האופטימלי רזולוציה (הפרשת המחירים יכול להיקבע עם עת הבסיס עד השנייה), והתוצאות הן הסבירות להעברה המצב ויוו7. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט על איך לבצע הליך זה, אך תחילה נדון בשיטות אחרות ללמוד הפרשת הורמון תחושת הבטן, כולל על יתרונותיה וחסרונותיה של מודלים אלה בהשוואה המעי הדק מבודד עכברוש perfused.
אם אדם רוצה להקים אם מתחם מסוים המווסת את הפרשת הורמונים מסוימים במעיים, מחקרים בבני אדם הם המטרה הסופית. לפיכך, אם תרכובת מציג נהדר אפקטים על הפרשת הורמונים בטן אחד או כמה מכרסמים (in vivo או perfusions) או מ הורמון הפרשת תאי (שורות תאים או תאים ראשי), אפקט זה רלוונטית רק לרפואה ופיזיולוגיה האנושית אם זה יכול להיות אישרו אצל בני אדם. עם זאת, ישנם גבולות ברורים עבור הסוג של מחקרים שניתן לבצע אצל בני אדם ולאחר מחקרים ויוו על חיות ניסוי לעיתים, לכן, האפשרות השנייה הכי טובה עבור מחקרים כאלה. עכברים וחולדות הם החיות ניסיוני שנמצאות בשימוש תכוף ביותר ככל הנראה בשל גודלם נוח, בעלות נמוכה ואת האפשרות גנטית לשנות את הגנים בחשד למעורבות של שאלות מחקר ספציפי (למשל, לדפוק נהג מסוים או קולטן). באופן כללי, מודלים ויוו ליהנות מלהיות שלם מבחינה פיזיולוגית, אך יש גם מספר מגבלות. והכי חשוב, גודל קטן של מכרסמים, עכברים במיוחד, הוא גורם מגביל, כמו רוב מבחני על הבטן הורמון כימות דורשים לפחות 20 µL פלזמה (ועוד לעיתים קרובות הרבה יותר), כלומר לפחות 100 µL הדם חייב להיות מופנמים כדי לשכפל כימות. לכן, זה רק ניתן לקבל מעט מאוד המתאים בסיסית דוגמאות ודוגמאות דגימות גירוי פוסט אחד או שניים (נפח הדם הכולל עכבר של 20 גרם הוא ~1.4 מ"ל). כתוצאה מכך, תגובות הפרשה פוטנציאליים (לדוגמה, במהירות או מאוחר המתרחשים התגובות) ולכן עשויים לפספס.
במודל זלוף, להתגבר על בעיה זו, כמו מדגם גדולים מתקבלים כרכים (קצב הזרימה: 7.5 mL/min), ניתן להתאים את המרווחים אוסף לפי הצורך כדי להבטיח כי התגובות מהיר ולא לטווח קצר ולא החמיצה (אנחנו אוספים דגימות כל מין)7 . בעיה נוספת עם vivo מחקרים בחולדות כי רוב ההורמונים בטן הם אפילו יותר מסולק במהירות או מטבוליזם מאשר בני8,9,10, אשר עלול לסבך את הניתוח הביוכימי עוקבות. למשל, הראינו כי GLP-1 עובר מטבוליזם בעכברים בקצב אפילו מהר יותר מאשר אצל בני אדם (כאשר T1/2 הוא 1-2 דקות11) ו, וחשוב, המערבת המחשוף של GLP-1 בעכברים, בנוסף N-מסוף ביקוע על ידי dipeptidyl-peptidase-4 (DPP4) (שהוא האנזים העיקרי של משפילים GLP-1 אצל בני אדם), לקדם ביקוע על ידי אנזים endopeptidase נייטרלית 24.1112. כתוצאה מכך, מבחני המסחרי הנוכחי עבור כימות של GLP-1, אשר גם מבוססים על איזופורם ללא פגע GLP-1 (7-36amide) או את isoform DPP-4 ביקע (9-39amide), במידה רבה אל תזלזל GLP-1 הפרשת בעכברים וגוררים מטעה תוצאות 12. במעי הדק מבודד עכברוש perfused, רוב החומרים של הורמונים מופרשים לסלק או מופחת במידה ניכרת, שכן השפלה בתיווך פלזמה הוא נמנע, חילוץ הכבד/כליות/ריאות/השפלה מנועה (כי perfusate נאסף כשהוא עוזב את הבטן).
כמובן, תובנה חשובה יכול להיווצר על ידי שימוש בבעלי חיים מהונדסים, למשל, נתרן-גלוקוז טרנספורטר-1 נוקאאוט עכברים13, אבל דורש הערכה מפורטת של חיישנים מולקולריים מעורב הפרשת לעיתים קרובות השיקול של מספר אתרי מולקולרית, החל מן מובילי מולקולרית יון ערוצי ומן שונים G-חלבון בשילוב קולטנים חלבונים תאיים. למשל, שסימנו את הפעילות של תשעה אתרים מולקולריים שונים כאשר להתיר את החיישנים המולקולרי האחראי על גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-17. חקירת דומה לא יהיה אפשרי ויוו כי כמה של תרכובות בשימוש לא ספציפי או תופעות מזיקות/קטלני. לדוגמה, בעת שימוש הבטן perfused, שזה אפשרי