يمكن لهذه الطرق المساعدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال طب الأعصاب وطب العيون، وتساعد على تقييم مجموعة كبيرة ومتنوعة من اعتلالات الشبكية ومظاهر الشبكية في نماذج القوارض المختلفة. والميزة الرئيسية لهذه التقنيات هي أنه يمكن إجراء تحقيقات طولية غير فاشية، مما يقلل من التباين ويقلل من عدد الحيوانات اللازمة للتجارب. هذه الأساليب تسمح الكمية في التحقيق الجسم الحي للهيكل والوظيفة التي يمكن استخدامها للتحقيق في الظروف المرضية، أو لتقييم المنفعة المحتملة للعلاجات الجديدة.
ومع ذلك ، لا سيما تطبيق تكنولوجيا التصوير المقطعي التناسق البصري في نماذج القوارض لا يزال تحديا ، وذلك أساسا بسبب صغر حجم العين. إثبات الإجراءات سيكون مايكل ديتريش، طالب دكتوراه من مختبرنا. بعد تخدير القوارض ، ضع قطرة واحدة من فينيليفرين تروبيكاميد على كل عين لتمدد التؤقت.
مسح قبالة أي قطرات العين الزائدة الرطب بعد دقيقة واحدة. وتليظ العينين methylcellulose أساس الجل العين لتجنب تجفيف العين وخلق قرنية عكر. ثم استخدام ملقط لوضع عدسة لاصقة مخصصة على العين.
اضغط على الزر ابدأ في الزاوية اليمنى من شاشة لوحة التحكم لبدء وضع الاكتساب. بعد ذلك ، لتصوير العين اليسرى ، ضع حامله لضمان أن مصباح العين الأيسر للقارض يواجه الكاميرا. تعيين مستوى التصفية إلى R، وحدد BR وOCللتصوير الانعكاسات الزرقاء وحيازة B-مسح ضوئي في البرنامج.
بعد ذلك، قم بتعيين مسافة التركيز البؤري على حوالي 38 ديوبتر، باستخدام مقبض التركيز على الجزء الخلفي من الكاميرا. وتكبير في شبكية العين، حتى مسح أكتوبر مرئيا على الشاشة. ثم لضمان مسار شعاع من خلال منتصف التلميذ ، مع زاوية متعامدة من شبكية العين في جميع الطبقات ، ووضع القرص البصري في منتصف الحقل مضيئة.
وضبط خط أفقي ورأسي B-مسح إلى مستوى أفقي من خلال تناوب حامل. على شاشة البرنامج حدد وضع مسح مستوى الصوت، وتعيينه إلى 25 B-مسح في وضع عالية الدقة في 50 التلقائي تتبع الوقت الحقيقي. مركز منتصف شبكة المسح الضوئي على القرص البصري وابدأ في الحصول على عن طريق الضغط على مقبض الحساسية السوداء، ثم الحصول على لوحة التحكم.
بعد اكتمال عملية الاستحواذ، قم بتعيين مستوى التصفية إلى A.Select Blue Autofluscence على لوحة التحكم. وضبط سطوع الصورة مع مقبض الحساسية. اضغط على مقبض الحساسية ثم احصل على صورة الخلايا الفلورية أو الودائع الفلورية.
لتحليل عمليات المسح الضوئي لوحدة التخزين استخدم التقسيم التلقائي لبرنامج الجهاز OCT بالنقر بزر الماوس الأيمن على الفحص. وحدد التجزئة، ثم جميع الطبقات. قم بإجراء تصحيح يدوي للطبقات بالنقر المزدوج على المسح المطلوب.
حدد ملف تعريف التكثّر. وانقر على تحرير تجزئة الطبقة. حدد طبقة واحدة في كل مرة.
وإذا لزم الأمر تصحيح الخط الأخضر عن طريق تحريك النقاط الحمراء عن طريق سحب وإسقاط إلى الموضع الصحيح. بعد ذلك حدد خريطة سمك علامة التبويب. اختر شبكة 1، 2، 3 ملليمتر ETDRS.
مركز الدائرة الداخلية على القرص البصري. وأخيراً، احسب سمك طبقات الشبكية من قيم السمك التي يوفرها البرنامج لقطاعات الشبكية المختلفة ذات الاهتمام. لحساب قيم سمك الرئيسي من مسح حجم، استخدم كامل 1، 2، 3، شبكة ETDRS ملليمتر الذي يغطي زاوية من 25 درجة تقريبا، باستثناء الدائرة الداخلية ملليمتر واحد الذي يحتوي على القرص البصري.
تبدأ من خلال اختيار منصة لقياس القوارض. افتح الإطار الإعدادات المسبقة بالنقر المزدوج على البرنامج. حدد مجموعة جديدة واختر اسم المجموعة، وعدد المواضيع، والأنواع، والسلالات.
حدد حافز متغير، تردد اصحاء الزمانية، حساسية التباين، السرعة أو الاتجاه في القائمة المنسدلة واضغط على إنشاء مجموعة جديدة. التركيز على منصة من خلال التلاعب حلقة التركيز من الكاميرا على رأس الغرفة. ومعايرة النظام من خلال محاذاة الدائرة الحمراء حول الدائرة السوداء على المنصة.
بعد ذلك ، ضع القوارض على المنصة واتركها تتكيف مع البيئة لمدة خمس دقائق. ثم ابدأ القياس عن طريق تحديد السهم الأيسر لـ نعم أو المربع للي، إذا كان الحيوان يتتبع أو لا يتعقبه على التوالي. حدد يدوياً حجم الخطوة من التحفيز بالنقر فوق الأسهم لأعلى ولأسفل بجوار متغير التحفيز.
وأخيرا، حدد علامة التبويب ملخص وانقر على ملف، تصدير الجدول أو الرسم البياني لتصدير مجموعة البيانات المطلوبة. تشير النتائج إلى أن انحطاط طبقات الشبكية الداخلية ينخفض. ويتم تخفيف درجة EAE السريرية خلال دورة EAE عندما تم إعطاء المادة 1.
علاوة على ذلك ، تكشف OKR عن تحسن حدة البصر للحيوانات المعالجة بمادة 1 مقارنة بفئران MOG EAE غير المعالجة التي تقاس باختبار عتبة التردد المكاني على مدى فترة 120 يومًا. عند إجراء قياسات OCT، هناك خطوة حاسمة هي التوجه المتعامد لشعاع الليزر في جميع المقاييس فيما يتعلق بكي الشبكية لضمان جودة وقيم السمكة. لتقنية OKR ، والتمييز بين تتبع والحركات السلوكية العادية للحيوان ، يتطلب بعض التدريب من المحقق.
من المهم أن تكون أعمى للمجموعة التجريبية. بعد هذه التحقيقات من الأضرار الهيكلية والوظيفية التي تحدث في سياق التهاب الدماغ الذاتي مناعة الذاتية التجريبية, الإجراء قد تكون مفيدة أيضا في نماذج أخرى تنطوي على النظام البصري, بما في ذلك سبيل المثال لا الحصر نماذج من اعتلال الشبكية, أو إصابة العصب البصري. هذه التقنيات تمهد الطريق للبحوث في مجال علم النفس في مجالات طب الأعصاب وطب العيون ويمكن نقلها بسهولة إلى التجارب السريرية.