להעריך את התפקיד של מטבוליזם הגלוקוז התוך תאית על ההפרשה של GLP-1 ו- neurotensin על-ידי חסימת היווצרות ATP עם 2-4-dinitrophenol7,14 , כמו גם את התפקיד של ערוצי סידן ממותגת מתח לחומצת מרה מגורה GLP-1, NT ו PYY הפרשת3. אכן, טטרודוטוקסין חוסם הערוץ נתרן רעיל מאוד ניתן להחיל בהצלחה בלימודים זלוף. בסופו של דבר, במודל זלוף זה יכול להיות ישירות מוערך איפה בבטן תרכובת מסוימת מעוררת הפרשת הורמון מסוים, החוקר יכול פשוט לבחור ולהכין את האזור הרצוי כדי perfuse, באותו זמן זה יכול ייחקרו גירוי הפרשת גורם על-ידי הפעלה של חיישנים מולקולריים מהצד luminal או כלי הדם של המעי3,ה-15,16.
מנגנוני הפרשה הפרשת הורמון בטן כבסיס עשויים גם להילמד על ידי שימוש חתיכות רקמה בטן (כולל רקמה אנושית), ראשי מעיים (בדרך כלל של תרבויות עכברים), מונצחים הורמון הפרשת שורות תאים (של העכבר או ממקור אנושי), על ידי הבטן רקמות רכוב בתאי Ussing או על-ידי organoids (הן לרוב של עכברים)2,3,4,5,6,17,18. בהשוואה perfusions מעיים, מחקרים על הבטן האנושית חתיכות, תרביות תאים ראשי שורות תאים טכנית קל יותר לבצע הם דרך זולה יותר ומהירה של יצירת נתונים, אך כמובן המחקר של הבטן חתיכות דורש גישה טריים בטן האדם דגימות. אולם, במודלים אלה קיטוב תאים נורמליים של המעיים הוא מטבעו אבודה, כלומר כי מודלים אלה לא ניתן להשתמש כדי להעריך את ההפעלה הרגילה של חיישנים מולקולריים, תהליכי הקליטה גם לא ניתן לחקור. יתר על כן, מחקרים כאלה בדרך כלל מעסיקים incubations סטטי (עבור עד כמה ש) אשר מאוד שאינם-פיזיולוגיים, יש מה לעשות עם דינמיקה הפרשה נורמלית התאים, כי המוצר מופרשים לא מוסר ולא ובכך עשויים להשפיע משוב הפרשת הורמונים. לעומת זאת, במעי perfused, מולקולות המופרש והוא נספג ביעילות יוסרו על ידי microcirculation הרירית כפי שהם ויוו, המבטיח כי מעברי הצבע transmucosal נשמרים כך הקליטה והפרשת יכול להתרחש בקצב נורמלי. יתר על כן, יש dedifferentiated תרביות תאים של מוצאם תא enteroendocrine מקורי, כלומר כי הם כבר לא נציג של תאים מקורית מבחינת התוכן פפטיד וביטוי של חיישנים מולקולריים, למרות שיהיו עדיין להפריש את ההורמון המדובר. זהו, למשל, במקרה של GLP-1 מפרישים תאי שורות19.
לכן זה, לדעתנו כי התא הראשי תרבויות או תא קו מחקרים מתאימים ביותר לסינון למטרות, לביצוע ניסויים סוגים שלא ניתן שבוצעו ויוו או בבטן perfused מבודדים. למשל, כוח אמיתי של תרביות תאים הראשי, תרביות תאים קו הוא את התוך תאית משני שליחים (למשל Ca2 +, מחנה, NAD(P)H) ניתן לנטר בזמן אמת, וניתן איתות חשמלי של ההורמון מפריש תאים חקר20,21,22. בנוסף, נוקאאוט siRNA יכול להיעשות, אשר הוא שימושי במיוחד אם מעכבי מסוימים אינם זמינים20,21,22,23,24. הבטן רקמת עכברים רכוב בתאי Ussing שימש לאחרונה ללמוד את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת GLP-1 מגורה חומצות מרה, בעוד organoids מעיים (מתוך עכברים) ואת הבטן האנושית חתיכות היו בשימוש גם ללמוד פרטים מולקולרית של הבטן הורמון הפרשת17,25. ואילו היתרונות לשעבר להיות מקוטב2 כל של מודלים אלה כרוכים incubations סטטי. מחקרים על חתיכות הבטן האנושית, לעומת זאת, להפיק תועלת משימוש רקמה אנושית, ולא מכרסמים, אשר חשוב מאז מינים ההבדל בביטוי רקמות של קולטני 7TM והוא מובילי מולקולרית עלול לגרום במשעולים חישה שונים מולקולרי בין מינים. למעשה, רוב הנתונים בשדה זה נוצר על ידי מחקרים על חזירים, עכברים או חולדות, והוא נותר חמקמק אם ממצאים אלה יועברו בני אדם. היא, לעומת זאת, מרגיע חישה המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 מופיעים דומה בין עכבר, עכבר, אדם, ו transcriptomic, peptidomic יצירת פרופילים של עכבר ו- L-תאים אנושיים חשף חזק גלובלית קווי דמיון בין26,2718,7,שני מינים.
המעי הדק מבודד עכברוש perfused, עם זאת, יש גם כמה מגבלות הנחשבות. והכי חשוב, זה בלתי אפשרי לקבוע אם תגובה הפרשה נתון נובעת הפעלה ישירה על ידי החומר מבחן של תאים מייצרי ההורמונים יישוב או ליתר דיוק נגרמת על ידי מנגנון עקיף. למשל, אשלגן כלורי באופן מיידי מגביר הפרשת GLP-1 המעי perfused7, אבל זה נשאר לא ידוע אם זו תוצאה של דפולריזציה ישירה של L-התא, או נובעת דפולריזציה של נוירונים קרוב L-התאים או השפעות במקביל פרסמה תכשירים/מעכבי paracrine. הנתונים הנובעים מחקרים באמצעות המעי perfused שמטרתם להבהיר את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשה צריכה, לכן, תמיד להכניס ההקשר עם נתונים המתקבלים דגמים אחרים ספציפיים יותר כדי להגדיל את היכולת ליצור סיבתיות. למשל, גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 GLP-1 שורת התאים מפרישים28,GLUTag29 ומן העכבר הראשי L-תאים תלויים הפעילות של למעליות גלוקוז (SGLT1 ו- GLUT2). חסימת אלה מובילים במעי הדק עכברוש perfused נחלש גם הפרשת20, כלומר, הוא סביר כי גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 במידה רבה מתווך על ידי פעולות ישירות של גלוקוז על L-התא. הגבלה חשובה נוספת של המעי perfused מבודדים היא חלק של ליפידים הם שקשה ללמוד בשל hydrophobicity שלהם. למרות שניתן לחקור המוצרים הסופיים של עיכול השומנים (חומצות שומן, diacyl glycerols, lysophosphatidylglycerols, וכו '), ולמרות ההכנה ייתכן שניתן יהיה מחדש esterify ליפידים, intra-cellularly, ואולי לארוז אותם לתוך chylomicrons, הובלת chylomicrons התאים ואת ספיגת עוקבות שלהם על ידי lacteals של villi משובשת, שכן אין אפשרות לאבטח את זרימת הלימפה בבטן מבודד. סביר להניח, לכן, ספיגת השומנים נעצרו לאחר המוצרים נספג להתחיל לצבור בתאים. המערכות תא במבחנה מתאימים פחות ללימודי השומנים בשל היעדרם של קיטוב. ברור, מגבלה זו רלוונטי רק עבור שומנים כי הם נספג מועבר דרך lacteals, ואילו אלה נספג דרך כלי הדם במעיים נוטים להיות מטופלים בדרך כלל.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for perfusion buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.12018.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2 x 2 H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran 70</td>
			<td>Pharmacosmos</td>
			<td>40014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fumaric acid disodium salt (C4H2Na2O4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (C6H12O6)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvic acid sodium salt (C3H3NaO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium L-glutamate monohydrate (C5H8NNaO4 x H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion equitment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universial perfusion system</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BASIC UNIT UNIPER UP-100, TYPE 834</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump, with four channels</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windkessel</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic Circulator,Bath Volume 3L, 230V/50Hz</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating table, heated on tripod stand, type 873</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula with basked, OD= 2.0mm, ID= 1.0mm</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733313</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine

הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים המווסתים צריכת התיאבון ומזון, עיכול, ספיגת התזונתי, הפצה, וטיולים גלוקוז מים אחרונים. הבנת המנגנון המולקולרי המסדירים את הפרשת הורמון תחושת הבטן היא היסוד עבור הבנה ותרגום בטן הורמון פיזיולוגיה. באופן מסורתי, המנגנונים הפרשת הורמון בטן גם נלמדים ויוו (של חיות ניסוי או בני אדם) או באמצעות הבטן מפריש הורמון ראשי הרירית תא תרבויות או תא קווים. כאן, אנחנו מציגים של המעי הדק מבודד עכברוש perfused שיטה חלופית ללמוד הפרשת הורמון תחושת הבטן. המעלות של מודל זה זה מסתמך על הבטן ללא פגע, כלומר זה recapitulates רוב הפרמטרים החשובים מבחינה פיזיולוגית אחראי על הפרשת במחקרים ויוו, לרבות קיטוב הרירית, יחסים paracrine, דרכי חשיפה זלוף/גירוי. בנוסף, ולהבדיל מחקרים ויוו, המעי הדק מבודד עכברוש perfused מאפשר שליטה ניסויית כמעט מלאה והערכה ישירה של הפרשה. בניגוד מחקרים במבחנה, זה אפשרי ללמוד את סדר הגודל והן את הדינמיקה של הפרשת וכדי שאלות חשובות כתובות, כגון איזה גירויים לגרום הפרשת הורמונים שונים בבטן, באיזה צד של המעיים (luminal או כלי דם) הוא הפרשת גירוי, ולנתח את פירוט סנסורים המולקולרי שבבסיס התגובה הפרשה. בנוסף, ההכנה הוא מודל חזק לחקר הספיגה במעיים ופרטים לגבי הדינמיקה של הספיגה במעיים כולל אחראי למעליות.

יכולת לקבוע גירוי מסוים גורם הפרשת הורמון תחושת הבטן של עניין מסתמך על הפרשת בסיס יציב. יתר על כן, אם אין תגובה הגירוי הוא ציין, בתגובה הפרשה חזקים הפקד חיובית להיות ניכר כדי לא לכלול כי העדר תגובת הגירוי המבחן אינו משקף חוסר ההיענות הכללי. איור 2A ו- 2B</st...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש

כאן, אנו מציגים מודל פיזיולוגיים ועוצמתי כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן, הספיגה במעיים – המעי הדק מבודד עכברוש perfused.

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

השיטה שפיתחנו כאן התבררה כמועילה ביותר בעבודה שלנו, בניסיון לגלות את המנגנונים המולקולריים של הפרשת הורמונים מהמעיים, אבל גם ספיגת חומרים מזינים, ואת הצימוד בין השניים. היתרון העיקרי של טכניקה פיזיולוגית גבוהה זו היא כי המעיים נשארים במקום, תוך מתן אפשרות מחקרים מפורטים המבוצעים בדרך כלל רק בתוך מודלים במבחנה. ראשית, מניחים את החולדה על שולחן ניתוחים מחומם, מאשרים חוסר תגובה לצביטת בוהן, ומפעילים כריתת עור וצבת כדי לחשוף את חלל הבטן.להזיז את המעי הדק לצד כדי לחשוף את האזור המסוף של המעי הגס. וללקט את כלי הדם המספקים המעי הגס. בהדרגה לחלץ את המעי הגס, החל מאזור הטרמינל, נע לכיוון המעי הדק, לחות את הרקמה עם מלוחים איזוטוניים, ושימוש במטליות כותנה כדי להסיר את רקמת החיבור לפי הצורך.כאשר כל המעי הגס הוסר, להכניס חתיכה 15 ס"מ של צינורות פלסטיק לתוך הקצה הפרוקסימלי של לומן מעיים קטן, ולאבטח את הצינורות עם תפרים. לאחר מכן השתמש במזרק 10 מיליליטר ומשאבת מזרק כדי לשטוף בזהירות את המעי הדק עם תמיסת מלח איזוטונית בטמפרטורת החדר בקצב זרימה של 25 מיליליטר לדקה. כאשר הרקמה התרוקנה של chyme, להתאים את הרקמות, כך העורק mesenteric העליון נגיש ולהסיר את רקמת החיבור ואת רקמת השומן כדי לחשוף את העורק.השתמש במטלפי נקודה עדין כדי למקם שני תפרים מתחת לעורק mesenteric ושני תפרים מתחת לווריד הפורטל. מלאו קטטר פלסטיק 22-מד המחובר למשאבה מתגלגלת עם חיץ תדלוק ולהשתמש בזוג מספריים כירורגיים כדי לחתוך חור קטן בעזרה mesenteric, מיד החדרת קטטר לתוך החתך. הכנס את הקטטר בתוך שתי דקות של חיתוך חור בעורק, אחרת המעיים צפויים לסבול מנזק איסכמי.ברגע שהקטטר אובטח בתפר, התחל את המשאבה המתגלגלת כדי ליזום חליטה בקצב זרימה של 7.5 מיליליטר לדקה. כאשר כלי הדם במעיים ובוריד השער הופכים חיוורים, חותכים חור בווריד השער. הכנס קטטר מתכת, ולאבטח את קטטר המתכת עם תפר אחר.יש לדאוג בעת החדרת קטטר לתוך וריד הפורטל, כמו וריד דק מוקף חומה. עם זאת, כמו השומר הוא עכשיו להיות מנוון, הכנסה מהירה אינה קריטית. לאחר איסוף פלט תפוקת התדלוק לדקה אחת, למדוד את עוצמת הקול ולחץ לבצע ניסוי בתוכנית הקלטת הלחץ ליזום את הקלטות רכישת לחץ תדלוק.לאחר מכן לכסות את המעיים עם רקמת מעבדה לחה כדי למנוע ממנו להתייבש, ולאשר כי הקצה הדיסטלי של המעי אינו חסום, ו haploid זוהר יכול לצאת. כדי למדוד את הלחץ החלקי של חמצן ופחמן דו חמצני, לאסוף חיץ תדלוק דרך שסתום עצירה-תרנגולי תלת כיווני מיד לפני שהוא נכנס לאיבר, לאחר כשלוש דקות של חליטה, ומהקטטר שהוכנס לווריד הפורטל. מניחים את הדגימות על קרח, ולהשתמש מנתח גז דם אוטומטי כדי למדוד את הדגימות זמן קצר לאחר איסוף.השתמש במסוף שברים כדי להשיג את הדוגמאות הבסיסיות הראשונות. לאחר 10 עד 15 דקות של איסוף בסיסי, השתמש במשאבת מזרק כדי לנהל את ממריצי הבדיקה התוך-ארטיאלית הראשונה באמצעות עצירת ת'וק תלת-כיוון בקצב זרימה של 35 מיליליטר לדקה. בצע גירויים זוהרים על ידי הזרקת boas גירוי ראשוני נמסר בקצב זרימה של 2.5 מיליליטר לדקה במהלך חמש הדקות הראשונות של הגירוי, ואחריו ניהול של פתרון הבדיקה ב 5 מיליליטר לדקה קצב זרימה.ברגע שתסתיים תקופת גירוי לומינלית, יש לשטוף את הלומן בתמיסת מלח איזוטונית בקצב זרימה של 2.5 מיליליטר לדקה למשך חמש דקות. לאחר מכן לאסוף דגימות בסיסיות ב 5 מיליליטר לדקה במשך 15 עד 30 דקות לפני חומר הבדיקה הבא מנוהל. בסוף הניסוי, לנהל מתאים, שליטה חיובית כדי לבדוק את ההיענות של ההכנה במשך חמש עד 10 דקות, איסוף ו 10 עד 15 דקות נוספות של דגימות בסיסיות בסוף תקופת גירוי שליטה חיובית.להלן דוגמה לנתונים באיכות טובה, המדגימים פפטיד-1 דמוי גלוקגון או GLP-1, הפרשה ממעי דק מבודד של חולדה מנומקת שנאספה במרווחים של דקה אחת. בתנאים הבסיסיים, הפרשת היה יציב בעוד הן לפני ואחרי ניהול של גירוי הבדיקה ואת השליטה החיובית, תגובה הפרשה חזקה ניכרה. נתוני הפרשת GLP-1 אלה המתקבלים ממעי דק מבודד של חולדה מנוון הם באיכות ירודה עם הפרשה לא יציבה הנמדדת בתנאי בסיס שנסחפו כלפי מעלה לאורך כל הבדיקות באופן שנראה שאינו קשור לממשלי חומר הבדיקה או לשליטה החיובית.לכן אי אפשר להסיק אם הפרשת GLP-1 המוגברת שנצפתה בסוף גירוי פרוקטוז כלי הדם הייתה תגובה מתווכה פרוקטוז. תוך כדי ניסיון הליך זה כדי לטפל כדי לאבטח את קטטרים כראוי כדי לנקות ביסודיות את ציוד חליטה כמו חיץ חליטה מספק מדיום מצוין לצמיחה חיידקית. בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו In Vitro מחקרים על קווי תאים מפרישים הורמונים של תרכובות תאי מעיים ראשוניים, ניתן לבצע כדי לחקור ישירות את הייצור תאיים של AMP מחזורי או סידן תאי.אז כבר השתמשנו בשיטה עכשיו להבהרה של מספר תהליכים מאחורי ספיגת חומרים מזינים ואת מנגנון הפרשת ההורמונים וזה התברר להיות מאוד שימושי. אל תשכח כי עבודה עם חוסמים או מפעילים של אתרים מולקולריים יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות כגון שימוש במעיל מעבדה, כפפות, ומשקפי בטיחות, מכסה המנוע אדים תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

גלוטמט והיפוקסיה כמודל מתח לperfused חוליות הרשתית מבודדת

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם לחקר הורמוני פעולה בשד האדם

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

אינדוקציה והערכה של איסכמיה reperfusion פגיעה בלבבות עכברוש Langendorff-perfused

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

מודל הלב הפוכה עבור אוסף transstate Interstitial מן הלב עכברוש מבודד

The present protocol describes a unique approach that enables the collection of cardiac transudate (CT) from the isolated, saline-perfused rat heart. ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

הערכה של מנגנוני הבקרה וסקולרית ניצול מיקרוסקופ וידאו מבודד התנגדות העורקים של חולדות

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

כריתה מזורצית בסיוע רובוט וריצוף בלוטות לימפה לרוחב האגן לסרטן רקטלי בינוני-נמוך מתקדם מקומי

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

מודל של פרפור חדרים ארוך טווח בלבבות חולדות מבודדים

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...